Taxa de recuperação embrionária em éguas Mangalarga Marchador inseminadas com sêmen refrigerado / Embryonic recovery rate in Mangalarga Marchador mares inseminated with refrigerated semen

O acompanhamento reprodutivo da espécie equina tem sido cada vez mais aplicado na aplicade de diversos países, resultando em melhores índices reprodutivos para a espécie e em animais de linhagens selecionadas. Nos programas de transferência de embrião, a taxa de recuperação embrionária consiste em um parâmetro essencial a fim de verificar o sucesso da técnica. Por conseguinte, este trabalho propõe-se a avaliar as taxas de recuperação embrionária de éguas doadoras submetidas à inseminação artificial com sêmen refrigerado de maneira a complementar os dados relacionados ao assunto. Conforme os dados coletados durante a estação de monta de agosto de 2018 a fevereiro de 2019, obteve-se 129 lavados uterinos provenientes de 20 éguas e 83 embriões recuperados. Desse modo, a taxa de recuperação embrionária obtida foi de 64,34%. Diante dos dados apresentados neste estudo, conclui-se que a aplicabilidade da técnica de recuperação embrionária visando o uso do sêmen refrigerado na inseminação artificial de éguas se mostra promissora, pois permite o transporte de material genético de alto valor entre propriedades sem interferir drasticamente nos índices dos programas de reprodução.

The reproductive monitoring of the equine species has been increasingly applied in several countries, resulting in better reproductive rates for the species and in animals from selected strains. In embryo transfer programs, the embryo recovery rate is an essential parameter to verify the technique success. Therefore, the present work proposes to evaluate the embryo recovery rates of donor mares submitted to artificial insemination with refrigerated semen to complement the data related to the subject. According to the data collected during the breeding season for the period from August 2018 to February 2019, 129 uterine washes were obtained from 20 mares and 83 recovered embryos. Thus, the embryonic recovery rate obtained was 64.34%. Given the data presented in this study, it is concluded that the applicability of the embryonic recovery technique aiming at the use of refrigerated semen in artificial insemination of mares is promising, as it allows the transport of high-value genetic material between properties without interfering dramatically in breeding program indexes.

Seleção de reprodutores caprinos e ovinos para produção de sêmen / Selection of caprine and ovine sires for semen production

A presente revisão propôs analisar quais características são desejáveis para seleção de reprodutores caprinos e ovinos, visando à produção de sêmen. A escolha dos reprodutores deve ser feita de acordo com os padrões exigidos da raça, além da higidez reprodutiva dos animais. Biotecnologias reprodutivas oferecem oportunidades consideráveis para a produção animal, como a inseminação artificial, transferência de embriões e congelamento de sêmen. Análises da produção de espermatozoides são de grande importância, pois está diretamente relacionada com a atividade sexual. A genética do criatório é um fator crítico que influencia o resultado final e a saúde animal. A utilização de marcadores moleculares é uma ferramenta que temos para selecionar características desejáveis em uma prole, através da identificação de biomarcadores. Técnicas de genética molecular potencializam o efeito de biotécnicas reprodutivas e consequentemente a lucratividade da pecuária intensiva.(AU)

The present review proposed to analyze which characteristics are desirable for the selection of goat and sheep breeders, aiming at the production of semen. The choice of breeders must be made in accordance with the standards required for the breed, in addition to the reproductive health of the animals. Reproductive biotechnologies offer considerable opportunities for animal production, such as artificial insemination, embryo transfer and semen freezing. Analyzes of sperm production are of great importance, as it is directly related to sexual activity. Farm genetics is a critical factor that influences the end result and animal health. The use of molecular markers is a tool that we have to select desirable characteristics in an offspring, through the identification of biomarkers. Molecular genetic techniques enhance the effect of reproductive biotechniques and consequently the profitability of intensive livestock farming.(AU)

Lentivirus vectors fail to deliver transgenes into bovine zygotes after co-incubation with sperm during in vitro fertilization / [Lentivírus falham na entrega de transgenes em zigotos bovinos após coincubação com espermatozoide, durante fertilização in vitro]

