Caracterização de corantes solvatocrômicos como marcadores físico-químicos de medicamentos homeopáticos e de amostras biológicas de sobrenadantes

O presente estudo tem a finalidade de determinar se corantes solvatocrômicos podem ser utilizados como método de escolha de medicamentos homeopáticos para tratamento de sistemas vivos infectados com diferentes agentes infecciosos. Tal método permite analisar possíveis alterações no momento dipolo da água quando em contato com diluições homeopáticas de diferentes origens. Métodos: A pesquisa se desenvolveu a partir de sobrenadantes (SNs) colhidos de macrófagos RAW 264.7 estimulados com bacilos Calmette-Guérin (BCG) (cepa vacinal) e tratados com Silicea terra 6, 30, 200 cH, Zincum metallicum 6, 30, 200 cH e controles; desafiados com Encephalitozoon cuniculi (E. cuniculi) e tratados com Phosphorus 6, 30, 200 cH e controles; ou ainda ativados com LPS (mimetizando infecção por bactérias Gram negativas) e tratados com Aspirina 15 cH e controles. Os SNs descongelados foram diluídos 1:10 em água pura estéril e 1:100 em solução hidro-alcooólica 30%, sendo sucussionados por 100 vezes em braço mecânico automático (Autic®). Os respectivos medicamentos também foram preparados em solução hidro- alcooólica 30% do mesmo lote e sucussionados da mesma forma. Todas as amostras foram codificadas aleatoriamente, em números consecutivos, por um técnico não envolvido com a experimentação. Os códigos só foram quebrados após a análise estatística, de forma que todo o estudo foi realizado em cego. Antes de cada experimento, as amostras foram submetidas a 40 agitações verticais manuais, filtradas em filtro de malha 0.22 micrômetros e adicionadas aos corantes na proporção 1:60. Seis diferentes corantes solvatocrômicos (BDN, NNDMIA, Cumarina, Rodanina, Violeta metileno e Vermelho do Nilo) foram testados, a fim de cobrir todo o espectro de luz visível. A leitura em espectrofotômetro foi feita em cubetas descartáveis e a concentração dos corantes foi definida segundo padrões previamente estabelecidos, utilizando álcool absoluto como solvente. Todas as preparações foram feitas em capela de fluxo laminar e com o mínimo de incidência de luz possível sobre os corantes, até o momento da leitura. As condições ambientais foram controladas diariamente, sendo medidas temperatura, umidade e fluxo magnético. Antes de cada série de medidas, o equipamento foi calibrado com o mesmo álcool absoluto usado na preparação dos corantes e o comprimento de onda correspondente ao pico de absorbância foi registrado. As amostras foram analisadas em triplicata, em três séries experimentais consecutivas (N=9). O perfil de absorbância de cada medicamento foi comparado com a absorbância dos respectivos SNs. O método estatístico usado foi a ANOVA de uma via, seguido de Tukey, sendo os valores de p<0,05 considerados significantes. Testes de normalidade foram feitos por Shapiro- Wilk e eventuais outliers foram removidos após inspeção do QQ plot. Conclusão: Concluiu-se, portanto, que a Rodanina é um bom marcador de solventes submetidos à sucussão, provavelmente em função da atividade oxidativa associada; Cumarina é marcador de Phosphorus 6cH e de sobrenadantes tratados com Aspirina 15 cH e LPS; BDN é marcador de Silicea terra 6 cH, 30 cH e 200 cH, Zincum metallicum 30 cH e 200cH e Aspirina 15cH; Violeta metileno é marcador de sobrenadantes tratados com Silicea terra 30 cH e 200cH, bem como Zincum metallicum 6 cH e 200cH. Os demais corantes não apresentaram interações específicas com as amostras estudadas.

