Antibacterial and antifungal activity of methanolic extracts of Salix alba L. against various disease causing pathogens

Abstract The present study was aimed to manifest the antibacterial and antifungal activity of methanolic extracts of Salix alba L. against seven Gram-positive and Gram-negative bacterial pathogens e.g. Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus (1), S. aureus (2), Shigella sonnei, Escherichia coli (1), E. coli (2) and Neisseria gonorrhoeae and three fungal isolates from the air such as Aspergillus terreus, A. ornatus, and Rhizopus stolonifer. Two different serotypes of S. aureus and E. coli were used. The agar well-diffusion method results showed the dose-dependent response of plant extracts against bacterial and fungal strains while some organisms were found resistant e.g. E. coli (1), S. sonnei, A. terreus and R. stolonifer. The highest antibacterial activity was recorded at 17.000±1.732 mm from 100 mg/mL of leaves methanolic extracts against S. pyogenes while the activity of most of the pathogens decreased after 24 h of incubation. The highest antifungal activity was reported at 11.833±1.0 mm against A. ornatus at 50 mg/mL after 48 h of the incubation period. These experimental findings endorse the use of S. alba in ethnopharmacological formulations and suggest the use of methanolic extracts of the said plant to develop drugs to control the proliferation of resistant disease causing pathogenic microbes.

Resumo O presente estudo teve como objetivo manifestar a atividade antibacteriana e antifúngica de extratos metanólicos de Salix alba L. contra sete patógenos bacterianos Gram-positivos e Gram-negativos. Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus (1), S. aureus (2), Shigella sonnei, Escherichia coli (1), E. coli (2) e Neisseria gonorrhoeae e três isolados de fungos do ar, como Aspergillus terreus, A. ornatus, e Rhizopus stolonifer. Dois sorotipos diferentes de S. aureus e E. coli foram usados. Os resultados do método de difusão em ágar mostraram a resposta dependente da dose de extratos de plantas contra cepas de bactérias e fungos, enquanto alguns organismos foram considerados resistentes, e.g. E. coli (1), S. sonnei, A. terreus e R. stolonifer. A maior atividade antibacteriana foi registrada em 17.000 ± 1.732 de 100 mg/mL de extratos metanólicos de folhas contra S. pyogenes, enquanto a atividade da maioria dos patógenos diminuiu após 24 h de incubação. A maior atividade antifúngica foi relatada em 11,833 ± 1,0 contra A. ornatus a 50 mg/mL após 48 h do período de incubação. Esses achados experimentais endossam o uso de S. alba em formulações etnofarmacológicas e sugerem o uso de extratos metanólicos da referida planta para o desenvolvimento de fármacos que controlem a proliferação de doenças resistentes que causam micróbios patogênicos.

Antibacterial and antifungal activity of methanolic extracts of Salix alba L. against various disease causing pathogens / Atividade antibacteriana e antifúngica de extratos metanólicos de Salix alba L. contra vários patógenos que causam doenças

Abstract The present study was aimed to manifest the antibacterial and antifungal activity of methanolic extracts of Salix alba L. against seven Gram-positive and Gram-negative bacterial pathogens e.g. Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus (1), S. aureus (2), Shigella sonnei, Escherichia coli (1), E. coli (2) and Neisseria gonorrhoeae and three fungal isolates from the air such as Aspergillus terreus, A. ornatus, and Rhizopus stolonifer. Two different serotypes of S. aureus and E. coli were used. The agar well-diffusion method results showed the dose-dependent response of plant extracts against bacterial and fungal strains while some organisms were found resistant e.g. E. coli (1), S. sonnei, A. terreus and R. stolonifer. The highest antibacterial activity was recorded at 17.000±1.732 mm from 100 mg/mL of leaves methanolic extracts against S. pyogenes while the activity of most of the pathogens decreased after 24 h of incubation. The highest antifungal activity was reported at 11.833±1.0 mm against A. ornatus at 50 mg/mL after 48 h of the incubation period. These experimental findings endorse the use of S. alba in ethnopharmacological formulations and suggest the use of methanolic extracts of the said plant to develop drugs to control the proliferation of resistant disease causing pathogenic microbes.

Resumo O presente estudo teve como objetivo manifestar a atividade antibacteriana e antifúngica de extratos metanólicos de Salix alba L. contra sete patógenos bacterianos Gram-positivos e Gram-negativos. Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus (1), S. aureus (2), Shigella sonnei, Escherichia coli (1), E. coli (2) e Neisseria gonorrhoeae e três isolados de fungos do ar, como Aspergillus terreus, A. ornatus, e Rhizopus stolonifer. Dois sorotipos diferentes de S. aureus e E. coli foram usados. Os resultados do método de difusão em ágar mostraram a resposta dependente da dose de extratos de plantas contra cepas de bactérias e fungos, enquanto alguns organismos foram considerados resistentes, e.g. E. coli (1), S. sonnei, A. terreus e R. stolonifer. A maior atividade antibacteriana foi registrada em 17.000 ± 1.732 de 100 mg/mL de extratos metanólicos de folhas contra S. pyogenes, enquanto a atividade da maioria dos patógenos diminuiu após 24 h de incubação. A maior atividade antifúngica foi relatada em 11,833 ± 1,0 contra A. ornatus a 50 mg/mL após 48 h do período de incubação. Esses achados experimentais endossam o uso de S. alba em formulações etnofarmacológicas e sugerem o uso de extratos metanólicos da referida planta para o desenvolvimento de fármacos que controlem a proliferação de doenças resistentes que causam micróbios patogênicos.

Colonization by Streptococcus pneumoniae among children in Porto Velho, Rondônia, Western Brazilian Amazon / Colonização por Streptococcus pneumoniae em crianças na Amazônia Ocidental Brasileira, Porto Velho, Rondônia

Streptococcus pneumoniae is one of the primary pathogens that are associated with acute respiratory infections (ARI) that cause high rates of morbidity and mortality among children under five years of age in developed and developing countries. This study aimed to determine the prevalence of nasopharyngeal colonization, the antimicrobial resistance profile, and the capacity for biofilm formation by S. pneumoniae isolated from children aged 0-6 years with ARI throughout the Porto Velho-RO. A total of 660 swabs were collected from children with ARI. Molecular and biochemical tests were performed to characterize the isolates. The disk-difusion method and the E-test were used for antimicrobial sensitivity testing (TSA). Biofilm formation capacity was assessed using microtiter plate assays, and serotype detection was acheived using polymerase chain reaction (PCR) analyses. The colonization rate for S. pneumoniae was 8.9% (59/660) and exhibited a high prevalence in children under 23 months of age 64.4% (38/59). The observed serotypes were 9V and 19F with frequencies of 1.7% (1/59) and 13.6% (8/59), respectively. The antimicrobial susceptibility test revealed 100% (59/59) sensitivity to vancomycin. In contrast, trimethoprim and oxacillin exhibited high resistance rates of 76.3% (45/59) and 52.5% (31/59), respectively. Of the biofilm-forming isolates, 54.8% (23/42) possessed resistance to some antimicrobials. In this study, S. pneumoniae showed high rates of antimicrobial resistance and the ability to form biofilms, as these are factors that favor bacterial persistence and can cause serious damage to the host.(AU)