As vantagens dos animais transgênicos têm sido demonstradas em diferentes aplicações, entretanto muitas metodologias usadas para gerar animais geneticamente modificados (GM) apresentam baixas taxas de eficiência. O objetivo deste estudo foi avaliar a entrega dos vetores lentivirais (VLs) em zigotos durante a fertilização in vitro (FIV), para gerar embriões GM, com o gene da proteína verde fluorescente (GFP) ou do fator IX de coagulação humana (FIX). Vetores lentivirais com os genes GFP (pLGW-GFP-LV) ou FIX (pLWE2-FIX-LV) foram utilizados na FIV ou na cultura de embriões in vitro (CIV). A coincubação de pLWE2-FIX-LV com espermatozoides e complexos oócitos-células do cumulus (COCs) durante a FIV diminuiu (P<0,05) as taxas de clivagem e de blastocistos, enquanto com pLGW-GFP-LV diminuiu (P<0,05) a taxa de blastocisto quando se comparou ao controle sem VL. A coincubação de pLWE2-FIX-LV e pLGW-GFP-LV com presumíveis zigotos durante a CIV não afetou (P>0,05) o desenvolvimento embrionário. A expressão da proteína GFP não foi detectada em embriões após a coincubação de FIV ou CIV, embora as células do cumulus expressassem a proteína até o dia oito de cultivo in vitro. Reações em cadeia da polimerase (PCR) não detectaram os genes GFP ou FIX em embriões, mas ambos foram detectados em células do cumulus. Assim, a coincubação de VL com espermatozoide bovino e COCs não é eficaz para produzir embriões geneticamente modificados por meio de FIV.(AU)

Clinical application of Doppler ultrasound in the diagnosis of fertility problems in equines / Aplicações da ultrassonografia Doppler no diagnóstico de problemas de fertilidade em equinos

The use of different ultrasound modalities (color, power and pulsed Doppler) in clinical research has enhanced knowledge of reproductive pathophysiology in equine, in addition to improving the clinical diagnosis of reproductive disorders in both the stallion and the mare. In the stallion, color Doppler ultrasound has improved the diagnostic potential of conventional ultrasound, improving the differential diagnosis of pathologies such as testicular torsion (decrease or absence of blood flow in the cord) and orchitis (increased blood flow in the cord). The function of the testicle is highly dependent on the blood flow it receives; therefore, any vascular alterations can affect both the quality and production of sperm. In recent years there have been a greater number of studies in which Doppler ultrasound is used as a tool in the diagnosis of testicular dysfunction and in the monitoring of medical and surgical treatments. In the mare, ultrasound technology has allowed numerous advances in basic research regarding the vascular hemodynamics of the ovary and uterus. Moreover, it has become an indispensable tool in reproductive practice. Among the clinical applications of this technique in mares are the evaluation of CL (corpus luteum) functionality, being a useful tool in the selection of recipients in embryo transfer programs or the use of power Doppler in the diagnosis of pregnancy as early as 7 days postovulation prior to flushing. Finally, the incorporation of color and pulsed Doppler ultrasound into the examination improves the diagnosis of mares with endometritis due to a pathological increase in uterine blood flow.

A interface entre a saúde humana e a reprodução assistida em primatas não humanos / The interface between human health and assisted reproductive technologies in non-human primates

Os primatas não-humanos (PNHs) são tidos como importantes modelos para estudos biomédicos devido à sua grande similaridade biológica com os seres humanos. As técnicas de reprodução assistida (TRAs) constituem uma importante ferramenta para realização de estudos que envolvam infertilidade, desenvolvimento de contraceptivos, gestação e desenvolvimento fetal, preservação da fertilidade em pacientes com câncer, geração de modelos experimentais por meio de técnicas de edição gênica, entre outros. O objetivo dessa revisão é discutir as principais TRAs utilizadas em PNHs e suas aplicações. Dentre as técnicas mais utilizadas em PNHs, podem-se citar colheita e criopreservação de sêmen, monitoramento do ciclo ovariano, estimulação ovariana controlada e aspiração de folículos ovarianos, fecundação in vitro, injeção intracitoplasmática de espermatozoides, inseminação artificial, microinjeção para injeção gênica, biopsia embrionária, criopreservação de embriões, transferência de embriões, diagnóstico de gestação, enxerto de gônadas e clonagem. Os estudos apresentados nesta revisão mostram a evolução das TRAs e suas diferentes aplicações. Particularmente, os estudos de edição gênica e clonagem representam um grande avanço na utilização combinada de diversas TRAs para geração de modelos biomédicos para doenças humanas, demostrando o papel dessas técnicas para avanços científicos no que diz respeito à saúde humana.

Nonhuman Primates (NHPs) are considered important models for biomedical studies due to their high biological proximity with humans. The Assisted Reproductive Technologies (ARTs) represent an important tool to perform studies related to infertility, development of contraceptives, gestation and fetal development, fertility preservation in cancer patients, generation of experimental models through gene editing techniques, among others. The objective of this review is to discuss the main ARTs used in NHPs and their application. Among the most used techniques in NHPs, we can include collection and cryopreservation of semen, ovarian cycle monitoring, controlled ovarian stimulation and follicle aspiration, in vitro fertilization, intracytoplasmic sperm injection, artificial insemination, microinjections for gene editing, embryo biopsy, embryo cryopreservation, embryo transfer, pregnancy diagnosis, grafting of gonadal tissue, and cloning. The studies cited in this review illustrate the evolution of the ARTs and their applications. The gene editing and cloning studies, in particular, represent the great advancements on the combined use of several different ARTs for the generation of biomedical models for human diseases, demonstrating the role of these techniques in the scientific advancement with regards to human health.

