Eficiência de três diluidores inespecíficos na refrigeração do sêmen de coelho (Oryctolagus cuniculus f. domesticus) / Efficiency of three unspecific diluents in refrigeration of rabbit (Oryctolagus cuniculus f. domesticus) semen / Eficiencia de tres diluyentes inespecíficos en la refrigeración de semen de conejo (Oryctolagus cuniculus f. domesticus)

Objetivou-se com este trabalho avaliar a viabilidade seminal de coelhos após refrigeração a 5°C utilizando três diluentes comerciais, indicados para refrigeração de sêmen de outras espécies monogástricas. Foram realizadas dez colheitas de sêmen de cada reprodutor. Os ejaculados de cada coelho eram misturados, obtendo-se um pool de sêmen. Em seguida, o pool heterospérmico foi dividido em três tratamentos, de acordo com o diluente utilizado: BotuDogⓇ (cães); BotuSemen® (equinos); e Beltsville Thawing Solution - BTS (suínos). As amostras foram avaliadas quanto aos parâmetros macroscópicos, microscópicos e funcionais em quatro momentos: sêmen fresco (0 h) e refrigerado (16, 24 e 48 h). Os valores médios de motilidade, vigor e defeitos totais do sêmen fresco foram de 86,0%, 3,05 e 11,5%, respectivamente. Após o início do resfriamento, observou-se comportamento linear decrescente para a motilidade e vigor espermático do sêmen em função do tempo, diferindo (P < 0,05) entre os tratamentos. Destaca-se que o tratamento diluído em BTS apresentou redução na manutenção dos parâmetros avaliados de forma mais pronunciada (P < 0.05) ao longo do tempo, apresentando os menores valores para motilidade e vigor espermático dentro de cada tempo avaliado: 16h [20,6 ± 7,28 e 0,75 (0,375 1,5)], 24h [12,0 ± 6,80 e 0 (0 - 1,0)] e 48h [3,0 ± 2,13 e 0 (0 - 0,125)]. Após 48 h de resfriamento, o BotuDogⓇ foi o que apresentou maior valor para motilidade espermática (71,0 ± 2,08) e, juntamente, com o BotuSemenⓇ apresentaram maior valor para vigor espermático (2,5). De acordo com os dados obtidos os diluentes BotuDogⓇ e BotuSemenⓇ mostraram-se eficientes em manter parâmetros espermáticos adequados, apresentando boa viabilidade espermática em até 48h pós refrigeração a 5°C. Foram obtidos, resultados inéditos quanto a parâmetros espermáticos do sêmen de coelho refrigerado que podem ser utilizados como valores de referência para o manejo reprodutivo e processamento do semen desses animais, visto a inexistênca dessas recomendações técnicas.

The objective of this work was to evaluate the seminal viability of rabbits after refrigeration at 5°C using three commercial diluents, indicated for refrigeration of semen from other monogastric species. Ten semen collections were performed from each breeder. The ejaculates of each rabbit were mixed, obtaining a pool of semen. Then, the heterospermic pool was divided into three treatments, according to the diluent used: BotuDog (dogs); BotuSemenⓇ (horses); and Beltsville Thawing Solution - BTS (pigs). The samples were evaluated for macroscopic, microscopic, and functional parameters in four moments: fresh (0 h) and refrigerated (16, 24, and 48 h) semen. The average values of motility, vigor, and total defects of fresh semen were 86.0%, 3.05 and 11.5%, respectively. After the beginning of cooling, a decreasing linear behavior was observed for motility and sperm vigor of semen as a function of time, differing (P < 0.05) between treatments. It is noteworthy that the treatment diluted in BTS® showed a more pronounced reduction in the maintenance of the evaluated parameters (P < 0.05) over time, with the lowest values for sperm motility and vigor within each evaluated time: 16h [20.6 +7.28 and 0.75 (0.375 - 1.5)], 24h [12.0± 6.80 and 0 (0 - 1.0)] and 48h [3.0±2.13 and 0 (0 - 0.125)]. After 48 h of cooling, BotuDog presented the highest value for sperm motility (71.0 ± 2.08) and, together with BotuSemenⓇ, presented the highest value for sperm vigor (2.5). According to the data obtained, BotuDog and BotuSemenⓇ diluents were efficient in maintaining adequate sperm parameters, showing good sperm viability in up to 48 hours after refrigeration at 5°C. Through this work, unpublished results were obtained regarding spermatic parameters of refrigerated rabbit semen that can be used as reference values for reproductive management and semen processing of these animals, given the lack of these technical recommendations.

El objetivo de este trabajo fue evaluar la viabilidad seminal de conejos después de refrigeración a 5°C utilizando tres diluyentes comerciales, indicados para la refrigeración de semen de otras especies monogástricas. Se realizaron diez colectas de semen de cada reproductora. Se mezclaron los eyaculados de cada conejo, obteniendo un pool de semen. Luego, el pool heterospérmico se dividió en tres tratamientos, según el diluyente utilizado: BotuDogⓇ (perros); BotuSemenⓇ (caballos); y Beltsville Thawing Solution - BTS® (cerdos). Las muestras fueron evaluadas para parámetros macroscópicos, microscópicos y funcionales en cuatro momentos: semen fresco (0 h) y refrigerado (16, 24 y 48 h). Los valores promedio de motilidad, vigor y defectos totales del semen fresco fueron 86,0%, 3,05 y 11,5%, respectivamente. Después del inicio del enfriamiento, se observó un comportamiento lineal decreciente para la motilidad y el vigor espermático del semen en función del tiempo, difiriendo (P < 0.05) entre tratamientos. Cabe destacar que el tratamiento diluido en BTS® mostró una reducción más pronunciada en el mantenimiento de los parámetros evaluados (P<0,05) a lo largo del tiempo, con los valores más bajos de motilidad espermática y vigor dentro de cada tiempo evaluado: 16h [20,6 ± 7,28 y 0,75 (0,375 -1.5)], 24h [12,0 ± 6,80 y 0 (0 - 1,0)] y 48h [3,0±2,13 y 0 (0 - 0,125)]. Después de 48 h de enfriamiento, BotuDogⓇ presentó el valor más alto de motilidad espermática (71,0 +2,08) y, junto con BotuSemenⓇ, presentó el valor más alto de vigor espermático (2,5). De acuerdo con los datos obtenidos, los diluyentes BotuDogⓇ y BotuSemenⓇ fueron eficientes en mantener parámetros espermáticos adecuados, mostrando buena viabilidad espermática hasta 48 horas después de la refrigeración a 5°C. A través de este trabajo se obtuvieron resultados inéditos respecto a parámetros espermáticos de semen de conejo refrigerado que pueden ser utilizados como valores de referencia para el manejo reproductivo y procesamiento de semen de estos animales, dada la falta de estas recomendaciones técnicas.