Streptococcus pneumoniae é um dos principais patógenos associados a infecções respiratórias agudas (IRAs) que causam altas taxas de morbidade e mortalidade entre crianças menores de cinco anos de idade em países desenvolvidos e em desenvolvimento. Este estudo teve como objetivo determinar a prevalência de colonização da nasofaringe, o perfil de resistência antimicrobiana e a capacidade de formação de biofilme dos S. pneumoniae isolados de crianças de 0 a 6 anos com IRA na cidade de Porto Velho-Rondônia. Um total de 660 swabs foi coletado de crianças com IRA. Testes moleculares e bioquímicos foram realizados para identificar os isolados bacterianos. O método de disco-difusão e o E-test foram utilizados para o teste de sensibilidade antimicrobiana (TSA). A capacidade de formação de biofilme foi avaliada por meio de ensaios em placas de microtitulação e a detecção de sorotipos foi obtida por meio de análises de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). A taxa de colonização por S. pneumoniae foi de 8,9% (59/660) e apresentou alta prevalência em menores de 23 meses de idade 64,4% (38/59). Os sorotipos identificados foram 9V e 19F com frequências de 1,7% (1/59) e 13,6% (8/59) respectivamente. O teste de sensibilidade aos antimicrobianos revelou 100% (59/59) de sensibilidade à vancomicina. Em contraste, trimetoprima e oxacilina apresentaram altas taxas de resistência de 76,3% (45/59) e 52,5% (31/59) respectivamente. Dos isolados formadores de biofilme 54,8% (23/42) possuíam resistência a alguns dos antimicrobianos. Neste estudo, S. pneumoniae apresentou altas taxas de resistência antimicrobiana e capacidade de formar biofilmes, pois são fatores que favorecem a persistência bacteriana e podem causar sérios danos ao hospedeiro.(AU)

Comparison between immunofluorescence and immunohistochemistry for Listeria monocytogenes detection in formalin-fixed paraffin-embedded tissues / Comparação entre imunofluorescência e imuno-histoquímica para detecção de Listeria monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados

Listeria monocytogenes is a bacterium that infect humans and animals and causes a zoonotic disease characterized by encephalitis, septicemia or abortion. In addition, listeriosis leads to significant economic losses due to animal death and sacrifice. This research compared the technique of immunofluorescence (IF) and immunohistochemistry (IHC) for the diagnosis of L. monocytogenes in formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissues. A total of 30 tissue blocks from 15 animals with history and/or lesions compatible with listeriosis were selected. For both IHC and IF, the same diluted (1:200) polyclonal primary antibody was used against L. monocytogenes serotypes 1 and 4. For IHC, a polymer secondary antibody conjugated to peroxidase (HRP) was used. For IF, samples were incubated with a fluorescein-labeled anti-rabbit IgG secondary antibody. Each sample was classified according to the presence and percentage of immunolabeling area. From 30 samples, 10 were positive at least for one technique, whereas eight samples were positive for both IHC and IF with similar score. There was strong immunolabeling in tissue samples from bovines experimentally infected with L. monocytogenes ATCC 7644, as well as in nervous tissues from naturally infected ruminants. Additionally, IF did not show any difference in sensitivity when compared to IHC. Using processed biological materials for IF, instead of fresh tissues, is a quite unique technique, since there are few protocols described. Therefore, this study demonstrated that both techniques are efficient to detect L. monocytogenes in FFPE tissues.

Listeria monocytogenes é uma bactéria que infecta humanos e animais, podendo causar uma doença zoonótica caracterizada por encefalite, septicemia e abortos. Além disso, a listeriose resulta em perdas econômicas significativas pela morte e sacrifício de animais. O objetivo deste trabalho foi comparar a técnica de imunofluorescência (IF) e imuno-histoquímica (IHQ) para detecção de L. monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados. Foram selecionados 30 blocos de tecidos de 15 animais com histórico e/ou lesões compatíveis com listeriose. Para ambas as técnicas, foi utilizado o mesmo anticorpo primário policlonal diluído (1:200) para detecção de L. monocytogenes sorotipos 1 e 4. Para a IHQ foi utilizado anticorpo secundário em polímero acoplado a peroxidase (HRP). Para a IF, as amostras foram incubadas com anticorpo secundário anti-IgG de coelho marcado com fluoresceína. Cada amostra foi classificada quanto à presença de imunomarcação e porcentagem de área positiva. Das 30 amostras, 10 foram positivas em pelo menos uma das técnicas, sendo oito amostras positivas em ambas IHQ e IF com o mesmo escore. Houve forte imunomarcação tanto em amostras de bovino experimentalmente infectado com L. monocytogenes ATCC 7644, como em amostras de tecido nervoso de ruminantes naturalmente infectados. Além disso, a IF não apresentou diferença na sensibilidade quando comparada com a IHQ. O uso de materiais biológicos processados para IF, ao invés de tecidos frescos, é algo inovador, uma vez que existem poucos protocolos descritos. Portanto, este estudo demonstrou que as duas técnicas foram eficientes para detectar L. monocytogenes em tecidos fixados em formol e parafinizados.

Diversity and antimicrobial resistance of Salmonellaentericaserovars in surface river water and sediment / Diversidade e resistência antimicrobiana de sorovares de Salmonella enterica em águas superficiais de rios e sedimentos

This study aimedto evaluate the contamination by Salmonellasp. in the Capinzal River, to determinethe prevalent serovars, patterns of antimicrobial resistance, and the genetic relationships between the serovars identified. A total of 108 samples were collected from 2016 to 2018. The isolation of Salmonellaspp. was conducted accordingto InternationalOrganization for Standardization (ISO) standards. The antimicrobial resistance profile of the Salmonella isolates was evaluated, and isolates were selected for serotyping and verification of genetic similarity using the Pulsed-FieldGel Electrophoresis (PFGE) Technique. Of the 108 samples collected, 35 (32.4%) were positive for Salmonella; 17.2% of the isolates were from the rural area; and 88.6% were from the urban area. Salmonellawas isolated from all collect points along the river, with a higher incidence at the beginning of the urban area, indicating that contamination starts in the rural area and intensifies in the urban area of the city. A percentageof 35.1% of the Salmonellaisolates were resistant to at least two antibiotics, while 18.9% were considered multidrug-resistant (resistant to at least two antibiotics of different classes). Seven serovars were distinguished from the serotyped isolates, with a prevalence rate of 23.5% for S.Infantis, S.Orion, and S. Javiana; 11.8% forS.Senfterberg, and 5.9% forS. Montevideo, S.Heidelberg, and S.entericasubsp. enterica(O: 6.8). The variability in specific restriction sites generated by PFGE resulted in 10 pulsotypes, separating mainly different serotypes.

O objetivo deste estudo foi avaliar a contaminação por Salmonellasp. no rio Capinzal, para determinar os sorovares prevalentes, padrões de resistência antimicrobiana e as relações genéticas entre os sorovaresidentificados. Um total de 108 amostras foram coletadas de 2016 a 2018. O isolamento de Salmonellaspp. foi conduzido de acordo com os padrões da International Organization for Standardization (ISO). O perfil de resistência antimicrobiana dos isolados de Salmonellafoi avaliado, e os isolados foram selecionados para sorotipagem e verificação de similaridade genética por meio da Técnica de Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE). Das 108 amostras coletadas, 35 (32,4%) foram positivaspara Salmonella; 17,2% dos isolados eram da área rural; e 88,6% da área urbana. Salmonellafoi isolada em todos os pontos de coleta ao longo do rio, com maior incidência no início da área urbana, indicando que a contaminação começa na área rural e se intensifica na área urbana da cidade. Um percentual de 35,1%dos isolados de Salmonellaforam resistentes a pelo menos dois antibióticos, enquanto 18,9% foram considerados multirresistentes (resistentes a pelo menos dois antibióticos de classes diferentes). Sete sorovares foram diferenciadosdos isolados sorotipados, com uma taxa de prevalência de 23,5% para S.Infantis,S.Orion e S.Javiana; 11,8% para S.Senfterberg e 5,9% para S.Montevidéu, S.Heidelberg e S.enterica subsp. enterica (O: 6,8). A variabilidade emlocais de restrição específicos gerados por PFGE resultou em 10 pulsotipos, separando principalmente diferentes sorotipos.