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).(AU)

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).(AU)

Thirty years of assisted reproductive technology in the domestic cat: A selected summary / Trinta anos de tecnologia de reprodução assistida no gato doméstico: Um resumo selecionado

The first kittens to be born after embryo transfer (ET) in the cat (Schriver and Kraemer, 1978) were reported four decades ago. The births of kittens after in vitro fertilization (IVF)/ET (Goodrowe et al., 1988) and after embryo cryopreservation/ET (Dresser et al., 1988) were described 10 years later. In an early report it was established that embryo donors had the ability ot exhibit repeated ovarian stimulatory response to multiple gonadotropin treatments (porcine FSH; Dresser et al., 1987). After studies on gonadotropin-induced hyperstimulation of follicular development for recovery and ET of fresh and cryopreserved in vivo derived uterine stage embryos from mated donors (Dresser et al., 1988; Pope et al., 1989), we transitioned into developing methods for in vitro production of domestic cat embryos for the purpose of applying the technology to support conservation of threatened and endangered felid species (Pope et al., 1993). Since then, techniques for the in vitro production of cat embryos have been developed sufficiently to allow births of kittens after transfer of embryos derived by an assortment of in vitro techniques, including cryopreservation (Pope et al., 1994; Gómez et al., 2003a; Pope et al., 2012a, b; Galiguis et al., 2014), intracytoplasmic sperm injection (ICSI; Pope et al., 1998; Gómez et al., 2000; Pope et al., 2012a), gender selection (Pope et al., 2009) and somatic cell nuclear transfer (SCNT) (Gómez et al., 2004; 2008; 2009).(AU)

Thirty years of assisted reproductive technology in the domestic cat: A selected summary / Trinta anos de tecnologia de reprodução assistida no gato doméstico: Um resumo selecionado

The first kittens to be born after embryo transfer (ET) in the cat (Schriver and Kraemer, 1978) were reported four decades ago. The births of kittens after in vitro fertilization (IVF)/ET (Goodrowe et al., 1988) and after embryo cryopreservation/ET (Dresser et al., 1988) were described 10 years later. In an early report it was established that embryo donors had the ability ot exhibit repeated ovarian stimulatory response to multiple gonadotropin treatments (porcine FSH; Dresser et al., 1987). After studies on gonadotropin-induced hyperstimulation of follicular development for recovery and ET of fresh and cryopreserved in vivo derived uterine stage embryos from mated donors (Dresser et al., 1988; Pope et al., 1989), we transitioned into developing methods for in vitro production of domestic cat embryos for the purpose of applying the technology to support conservation of threatened and endangered felid species (Pope et al., 1993). Since then, techniques for the in vitro production of cat embryos have been developed sufficiently to allow births of kittens after transfer of embryos derived by an assortment of in vitro techniques, including cryopreservation (Pope et al., 1994; Gómez et al., 2003a; Pope et al., 2012a, b; Galiguis et al., 2014), intracytoplasmic sperm injection (ICSI; Pope et al., 1998; Gómez et al., 2000; Pope et al., 2012a), gender selection (Pope et al., 2009) and somatic cell nuclear transfer (SCNT) (Gómez et al., 2004; 2008; 2009).

Impacts of oxidative stress on bovine sperm function and subsequent in vitro embryo development

Low levels of reactive oxygen species (ROS) in sperm are essential for various sperm functions such as capacitation, hyperactivation and acrosome reaction. However, increased synthesis of ROS or a disruption of antioxidative status (e.g. in cryopreserved sperm) can induce oxidative stress (OS). Sperm are particularly vulnerable to OS, as their plasma membrane contains large amounts of polyunsaturated fatty acids and they have limited antioxidative capacity (due to low cytoplasmic volume). Oxidative stress disturbs sperm function by damaging sperm proteins, lipids and DNA. Under relatively low OS sperm may retain their fertilizing ability, which might result in transfer of impaired paternal molecules (e.g. damaged DNA) to the fertilized oozyte. Oocytes can repair damaged paternal DNA, but only to a certain extent. Most embryos are either repaired (based on limited DNA damage in blastocysts) or eliminated (based on low percentage of blastocyst formation when sperm with damaged DNA is used for fertilization). However, some blastocysts had increases in both DNA damage and apoptosis, which could have important implications for subsequent development. In several studies, exogenous antioxidants improved quality of sperm exposed to oxidative stress and subsequent embryo development. However, there is still a knowledge gap regarding whether these alterations affect embryonic survival and further development to a live fetus and healthy offspring.