Supplementation of two sources of selenium at different levels in diet of boars and this effect on the seminal quality / Suplementação de duas fontes de selênio em diferentes níveis na dieta de cachaços e seu efeito sobre a qualidade seminal

The spermatic membrane is rich in polyunsaturated fatty acids, which makes it sensitive to the action of reative species of oxygen, which can damage the seminal quality of the scraps. The purpose of this study was to evaluate the effect of the supplementation of two selenium sources at different doses. Third five scraps were allocated in four groups: (INOR30) 0.30 ppm sodium selenite; (COMP30) 0.30 ppm selenium metal-amino acid; (MIXED15+15) 0.15 ppm sodium selenite + 0.15 ppm selenium metal-amino acid and (COMP15) 0.15 ppm selenium metal-amino acid. The ejaculates of the scraps were evaluated over 22 weeks, resulting in 210 samples evaluated for volume, motility, pH, presence of agglutination and morphological changes, and 140 samples for spermatic concentration. The data was analyzed with repeated measures in time in a mixed model with type of selenium supplementation, periods of evaluation (one period of two weeks + five periods of four weeks) and their interactions as fixed effects, and animal and the worker that collected the ejaculates as random effects. Results showed no difference in selenium supplementation with the sources and doses used. In this way, it was possible to verify that the metal amino acid of selenium at the dose of 0.15 ppm promotes the same effect as the diets formulated with 0.30 ppm of sodium selenite.(AU)

A membrana espermática é rica em ácidos graxos poliinsaturados, o que a torna sensível à ação de espécies reativas de oxigênio, que podem prejudicar a qualidade seminal dos cachaços. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da suplementação de duas fontes de selênio em diferentes doses. Trinta e cinco cachaços foram distribuídos em quatro grupos: (INOR30) 0,30 ppm de selenito de sódio; (COMP30) 0,30 ppm de metal-aminoácido de selênio; (MISTO15+15) 0,15 ppm de selenito de sódio + 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio e (COMP15) 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio. Os ejaculados dos cachaços foram avaliados durante 22 semanas, resultando em 210 amostras avaliadas para volume, motilidade, pH, presença de aglutinação e alterações morfológicas, e 140 amostras para concentração espermática. Os dados foram analisados com medidas repetidas no tempo em modelo misto, em que o tipo de suplementação de selênio, os períodos de avaliação (um período de duas semanas + cinco períodos de quatro semanas) e suas interações foram os efeitos fixos, e o animal e o funcionário que coletou os ejaculados foram os efeitos aleatórios. Os resultados obtidos demonstraram não haver diferença na suplementação de selênio com as fontes e doses utilizadas. Com isso, foi possível verificar que o metal-aminoácido de selênio na dose de 0,15 ppm promove o mesmo efeito das dietas formuladas com 0,30 ppm de selenito de sódio.(AU)

Componentes moleculares envolvidos na criopreservação do sêmen suíno / Molecular components involved in cryopreservation of swine semen

A criopreservação induz mudanças estruturais e funcionais nos espermatozoides, que podem variar entre animais da mesma espécie, mesmo quando o sêmen deles é submetido ao mesmo protocolo de criopreservação. Essa característica leva alguns estudos a questionarem quanto à composição protéica do sêmen e sua influência na proteção espermática, em relação ao choque térmico. O plasma seminal de suínos apresenta predominância de espermadesinas, que são proteínas de baixo peso molecular e apresentam função de proteção da membrana plasmática. A criopreservação é o método mais eficiente para a conservação de espermatozoides a longo prazo. No entanto, o uso do sêmen congelado na espécie suína ainda está associado a baixos índices produtivos, pois o processo de criopreservação ocasiona diversos danos ao espermatozoide. Estudos têm sido realizados com a finalidade de identificar as causas específicas desses danos, a fim de promover uma melhor proteção ao espermatozoide criopreservado. Dessa forma, o presente trabalho tem como objetivo abordar os principais componentes moleculares do sêmen, que estão envolvidos no processo de criopreservação.

Cryopreservation induces structural and functional changes in the spermatozoa, which may vary between animals of the same species, even when their semen is subjected to the same cryopreservation protocol. This feature leads some studies to question the semen protein composition and its influence on sperm protection in relation to the thermal shock. S wine seminal plasma presents predominance of spermadesins, which are low molecular weight proteins and present a protective function of the plasmatic membrane. Cryopreservation is the most efficient method for long-term sperm conservation. However, the use of frozen semen in swine species is still associated with low productive indexes because the cryopreservation process causes several damages to the spermatozoid. Studies have been carried out with the purpose of identifying specific causes of this damage in order to promote a better protection of the cryopreserved spermatozoa. In this way, the present work aimed to address the main molecular components of semen that are involved in the cryopreservation process.

Componentes moleculares envolvidos na criopreservação do sêmen suíno / Molecular components involved in cryopreservation of swine semen

A criopreservação induz mudanças estruturais e funcionais nos espermatozoides, que podem variar entre animais da mesma espécie, mesmo quando o sêmen deles é submetido ao mesmo protocolo de criopreservação. Essa característica leva alguns estudos a questionarem quanto à composição protéica do sêmen e sua influência na proteção espermática, em relação ao choque térmico. O plasma seminal de suínos apresenta predominância de espermadesinas, que são proteínas de baixo peso molecular e apresentam função de proteção da membrana plasmática. A criopreservação é o método mais eficiente para a conservação de espermatozoides a longo prazo. No entanto, o uso do sêmen congelado na espécie suína ainda está associado a baixos índices produtivos, pois o processo de criopreservação ocasiona diversos danos ao espermatozoide. Estudos têm sido realizados com a finalidade de identificar as causas específicas desses danos, a fim de promover uma melhor proteção ao espermatozoide criopreservado. Dessa forma, o presente trabalho tem como objetivo abordar os principais componentes moleculares do sêmen, que estão envolvidos no processo de criopreservação.(AU)

Cryopreservation induces structural and functional changes in the spermatozoa, which may vary between animals of the same species, even when their semen is subjected to the same cryopreservation protocol. This feature leads some studies to question the semen protein composition and its influence on sperm protection in relation to the thermal shock. S wine seminal plasma presents predominance of spermadesins, which are low molecular weight proteins and present a protective function of the plasmatic membrane. Cryopreservation is the most efficient method for long-term sperm conservation. However, the use of frozen semen in swine species is still associated with low productive indexes because the cryopreservation process causes several damages to the spermatozoid. Studies have been carried out with the purpose of identifying specific causes of this damage in order to promote a better protection of the cryopreserved spermatozoa. In this way, the present work aimed to address the main molecular components of semen that are involved in the cryopreservation process.(AU)

Eficiência de duas técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães e avaliação seminal pós-criopreservação / [Efficiency of two techniques for recovering epididymal spermatozoids from dogs and seminal evaluation post cryopreservation]

O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.(AU)