Diversity and antimicrobial resistance of Salmonellaentericaserovars in surface river water and sediment / Diversidade e resistência antimicrobiana de sorovares de Salmonella enterica em águas superficiais de rios e sedimentos

This study aimedto evaluate the contamination by Salmonellasp. in the Capinzal River, to determinethe prevalent serovars, patterns of antimicrobial resistance, and the genetic relationships between the serovars identified. A total of 108 samples were collected from 2016 to 2018. The isolation of Salmonellaspp. was conducted accordingto InternationalOrganization for Standardization (ISO) standards. The antimicrobial resistance profile of the Salmonella isolates was evaluated, and isolates were selected for serotyping and verification of genetic similarity using the Pulsed-FieldGel Electrophoresis (PFGE) Technique. Of the 108 samples collected, 35 (32.4%) were positive for Salmonella; 17.2% of the isolates were from the rural area; and 88.6% were from the urban area. Salmonellawas isolated from all collect points along the river, with a higher incidence at the beginning of the urban area, indicating that contamination starts in the rural area and intensifies in the urban area of the city. A percentageof 35.1% of the Salmonellaisolates were resistant to at least two antibiotics, while 18.9% were considered multidrug-resistant (resistant to at least two antibiotics of different classes). Seven serovars were distinguished from the serotyped isolates, with a prevalence rate of 23.5% for S.Infantis, S.Orion, and S. Javiana; 11.8% forS.Senfterberg, and 5.9% forS. Montevideo, S.Heidelberg, and S.entericasubsp. enterica(O: 6.8). The variability in specific restriction sites generated by PFGE resulted in 10 pulsotypes, separating mainly different serotypes.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a contaminação por Salmonellasp. no rio Capinzal, para determinar os sorovares prevalentes, padrões de resistência antimicrobiana e as relações genéticas entre os sorovaresidentificados. Um total de 108 amostras foram coletadas de 2016 a 2018. O isolamento de Salmonellaspp. foi conduzido de acordo com os padrões da International Organization for Standardization (ISO). O perfil de resistência antimicrobiana dos isolados de Salmonellafoi avaliado, e os isolados foram selecionados para sorotipagem e verificação de similaridade genética por meio da Técnica de Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE). Das 108 amostras coletadas, 35 (32,4%) foram positivaspara Salmonella; 17,2% dos isolados eram da área rural; e 88,6% da área urbana. Salmonellafoi isolada em todos os pontos de coleta ao longo do rio, com maior incidência no início da área urbana, indicando que a contaminação começa na área rural e se intensifica na área urbana da cidade. Um percentual de 35,1%dos isolados de Salmonellaforam resistentes a pelo menos dois antibióticos, enquanto 18,9% foram considerados multirresistentes (resistentes a pelo menos dois antibióticos de classes diferentes). Sete sorovares foram diferenciadosdos isolados sorotipados, com uma taxa de prevalência de 23,5% para S.Infantis,S.Orion e S.Javiana; 11,8% para S.Senfterberg e 5,9% para S.Montevidéu, S.Heidelberg e S.enterica subsp. enterica (O: 6,8). A variabilidade emlocais de restrição específicos gerados por PFGE resultou em 10 pulsotipos, separando principalmente diferentes sorotipos.(AU)

Investigation of Salmonella spp. in free-range chickens (Gallus gallus domesticus) in Southern Rio Grande do Sul / Pesquisa de Salmonella spp. em galinhas coloniais (Gallus gallus domesticus) no sul do Rio Grande do Sul

Salmonelose é uma doença causada por bactérias do gênero Salmonella, com importância para saúde pública e animal. Dentre os sorotipos hospedeiro-específicos, destaca-se o Gallinarum, que possui os biovares Gallinarum e Pullorum adaptados às aves e amplamente difundidos pelo mundo. Os dados sobre a ocorrência de Salmonella spp. em criações avícolas alternativas no Brasil são escassos. O objetivo deste estudo foi pesquisar a ocorrência de Salmonella spp. em galinhas coloniais encaminhadas para necropsia ao LRD/FV/UFPel. Foram realizadas análises histopatológicas, microbiológicas e moleculares das colônias bacterianas isoladas de 12 amostras de órgãos de galinhas domésticas dos municípios de Pelotas e Piratini, no Rio Grande do Sul. Na análise microbiológica, foram isoladas bactérias do gênero Salmonella sorotipo Gallinarum das 12 amostras, sendo 10/12 bioquimicamente compatíveis com biovar Gallinarum e 2/12 com biovar Pullorum. Na análise molecular PCR 11/12, 91,7% foram identificadas genotipicamente como Salmonella spp. O presente estudo demonstrou uma elevada frequência de isolamento de Salmonella Gallinarum biovar Gallinarum em aves sintomáticas criadas em regime extensivo. Além disso, os dados epidemiológicos das aves analisadas demonstram que a infecção por Salmonella Gallinarum nesses casos está associada ao contato com aves silvestres e falhas de manejo sanitário.(AU)

Fatores associados à infecção pelo vírus da estomatite vesicular em equídeos no estado do Rio Grande do Norte, Brasil / Factors associated with infection by the vesicular stomatitis virus in equines in the state of Rio Grande do Norte, Brazil

Objetivou-se investigar a presença do Vírus da Estomatite Vesicular (VEV) e seus fatores de risco para ocorrência e disseminação da enfermidade em equídeos das mesorregiões Leste e Oeste Potiguar do estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Foram analisadas pela técnica de virusneutralização, 809 amostras sanguíneas de equídeos provenientes de noventa propriedades de dezesseis municípios Potiguares durante os meses de julho de 2018 a fevereiro de 2019. Os fatores de riscos associados ao VEV foram avaliados por meio de questionário epidemiológico e os dados submetidos a análise estatística no programa IBM SPSS Statistics versão 21.0 com nível de confiança de 95%. Posteriormente, todas as variáveis estatisticamente significantes foram submetidas a análise de regressão de Poisson. A soroprevalência de anticorpos anti-VEV foi 24,6% (199/809), sendo 3,2% (13/402) de soropositivos na mesorregião Leste e 45,7% (186/407) na do Oeste Potiguar. Com relação aos sorotipos, observou-se uma prevalência de 3,8% (31/809) e 24,5% (198/809) para Indiana 2 e 3 respectivamente, com 15,1% (30/198) de coinfecção. Equídeos criados na mesorregião Oeste, em propriedades que não realizam quarentena e onde os animais enfermos são mantidos no rebanho, foram consideradas fatores predisponentes a infecção pelo VEV. Esses resultados demonstram a circulação do VEV em equídeos no Rio Grande do Norte, com destaque ao Oeste Potiguar, e sendo necessário a aplicação de medidas sanitárias que impeçam introdução e disseminação do vírus ente as espécies susceptíveis, principalmente em condições climáticas favoráveis para a sua manutenção, no ambiente de criação e pastagens.

This study aimed to investigate the presence of Vesicular stomatitis virus (VSV) and risk factors for its occurrence and dissemination in equines from the Eastern and Western mesoregions of the state of Rio Grande do Norte, Brazil. Blood samples were analyzed, by Serum Virus Neutralization Assay, from 809 animals belonging to 90 properties distributed in sixteen municipalities from July 2018 to February 2019. Risk factors were assessed using an epidemiological questionnaire. Data were submitted to statistical analysis using the software IBM SPSS Statistics, version 21.0 with a 95% confidence level. Also, all statistically significant variables were subjected to Poisson regression analysis. The occurrence of anti-VSV antibodies was 24.6% (199/809) with 3.2% (13/402) and 45.7% (186/407) of seropositivity in the Western and Eastern mesoregion, respectively. Regarding serotypes, there were an occurrence of 3.8% (31/809) and 24.5% (198/809) for Indiana 2 and 3, respectively, and 15.1% (30/198) of co-infection for both. Equines kept of the Western mesoregion, on properties that do not quarantine, and where sick animals are kept in the herd, were considered risk factors for LVV infection. These results demonstrate the presence of VSV in equines in Rio Grande do Norte, with emphasis on Oeste Potiguar, and that sanitary measures must be adopted to prevent the introduction and viral spreading among susceptible species, especially due to favorable climatic conditions for the maintenance of VSV in the breeding and pasture environment.