Impacts of oxidative stress on bovine sperm function and subsequent in vitro embryo development

Low levels of reactive oxygen species (ROS) in sperm are essential for various sperm functions such as capacitation, hyperactivation and acrosome reaction. However, increased synthesis of ROS or a disruption of antioxidative status (e.g. in cryopreserved sperm) can induce oxidative stress (OS). Sperm are particularly vulnerable to OS, as their plasma membrane contains large amounts of polyunsaturated fatty acids and they have limited antioxidative capacity (due to low cytoplasmic volume). Oxidative stress disturbs sperm function by damaging sperm proteins, lipids and DNA. Under relatively low OS sperm may retain their fertilizing ability, which might result in transfer of impaired paternal molecules (e.g. damaged DNA) to the fertilized oozyte. Oocytes can repair damaged paternal DNA, but only to a certain extent. Most embryos are either repaired (based on limited DNA damage in blastocysts) or eliminated (based on low percentage of blastocyst formation when sperm with damaged DNA is used for fertilization). However, some blastocysts had increases in both DNA damage and apoptosis, which could have important implications for subsequent development. In several studies, exogenous antioxidants improved quality of sperm exposed to oxidative stress and subsequent embryo development. However, there is still a knowledge gap regarding whether these alterations affect embryonic survival and further development to a live fetus and healthy offspring.(AU)

Freezing goat embryos at different developmental stages and quality using ethylene glycol and a slow cooling rate / Congelação de embriões caprinos em diferentes estádios de desenvolvimento e qualidade utilizando etileno glicol e taxa de resfriamento lenta

The efficiency of an alternative freezing protocol for goat embryos of different morphology and quality was tested. Fifty-eight embryos on Day 6-7 stage were transferred as fresh or after freeze-thawing (n=29/group). For freezing, embryos were placed into 1.5M ethylene-glycol solution for 10min. During this time, they were loaded in the central part of 0.25mL straw, separated by air bubble from columns containing PBS/BSA 0.4% plus 20% BFS. Straws were then frozen using a freezing machine from 20ºC to -6ºC at a cooling rate of 3ºC/min, stabilization for 15min (seeding after 5min), from -6 C to -32ºC at 0.6 C/min,and plunged into liquid nitrogen. Frozen embryos were thawed for 30s at 37ºC in a water bath. Embryos subjected to fresh transfer were maintained in holding medium (37ºC). Fresh and frozen-thawed embryos were transferred at day 7 post-estrus to 30 recipients. Kidding and kid born rates were similar (P> 0.05), respectively, for recipients receiving fresh (66.7% or 10/15; 55.2% or 16/29) or frozen-thawed (60% or 9/15; 51.7% or 15/29) embryos. The cryopreservation of goat embryos using slow-freezing protocol and 1.5MEG resulted in similar efficiency rates of fresh embryos.(AU)

Este estudo testou a eficiência de protocolo alternativo de criopreservação de embriões caprinos de diferentes qualidades morfológicas. Foram utilizados 58 embriões, coletados entre o sexto e o sétimo dia do ciclo estral (n=29/grupo). Embriões congelados passaram por solução 1,5M etilenoglicol por 10min e foram aspirados durante esse tempo para parte central de palheta 0,25mL, separada por bolhas de ar de colunas contendo PBS 0,4% BSA e 20% SFB. As palhetas foram congeladas em máquina de congelação de 20ºC a -6ºC, com taxa de resfriamento de 3ºC/min, estabilização por 15min (seeding após 5min), -6ºC a -32ºC a 0,6ºC/min, e imersas em nitrogênio líquido. Os embriões foram descongelados por 30s a 37ºC, em água. Embriões frescos foram mantidos em solução de manutenção (37ºC). Embriões frescos e congelados/descongelados foram transferidos para 30 receptoras no sétimo dia do ciclo estral. A taxa de partos e a de crias nascidas (respectivamente) foram similares (P>0,05) para receptoras recebendo embriões frescos (66,7% ou 10/15; 55,2% ou 16/29) ou congelados/descongelados (60,0% ou 9/15; 51,7% ou 15/29). O protocolo de criopreservação de embriões utilizado no presente estudo resultou em índices de eficiência semelhantes aos de embriões frescos.(AU)

Freezing goat embryos at different developmental stages and quality using ethylene glycol and a slow cooling rate / Congelação de embriões caprinos em diferentes estádios de desenvolvimento e qualidade utilizando etileno glicol e taxa de resfriamento lenta

The efficiency of an alternative freezing protocol for goat embryos of different morphology and quality was tested. Fifty-eight embryos on Day 6-7 stage were transferred as fresh or after freeze-thawing (n=29/group). For freezing, embryos were placed into 1.5M ethylene-glycol solution for 10min. During this time, they were loaded in the central part of 0.25mL straw, separated by air bubble from columns containing PBS/BSA 0.4% plus 20% BFS. Straws were then frozen using a freezing machine from 20ºC to -6ºC at a cooling rate of 3ºC/min, stabilization for 15min (seeding after 5min), from -6 C to -32ºC at 0.6 C/min,and plunged into liquid nitrogen. Frozen embryos were thawed for 30s at 37ºC in a water bath. Embryos subjected to fresh transfer were maintained in holding medium (37ºC). Fresh and frozen-thawed embryos were transferred at day 7 post-estrus to 30 recipients. Kidding and kid born rates were similar (P> 0.05), respectively, for recipients receiving fresh (66.7% or 10/15; 55.2% or 16/29) or frozen-thawed (60% or 9/15; 51.7% or 15/29) embryos. The cryopreservation of goat embryos using slow-freezing protocol and 1.5MEG resulted in similar efficiency rates of fresh embryos.(AU)