The present study aims to determine whether solvatochromic dyes can be used as a method of choice for homeopathic medicines to treat living systems infected with different infectious agents. This method allows analyzing possible changes in the dipole moment of water when in contact with homeopathic dilutions of different origins. The research was developed from supernatants (SNs) collected from RAW 264.7 macrophages stimulated with bacilli Calmette-Guérin (BCG) (vaccinal strain) and treated with Silicea terra 6, 30, 200 cH, Zincum metallicum 6, 30, 200 cH, and controls. Supernatants challenged with Encephalitozoon cuniculi (E. cuniculi) and treated with Phosphorus 6, 30, and 200 cH and controls, or even from macrophages activated with LPS (mimicking infection by Gram-negative bacteria) treated with Aspirin 15 cH and controls. The thawed SNs were diluted 1:10 in sterile water, then 1:100 in 30% hydro-alcoholic solution and submitted to 100 succussions in a robotic mechanical arm (Autic®). The respective medicines were also prepared in 30% hydro- alcoholic solution from the same batch, being succussed in the same way. All samples were randomly coded in consecutive numbers by a technician not involved in the experiment. The codes were only broken after statistical analysis; thus, the study was performed entirely blind. Before each experiment, the samples were submitted to 40 manual vertical agitations, filtered in a 0.22- micrometer mesh filter, and added to the dyes in a 1:60 ratio. Six different solvatochromic dyes (BDN, NNDMIA, Coumarin, Rhodanine, Methylene Violet, and Nile Red) were tested to cover the whole visible light spectrum. The reading was done in a spectrophotometer in disposable cuvettes, and the concentration of the dyes was defined according to previously established standards, using absolute alcohol as a solvent. All preparations were carried out in a laminar flow hood, with an as little light incidence as possible on the dyes, until the moment of reading. The environmental conditions were controlled daily, being measured temperature, humidity, and magnetic flux. Before each series of measurements, the equipment was calibrated with the same absolute alcohol used in the preparation of the dyes, and the wavelength corresponding to the peak of absorbance was recorded. The samples were analyzed in triplicate, in three consecutive experimental series (N=9). The absorbance profile of each drug was compared with the absorbance of the respective SNs. The statistical method used was one-way ANOVA, followed by Tukey, with p<0.05 being considered significant. The Shapiro-Wilk test checked normality, and eventual outliers were removed after inspection of the QQ plot. Therefore, it was concluded that Rodanine is a good marker of solvents subjected to succussion, probably due to its associated oxidative activity; Coumarin is a marker of Phosphorus 6cH and of supernatants treated with Aspirin 15cH and LPS; BDN is a marker of Silicea terra 6 cH, 30 cH and 200 cH, Zincum metallicum 30 cH and 200cH and Aspirin 15cH; Methylene violet is a marker of supernatants treated with Silicea terra 30 cH and 200cH, as well as Zincum metallicum 6 cH and 200cH. The other dyes did not show specific interactions with the samples studied.

Desenvolvimento farmacotécnico e atividade antimicrobiana e antioxidante de gel de carbômero contendo extrato de casca de Punica granatum para uso em lesões cutâneas em cães