Fatores associados à infecção pelo vírus da estomatite vesicular em equídeos no estado do Rio Grande do Norte, Brasil / Factors associated with infection by the vesicular stomatitis virus in equines in the state of Rio Grande do Norte, Brazil

Objetivou-se investigar a presença do Vírus da Estomatite Vesicular (VEV) e seus fatores de risco para ocorrência e disseminação da enfermidade em equídeos das mesorregiões Leste e Oeste Potiguar do estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Foram analisadas pela técnica de virusneutralização, 809 amostras sanguíneas de equídeos provenientes de noventa propriedades de dezesseis municípios Potiguares durante os meses de julho de 2018 a fevereiro de 2019. Os fatores de riscos associados ao VEV foram avaliados por meio de questionário epidemiológico e os dados submetidos a análise estatística no programa IBM SPSS Statistics versão 21.0 com nível de confiança de 95%. Posteriormente, todas as variáveis estatisticamente significantes foram submetidas a análise de regressão de Poisson. A soroprevalência de anticorpos anti-VEV foi 24,6% (199/809), sendo 3,2% (13/402) de soropositivos na mesorregião Leste e 45,7% (186/407) na do Oeste Potiguar. Com relação aos sorotipos, observou-se uma prevalência de 3,8% (31/809) e 24,5% (198/809) para Indiana 2 e 3 respectivamente, com 15,1% (30/198) de coinfecção. Equídeos criados na mesorregião Oeste, em propriedades que não realizam quarentena e onde os animais enfermos são mantidos no rebanho, foram consideradas fatores predisponentes a infecção pelo VEV. Esses resultados demonstram a circulação do VEV em equídeos no Rio Grande do Norte, com destaque ao Oeste Potiguar, e sendo necessário a aplicação de medidas sanitárias que impeçam introdução e disseminação do vírus ente as espécies susceptíveis, principalmente em condições climáticas favoráveis para a sua manutenção, no ambiente de criação e pastagens.(AU)

This study aimed to investigate the presence of Vesicular stomatitis virus (VSV) and risk factors for its occurrence and dissemination in equines from the Eastern and Western mesoregions of the state of Rio Grande do Norte, Brazil. Blood samples were analyzed, by Serum Virus Neutralization Assay, from 809 animals belonging to 90 properties distributed in sixteen municipalities from July 2018 to February 2019. Risk factors were assessed using an epidemiological questionnaire. Data were submitted to statistical analysis using the software IBM SPSS Statistics, version 21.0 with a 95% confidence level. Also, all statistically significant variables were subjected to Poisson regression analysis. The occurrence of anti-VSV antibodies was 24.6% (199/809) with 3.2% (13/402) and 45.7% (186/407) of seropositivity in the Western and Eastern mesoregion, respectively. Regarding serotypes, there were an occurrence of 3.8% (31/809) and 24.5% (198/809) for Indiana 2 and 3, respectively, and 15.1% (30/198) of co-infection for both. Equines kept of the Western mesoregion, on properties that do not quarantine, and where sick animals are kept in the herd, were considered risk factors for LVV infection. These results demonstrate the presence of VSV in equines in Rio Grande do Norte, with emphasis on Oeste Potiguar, and that sanitary measures must be adopted to prevent the introduction and viral spreading among susceptible species, especially due to favorable climatic conditions for the maintenance of VSV in the breeding and pasture environment.(AU)

Fatores associados à infecção pelo vírus da estomatite vesicular em equídeos no estado do Rio Grande do Norte, Brasil / Factors associated with infection by the vesicular stomatitis virus in equines in the state of Rio Grande do Norte, Brazil

Objetivou-se investigar a presença do Vírus da Estomatite Vesicular (VEV) e seus fatores de risco para ocorrência e disseminação da enfermidade em equídeos das mesorregiões Leste e Oeste Potiguar do estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Foram analisadas pela técnica de virusneutralização, 809 amostras sanguíneas de equídeos provenientes de noventa propriedades de dezesseis municípios Potiguares durante os meses de julho de 2018 a fevereiro de 2019. Os fatores de riscos associados ao VEV foram avaliados por meio de questionário epidemiológico e os dados submetidos a análise estatística no programa IBM SPSS Statistics versão 21.0 com nível de confiança de 95%. Posteriormente, todas as variáveis estatisticamente significantes foram submetidas a análise de regressão de Poisson. A soroprevalência de anticorpos anti-VEV foi 24,6% (199/809), sendo 3,2% (13/402) de soropositivos na mesorregião Leste e 45,7% (186/407) na do Oeste Potiguar. Com relação aos sorotipos, observou-se uma prevalência de 3,8% (31/809) e 24,5% (198/809) para Indiana 2 e 3 respectivamente, com 15,1% (30/198) de coinfecção. Equídeos criados na mesorregião Oeste, em propriedades que não realizam quarentena e onde os animais enfermos são mantidos no rebanho, foram consideradas fatores predisponentes a infecção pelo VEV. Esses resultados demonstram a circulação do VEV em equídeos no Rio Grande do Norte, com destaque ao Oeste Potiguar, e sendo necessário a aplicação de medidas sanitárias que impeçam introdução e disseminação do vírus ente as espécies susceptíveis, principalmente em condições climáticas favoráveis para a sua manutenção, no ambiente de criação e pastagens.

This study aimed to investigate the presence of Vesicular stomatitis virus (VSV) and risk factors for its occurrence and dissemination in equines from the Eastern and Western mesoregions of the state of Rio Grande do Norte, Brazil. Blood samples were analyzed, by Serum Virus Neutralization Assay, from 809 animals belonging to 90 properties distributed in sixteen municipalities from July 2018 to February 2019. Risk factors were assessed using an epidemiological questionnaire. Data were submitted to statistical analysis using the software IBM SPSS Statistics, version 21.0 with a 95% confidence level. Also, all statistically significant variables were subjected to Poisson regression analysis. The occurrence of anti-VSV antibodies was 24.6% (199/809) with 3.2% (13/402) and 45.7% (186/407) of seropositivity in the Western and Eastern mesoregion, respectively. Regarding serotypes, there were an occurrence of 3.8% (31/809) and 24.5% (198/809) for Indiana 2 and 3, respectively, and 15.1% (30/198) of co-infection for both. Equines kept of the Western mesoregion, on properties that do not quarantine, and where sick animals are kept in the herd, were considered risk factors for LVV infection. These results demonstrate the presence of VSV in equines in Rio Grande do Norte, with emphasis on Oeste Potiguar, and that sanitary measures must be adopted to prevent the introduction and viral spreading among susceptible species, especially due to favorable climatic conditions for the maintenance of VSV in the breeding and pasture environment.

Quinolones resistance in Salmonella spp. isolated from broilers and chickens carcasses under federal inspection

ABSTRACT: We analyzed 77 Salmonella spp. strains, from which 20 were isolated from broilers (cloacal swabs) and 57 from chickens from slaughterhouses under federal inspection. The following serotypes were identified: Salmonella Saint Paul (29), Salmonella Heidelberg (27), Salmonella Anatum (9), Salmonella Cerro (5), Salmonella Senftenberg (5), Salmonella enterica (O: 4,5) (1) and Salmonella enterica (O: 9.12) (1). Fifteen strains (19.5%) were resistant to enrofloxacin, six (7.8%) to ciprofloxacin, and 26 (33.8%) to nalidixic acid in the Disk Diffusion Test. The fifteen enrofloxacin resistant strains were selected for the PCR to detect the genes gyrA, gyrB, parC, and parE, and genetic sequencing to identify mutations in these genes. Five strains (33.3%) had point mutations in the gyrA gene, and one (6.7%) presented a point mutation in the parC gene. None of the 15 strains had mutations in the gyrB and parE genes, and none had more than one mutation in the gyrA gene or the other genes. The presence of point mutations in the strains studied corroborates with the phenotypic resistance observed to nalidixic acid. However, it did not explain the resistance to fluoroquinolones found in the 15 strains. Other mechanisms may be related to the fluoroquinolones resistance, highlighting the need for additional mutation screening.