Este estudo testou a eficiência de protocolo alternativo de criopreservação de embriões caprinos de diferentes qualidades morfológicas. Foram utilizados 58 embriões, coletados entre o sexto e o sétimo dia do ciclo estral (n=29/grupo). Embriões congelados passaram por solução 1,5M etilenoglicol por 10min e foram aspirados durante esse tempo para parte central de palheta 0,25mL, separada por bolhas de ar de colunas contendo PBS 0,4% BSA e 20% SFB. As palhetas foram congeladas em máquina de congelação de 20ºC a -6ºC, com taxa de resfriamento de 3ºC/min, estabilização por 15min (seeding após 5min), -6ºC a -32ºC a 0,6ºC/min, e imersas em nitrogênio líquido. Os embriões foram descongelados por 30s a 37ºC, em água. Embriões frescos foram mantidos em solução de manutenção (37ºC). Embriões frescos e congelados/descongelados foram transferidos para 30 receptoras no sétimo dia do ciclo estral. A taxa de partos e a de crias nascidas (respectivamente) foram similares (P>0,05) para receptoras recebendo embriões frescos (66,7% ou 10/15; 55,2% ou 16/29) ou congelados/descongelados (60,0% ou 9/15; 51,7% ou 15/29). O protocolo de criopreservação de embriões utilizado no presente estudo resultou em índices de eficiência semelhantes aos de embriões frescos.(AU)

Técnicas reprodutivas, criopreservação espermática e coleta de sêmen em felinos selvagens visando à conservação revisão bibliográfica

As técnicas de reprodução assistida (TRAs) como a inseminação artificial (IA), fertilização in vitro (FIV), transferência de embrião (TE) e a criopreservação de espermatozoide são de fundamental importância para que a variabilidade genética dos felinos selvagem de cativeiro não seja perdida, tal fato está diretamente ligado à conservação dessas espécies. Embora a criopreservação ainda seja um grande desafio devido a queda na qualidade espermática, essa tecnologia possibilita a utilização dos gametas masculinos por um período relativamente longo ou indeterminado, reduz riscos e custos com aquisição e transporte de reprodutores, além de favorecer rápida distribuição do material genético entre locais distantes.(AU)

Assisted reproduction techniques (ART), artificial insemination (AI), in vitro fertilization (IVF), embryo transfer (ET) and cryopreservation of spermatozoa are of fundamental importance for the genetic variability of wild felines of captivity not to be This fact is directly related to the conservation of these species. Although cryopreservation is still a major challenge due to a decrease in sperm quality, this technology allows male gametes to be used for a relatively long or indeterminate period, reduces risks and costs with the acquisition and transport of breeding stock, and favors rapid distribution of genetic material between distant locations.(AU)

Técnicas reprodutivas, criopreservação espermática e coleta de sêmen em felinos selvagens visando à conservação – revisão bibliográfica

As técnicas de reprodução assistida (TRAs) como a inseminação artificial (IA), fertilização in vitro (FIV), transferência de embrião (TE) e a criopreservação de espermatozoide são de fundamental importância para que a variabilidade genética dos felinos selvagem de cativeiro não seja perdida, tal fato está diretamente ligado à conservação dessas espécies. Embora a criopreservação ainda seja um grande desafio devido a queda na qualidade espermática, essa tecnologia possibilita a utilização dos gametas masculinos por um período relativamente longo ou indeterminado, reduz riscos e custos com aquisição e transporte de reprodutores, além de favorecer rápida distribuição do material genético entre locais distantes.

Assisted reproduction techniques (ART), artificial insemination (AI), in vitro fertilization (IVF), embryo transfer (ET) and cryopreservation of spermatozoa are of fundamental importance for the genetic variability of wild felines of captivity not to be This fact is directly related to the conservation of these species. Although cryopreservation is still a major challenge due to a decrease in sperm quality, this technology allows male gametes to be used for a relatively long or indeterminate period, reduces risks and costs with the acquisition and transport of breeding stock, and favors rapid distribution of genetic material between distant locations.