The objective of this work was to evaluate the recovery of epididymal spermatozoa from castrated dogs using retrograde flow (FL) and flotation (FL) techniques in Tris-egg yolk diluent, before and after cryopreservation. Thirty testicle-epididymal complexes (CTE) were collected, 15 for FR and 15 for FL and soon after spermatozoid recovery, morphological changes in these spermatic cells were analyzed. After addition of the diluent, the parameters of total motility (MOT) and vigor (V) were evaluated. The post-cryopreserved semen was submitted to thermoresistance (TTR) test at T0, T30, T60 and T90 minutes, as well as the plasma and acrosomal membrane evaluation by fluorescent probes. There was no statistically significant difference between techniques tested for MOT and vigor in the diluted semen (FR-MOT: 82.3% and V: 3.4, FL-MOT: 79.6% and V: 3.2) and post-cryopreserved (FR-MOT: 34% and V: 2.8, FL-MOT: 30% and V: 2.7). From the T30 there was a significant difference regarding MOT and vigor in the used techniques, and the time also damaged the spermatic acrosome from the T30. It is concluded that the epididymal spermatozoa recovering techniques from castrated dogs, tested in this study, can be used for semen refrigeration and cryopreservation.(AU)

Effects of treatment with quercetin on the quality of cryopreserved bovine semen

Background: Semen cryopreservation is one of the most common biotechnologies in the reproduction of animals ofagricultural interest, especially bulls. However, cryopreservation can be harmful to sperm cells, with susceptibility tooxidative stress being one of the causes. The addition of antioxidants such as quercetin may inhibit and/or reduce suchdamage, reducing fertility. Quercetin can increasing sperm motility and interaction capacity between spermatozoa-oocyte,to increase cellular metabolism and reduced DNA fragmentation and oxidation following thawing. Therefore, the objective of this study was to evaluate the protective effect of quercetin on the metabolism of bovine semen following thawing.Materials, Methods & Results: Three Brahman bulls in reproduction age and previously considered fit for reproductionwere used. The semen samples were collected via the electroejaculation method, and the samples were homogenized toform pooled semen from three ejaculates, which was diluted in Tris-yolk egg-glicerol diluent medium. Quercetin was addedto diluent, to final concentrations of 0, 5, 10, 15 and 20 μg.mL-1 in each group. The samples were kept frozen in strawsof 500 μL, with concentration of 40,000,000 spermatozoid / mL for 15 days and were thawed in water at 36°C for 30 s.All the tests was performed in five replicates. The cell metabolism status was evaluated by quantification of superoxideradical production with a nitroblue tetrazolium test (NBT) and scanning spectrophotometry. By spermatic evaluation, thefollowing parameters were evaluated via the computerized system of sperm analysis (CASA): total motility (TM, %),progressive motility (PM, %), velocity curved line (VCL, mm/s), velocity straight line (VSL, mm/s), velocity averagepath (VAP, mm/s), distance curved line (DCL, mm), distance straight line (DSL, mm), distance average path (DAP, mm),amplitude of lateral head displacement (ALH, mm), beat cross frequency (BCF, Hz), wobble...

Effects of treatment with quercetin on the quality of cryopreserved bovine semen

Background: Semen cryopreservation is one of the most common biotechnologies in the reproduction of animals ofagricultural interest, especially bulls. However, cryopreservation can be harmful to sperm cells, with susceptibility tooxidative stress being one of the causes. The addition of antioxidants such as quercetin may inhibit and/or reduce suchdamage, reducing fertility. Quercetin can increasing sperm motility and interaction capacity between spermatozoa-oocyte,to increase cellular metabolism and reduced DNA fragmentation and oxidation following thawing. Therefore, the objective of this study was to evaluate the protective effect of quercetin on the metabolism of bovine semen following thawing.Materials, Methods & Results: Three Brahman bulls in reproduction age and previously considered fit for reproductionwere used. The semen samples were collected via the electroejaculation method, and the samples were homogenized toform pooled semen from three ejaculates, which was diluted in Tris-yolk egg-glicerol diluent medium. Quercetin was addedto diluent, to final concentrations of 0, 5, 10, 15 and 20 μg.mL-1 in each group. The samples were kept frozen in strawsof 500 μL, with concentration of 40,000,000 spermatozoid / mL for 15 days and were thawed in water at 36°C for 30 s.All the tests was performed in five replicates. The cell metabolism status was evaluated by quantification of superoxideradical production with a nitroblue tetrazolium test (NBT) and scanning spectrophotometry. By spermatic evaluation, thefollowing parameters were evaluated via the computerized system of sperm analysis (CASA): total motility (TM, %),progressive motility (PM, %), velocity curved line (VCL, mm/s), velocity straight line (VSL, mm/s), velocity averagepath (VAP, mm/s), distance curved line (DCL, mm), distance straight line (DSL, mm), distance average path (DAP, mm),amplitude of lateral head displacement (ALH, mm), beat cross frequency (BCF, Hz), wobble...(AU)

Refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus / Refrigerated storage of dusky grouper Epinephelus marginatus sperm

Foram estudados diferentes diluentes no processo de refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira. Inicialmente, a taxa e a duração da motilidade e a concentração espermática foram avaliadas, caracterizando a qualidade do sêmen fresco. Para os testes de refrigeração a 4ºC, diferentes diluentes foram testados em atmosfera normal e modificada (100% oxigênio). O sêmen fresco apresentou concentração espermática de 3,1±0,2 x 109 células mL-1, motilidade média de 90%, permanecendo móvel, em média, por 3.060 segundos. No experimento de refrigeração, a taxa e a duração média da motilidade foram mantidas adequadas durante 144 horas para o diluente A (70%; 3100 segundos) em atmosfera normal. Na atmosfera modificada, a qualidade do sêmen caiu drasticamente durante as primeiras 24 horas, independentemente do diluente empregado, não propiciando vantagem em sua utilização. A refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira permite manter por até 144 horas uma apropriada qualidade espermática.(AU)

This study aimed to evaluate different extenders in refrigerated storage of dusky grouper sperm. Initially, motility rate, motility time, and sperm density were analyzed to characterize the fresh sperm quality. Different diluents were used in the refrigerated storage sperm at 4ºC in normal atmosphere and modified atmosphere (100% oxygen). The fresh sperm has a spermatozoa density of 3.1±0.2 x 109 spermatozoa mL-1, motility rate 90% and motility time of 3,060 seconds. In the experiment of refrigerated storage, the motility rate and the motility time were maintained appropriate for 144 hours for the extender A (70%; 3,100 seconds) in normal atmosphere. In the modified atmosphere, the sperm quality decreased drastically during the first 24 hours, independently of the diluent used, not propitiating advantages. The refrigerated sperm of dusky grouper is a viable alternative for the short-term storage, being possible, to maintain for up to 144 hours an appropriate sperm viability.(AU)

Refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus / Refrigerated storage of dusky grouper Epinephelus marginatus sperm

Foram estudados diferentes diluentes no processo de refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira. Inicialmente, a taxa e a duração da motilidade e a concentração espermática foram avaliadas, caracterizando a qualidade do sêmen fresco. Para os testes de refrigeração a 4ºC, diferentes diluentes foram testados em atmosfera normal e modificada (100% oxigênio). O sêmen fresco apresentou concentração espermática de 3,1±0,2 x 109 células mL-1, motilidade média de 90%, permanecendo móvel, em média, por 3.060 segundos. No experimento de refrigeração, a taxa e a duração média da motilidade foram mantidas adequadas durante 144 horas para o diluente A (70%; 3100 segundos) em atmosfera normal. Na atmosfera modificada, a qualidade do sêmen caiu drasticamente durante as primeiras 24 horas, independentemente do diluente empregado, não propiciando vantagem em sua utilização. A refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira permite manter por até 144 horas uma apropriada qualidade espermática.(AU)