RESUMO: Foram analisadas neste estudo 77 estirpes de Salmonella spp., 20 isoladas de frangos vivos (suabes de cloaca) e 57 isoladas de carcaças, provenientes de abatedouros frigoríficos sob Inspeção Federal. Foram identificados os seguintes sorotipos: Salmonella Saint Paul (29), Salmonella Heidelberg (27), Salmonella Anatum (9), Salmonella Cerro (5), Salmonella Senftenberg (5), Salmonella enterica (O: 4,5) (1) e Salmonella enterica (O: 9,12) (1). Do total de estirpes estudadas, 15 (19,5%) se mostraram resistentes à enrofloxacina, seis (7,8%) à ciprofloxacina e 26 (33,8%) ao ácido nalidíxico no Teste de Difusão em Disco. Foram selecionadas as 15 estirpes resistentes à enrofloxacina para a realização da PCR para detecção dos genes gyrA, gyrB, parC e parEe para sequenciamento genético do produto da PCR para identificação de mutações nesses genes. Cinco estirpes (33,3%) apresentaram mutações pontuais no gene gyrA e uma (6,7%) apresentou mutação pontual no gene parC. Nenhuma das 15 estirpes apresentou mutações nos genes gyrB e parE e nenhuma apresentou mais de uma mutação no gene gyrA ou nos outros genes. A existência apenas de mutações pontuais em alguns genes das estirpes analisadas está de acordo com a resistência fenotípica observada ao ácido nalidíxico, mas não explica a resistência às fluoroquinolonas encontrada nas 15 estirpes. Outros mecanismos de resistência podem estar relacionados à resistência encontrada às fluoroquinolonas e estudos adicionais são necessários para investigar sua presença.

Detection of bluetongue virus antibodies in sheep from Paraná, Brazil / Detecção de anticorpos para o vírus da língua azul em ovinos do estado do Paraná, Brasil

Bluetongue (BT) is an infectious and non-contagious disease caused by bluetongue virus (BTV) belonging to the genus Orbivirus. It is transmitted by a hematophagous vector, Culicoides sp., to ruminants, particularly to sheep, which are most susceptible to this disease. The main serological tests are agar gel immunodiffusion (AGID), which is recommended by the World Organization for Animal Health (OIE), and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA), which has the advantage of no cross-reaction with other orbiviruses. The aim was to compare the results of these two tests by conducting them on sera collected from sheep in the state of Paraná, Brazil. From March to October 2017, serum samples were collected from 270 sheep from 10 farms in six mesoregions of Paraná. The samples were subjected to AGID and cELISA to detect antibodies against BTV. Based on the test results, we classified the sheep as low, moderate, and high occurrence. The results demonstrated that 64.81% (175/270) of the sheep were seropositive through the cELISA test, showing a high occurrence, and 41.11% (111/270) were seropositive through the AGID test, indicating a moderate occurrence. The concordance between the tests was moderate (0.51) as determined by the Kappa coefficient. Among the studied farms, 90% (9/10) presented at least one seropositive sheep, and the number of animals tested positive by the cELISA test was higher than those by the AGID test. Favorable climate, which favors the presence and multiplication of the culicoid vector and the occurrence of infection, was the biggest predominant factor responsible for the obtained results. The low occurrence in farms with milder climate suggest that the presence of antibodies also occurs due to the low pathogenicity of circulating serotypes in the different mesoregions studied. It is concluded that BTV infection is present in the sheep herds in Paraná, and the occurrence...

A língua azul (LA) é uma enfermidade infecciosa e não contagiosa causada por um vírus (VLA) do gênero Orbivirus, transmitida por vetores hematófagos Culicoides sp., aos ruminantes sobretudo aos ovinos, espécie mais susceptível. Os principais testes sorológicos utilizados são a Imunodifusão em Gél de Ágar (IDGA), preconizada pela OIE, e o teste Imunoensaio Enzimático Competitivo (ELISAc), sendo que este tem como vantagem não ocorrer reação cruzada contra outros orbivírus. O objetivo do trabalho foi detectar a presença de anticorpos contra o VLA em ovinos no estado do Paraná através dos testes diagnósticos IDGA e ELISAc. Durante os meses de março a outubro de 2017, colheu-se sangue de 270 ovinos, em 10 propriedades localizadas em seis mesorregiões paranaenses. As amostras foram submetidas aos testes de IDGA e ELISAc para detecção de anticorpos contra o VLA. Baseado nos resultados classificaram-se os rebanhos como baixa, moderada ou elevada ocorrência. Os resultados demonstraram elevada ocorrência através do teste de ELISAc, que apresentou 64,81% (175/270) de ovinos positivos, e moderada ocorrência através do IDGA, com 41,11% (111/270) de ovinos soropositivos. A concordância obtida entre os testes foi moderada (0,51) através do coeficiente Kappa. O número de ovinos reagentes no exame de ELISAc foi maior que o teste de IDGA em todas as propriedades positivas, demonstrando ser superior. O clima propício foi um dos fatores favoráveis para as ocorrências observadas, pois favorece a presença e multiplicação do vetor Culicoide e a ocorrência da infecção. A baixa ocorrência nas propriedades com clima mais ameno sugere que a presença de anticorpos provavelmente ocorra também pela baixa patogenicidade dos sorotipos circulantes nas diferentes mesorregiões estudadas. Conclui-se que há infecção de VLA no rebanho ovino paranaense, e a detecção de anticorpos para o VLA foi moderada, através do teste de IDGA, e elevada, através do teste ELISAc.

Detection of bluetongue virus antibodies in sheep from Paraná, Brazil / Detecção de anticorpos para o vírus da língua azul em ovinos do estado do Paraná, Brasil

Bluetongue (BT) is an infectious and non-contagious disease caused by bluetongue virus (BTV) belonging to the genus Orbivirus. It is transmitted by a hematophagous vector, Culicoides sp., to ruminants, particularly to sheep, which are most susceptible to this disease. The main serological tests are agar gel immunodiffusion (AGID), which is recommended by the World Organization for Animal Health (OIE), and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA), which has the advantage of no cross-reaction with other orbiviruses. The aim was to compare the results of these two tests by conducting them on sera collected from sheep in the state of Paraná, Brazil. From March to October 2017, serum samples were collected from 270 sheep from 10 farms in six mesoregions of Paraná. The samples were subjected to AGID and cELISA to detect antibodies against BTV. Based on the test results, we classified the sheep as low, moderate, and high occurrence. The results demonstrated that 64.81% (175/270) of the sheep were seropositive through the cELISA test, showing a high occurrence, and 41.11% (111/270) were seropositive through the AGID test, indicating a moderate occurrence. The concordance between the tests was moderate (0.51) as determined by the Kappa coefficient. Among the studied farms, 90% (9/10) presented at least one seropositive sheep, and the number of animals tested positive by the cELISA test was higher than those by the AGID test. Favorable climate, which favors the presence and multiplication of the culicoid vector and the occurrence of infection, was the biggest predominant factor responsible for the obtained results. The low occurrence in farms with milder climate suggest that the presence of antibodies also occurs due to the low pathogenicity of circulating serotypes in the different mesoregions studied. It is concluded that BTV infection is present in the sheep herds in Paraná, and the occurrence...(AU)