Estudio sobre las diferentes técnicas de sexaje de espermatozoides / Study of different spermatozoa sexing techniques / Estudo sobre as diferentes técnicas de sexagem de espermatozoides

El interés en la selección de individuos de un determinado sexo data de la antigua Grecia; sin embargo, estudios sobre métodos eficaces para la selección espermática son relativamente nuevos. Saber cuál será el sexo de la futura progenie trae al mercado un gran potencial para el mejoramiento genético. Esta selección del sexo es realizada con diversos enfoques; en bovinos para la optimización de animales de sexo deseado, en humanos evitando enfermedades ligadas al sexo y en animales salvajes en cautiverio en la selección del sexo. Con el adviento de las tecnologías como la inseminación artificial y la transferencia de embriones, el sexaje comenzó a tener relevancia en el escenario actual y el costo beneficio pasó a ser significativo. Varias técnicas han sido desarrolladas con el objetivo de mejorarla la pre-selección del sexo, la inmunoseparación, gradientes de densidad y citometria de flujo son algunas de ellas, sin embargo, en la actualidad, la citometria de flujo es la técnica con mejores resultados y la única que permite comercialización de semen sexado. No obstante, el proceso de sexaje aun demanda muchos estudios, debido a los daños ocasionados a los espermatozoides durante el proceso de separación, comprometiendo las tasas de la fertilidad. Esta revisión de literatura viene como una herramienta para el entendimiento del proceso de sexaje y las técnicas utilizadas.(AU)

The interest in sex selection of a particular individuals comes from the ancient greeks, but the study on effective methods of this selection is relatively new. Know future progeny sex brings to market great potential for genetic improvement. Sex selection contributes to cattle for animal optimization of desired sex, to human, preventing diseases sex-linked, or even sex selection of wild animals in captivity. With the biotechnologies advent such as artificial insemination and embryo transfer, sexing begins to have relevance in current scenario and benefit costs will be significant. Several techniques have been developed aiming the best pre-selection of sex, such as immuno separation, density gradient, and flow cytometry that in current world scenario is the technique with best results and only one that allows comercialization of sexed semen. Sexing processes still requiremany studies due to damage to sperm cells during the separation process, compromising fertility results. This literature review comes as a tool for understanding the sexing process and techniques used.(AU)

O interesse na seleção de indivíduos de determinado sexo vem dos antigos gregos, mas o estudo sobre métodos eficazes desta seleção é relativamente novo. Saber qual será o sexo da futura progenie traz ao mercado um grande potencial para o melhoramento genético, A seleção do sexo contribui na bovinocultura para a otimização de animais do sexo desejado, em humanos evitando doenças ligadas ao sexo, ou mesmo na seleção de sexo em animais selvagens de cativeiro. Com o advento das biotecnologias, como a inseminação artificial e transferência de embriões, a sexagem começa a ter relevância no cenário atual e o custo benefício passa a ser significativo. Várias técnicas foram desenvolvidas visando a melhor pré-seleção de sexo, tal como a imuno separação, gradiente de densidade, e a citometria de fluxo que, no atual cenário mundial, é a técnica com os melhores resultados e a única que permite a comercialização do sêmen sexado. Os processos de sexagem ainda demandam muitos estudos, devido aos danos causados aos espermatozoides durante o processo de separação, comprometendo os resultados de fertilidade. Essa revisão de literatura vem como uma ferramenta para o entendimento do processo de sexagem e as técnicas utilizadas.(AU)

Estudio sobre las diferentes técnicas de sexaje de espermatozoides / Study of different spermatozoa sexing techniques / Estudo sobre as diferentes técnicas de sexagem de espermatozoides

El interés en la selección de individuos de un determinado sexo data de la antigua Grecia; sin embargo, estudios sobre métodos eficaces para la selección espermática son relativamente nuevos. Saber cuál será el sexo de la futura progenie trae al mercado un gran potencial para el mejoramiento genético. Esta selección del sexo es realizada con diversos enfoques; en bovinos para la optimización de animales de sexo deseado, en humanos evitando enfermedades ligadas al sexo y en animales salvajes en cautiverio en la selección del sexo. Con el adviento de las tecnologías como la inseminación artificial y la transferencia de embriones, el sexaje comenzó a tener relevancia en el escenario actual y el costo beneficio pasó a ser significativo. Varias técnicas han sido desarrolladas con el objetivo de mejorarla la pre-selección del sexo, la inmunoseparación, gradientes de densidad y citometria de flujo son algunas de ellas, sin embargo, en la actualidad, la citometria de flujo es la técnica con mejores resultados y la única que permite comercialización de semen sexado. No obstante, el proceso de sexaje aun demanda muchos estudios, debido a los daños ocasionados a los espermatozoides durante el proceso de separación, comprometiendo las tasas de la fertilidad. Esta revisión de literatura viene como una herramienta para el entendimiento del proceso de sexaje y las técnicas utilizadas.

The interest in sex selection of a particular individuals comes from the ancient greeks, but the study on effective methods of this selection is relatively new. Know future progeny sex brings to market great potential for genetic improvement. Sex selection contributes to cattle for animal optimization of desired sex, to human, preventing diseases sex-linked, or even sex selection of wild animals in captivity. With the biotechnologies advent such as artificial insemination and embryo transfer, sexing begins to have relevance in current scenario and benefit costs will be significant. Several techniques have been developed aiming the best pre-selection of sex, such as immuno separation, density gradient, and flow cytometry that in current world scenario is the technique with best results and only one that allows comercialization of sexed semen. Sexing processes still requiremany studies due to damage to sperm cells during the separation process, compromising fertility results. This literature review comes as a tool for understanding the sexing process and techniques used.