A casca é um dos biorresíduos dos frutos de romã formados após a extração do suco, com potencial de ser convertido em produtos de valor agregado para inúmeras aplicações, entre elas, a farmacêutica, uma vez que contém inúmeros compostos bioativos de interesse farmacológico. O objetivo do presente trabalho foi preparar um gel contendo extrato bruto seco das cascas de romã (EBSCR) com vistas ao uso como antimicrobiano no manejo de lesões na farmacoterapia veterinária de cães, com o intuito de fundamentar o interesse pela agregação de valor aos biorresíduos do romã. Inicialmente, realizou-se a determinação do teor de fenóis totais e da atividade antioxidante do extrato, sendo definidas a CE50(Concentração efetiva para inibir 50%) e a CE90 (Concentração efetiva para inibir 90%), utilizando BHT (Butilhidroxitolueno) como padrão. Após caracterização química, foram preparadas formulações de géis de carbômero a 1% p/p contendo o EBSCR em diferentes concentrações (1,25, 2,5 e 3,75% p/p), nomeadas FG1, FG2 e FG3, que foram submetidas à pesquisa de atividade antimicrobiana pelo método de disco-difusão. Para tal, foram empregadas cepas de Staphylococcus aureus (ATCC 25.923), Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228), Escherichia coli (ATCC 25.922) e Candide albicans (ATCC 24.433). Depois de eleita a formulação com a melhor concentração do extrato para a continuidade do estudo, foram preparados 1,5 Kg do gel base (GB) e em 1 Kg foi incorporado o extrato na concentração eleita para o estudo (FG2; 2,5% p/p). O produto foi fracionado e as amostras foram armazenados sob refrigeração (5 ± 2 ºC) e em temperatura ambiente (27 ± 2º C), determinada no período de execução do estudo, para avaliação da estabilidade preliminar. Os seguintes testes físico-químicos foram realizados em FG2 ao longo de 90 dias: aspecto, pH, resistência ao estresse térmico e mecânico, perfil de textura, determinação do teor de fenóis totais, qualidade microbiológica e manutenção da atividade antimicrobiana. O teor de fenóis totais encontrado foi de 61,92% EAG e a atividade antioxidante total determinada para uma solução a 40 4µg.mL-1 foi 93,8%, com valores das concentrações mínimas eficazes (CE) para reduzir o DPPH em 50% e 90% de 14,44 µg.mL-1 e 39,82 µg.mL-1, respectivamente. A incorporação do EBSCR a 2,5% p/p no gel base originou um gel opaco, de cor amarelo-intensa, com pH de 6,10. Ao longo do tempo, o pH, os parâmetros de textura e o teor de fenóis totais diminuíram, sendo as maiores alterações notadas nos produtos armazenados sob refrigeração. Ao final de 30 dias a redução no teor de fenóis totais na formulação foi inferior a 9% somente para a amostra armazenada sob refrigeração. No que diz respeito à qualidade microbiológica, as formulações atenderam aos requisitos farmacopeicos para a contagem de microrganismos mesófilos totais e ausência de microrganismos patogênicos, sem alterações no período de 90 dias. A eficácia antimicrobiana foi mantida ao longo tempo. A partir dos resultados pode-se inferir que a formulação FG2, preparada a partir do gel base de carbômero a 1% p/p contendo EBSCR a 2,5% p/p, armazenada durante 30 dias sob refrigeração, pode ser empregada para a finalidade pretendida, sendo útil para agregar valor à biorresíduos do romã.