A língua azul (LA) é uma enfermidade infecciosa e não contagiosa causada por um vírus (VLA) do gênero Orbivirus, transmitida por vetores hematófagos Culicoides sp., aos ruminantes sobretudo aos ovinos, espécie mais susceptível. Os principais testes sorológicos utilizados são a Imunodifusão em Gél de Ágar (IDGA), preconizada pela OIE, e o teste Imunoensaio Enzimático Competitivo (ELISAc), sendo que este tem como vantagem não ocorrer reação cruzada contra outros orbivírus. O objetivo do trabalho foi detectar a presença de anticorpos contra o VLA em ovinos no estado do Paraná através dos testes diagnósticos IDGA e ELISAc. Durante os meses de março a outubro de 2017, colheu-se sangue de 270 ovinos, em 10 propriedades localizadas em seis mesorregiões paranaenses. As amostras foram submetidas aos testes de IDGA e ELISAc para detecção de anticorpos contra o VLA. Baseado nos resultados classificaram-se os rebanhos como baixa, moderada ou elevada ocorrência. Os resultados demonstraram elevada ocorrência através do teste de ELISAc, que apresentou 64,81% (175/270) de ovinos positivos, e moderada ocorrência através do IDGA, com 41,11% (111/270) de ovinos soropositivos. A concordância obtida entre os testes foi moderada (0,51) através do coeficiente Kappa. O número de ovinos reagentes no exame de ELISAc foi maior que o teste de IDGA em todas as propriedades positivas, demonstrando ser superior. O clima propício foi um dos fatores favoráveis para as ocorrências observadas, pois favorece a presença e multiplicação do vetor Culicoide e a ocorrência da infecção. A baixa ocorrência nas propriedades com clima mais ameno sugere que a presença de anticorpos provavelmente ocorra também pela baixa patogenicidade dos sorotipos circulantes nas diferentes mesorregiões estudadas. Conclui-se que há infecção de VLA no rebanho ovino paranaense, e a detecção de anticorpos para o VLA foi moderada, através do teste de IDGA, e elevada, através do teste ELISAc.(AU)

Quinolones resistance in Salmonella spp. isolated from broilers and chickens carcasses under federal inspection / Resistência à quinolonas em Salmonella spp. isoladas de frangos vivos e carcaças sob inspeção federal

We analyzed 77 Salmonella spp. strains, from which 20 were isolated from broilers (cloacal swabs) and 57 from chickens from slaughterhouses under federal inspection. The following serotypes were identified: Salmonella Saint Paul (29), Salmonella Heidelberg (27), Salmonella Anatum (9), Salmonella Cerro (5), Salmonella Senftenberg (5), Salmonella enterica (O: 4,5) (1) and Salmonella enterica (O: 9.12) (1). Fifteen strains (19.5%) were resistant to enrofloxacin, six (7.8%) to ciprofloxacin, and 26 (33.8%) to nalidixic acid in the Disk Diffusion Test. The fifteen enrofloxacin resistant strains were selected for the PCR to detect the genes gyrA, gyrB, parC, and parE, and genetic sequencing to identify mutations in these genes. Five strains (33.3%) had point mutations in the gyrA gene, and one (6.7%) presented a point mutation in the parC gene. None of the 15 strains had mutations in the gyrB and parE genes, and none had more than one mutation in the gyrA gene or the other genes. The presence of point mutations in the strains studied corroborates with the phenotypic resistance observed to nalidixic acid. However, it did not explain the resistance to fluoroquinolones found in the 15 strains. Other mechanisms may be related to the fluoroquinolones resistance, highlighting the need for additional mutation screening.(AU)

Foram analisadas neste estudo 77 estirpes de Salmonella spp., 20 isoladas de frangos vivos (suabes de cloaca) e 57 isoladas de carcaças, provenientes de abatedouros frigoríficos sob Inspeção Federal. Foram identificados os seguintes sorotipos: Salmonella Saint Paul (29), Salmonella Heidelberg (27), Salmonella Anatum (9), Salmonella Cerro (5), Salmonella Senftenberg (5), Salmonella enterica (O: 4,5) (1) e Salmonella enterica (O: 9,12) (1). Do total de estirpes estudadas, 15 (19,5%) se mostraram resistentes à enrofloxacina, seis (7,8%) à ciprofloxacina e 26 (33,8%) ao ácido nalidíxico no Teste de Difusão em Disco. Foram selecionadas as 15 estirpes resistentes à enrofloxacina para a realização da PCR para detecção dos genes gyrA, gyrB, parC e parEe para sequenciamento genético do produto da PCR para identificação de mutações nesses genes. Cinco estirpes (33,3%) apresentaram mutações pontuais no gene gyrA e uma (6,7%) apresentou mutação pontual no gene parC. Nenhuma das 15 estirpes apresentou mutações nos genes gyrB e parE e nenhuma apresentou mais de uma mutação no gene gyrA ou nos outros genes. A existência apenas de mutações pontuais em alguns genes das estirpes analisadas está de acordo com a resistência fenotípica observada ao ácido nalidíxico, mas não explica a resistência às fluoroquinolonas encontrada nas 15 estirpes. Outros mecanismos de resistência podem estar relacionados à resistência encontrada às fluoroquinolonas e estudos adicionais são necessários para investigar sua presença.(AU)

Comparative study of egg contamination with SalmonellaHeidelberg and Salmonella Typhimurium / Estudo comparativo da contaminação de ovos com SalmonellaHeidelberg e Salmonella Typhimurium

Cases of salmonellosis in humans have been associated with consumption of eggs contaminated with this bacterial pathogen due to insufficient heat treatment. The most prevalent serotypes of Salmonella in Brazil include serotypes Enteritidis, Typhimurium, and Heidelberg. The first two serotypes are major causes for eggs to be withheld from sale and for recalls over Salmonella contamination concerns in both domestic and foreign markets. Eggs may be contaminated through transovarian infection (transovarial transmission) due to the presence of the microorganism in the hen's oviduct and bacterial penetration of the eggshell. There is little data in the literature on the susceptibility of egg contamination and eggshell penetration by Brazilian serotypes of Salmonella. The present study aimed to evaluate the ability of S. Heidelberg and S. Typhimurium serotypes to penetrate through the eggshell and detect these bacteria in the albumen and yolk according to the thickness of the eggshell. SPF (specific-pathogen-free) eggs were artificially contaminated by contact with moist cotton containing Salmonella (15 x 108 CFU/ml). Eggs were divided into the following groups: negative control (not contaminated), S. Heidelberg, and S. Typhimurium. Subsequently, these eggs were incubated at 37°C, and their contents analyzed after 4 h and 24 h of incubation. The evaluation (assessment) of the contamination was performed by traditional bacteriology and confirmed by biochemical and serological tests. Treatments were compared with Fisher's test using a SAS statistical software. For S. Heidelberg, the percentage of positivity (positive cases) was lower in both albumen and yolk at 4 h and 24 h intervals (33.33% and 3.7%, and 3.7% and 3.7%, respectively) compared to S. Typhimurium (26.63% and 7.41%, and 33.33% and 33.33%, respectively). These findings suggest that the former strain (S. Heidelberg) was unable to survive in the hostile environment of the albumen. In contrast, eggshell thickness had no significant correlation with the number of positive samples. In conclusion, the results obtained in the egg infection model show that the Salmonella strains tested were able to penetrate the eggshell and multiply in both the albumen and yolk and that S. Typhimurium proved to be the most efficient to grow within these portions of the egg.(AU)