O interesse na seleção de indivíduos de determinado sexo vem dos antigos gregos, mas o estudo sobre métodos eficazes desta seleção é relativamente novo. Saber qual será o sexo da futura progenie traz ao mercado um grande potencial para o melhoramento genético, A seleção do sexo contribui na bovinocultura para a otimização de animais do sexo desejado, em humanos evitando doenças ligadas ao sexo, ou mesmo na seleção de sexo em animais selvagens de cativeiro. Com o advento das biotecnologias, como a inseminação artificial e transferência de embriões, a sexagem começa a ter relevância no cenário atual e o custo benefício passa a ser significativo. Várias técnicas foram desenvolvidas visando a melhor pré-seleção de sexo, tal como a imuno separação, gradiente de densidade, e a citometria de fluxo que, no atual cenário mundial, é a técnica com os melhores resultados e a única que permite a comercialização do sêmen sexado. Os processos de sexagem ainda demandam muitos estudos, devido aos danos causados aos espermatozoides durante o processo de separação, comprometendo os resultados de fertilidade. Essa revisão de literatura vem como uma ferramenta para o entendimento do processo de sexagem e as técnicas utilizadas.

Acción de oxígeno en especies reactivas en los espermatozoides / Action of reactive oxygen species on spermatozoa / Ação das espécies reativas de oxigênio nos espermatozoides

Para que el esperma puede desempeñar sus funciones y lograr el objetivo final, que es la fertilización, requieren energía que proviene de trifosfato de adenosina (ATP). Durante el metabolismo de la energía se almacena en forma de electrones de alta energía que se dirige a la cadena de transporte de electrones, compuesto de cinco proteínas supramolecular. En este proceso, se produce la formación de una, el anión intermedio radical semiquinona (Q- ) que es finalmente capaz de transferir este electrón desapareado a O2 y formar especies reactivas del oxígeno, la superóxido principal, peróxido de hidrógeno y el radical hidroxilo. Estas moléculas son procesos de activación altamente reactivos y espermatozoides que llevan a la degradación y la disminución de la calidad celular. Sin embargo, estas mismas moléculas que a menudo se consideran grandes villanos, también participan en los mecanismos que culminan en la fertilización y la formación de cigoto, adquiriendo así una gran importancia. Con el advenimiento de la criopreservación del semen y el estrés oxidativo asociado con el procesamiento, especies reactivas de oxígeno entraron en evidencia en la investigación, por lo que es necesario estudiar su acción y formas de reducir el estrés oxidativo.(AU)

So that spermatozoa can perform functions and achieve the goal that is fertilization, require energy from adenosine triphosphate (ATP). During the energy metabolism is stored in the form of high-energy electrons that are directed to the electron transport chain, comprised of five supramolecular protein. In this process, there is the formation of a semiquinone anion (Q¯) an intermediate radical that is eventually able to transfer this unpaired electron to O2 and form reactive oxygen species, as the main superoxide, hydrogen peroxide and hydroxyl radical. These molecules are highly reactive and sperm trigger processes that lead to degradation and decrease in cell quality. However these same molecules that are often considered great villains, also participate in mechanisms that culminate in fertilization and zygote formation, thus acquiring great importance. With the advent of semen cryopreservation and oxidative stress associated with the processing, reactive oxygen species entered into evidence in the research, making it necessary to study its action and ways to reduce oxidative stress.(AU)

Para que os espermatozoides possam executar suas funções e alcançarem o objetivo final, que é a fecundação, necessitam de energia que advém da adenosina trifosfato (ATP). Durante o metabolismo, a energia é armazenada na forma de elétrons de alta energia que são direcionados a cadeia de transporte de elétrons, composta de cinco proteínas supramoleculares. Neste processo, há a formação de um radical intermediário, o ânion semiquinona (Q) que eventualmente é capaz de transferir este elétron desemparelhado ao O2 e formar as espécies reativas de oxigênio, sendo as principais o superóxido, o peróxido de hidrogênio e o radical hidroxila. Essas moléculas são altamente reativas e nos espermatozoides desencadeiam processos que levam à degradação e decréscimo na qualidade celular. Porém, essas mesmas moléculas que muitas vezes são consideradas grandes vilãs, também participam de mecanismos que culminam na fertilização e formação do zigoto, adquirindo assim uma grande importância. Com o advento da criopreservação de sêmen e o estresse oxidativo associado ao processamento, as espécies reativas de oxigênio entraram em evidência nas pesquisas, tornando-se necessário o estudo de sua ação e maneiras de reduzir o estresse oxidativo.(AU)