The peel is one of the biowaste of pomegranates fruits formed after the extract of the juice, with the potential to be converted into products with added value for many applications, including the pharmaceutical. The purpose of this present work was to prepare a gel containing dry total extract from pomegranate peel (named EBSCR) with purpose on the use of handling of skin lesions in veterinarys pharmacotherapy of dogs, with the intention of substantiating the interest of values added on the biowastes of pomegranate. At first, was carried out the determination of the content of total phenols and the total antioxidant activity on the extract, being defined as CE50 (effective concentration to suppress 50%) e a CE90 (effective concentration to suppress 90%), using BHT (butylhydroxytoluene) as a pattern. After chemical characterization, was prepared formulations of carbomers gel with 1% p/p containing the EBSCR with different concentrations (1.25, 2.5, and 3.75% p/p), called FG1, FG2, and FG3, then was submitted to activitys research antimicrobial through the disc-diffusion method. In order to do this, was used strains of Staphylococcus aureus (ATCC 25.923), Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228), Escherichia coli (ATCC 25.922) e Candida albicans (ATCC 24.433). After of being elected the formulation with the best concentration of the extract for the continuation of the research was prepared 1.5 kg of base gel e in 1 kg was incorporated the extract in the concentration elected for theresearch (FG2; 2.5% p/p). The product was fractionated, and the samples were stored under refrigeration (5 ± 2º C) and at a temperature (27 ± 2º C), determined on executions period of the research to the evaluation of preliminary stability. The phy sicochemical tests were carried out on FG2 for 90 days: aspect, pH, thermal and mechanical stress, texture profile, contents of all phenols, microbiological quality, and antimicrobial activity maintenance. The research of the constituents on the extract by UHPLC suggests the existence of phenols composites of interest to the antimicrobial and healing activity in the extract. The content of total phenols found was of 61.92 g/EAG and the antioxidant activity total determined for a solution with 40 µg.mL-1 was 6 93.8% with the values of the minimum effective concentrations (EC) to reduce the DPPH to 50% and 90% of 14.44 µg.mL-1 and 39.82 µg.mL-1, respectively. The incorporation of the EBSCR to 2.5% on the bases gel created an opaque gel, with intense yellow color, with a pH of 6.10. During the time, the pH, texture profile, and phenols content decreased, being the biggest alterations noted on the products kept out of the refrigerator. At the end of 30 days, the reduction on the phenols content total in the formulation was lower than 9%, only to the sample stored under refrigeration. Concerning about the microbiological quality, the formulations were in according to the count of mesophiles microorganism total and absence of pathogenic microorganisms, without changes for 90 days. The antimicrobial effectiveness was kept during the study time. With the results can infer that the formulation FG2, prepared as of carbomer bases gel to 1% p/p containing EBSCR at 2.5% p/p, stored during 30 days under refrigeration can be used to the intended purpose, being useful to add value to biowastes of pomegranate.

Avaliação fisiológica e comportamental de cães utilizados em terapia assistida por animais (TAA) / Phyisiological and behavioral assessment in dogs used in Animal-Assisted Therapy (AAT)

Realizou-se a observação comportamental de nove cães terapeutas (oito da raça Labrador Retriever e um Golden Retriever), dosaram-se cortisol sérico e salivar, aferiram-se a temperatura retal, a pressão arterial sistólica e as frequências cardíaca e respiratória nos seguintes momentos: M0 (média de três avaliações do cão em repouso) e em M1, M2 e M3 (imediatamente antes, imediatamente após e decorridas 24h das atividades de terapia assistida por animais - TAA), respectivamente. Não houve diferença significativa quanto às características estudadas (P>0,05), exceto pela temperatura, que foi mais elevada em M1 e M2 do que em M0 (P=0,009). A avaliação comportamental, realizada de maneira descritiva, não apresentou alteração negativa. Houve diferença significativa quanto à concentração de cortisol sérico entre os momentos M1 e M3 (P=0,071), e não ocorreu diferença da concentração do cortisol salivar entre os quatro momentos (P=0,746). As alterações observadas foram atribuídas à contenção e à manipulação dos animais e não desencadearam desconforto físico ou estresse dignos de nota em cães.(AU)

Behavioral observation of nine therapist dogs (eight Labrador Retrievers and one Golden Retriever) was performed and serum and salivar cortisol dosage, rectal temperature, systolic blood pressure and heart and respiratory rates were measured and evaluated at the following moments: M0 (average of three evaluations of the dog at rest) and M1, M2 e M3 (immediately before, at the end and 24 hours after the AAT activities, respectively). There was no significant difference in the parameters between the moments (P>0.05) except for temperature, which was higher in M1 and M2 than M0 (P=0.009). The behavioral assessment was conducted in a descriptive way and didn't present a negative effect. There was significant difference when comparing the serum cortisol levels between M1 and M3 (P=0.0712). There wasn't asignificant difference in salivary cortisol levels when comparing the values of the four moments (P=0.7458). The observed alterations are probably related to the containment and handling of animals, demonstrating that the therapy doesn't have a negative effect on dogs.(AU)

Evaluation of resistance of the Nile tilapia (Oreochromis niloticus) skin in longitudinal, transversal and diagonal position after tanning with chromium salts and retanning with different tanning substances - DOI: 10.4025/actascianimsci.v28i3.54 / Avaliação da resistência da pele de tilápia do Nilo (Oreochrmis niloticus) nos sentidos longitudinal, transversal e diagonal, depois de submetida ao curtimento com sais de cromo e recurtimento com agentes - DOI: 10.4025/actascianimsci.v28i3.54