Salmonelose em humanos é frequentemente associada ao consumo de ovos contaminados sem o devido processamento térmico. No Brasil, os sorotipos mais prevalentes são: Enteritidis, Typhimurium e Heidelberg, alvo de barreiras sanitárias na comercialização de ovos. O ovo pode ser contaminado por via transovariana, pela presença da bactéria no oviduto da ave e também por penetração da bactéria através da casca do ovo. Existem poucas informações acerca da capacidade de contaminação no ovo por sorotipos isolados no Brasil. Este estudo teve como objetivo avaliar a capacidade dos sorotipos S. Heidelberg e S. Typhimurium penetrar através da casca do ovo e colonizar a albumina e gema, relacionando à espessura da casca. Os ovos SPF (livres de patógenos específicos) foram contaminados artificialmente pelo contato com algodão umedecido (15 x 108 CF/mL). Os ovos foram divididos nos seguintes grupos: controle negativo (sem contaminação), S. Heidelberg e S. Typhimurium. Posteriormente foram incubadas a 37°C e seu conteúdo foi analisado após 4 e 24 h. A avaliação da contaminação foi realizada por bacteriologia tradicional e confirmada por testes bioquímicos e sorológicos. Os tratamentos foram comparados com o teste de Fisher usando o software estatístico SAS. Para S. Heidelberg, a percentagem de positividade foi menor no albúmen e gema às 4 e 24 h (33,33% e 3,7%, 3,7% e 3,7%, respectivamente) em comparação com S. Typhimurium (26,63% e 7,41%, 33,33% e 33,33%, respectivamente), sugerindo que a primeira estirpe foi mais vulnerável as condições hostis da albumina. Por outro lado, a espessura da casca do ovo não teve relação significativa com a positividade das amostras. Em conclusão, o modelo de infecção do ovo mostrou que as cepas foram capazes de penetrar a casca do ovo e sobreviver na albumina e gema, sendo que o sorotipo S. Typhimurium foi mais eficiente.(AU)

Comparative study of egg contamination with SalmonellaHeidelberg and Salmonella Typhimurium / Estudo comparativo da contaminação de ovos com SalmonellaHeidelberg e Salmonella Typhimurium

Cases of salmonellosis in humans have been associated with consumption of eggs contaminated with this bacterial pathogen due to insufficient heat treatment. The most prevalent serotypes of Salmonella in Brazil include serotypes Enteritidis, Typhimurium, and Heidelberg. The first two serotypes are major causes for eggs to be withheld from sale and for recalls over Salmonella contamination concerns in both domestic and foreign markets. Eggs may be contaminated through transovarian infection (transovarial transmission) due to the presence of the microorganism in the hen's oviduct and bacterial penetration of the eggshell. There is little data in the literature on the susceptibility of egg contamination and eggshell penetration by Brazilian serotypes of Salmonella. The present study aimed to evaluate the ability of S. Heidelberg and S. Typhimurium serotypes to penetrate through the eggshell and detect these bacteria in the albumen and yolk according to the thickness of the eggshell. SPF (specific-pathogen-free) eggs were artificially contaminated by contact with moist cotton containing Salmonella (15 x 108 CFU/ml). Eggs were divided into the following groups: negative control (not contaminated), S. Heidelberg, and S. Typhimurium. Subsequently, these eggs were incubated at 37°C, and their contents analyzed after 4 h and 24 h of incubation. The evaluation (assessment) of the contamination was performed by traditional bacteriology and confirmed by biochemical and serological tests. Treatments were compared with Fisher's test using a SAS statistical software. For S. Heidelberg, the percentage of positivity (positive cases) was lower in both albumen and yolk at 4 h and 24 h intervals (33.33% and 3.7%, and 3.7% and 3.7%, respectively) compared to S. Typhimurium (26.63% and 7.41%, and 33.33% and 33.33%, respectively). These findings suggest that the former strain (S. Heidelberg) was unable to survive in the hostile environment of the albumen. In contrast, eggshell thickness had no significant correlation with the number of positive samples. In conclusion, the results obtained in the egg infection model show that the Salmonella strains tested were able to penetrate the eggshell and multiply in both the albumen and yolk and that S. Typhimurium proved to be the most efficient to grow within these portions of the egg.(AU)

Salmonelose em humanos é frequentemente associada ao consumo de ovos contaminados sem o devido processamento térmico. No Brasil, os sorotipos mais prevalentes são: Enteritidis, Typhimurium e Heidelberg, alvo de barreiras sanitárias na comercialização de ovos. O ovo pode ser contaminado por via transovariana, pela presença da bactéria no oviduto da ave e também por penetração da bactéria através da casca do ovo. Existem poucas informações acerca da capacidade de contaminação no ovo por sorotipos isolados no Brasil. Este estudo teve como objetivo avaliar a capacidade dos sorotipos S. Heidelberg e S. Typhimurium penetrar através da casca do ovo e colonizar a albumina e gema, relacionando à espessura da casca. Os ovos SPF (livres de patógenos específicos) foram contaminados artificialmente pelo contato com algodão umedecido (15 x 108 CF/mL). Os ovos foram divididos nos seguintes grupos: controle negativo (sem contaminação), S. Heidelberg e S. Typhimurium. Posteriormente foram incubadas a 37°C e seu conteúdo foi analisado após 4 e 24 h. A avaliação da contaminação foi realizada por bacteriologia tradicional e confirmada por testes bioquímicos e sorológicos. Os tratamentos foram comparados com o teste de Fisher usando o software estatístico SAS. Para S. Heidelberg, a percentagem de positividade foi menor no albúmen e gema às 4 e 24 h (33,33% e 3,7%, 3,7% e 3,7%, respectivamente) em comparação com S. Typhimurium (26,63% e 7,41%, 33,33% e 33,33%, respectivamente), sugerindo que a primeira estirpe foi mais vulnerável as condições hostis da albumina. Por outro lado, a espessura da casca do ovo não teve relação significativa com a positividade das amostras. Em conclusão, o modelo de infecção do ovo mostrou que as cepas foram capazes de penetrar a casca do ovo e sobreviver na albumina e gema, sendo que o sorotipo S. Typhimurium foi mais eficiente.(AU)

Ocorrência de Campylobacter e Enterobacteriaceae em aves silvestres e frangos de corte / Campylobacter and Enterobacteriaceae in wild birds and poultry

As aves silvestres podem ser reservatório de bactérias patogênicas e atuar como veiculadoras desses microrganismos para o ambiente, os animais domésticos e o homem. Portanto, o objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência de Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica e Salmonella enterica em aves silvestres capturadas nas áreas próximas de aviários e em frangos de corte alojados nesses estabelecimentos, além de verificar a presença dos genes cdtA, cdtB e cdtC nos isolados de Campylobacter e identificar os sorotipos de Salmonella encontrados. Amostras de fezes de 189 aves silvestres capturadas com redes de neblina nas áreas próximas de 10 aviários e de 200 frangos de corte foram processadas para pesquisa de Campylobacter spp., S. enterica e Y. enterocolitica. Duas espécies de aves silvestres, Sicalis flaveola (canário-da-terra) e Zonotrichia capensis (tico-tico), foram positivas para Salmonella e Campylobacter, respectivamente. Foram isolados Campylobacter spp., S. enterica e Y. enterocolitica de frangos. Todos os isolados de Campylobacter analisados apresentaram os genes cdt. Em dois aviários, Campylobacter foi isolado tanto de frangos como de aves silvestres, entretanto a contaminação mútua entre essas aves não foi comprovada. Este foi o primeiro relato de isolamento de Campylobacter de Z. capensis e de Salmonella do sorotipo Derby de S. flaveola.(AU)

Wild birds can be reservoirs of pathogenic bacteria and act as carriers of these microorganisms to the environment, domestic animals, and humans. Therefore, this study had as objective to verify the occurrence of Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica and Salmonella enterica in wild birds captured in the surroundings of the aviaries and in the broilers housed in these establishments. The presence of the cdtA, cdtB and cdtC genes in Campylobacter isolates was also investigated and Salmonella serotypes were identified. Stool samples from 189 wild birds captured with mist nets in around 10 aviaries and from 200 broilers were processed for Campylobacter spp., S. enterica and Y. enterocolitica research. Two species of wild birds, Sicalis flaveola (Saffron Finch) and Zonotrichia capensis (Rufous-collared Sparrow) were positive for Salmonella and Campylobacter, respectively. Campylobacter spp., S. enterica and Y. enterocolitica were isolated from broilers. The cdt genes were found in all Campylobacter isolates. In two aviaries, Campylobacter was isolated from both broilers and wild birds, however the mutual contamination among these birds has not been shown. This was the first report of Campylobacter isolation from Z. capensis and of Derby Salmonella serotype isolation from S. flaveola.(AU)