Acción de oxígeno en especies reactivas en los espermatozoides / Action of reactive oxygen species on spermatozoa / Ação das espécies reativas de oxigênio nos espermatozoides

Para que el esperma puede desempeñar sus funciones y lograr el objetivo final, que es la fertilización, requieren energía que proviene de trifosfato de adenosina (ATP). Durante el metabolismo de la energía se almacena en forma de electrones de alta energía que se dirige a la cadena de transporte de electrones, compuesto de cinco proteínas supramolecular. En este proceso, se produce la formación de una, el anión intermedio radical semiquinona (Q- ) que es finalmente capaz de transferir este electrón desapareado a O2 y formar especies reactivas del oxígeno, la superóxido principal, peróxido de hidrógeno y el radical hidroxilo. Estas moléculas son procesos de activación altamente reactivos y espermatozoides que llevan a la degradación y la disminución de la calidad celular. Sin embargo, estas mismas moléculas que a menudo se consideran grandes villanos, también participan en los mecanismos que culminan en la fertilización y la formación de cigoto, adquiriendo así una gran importancia. Con el advenimiento de la criopreservación del semen y el estrés oxidativo asociado con el procesamiento, especies reactivas de oxígeno entraron en evidencia en la investigación, por lo que es necesario estudiar su acción y formas de reducir el estrés oxidativo.

So that spermatozoa can perform functions and achieve the goal that is fertilization, require energy from adenosine triphosphate (ATP). During the energy metabolism is stored in the form of high-energy electrons that are directed to the electron transport chain, comprised of five supramolecular protein. In this process, there is the formation of a semiquinone anion (Q¯) an intermediate radical that is eventually able to transfer this unpaired electron to O2 and form reactive oxygen species, as the main superoxide, hydrogen peroxide and hydroxyl radical. These molecules are highly reactive and sperm trigger processes that lead to degradation and decrease in cell quality. However these same molecules that are often considered great villains, also participate in mechanisms that culminate in fertilization and zygote formation, thus acquiring great importance. With the advent of semen cryopreservation and oxidative stress associated with the processing, reactive oxygen species entered into evidence in the research, making it necessary to study its action and ways to reduce oxidative stress.

Para que os espermatozoides possam executar suas funções e alcançarem o objetivo final, que é a fecundação, necessitam de energia que advém da adenosina trifosfato (ATP). Durante o metabolismo, a energia é armazenada na forma de elétrons de alta energia que são direcionados a cadeia de transporte de elétrons, composta de cinco proteínas supramoleculares. Neste processo, há a formação de um radical intermediário, o ânion semiquinona (Q) que eventualmente é capaz de transferir este elétron desemparelhado ao O2 e formar as espécies reativas de oxigênio, sendo as principais o superóxido, o peróxido de hidrogênio e o radical hidroxila. Essas moléculas são altamente reativas e nos espermatozoides desencadeiam processos que levam à degradação e decréscimo na qualidade celular. Porém, essas mesmas moléculas que muitas vezes são consideradas grandes vilãs, também participam de mecanismos que culminam na fertilização e formação do zigoto, adquirindo assim uma grande importância. Com o advento da criopreservação de sêmen e o estresse oxidativo associado ao processamento, as espécies reativas de oxigênio entraram em evidência nas pesquisas, tornando-se necessário o estudo de sua ação e maneiras de reduzir o estresse oxidativo.

Negative energy balance and metabolic stress in relation to oocyte and embryo quality: an update on possible pathways reducing fertility in dairy cows

A negative energy balance in metabolically compromised high producing dairy cows has been shown to influence oocyte and embryo quality. However, the possible involved pathways needed more attention to better understandspecific deleterious effects. Oocyte maturation is the first process to be scrutinized. Because many possible metabolic factors might directly impact oocyte quality, systematic in vitroapproaches were used to investigate the effects of oocyte maturation under elevated NEFA concentrations. Blastocysts originating from NEFA-exposed oocytes showed a lower cell number, an increased apoptotic cell index, signs of glucose intolerance, sensitive to oxidative stress and mitochondrial dysfunction. Defining these embryos’ transcriptome and epigenome signatures revealed changes in DNA methylation patterns. Long-term exposure of developing murine follicles to elevated NEFA concentrations showed to impair oocyte developmental competence even more. While little is known on how the oviductal micro-environment can change as a consequence of a negative energy balance, a validated in vitrobovine oviduct model offered some valuable insights on how NEFAs disturb oviductal cell physiology. NEFA exposure reduces cell proliferation, cell migration, sperm binding capacity and monolayer integrity. In addition, oviductal cells seem to play an active role in regulating luminal NEFA-concentrations through increased permeability, intracellular lipid accumulation and fatty acid metabolism. This might favour early embryo development. The establishment of a successful pregnancy largely depends on the ability of the embryo to interact with a properly prepared endometrium.