The objective of this experiment was to evaluate the resistance of the Nile tilapia (Oreochromis niloticus) skin in longitudinal, transversal and diagonal sections after tanning with chromium salts and re-tanning with different tanning substances. Skins were distributed in a totally randomized design, 3 by 3, with three re-tanning techniques (T1 = with 4% chromium salts; T2 = 6% vegetal tannins; T3 = with 6% synthetic tannins) coupled with three removal positions (P1 = longitudinal position; P2 = transversal position and P3 = diagonal position), with 6 replications per treatment in triplicate. Hide was considered the experimental unit. The EMIC dynamometer was used for traction, lengthening and progressive tearing resistance. Hide thickness ranged from 1.00 to 1.20 mm with no difference in re-tanning techniques. Although no significant difference in traction existed with regard to re-tanning techniques, there was a higher significant difference with regard to transversal position removal of proofs (11.92 N/mm2). Re-tanning technique and position did not affect progressive tearing, which ranged from 24.47 to 29.12 N/mm. Hide in the transversal position had greater elongation of technique, albeit no difference occurred in T2 technique for longitudinal position. Greater resistance to traction and elongation occurred in re-tanned hide with chromium salts, while re-tanning and posit

O objetivo do trabalho foi avaliar a resistência da pele da Tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) no sentido longitudinal, transversal e diagonal, depois de curtida com sais de cromo e recurtida por diferentes técnicas de recurtimento. As peles foram distribuídas em delineamento inteiramente casualizado, em fatorial 3x3, sendo 3 técnicas de recurtimento (T1 = com 4% de sais de cromo; T2 = 6% com taninos vegetais e T3 = com 6% de taninos sintéticos) e 3 posições de retirada dos corpos-de-prova (P1 = longitudinal; P2 = transversal e P3 = diagonal), com 6 repetições por tratamento, em triplicata. O couro foi considerado a unidade experimental. Para os testes de determinação da resistência à tração, ao alongamento e ao rasgamento progressivo, foi utilizado o dinamômetro EMIC. A espessura dos couros variou de 1,00 a 1,20 mm, não diferindo entre as técnicas de recurtimento. Não houve diferença significativa para tração quanto às técnicas de recurtimento, porém, quanto à posição de retirada dos corpos-de-prova, foi significativamente maior para transversal (11,92 N/mm2). A técnica de recurtimento e a posição não influenciaram no rasgamento progressivo (variou de 24,47 a 29,12 N/mm). O couro na posição transversal apresentou maior alongamento independentemente da técnica aplicada, não diferindo apenas na técnica T2 para a posição longitudinal. A pele recurtida com sais de cromo e no

Biomechanical properties of the biceps-labral complex submitted to mechanical stress / Propriedades biomecânicas do complexo labrum-glenóide bicipital superior submetido ao estresse mecânico

OBJETIVO: Determinar as propriedades biomecânicas do complexo labrum-glenóide bicipital superior submetido ao estresse mecânico contínuo ou repetitivo (repentino).MÉTODOS: Dezoito ombros provenientes de 15 cadáveres não reclamados, idades na faixa de 20 a 40 anos, foram submetidos aos testes de tração contínua ou repentina usando três diferentes máquinas de tração. Foram excluídos do estudo os ombros que apresentavam lesões degenerativas ou evidências de lesões traumáticas pré-existentes.RESULTADOS: Ocorreu ruptura da porção distal do tendão do bíceps sob a tensão contínua de 290 N e de 348N na tração repentina. Não foram observadas lesões no complexo labrum-bicipital.CONCLUSÃO: A simples tração contínua ou súbita do braço não produz lesões do complexo Labrum Glenóide Bicipital Superior (SLAP) na articulação do ombro.(AU)