This study aimed to evaluate different extenders in refrigerated storage of dusky grouper sperm. Initially, motility rate, motility time, and sperm density were analyzed to characterize the fresh sperm quality. Different diluents were used in the refrigerated storage sperm at 4ºC in normal atmosphere and modified atmosphere (100% oxygen). The fresh sperm has a spermatozoa density of 3.1±0.2 x 109 spermatozoa mL-1, motility rate 90% and motility time of 3,060 seconds. In the experiment of refrigerated storage, the motility rate and the motility time were maintained appropriate for 144 hours for the extender A (70%; 3,100 seconds) in normal atmosphere. In the modified atmosphere, the sperm quality decreased drastically during the first 24 hours, independently of the diluent used, not propitiating advantages. The refrigerated sperm of dusky grouper is a viable alternative for the short-term storage, being possible, to maintain for up to 144 hours an appropriate sperm viability.(AU)

BIOLOGIA REPRODUTIVA DE HYPOPHTHALMUS MARGINATUS E ESTUDO COMPARATIVO DA ESPERMIOGÊNESE HYPOPHTHALMUS MARGINATUS, AGENEIOSUS UCAYALENSIS E AUCHENIPTERICHTHYS LONGIMANUS (TELEOSTEI: SILURIFORMES)

O presente estudo tem como objetivo analisar aspectos da biologia reprodutiva, proliferação das células germinativas no testículo de Hypophthalmus marginatus, bem como comparar a morfologia dos espermatozóides de Hypophthalmus marginatus, Ageneiosus ucayalensis e Auchenipterichthys longimanus baseado em análises ultraestruturais. Para isso o trabalho foi desenvolvido em três capítulos. O primeiro, verificou a proporção sexual entre fêmeas e machos de H. marginatus, estágios de maturação sexual; índice gonadossomático; período reprodutivo, tipo de desova; fator de condição e tamanho médio na primeira maturação sexual. A atividade reprodutiva ocorreu a jusante da barragem hidrelétrica de Tucuruí. Esta atividade reprodutiva coincidiu com o aumento da vazão e oxigênio dissolvido na água. O segundo, descreveu a estrutura testicular e a ultraestrutura de células germinativas de Hypophthalmus marginatus durante a espermatogênese. H. marginatus apresentaram testículos filiformes, o parênquima testicular era composto por células da linhagem espermatogênica e células de Sertoli. As células espermatogênicas estavam organizadas em cistos espermáticos. Durante a espermiogênese as espermatídes não apresentaram rotação nuclear, o centríolo proximal era perpendicular ao centríolo distal, característico da espermiogênese do tipo III. Morfologicamente os espermatozoides apresentaram cabeça ovóide sem acrossoma, um núcleo condensado e uma fossa nuclear rasa, peça central curta com um único longo flagelo, que exibia a estrutura do axonema clássico de nove pares de microtúbulos periféricos e um central. A peça final era fina com apenas microtúbulos periféricos. O terceiro capítulo analisou a morfologia dos espermatozóides de Hypophthalmus marginatus, Ageneiosus ucayalensis e Auchenipterichthys longimanus. Os resultados demostraram que algumas características evidenciadas nos espermatozoides de Hypophthalmus marginatus, Ageneiosus ucayalensis e Auchenipterichthys longimanus permaneceram conservadas, como a cabeça sem acrossoma, peça intermediária, uniflagelar e axonema clássico de 9+2 microtúbulos. Estas informações podem contribuir para a preservação da espécie, estudos filogenéticos entre os grupos de Siluriformes, bem como subsidiar o aproveitamento de H. marginatus na aquicultura.

The present study aimed to analyse aspects of the reproductive biology and germ cell proliferation on the testicles of Hypophthalmus marginatus, as well to compare the spermatozoid morphology of H. marginatus, Ageneiosus ucayalensis and Auchenipterichthys longimanus based on ultrastructural analyses. For this, the work was divided in three chapters. The first, chapter verified the sex ratio in H. marginatus, its gonadal maturing stages, gonadossomatic index, reproductive period, spawn type, condition factor and average size during the first maturation. Reproductive activity occurred downstream of the Tucuruí hydroelectric dam. This reproductive activity coincided with the increase in flow and dissolved oxygen in the water. The second, described the testicular structure and germ cell ultrastructure of H. marginatus during spermatogenesis. H. marginatus showed filiform testicles and its testicular parenchyma was formed by spermartogenic lineage cells and Sertoli cells. The spermatogenic cells were organized in spermatic cysts. During spermiogenesis, spermatids did not show nuclear rotation and the proximal centriole was perpendicular to the distal centriole, a characteristic of type III spermatogenesis. Morphologically, spermatozoids showed ovoid head without acrossome, a condensed nucleus and shallow nuclear fossa, short central piece and one long flagellum, wich exhibits the typical structure of axoneme in nine pairs of peripheral microtubules and one central pair. The final piece is thin and has only peripheral microtubules. The third, chapter analysed the morphology of spermatozoids in H. marginatus, Ageneiosus ucayalensis and Auchenipterichthys longimanus. The results demonstrated that some of the spermatozoids characteristics on the three species remain conserved, such as a head without acrossome, intermediary piece, uniflagellar and a classic axoneme of 9 + 2 microtubules. This information can contribute to the preservation of the species, phylogenetic studies among Siluriform groups, as well as subsidize the use of H. marginatus in aquaculture. Palavras-chave: Auchenipteridae. Pimelodidae. Reproduction. L50. Histology.

COMPARAÇÃO DO PERFIL PROTEICO DE ESPERMATOZOIDES EM DIFERENTES ESPÉCIES

Proteínas presentes no plasma seminal de animais domésticos apresentam diversas funções na fisiologia espermática, atuando em processos de capacitação, reação acrossômica, interação entre gametas e proteção ao espermatozoide. Desse modo, o presente estudo caracterizou proteínas presentes em células espermáticas de ovinos, caprinos, equinos, suínos e cães. Por meio de espectrometria de massas, foram identificadas um total de 128 proteínas no espermatozoide das espécies utilizadas. Desse total, proteínas identificadas foram encontradas em todas as espécies, no entanto seis proteínas estavam presentes em quatro das cinco espécies estudadas, sendo elas a angiotensin-converting enzyme, ATP-synthase subunit a, hexoquinase 1, malate dehydrogenase, pyruvate dehydrogenase e succinyl-CoA. Foi possível identificar 15 proteínas comuns às espécies ruminantes, além de terem sido encontradas ainda 11 proteínas exclusivas em ruminantes e 2 proteínas exclusivas em não ruminantes. Esse estudo foi o primeiro a caracterizar as proteínas presentes no espermatozoide de cães, além de comparar cinco espécies incluindo animais ruminantes e não-ruminantes. Apesar da alta similaridade entre algumas espécies, o espermatozoide apresenta diferenças proteicas na sua composição, o que poderia explicar as diferentes variações no processo de fertilização.