Ocorrência de Campylobacter e Enterobacteriaceae em aves silvestres e frangos de corte / Campylobacter and Enterobacteriaceae in wild birds and poultry

As aves silvestres podem ser reservatório de bactérias patogênicas e atuar como veiculadoras desses microrganismos para o ambiente, os animais domésticos e o homem. Portanto, o objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência de Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica e Salmonella enterica em aves silvestres capturadas nas áreas próximas de aviários e em frangos de corte alojados nesses estabelecimentos, além de verificar a presença dos genes cdtA, cdtB e cdtC nos isolados de Campylobacter e identificar os sorotipos de Salmonella encontrados. Amostras de fezes de 189 aves silvestres capturadas com redes de neblina nas áreas próximas de 10 aviários e de 200 frangos de corte foram processadas para pesquisa de Campylobacter spp., S. enterica e Y. enterocolitica. Duas espécies de aves silvestres, Sicalis flaveola (canário-da-terra) e Zonotrichia capensis (tico-tico), foram positivas para Salmonella e Campylobacter, respectivamente. Foram isolados Campylobacter spp., S. enterica e Y. enterocolitica de frangos. Todos os isolados de Campylobacter analisados apresentaram os genes cdt. Em dois aviários, Campylobacter foi isolado tanto de frangos como de aves silvestres, entretanto a contaminação mútua entre essas aves não foi comprovada. Este foi o primeiro relato de isolamento de Campylobacter de Z. capensis e de Salmonella do sorotipo Derby de S. flaveola.(AU)

Wild birds can be reservoirs of pathogenic bacteria and act as carriers of these microorganisms to the environment, domestic animals, and humans. Therefore, this study had as objective to verify the occurrence of Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica and Salmonella enterica in wild birds captured in the surroundings of the aviaries and in the broilers housed in these establishments. The presence of the cdtA, cdtB and cdtC genes in Campylobacter isolates was also investigated and Salmonella serotypes were identified. Stool samples from 189 wild birds captured with mist nets in around 10 aviaries and from 200 broilers were processed for Campylobacter spp., S. enterica and Y. enterocolitica research. Two species of wild birds, Sicalis flaveola (Saffron Finch) and Zonotrichia capensis (Rufous-collared Sparrow) were positive for Salmonella and Campylobacter, respectively. Campylobacter spp., S. enterica and Y. enterocolitica were isolated from broilers. The cdt genes were found in all Campylobacter isolates. In two aviaries, Campylobacter was isolated from both broilers and wild birds, however the mutual contamination among these birds has not been shown. This was the first report of Campylobacter isolation from Z. capensis and of Derby Salmonella serotype isolation from S. flaveola.(AU)

Padronização de teste para quantificar anticorpos anti-poliovírus utilizando vírus vacinal / Standardization of a test for quantifying the antibodies against poliovirus using the vaccine virus

A poliomielite é uma doença endêmica no Afeganistão e no Paquistão, apesar dos esforços para ser erradicada, representando uma ameaça para outros países principalmente devido às viagens internacionais. A Organização Mundial da Saúde (OMS) tem como objetivo erradicar a poliomielite causada pelo poliovírus selvagem no mundo. O requisito essencial para a erradicação da poliomielite é a eliminação da cepa do poliovírus selvagem, que é empregada no teste padrão-ouro. Com o intuito de auxiliar na erradicação do poliovírus selvagem, o objetivo deste estudo foi modificar o teste padrão-ouro usando o poliovírus derivado da vacina oral atenuada. Foram testados 63 soros pelo ensaio de neutralização utilizando-se antígenos vacinais. A concordância do sorotipo 1 (k=0,74) foi considerada substancial, enquanto o sorotipo 2 (k=1,00) e sorotipo 3 (k= 0,95) foram consideradas quase perfeitas. A sensibilidade dos testes de soroneutralização utilizando os sorotipos 1, 2 e 3 foi de 94,83%, 100,00% e 100,00%, respectivamente. Em conclusão, o ensaio com antígenos vacinais pode ser usado como procedimento laboratorial seguro, especialmente em estudos de vigilância em larga escala.

Poliomyelitis is an endemic disease in Afghanistan and Pakistan in despite of the efforts to eradicate it, and it represents a threat to other countries mainly due to the international trips. The World Health Organization (WHO) aims at eradicating the polio disease worldwide. An essential requirement for eradicating the poliomyelitis is the elimination of the wild poliovirus strain, which is employed in the gold standard test. As a support for the eradication of wild poliovirus, the present study aimed at modifying the gold standard test by using poliovirus derived from the oral attenuated vaccine. Sixty-three sera samples were tested by neutralization assay using vaccine antigens. The degree of agreement of the serotype 1 (k=0.74) was considered substantial, while the serotype 2 (k=1.00) and 3 (k= 0.95) showed almost perfect agreement. The sensitivity of serotypes 1, 2 and 3 was 94.83%, 100.00% and 100.00%, respectively. In conclusion, the assay with the vaccine antigens can be used as a safe application, especially for large-scale surveillance studies.

Padronização de teste para quantificar anticorpos anti-poliovírus utilizando vírus vacinal / Standardization of a test for quantifying the antibodies against poliovirus using the vaccine virus

A poliomielite é uma doença endêmica no Afeganistão e no Paquistão, apesar dos esforços para ser erradicada, representando uma ameaça para outros países principalmente devido às viagens internacionais. A Organização Mundial da Saúde (OMS) tem como objetivo erradicar a poliomielite causada pelo poliovírus selvagem no mundo. O requisito essencial para a erradicação da poliomielite é a eliminação da cepa do poliovírus selvagem, que é empregada no teste padrão-ouro. Com o intuito de auxiliar na erradicação do poliovírus selvagem, o objetivo deste estudo foi modificar o teste padrão-ouro usando o poliovírus derivado da vacina oral atenuada. Foram testados 63 soros pelo ensaio de neutralização utilizando-se antígenos vacinais. A concordância do sorotipo 1 (k=0,74) foi considerada substancial, enquanto o sorotipo 2 (k=1,00) e sorotipo 3 (k= 0,95) foram consideradas quase perfeitas. A sensibilidade dos testes de soroneutralização utilizando os sorotipos 1, 2 e 3 foi de 94,83%, 100,00% e 100,00%, respectivamente. Em conclusão, o ensaio com antígenos vacinais pode ser usado como procedimento laboratorial seguro, especialmente em estudos de vigilância em larga escala.(AU)

Poliomyelitis is an endemic disease in Afghanistan and Pakistan in despite of the efforts to eradicate it, and it represents a threat to other countries mainly due to the international trips. The World Health Organization (WHO) aims at eradicating the polio disease worldwide. An essential requirement for eradicating the poliomyelitis is the elimination of the wild poliovirus strain, which is employed in the gold standard test. As a support for the eradication of wild poliovirus, the present study aimed at modifying the gold standard test by using poliovirus derived from the oral attenuated vaccine. Sixty-three sera samples were tested by neutralization assay using vaccine antigens. The degree of agreement of the serotype 1 (k=0.74) was considered substantial, while the serotype 2 (k=1.00) and 3 (k= 0.95) showed almost perfect agreement. The sensitivity of serotypes 1, 2 and 3 was 94.83%, 100.00% and 100.00%, respectively. In conclusion, the assay with the vaccine antigens can be used as a safe application, especially for large-scale surveillance studies.(AU)