PURPOSE: To determine biomechanical properties of the superior labrum-biceps tendon complex submitted to continuous and sudden mechanical strain. METHODS: Eighteen shoulder specimens from 15 unclaimed corpses, ages ranging from 20 to 40 years, were submitted to continuous or sudden tensile tests using 3 different traction machines. Shoulders presenting signs of degenerative diseases or preexisting traumatic lesions were excluded. RESULTS: Rupture of the distal portion of the long hand of the biceps occurred when stretching forces reached 290N in continuous traction and 384N in sudden traction. No labral-complex lesions were observed. CONCLUSION: Either a simple continuous or a sudden uniaxial traction of the arm do not play a role in the genesis of superior labrum anterior-posterior (SLAP) lesions in the shoulder joint produce.(AU)

Evaluation of resistance of the Nile tilapia (Oreochromis niloticus) skin in longitudinal, transversal and diagonal position after tanning with chromium salts and retanning with different tanning substances - DOI: 10.4025/actascianimsci.v28i3.54 / Avaliação da resistência da pele de tilápia do Nilo (Oreochrmis niloticus) nos sentidos longitudinal, transversal e diagonal, depois de submetida ao curtimento com sais de cromo e recurtimento com agentes - DOI: 10.4025/actascianimsci.v28i3.54

The objective of this experiment was to evaluate the resistance of the Nile tilapia (Oreochromis niloticus) skin in longitudinal, transversal and diagonal sections after tanning with chromium salts and re-tanning with different tanning substances. Skins were distributed in a totally randomized design, 3 by 3, with three re-tanning techniques (T1 = with 4% chromium salts; T2 = 6% vegetal tannins; T3 = with 6% synthetic tannins) coupled with three removal positions (P1 = longitudinal position; P2 = transversal position and P3 = diagonal position), with 6 replications per treatment in triplicate. Hide was considered the experimental unit. The EMIC dynamometer was used for traction, lengthening and progressive tearing resistance. Hide thickness ranged from 1.00 to 1.20 mm with no difference in re-tanning techniques. Although no significant difference in traction existed with regard to re-tanning techniques, there was a higher significant difference with regard to transversal position removal of proofs (11.92 N/mm2). Re-tanning technique and position did not affect progressive tearing, which ranged from 24.47 to 29.12 N/mm. Hide in the transversal position had greater elongation of technique, albeit no difference occurred in T2 technique for longitudinal position. Greater resistance to traction and elongation occurred in re-tanned hide with chromium salts, while re-tanning and posit

O objetivo do trabalho foi avaliar a resistência da pele da Tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) no sentido longitudinal, transversal e diagonal, depois de curtida com sais de cromo e recurtida por diferentes técnicas de recurtimento. As peles foram distribuídas em delineamento inteiramente casualizado, em fatorial 3x3, sendo 3 técnicas de recurtimento (T1 = com 4% de sais de cromo; T2 = 6% com taninos vegetais e T3 = com 6% de taninos sintéticos) e 3 posições de retirada dos corpos-de-prova (P1 = longitudinal; P2 = transversal e P3 = diagonal), com 6 repetições por tratamento, em triplicata. O couro foi considerado a unidade experimental. Para os testes de determinação da resistência à tração, ao alongamento e ao rasgamento progressivo, foi utilizado o dinamômetro EMIC. A espessura dos couros variou de 1,00 a 1,20 mm, não diferindo entre as técnicas de recurtimento. Não houve diferença significativa para tração quanto às técnicas de recurtimento, porém, quanto à posição de retirada dos corpos-de-prova, foi significativamente maior para transversal (11,92 N/mm2). A técnica de recurtimento e a posição não influenciaram no rasgamento progressivo (variou de 24,47 a 29,12 N/mm). O couro na posição transversal apresentou maior alongamento independentemente da técnica aplicada, não diferindo apenas na técnica T2 para a posição longitudinal. A pele recurtida com sais de cromo e no