Proteins present in seminal plasma of domestic animals present several functions in sperm physiology, acting in capacitation processes, acrosome reaction, interaction between gametes and sperm protection. Thus, the present study characterized proteins present in sperm cells from sheep, goats, horses, pigs and dogs. By means of mass spectrometry, a total of 128 proteins were identified in the spermatozoa of the species used. From this total, identified proteins were found in all species, however six proteins were present in four of the five species studied: angiotensin-converting enzyme, ATP synthase subunit, hexokinase 1, malate dehydrogenase, pyruvate dehydrogenase and succinyl- CoA. It was possible to identify 15 proteins common to ruminant species, besides 11 exclusive proteins were found in ruminants and 2 proteins exclusive to non-ruminants. This study was the first to characterize the proteins present in the spermatozoon of dogs, in addition to comparing five species including ruminant and non-ruminant animals. Despite the high similarity between some species, the spermatozoid presents protein differences in its composition, which could explain the different variations in the fertilization process.

ASPECTOS CLÍNICO-ANDROLÓGICOS DE REPRODUTORES DA ESPÉCIE EQUINA SUBMETIDOS A ULTRASSONOGRAFIA DOPPLER NO ESTADO DA PARAÍBA

Objetivou-se com este trabalho avaliar a ultrassonografia Doppler com o exame clínicoandrológico e fertilidade de equinos no estado da Paraíba. Onze equinos da raça quarto de milha, com idade entre três a 27 anos foram utilizados neste experimento. Os ejaculados foram colhidos pelo método de vagina artificial e as amostras foram submetidas à avaliação de cinética espermática a campo e pelo sistema automatizado para análise espermática (CASA). Em seguida, os animais foram submetidos à avaliação do fluxo sanguíneo testicular com a ultrassonografia Doppler. Diferenças (p<0,05) foram observadas entre os parâmetros de motilidade subjetiva avaliada a campo e no CASA. Avaliação da integridade da membrana espermática a campo foi semelhante ao teste de fluorescência. Animais idosos apresentam motilidade reduzida seguidos de um menor aporte sanguíneo na região testicular e baixa fertilidade. A ultrassonografia Doppler identificou que o Índice de Pulsatilidade tem correlação positiva com amplitude de deslocamento lateral de cabeça (ALH) do espermatozoide. Conclui-se que o exame clínico-andrológico, quando isolado, não determina a capacidade fértil de garanhões; a ultrassonografia associada ao método Doppler identifica animais subférteis e pode ser uma ferramenta auxiliar na seleção de reprodutores equinos com potencial fertilidade.

The aim of this study was to evaluate the Doppler ultrasonography with the clinicalandrological examination and fertility of horses in the state of Paraíba. Eleven quarter horse equine animals, aged among three to 27 years, were used in this experiment. Ejaculates were collected by the artificial vagina method and the samples were submitted to field sperm kinetics and by computer-assisted sperm analyses (CASA). Afterwards, the animals were submitted to evaluation of testicular blood flow with Doppler ultrasonography. It was observed statistical differences (p<0.05) between the parameters of subjective motility evaluated in the field and (CASA). Evaluation of sperm membrane integrity in the field was similar to the fluorescence test. Older animals have reduced motility followed by a lower blood supply in the testicular region and low fertility. The Doppler ultrasonography identified that the Pulsatility Index has a positive correlation with the amplitude of the lateral displacement of the head (ALH) of the spermatozoid. It is concluded that the clinical-andrological examination, when isolated, does not determine the fertile capacity of stallions; ultrasound associated with the Doppler method identifies subfertile animals and may be an auxiliary tool in the selection of equine reproducers with potential fertility

Evaluation of the semen characteistics after induced spermiation in the bullfrog Lithobates catesbeianus / Características e avaliação do sêmen de rã-touro Lithobates catesbeianus induzidos à espermiação

Evaluation of semen characteristics after hormonal induction of the bullfrog could provide valuable information on the gametes of this species, which may be useful for projects related to artificial fertilization, animal improvement, and cryopreservation. Bullfrog males were induced to spermiate with buserelin acetate (GnRHa), and their semen was subsequently analyzed. GnRHa (0.4 g) was administered to the bullfrog males with secondary sexual characteristics such as weight > 200 g, yellow chin, nuptial callus, and amplexus reflex, being the semen collected after 60 min. The semen volume was 5.76 mL, lightcolored. The other characteristics of the semen were: vigor of 4.80, motility of 93%, concentration of 14.24 × 106 mL-1, and content of normal spermatozoa of 70%. The volume, color, vigor, motility, sperm concentration, and content of normal spermatozoa were adequate in these bullfrog semen samples. Evaluation of the bullfrog semen samples based on this set of parameters is essential for decision-making about the quality and destination of the semen.(AU)

Avaliação de que as características do sêmen, após a indução hormonal da rã-touro, pode fornecer informações valiosas sobre os gametas desta espécie, podendo ser útil para projetos relacionados à fertilização artificial, melhoramento animal, e criopreservação. Machos de rã-touro foram induzidos à espermiação com acetato de buserelina (GnRHa) e o sêmen foi posteriormente analisado. GnRHa (0,4 mg) foi administrado à rã-touro do sexo masculino com características sexuais secundárias, tais como peso superior a 200 g, papo amarelo, calo nupcial, e reflexo amplexo, e seu sêmen foi coletado após 60 min. O sêmen da rã-touro apresentou volume de 5,76 mL, coloração turva, vigor espermático de 4,80; motilidade espermática de 93%, concentração de 14,24 x 106 SPTZ mL-1 e 70% de espermatozoides normais. O volume, cor, vigor, motilidade, concentração espermática e o número de espermatozoides normais das amostras do sêmen de rã-touro são adequados. O conjunto dos parâmetros para avaliação das amostras de sêmen de rã-touro é indispensável para a tomada de decisão sobre a qualidade e destino do mesmo.(AU)

BIOMARCADORES DO SÊMEN E DO SANGUE EM CÃES REPRODUTORES SUPLEMENTADOS COM GLUTAMINA E GLUTAMATO

A utilização de biotecnologias do sêmen canino tem sido requisitada com maior frequência pelos criadores. A composição proteica do plasma seminal tem despertado interesse em muitos pesquisadores e as proteínas presentes neste têm sido associadas à fertilização, funcionando como elementos chave durante este processo. O avanço no mercado de rações e suplementos para animais de companhia, principalmente cães, vem investindo em pesquisas de ingredientes e alimentos funcionais para atender às necessidades das diferentes raças e fases de vida, como também na melhoria da eficiência reprodutiva destes animais. A suplementação com aminoácidos pode ser um importante método para melhorar a fertilidade nos machos. A glutamina é um aminoácido presente em muitas proteínas e é o mais abundante no plasma sanguíneo e nos tecidos. Apesar de estar presente e participar de vários processos metabólicos, pouco se sabe sobre as concentrações de glutamina no plasma seminal de cães. Sabe-se que este aminoácido participa das vias metabólicas no espermatozoide, onde é encontrada em maiores concentrações na região da peça intermediária, e está relacionada com a proteção contra o estresse oxidativo dos gametas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da suplementação de glutamina e glutamato em cães em idade reprodutiva. Foram utilizados 9 cães com idade entre 2 e 8 anos, que receberam suplemento encapsulado. Coletas de sangue e sêmem foram realizadas em três momentos dia zero; dia vinte e oito, e dia cinquenta e seis do tratamento. O sangue foi analisado para avaliar a saúde dos cães e concentração sistêmica da glutamina, e o sêmem foi analisado quanto às características morfofuncionais e concetrações no plasma seminal de glutamina. Os resultados demonstraram que a suplementação elevou a concentração de glutamina no sangue (P<0,05), bem como que houve correlação com a contagem de leucócitos e linfócitos (R2 = 0,47). No que diz respeito à concentração de glutamina no plasma seminal, observou-se que há correlação significativa entre concentração da glutamina seminal e concentração de espermatozoides (R2 = 0,45), e que a suplementação melhorou os parâmetros de vigor (16%), motilidade (11%) e concentração (33%) dos espermatozoides nos valores absolutos.

The use of biotechnologies of canine semen has been requested more frequently by breeders. The protein composition of seminal plasma has aroused interest in many researchers and the proteins present in it have been associated with fertilization, functioning as key elements during this process. The advance in the feed and pet food market, mainly dogs, has been investing in research on ingredients and functional foods to meet the needs of different races and life stages, as well as improving the reproductive efficiency of these animals. Amino acid supplementation can be an important method for improving fertility in males. Glutamine is an amino acid present in many proteins and is the most abundant in blood plasma and tissues. Despite being present and participating in various metabolic processes, little is known about glutamine concentrations in seminal plasma of dogs. It is known that this amino acid participates in the metabolic pathways in the spermatozoid, where it is found in higher concentrations in the region of the intermediate piece, and is related to the protection against the oxidative stress of the gametes. The objective of the present study was to evaluate the effects of glutamine and glutamate supplementation in dogs of reproductive age. Nine dogs with ages ranging from 2 to 8 years were analyzed. Blood collections and semen were performed at three zero day moments; day twenty-eight and day fifty-six. Blood was analyzed to evaluate dog health and systemic concentration of glutamine, and semen was analyzed for morphofunctional characteristics and glutamine seminal plasma concentrations. The results showed that supplementation elevated glutamine concentration in the blood (P <0.05) as well as that there is a correlation with leukocyte and lymphocyte counts (R2 = 0.47). As regards glutamine concentration in seminal plasma, there was a significant correlation between seminal glutamine concentration and sperm concentration (R2 = 0.45), and that supplementation improved vigor parameters (16%), motility (11%) and concentration (33%) of spermatozoa in absolute values.

ADIÇÃO DE SUCOS DE FRUTAS E BETERRABA NO DILUENTE DE SÊMEN CRIOPRESERVADO DE OVINO

O espermatozoide é uma célula de alta produção energética e de respiração aeróbica. Em condições fisiológicas a fosforilação oxidativa libera espécies reativas do metabolismo do oxigênio (ERMO) que podem ser lesivos a moléculas e células. A extrusão do citoplasma do espermatozoide durante o processo de maturação torna-o ineficaz contra os processos oxidativos, uma vez que o pouco citoplasma não é capaz de comportar a quantidade necessária de antioxidantes. O processo de criopreservação é de grande importância para a pecuária uma vez que permite a otimização do uso de reprodutores e a avaliação e seleção genética de forma eficaz. Porém o processo expõe o espermatozoide ao estresse térmico e causa lesões em membranas biológicas e organelas, além de aumentar consideravelmente a produção de ERMO. O presente estudo foi realizado com o intuito de mensurar os efeitos da adição de suco de abacaxi, laranja e beterraba no diluente de sêmen ovino criopreservado, em diferentes concentrações e combinações. Foram realizadas cinco colheitas do sêmen de cinco machos e após avaliação primária e execução do pool com intuito de reduzir as características individuais de cada macho, o sêmen foi dividido nos seguintes tratamentos: abacaxi (A) a 10 e 15%, laranja (L) a 10 e 15%, beterraba (B) a 10 e 15%, abacaxi + laranja (A + L) a 10 e 15%, abacaxi + beterraba (A + B) a 10 e 15%, beterraba + laranja (B + L) a 10 e 15%, abacaxi + beterraba + laranja (A + B + L) a 10 e 15% e por fim o grupo controle adicionados ao meio de congelação BotuBov®. O suco de beterraba a 10% apresentou maiores valores (p<0,05) que os demais em motilidade progressiva e foi superior (p<0,05) em motilidade total não diferindo (p>0,05) dos grupos controle, beterraba 15% e beterraba e laranja 10% em motilidade total. Além disso, o tratamento com a beterraba a 10% mostrou maiores valores em hiperativação espermática (p<0,05) se comparado aos demais. O suco de beterraba mostrou-se capaz de manter os espermatozoides vivos em maior quantidade que o grupo controle, além de manter padrões aceitáveis de qualidade no sêmen.

The spermatozoa is a cell of high energy production and aerobic respiration. In physiological conditions oxidative phosphorylation releases reactive oxygen metabolism species (ERMO) that can be harmful to molecules and cells. Extrusion of the spermatozoid cytoplasm during the maturation process renders it ineffective against oxidative processes, since the little cytoplasm is not capable of containing the required amount of antioxidants. The cryopreservation process is of great importance for livestock since it allows the optimization of the use of breeders and the evaluation and genetic selection effectively. However, the process exposes the spermatozoid to thermal stress and causes lesions in biological membranes and organelles, as well as considerably increase the production of ERMO. The present study was carried out to measure the effects of the addition of pineapple, orange and beet juice on the cryopreserved ovine semen diluent, in different concentrations and combinations. Five sperm harvests were collected from five male males and, after primary evaluation and execution of the pool in order to reduce the individual characteristics of each male, the semen was divided into the following treatments: pineapple (A) at 10 and 15%, orange (L) 10 and 15% beet, 10 and 15% beet, 10 and 15% pineapple + orange (A + L), 10 and 15% pineapple + beet (A + B), beet + orange (B + L) at 10 and 15%, pineapple + beet + orange (A + B + L) at 10 and 15% and finally the control group added to BotuBov® freezing extender. The 10% beet juice presented higher values (p <0.05) than the others in progressive motility and was higher (p <0.05) in total motility than in control, beet 15% and beet and orange 10% on total motility. In addition, treatment with 10% beet showed higher values in spermatic hyperactivation (p <0.05) when compared to the others. Beet juice was able to keep spermatozoa alive in greater numbers than the control group, in addition to maintaining acceptable quality standards in the semen.

Avaliação do processo de congelação do sêmen equino in natura diluído, 5°C, -55°C e pós-descongelação.

Durante o processo de criopreservação o espermatozoide passa por diversas mudanças físico-químicas, podendo ocasionar variados graus de lesões as células espermáticas. Determinar o momento do processo de congelação pelo qual o espermatozoide está mais suscetível às injúrias seria importante passo para progresso do processo de congelação e, com isso, a fertilização. O objetivo foi avaliar o efeito do processo de congelação na integridade das membranas plasmática, acrossomal e potencial mitocondrial (PIAIA) integridade das membranas plasmática (MPI), acrossomal (AI), potencial mitocondrial (APM) e citoesqueleto de espermatozoides equinos in natura diluído, 5°C, -55°C e -196°C. Além de, estudar as etapas de refrigeração, congelação e dentro da congelação, a etapa de supercooling. Assim como, verificar o efeito de duas curvas de congelação (-15°C/min e -33°C/min) durante o supercooling 5°C à -55°C, para isto, foram utilizadas duas máquinas de congelação modelo TK 3000. Para desenvolvimento do experimento, o sêmen foi envasado em palhetas de 0,5mL com concentrações de 100x106 espermatozoides/palheta e submetidos a uma curva 1 (rápida; -0,25°C/min de 22°C até 5°C, com período de 20 minutos para estabilização, -33°C/min de 5°C até -80°C e, -10°C/min de -80°C para -120°C) e a outra para uma curva 2 (lenta; -0,25°C/min de 22°C até 5°C, com período de 20 minutos para estabilização, -15°C/min de 5°C até -80°C e, -10°C/min de -80°C até -120°C). Para realização do experimento foram utilizados 4 garanhões com 6 repetições. Os dados obtidos dos procedimentos experimentais foram analisados com auxílio do software Statistical Analysis System for Windows SAS®, versão 9.3 (SAS, 2005). Não houve diferença estatística significativa (P>0,05) entre as duas curvas de congelação usadas. No entanto, houve efeito de tempo (P<0,05) para todas as características estudadas. Quando foi analisado progressivamente a criopreservação in natura diluído, 5°C, -55°C e -196°C, foi observado que as lesões progrediram com a congelação. Entretanto, quando estudado, as etapas do processo de congelação, a refrigeração in natura diluído até 5°C, supercooling dentro da congelação de 5°C até -55°C e congelação -55°C até -196°C, assim, o citoesqueleto sofreu maior despolimerização durante a refrigeração, entretanto, a membrana acrossomal, quase não sofreu danos durante esta etapa. Para MPI e APM ocorreu maior porcentagem de redução da integridade no momento final da congelação -55°C até -196°C, assim, como PIAIA, provavelmente, por MPI e APM, sofrerem mais injúrias, nessa etapa. De uma forma geral, o processo de congelação causa danos irreversíveis ao espermatozoide equino. Sendo que, a refrigeração causou maior despolimerização do citoesqueleto, porém, praticamente não afetou o acrossomo. A redução de células com MPI, APM e PIAIA, ocorre no momento final da congelação -55°C e -196°C. O acrossomo é a membrana que menos lesa com o processo de congelação. Também, observamos similaridade entre as curvas de congelação rápida (-33°C/min) e lenta (-15°C/min), para os parâmetros estudados. Assim, este estudo permitiu avaliar progressivamente a resposta biológica do espermatozoide durante a criopreservação, obtendo um compreensão dinâmica e quantitativa, dos momentos mais críticos para o espermatozoide, para as características avaliadas e técnicas utilizadas.

During the cryopreservation process the sperm cells undergo several physico-chemical changes, which can cause varying degrees of injury to the sperm cells. Determining the timing of the freezing process by which sperm is most susceptible to injury would be an important step in progressing the freezing process and thus fertilization. The objective was to evaluate the effect of the freezing process on the integrity of plasma membranes, acrosomal and mitochondrial potential (PIAIA) plasma membranes integrity (MPI), acrosomal (AI), mitochondrial potential (APM) and equine spermatozoa diluted in natura, 5°C, -55°C and -196°C. In addition to, study the steps of refrige-ration, freezing and within freezing, the stage of supercooling. The freezing curves -15°C/min and -33°C/min du-ring supercooling 5°C to -55°C were used to verify the effect of two freezing machines model TK 3000. For the development of the experiment, the semen was packed in 0.5mL straw with concentrations of 100x106 spermato-zoa/straws and submitted to a curve 1 (fast; -0.25°C/min from 22°C to 5°C, with a period of 20 minutes for stabili-zation, -33°C/min from 5°C to -80°C and -10°C/min from -80°C to -120°C) and the other for a curve 2 (with a period of 20 minutes for stabilization, -15°C/min from -5°C to -80°C and -10°C/min from -80°C to -120°C). For the experiment, 4 stallions with 6 replicates were used. The data obtained from the experimental procedures were analyzed with the aid of Statistical Analysis System for Windows SAS®, version 9.3 (SAS, 2005). There was no significant statistical difference (P> 0.05) between the two freezing curves used. However, there was a time effect (P <0.05) for all the characteristics studied. When cryopreservation was progressively analyzed (semen extender, 5°C, -55°C and -196°C), it was observed that the lesions progressed with freezing. However, when studied, the steps of the freezing process, refrigeration (in natura diluted to 5°C), supercooling within freezing 5°C to -55°C and freezing -55°C to -196°C, thus, the cytoskeleton underwent greater depolymerization during refrigeration; however, the acrosomal membrane was almost not damaged during this stage. For MPI and APM, a higher percen-tage of integride reduction occurred at the final freezing point -55°C to -196°C, thus, as PIAIA, probably due to MPI and APM, suffered more injuries at this stage. In general, the freezing process causes irreversible damage to the equine sperm. Since, the refrigeration caused greater depolymerization of the cytoskeleton, however, it practically did not affect the acrosome. The reduction of cells with MPI, APM and PIAIA, occurs at the final moment of freezing -55°C and -196°C. The acrosome is the membrane that least damages the freezing process. Also, similarities were observed between the freezing (-33°C/min) and slow (-15°C/min) freezing curves for the studied parameters. Thus, this study allowed to progressi-vely evaluate the spermatozoid biological response during cryopreservation, obtaining a dynamic and quantitative understanding of the most critical mommies for the spermatozoon, for the evaluated parameters and techniques used. Keywords: Freezing. Sperm Equine. Supercooling.

Efeitos da glutationa reduzida sobre os processos de capacitação e reação acrossômica in vitro em espermatozoides suínos refrigerados

Um estudo foi realizado objetivando-se avaliar os efeitos da glutationa reduzida (GSH) sobre a função espermática, durante a capacitação e posterior indução da reação acrossômica in vitro, em sêmen suíno refrigerado. Isso foi feito por meio da avaliação de vários marcadores de capacitação in vitro e outros parâmetros globais de qualidade de sêmen, tais como viabilidade, motilidade total, exocitose acrossomal induzida por progesterona, fragmentação de DNA, níveis de desordens lipídicas na membrana espermática, espécies reativas de oxigênio (ERO), resíduos de cisteínas livres em extratos de cabeça e cauda espermáticas e fosforilação prot eica de resíduos de tirosina. Um total de 62 ejaculados, provenientes de 35 reprodutores suínos saudáveis Pietrain, entre 2 e 3 anos de idade, foram usados nas diferentes análises deste trabalho. A adição de GSH, no meio de capacitação (CM), impediu a maioria das alterações concomitantes à capacitação. Além disso, o GSH provocou uma queda rápida e intensa da motilidade total (P<0,05), a qual foi mantida dur ante todo o período de incubação. Apesar destes resultados, o GSH não afetou o início da exocitose acrossomal in vitro induzida pela progesterona (IVAE) observada após 4h de incubação no CM. Os resultados mostraram que a capacitação in vitro de sêmen suíno está relacionada com um aumento significante tanto da quebra total das pontes dissulfeto quanto dos níveis de ERO intracellular. Esses fenômenos podem desempenhar um papel, na obtenção do estado capacitante da célula espermática, embora eles não sejam fundamentais na realização da posterior IVAE. Finalmente, a motilidade dos espermatozoides parece ser , parcialmente, controlada por mecanismos iônicos e de oxidação-redução, tal como indicou a incubação com GSH em condições separadas. Portanto es te estudo demonstra a existência de vias paralelas e separadas dentro dos eventos da capacitação espermática controladas pelo GSH e, assim, contribui para uma melhor compreensão desses fenômenos e traz um novo direcionamento para trabalhos futuros dentro dessa linha de pesquisa.

A study was conducted with the objective of evaluating the effects of reduced glutathione (GSH) over spermatic function during capacitation and posterior induction of acrosome reaction in vitro, in refrigerated pig semen. This was done by evaluating many in vitro capacitation markers and other global parameters of semen quality, such as feasibility, total motility, acrosome exocytosis induced by progesterone, DNA fragmentation, levels of lipid disorders in the spermatic membrane, reactive oxygen species (ROS), free cysteine residue in sperm head and tail extracts and protein phosphorylation of tyrosine residue. A total of 62 ejaculates derived from 35 healthy breeding Pietrain pigs, between 2 and 3 years of age, were used in the different analyses conducted in this work. The addition of GHS in the capacitation medium (CM) prevented most changes consequent to capacitation. In addition, the GSH caused quick fall and intense total motility (P < 0.05), which was maintained during the entire incubation period. Despite these results, the GH did not affect the beginning of in vitro acrosome exocytosis induced by progesterone (IVAE), observed after four hours of CM incubation. The results showed that in vitro pig semen capacitation is related to the significant increase of both total break of disulfide bonds and the levels of intracellular ROS. These phenomena can fulfill a role in obtaining the capacitating state of the spermatic cell, although they are not fundamental in performing the posterior IVAE. Finally, spermatozoid motility seems to be partially controlled by ionic and oxidation-reduction mechanisms, as was indicated by the GSH incubation in separate conditions. Therefore, this study demonstrates the existence of parallel and separated paths within the spermatic capacitation events controlled by the GSH, thus contributing for the better understanding of these phenomena, and brings a new direction for future works in this line of research.

PROTEÔMICA DA MATRIZ NUCLEAR ESPERMÁTICA SUÍNA

Objetivou-se com este estudo realizar o isolamento e identificação das proteínas da matriz nuclear espermática de um reprodutor suíno. Foi utilizado sêmen de suíno pré-diluído resfriado, obtido de um reprodutor aparentemente saudável, com testes de morfologia e de condensação de cromatina normais, da linha comercial landrace X large White X pietran, com 22 semanas de idade, utilizado normalmente em uma central de inseminação artificial de suínos localizada em Uberlândia, Minas Gerais. O sêmen foi processado para separação das cabeças dos espermatozoides, extração da cromatina e matriz nuclear, quantificação de proteínas e análise por espectrometria de massas (Aparelho LTQ-Orbitrap Elite). A família de proteínas mais abundantes correspondeu às ribossomais (18%), seguida pelas não caracterizadas (15,6%), citoesqueleto (11,4%), histonas (3,8%), subunidades proteossomais (2,8%) e heat shock (1,9%). As outras proteínas foram agrupadas em outras famílias e corresponderam a 46,5% do total de proteínas descritas. Foram identificadas 211 proteínas diferentes na amostra, e destas 149 (70,7%) foram previamente descritas como presentes no núcleo espermático ou somático de outras espécies, 29 (13,7%) não têm presença nuclear previamente descrita e 33 (15,6%) foram não caracterizadas. A protamina 2 foi identificada pela primeira vez na espécie suína, no entanto a protamina 1 não foi descrita. Conclui-se que o isolamento das proteínas da matriz nuclear de espermatozoides suíno foi satisfatório, demonstrando que o protocolo utilizado foi eficiente. Algumas famílias de proteínas foram identificadas e descritas. Contudo não foi possível identificar algumas estruturas proteicas. Desta forma este estudo vem contribuir com um catálogo de estruturas proteicas que podem ser úteis em futuros estudos proteômicos.

The objective of this study was to perform the isolation and identification of proteins of sperm nuclear matrix of a pig breeder. It was used pre-chilled diluted boar semen obtained from an apparently healthy breeder boar, with normal morphology and chromatin condensation tests, from a commercial line landrace X large white X pietran, with 22 weeks of age, usually used in an artificial insemination central, located in Uberlândia, Minas Gerais. The semen was processed to separate the sperm heads, extraction of chromatin and nuclear matrix, protein quantification and analysis by mass spectrometry (Equipment LTQ-Orbitrap Elite). The most abundant family corresponded of ribosomal proteins (18%), followed by uncharacterized (15,6%), cytoskeleton (11,4%), histones (3,8%), proteasome subunits (2,8% ) and heat shock (1,9%). The other proteins were grouped into other families and corresponded to 46,5% of total proteins described. Were identified 211 different proteins in the sample and 149 of these (70,7%) have been described previously as present in the somatic or sperm nucleus of other species, 29 (13,7%) did not have nuclear presence previously described and 33 (15,6%) have not been characterized. Protamine 2 was first identified in swine, however protamine 1 has not been described. It follows that the proteins isolation of the nuclear matrix of swine spermatozoid was satisfactory, showing that the protocol used was efficient. Some protein families have been identified and described. However it was not possible to identify some protein structures. Therefore this study contributes to a catalog of protein structures that may be useful in future proteomics studies.

Sperm Quality of Sheep Fed Cottonseed Cake

Cottonseed cake is used as source of proteins for animal feeding. However, cotton seeds present a substance with toxic potential in their composition, the gossypol. Gossypol is a compound highly reactive that binds rapidly to different substances, including minerals and amino acids. In males, gossypol promotes reduction of motility and spermatozoid concentration. The present work evaluated the effects on spermatogenesis of male sheep fed cottonseed cake.

Sperm Quality of Sheep Fed Cottonseed Cake

Cottonseed cake is used as source of proteins for animal feeding. However, cotton seeds present a substance with toxic potential in their composition, the gossypol. Gossypol is a compound highly reactive that binds rapidly to different substances, including minerals and amino acids. In males, gossypol promotes reduction of motility and spermatozoid concentration. The present work evaluated the effects on spermatogenesis of male sheep fed cottonseed cake.(AU)