Effects of neutrophil extracellular traps during human respiratory syncytial virus infection in vitro

Abstract The human respiratory syncytial virus (hRSV) is the most common cause of severe lower respiratory tract diseases in young children worldwide, leading to a high number of hospitalizations and significant expenditures for health systems. Neutrophils are massively recruited to the lung tissue of patients with acute respiratory diseases. At the infection site, they release neutrophil extracellular traps (NETs) that can capture and/or inactivate different types of microorganisms, including viruses. Evidence has shown that the accumulation of NETs results in direct cytotoxic effects on endothelial and epithelial cells. Neutrophils stimulated by the hRSV-F protein generate NETs that are able to capture hRSV particles, thus reducing their transmission. However, the massive production of NETs obstructs the airways and increases disease severity. Therefore, further knowledge about the effects of NETs during hRSV infections is essential for the development of new specific and effective treatments. This study evaluated the effects of NETs on the previous or posterior contact with hRSV-infected Hep-2 cells. Hep-2 cells were infected with different hRSV multiplicity of infection (MOI 0.5 or 1.0), either before or after incubation with NETs (0.516 g/mL). Infected and untreated cells showed decreased cellular viability and intense staining with trypan blue, which was accompanied by the formation of many large syncytia. Previous contact between NETs and cells did not result in a protective effect. Cells in monolayers showed a reduced number and area of syncytia, but cell death was similar in infected and non-treated cells. The addition of NETs to infected tissues maintained a similar virus-induced cell death rate and an increased syncytial area, indicating cytotoxic and deleterious damages. Our results corroborate previously reported findings that NETs contribute to the immunopathology developed by patients infected with hRSV.

Resumo O vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a causa mais comum de doenças graves do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, resultando em grande número de hospitalizações e gastos significativos para os sistemas de saúde. Neutrófilos são recrutados em massa para o tecido pulmonar de pacientes com doenças respiratórias agudas. No local da infecção, eles liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) que podem capturar e/ou inativar diferentes tipos de microrganismos, incluindo vírus. Evidências demonstraram que o acúmulo de NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos nas células endoteliais e epiteliais. Os neutrófilos estimulados pela proteína F do vírus sincicial respiratório (hRSV-F) geram NETs que são capazes de capturar partículas virais, reduzindo assim sua transmissão. No entanto, a produção maciça de NETs obstrui as vias aéreas e aumenta a gravidade da doença. Assim, um maior conhecimento sobre os efeitos das NETs durante as infecções por hRSV é essencial para o desenvolvimento de novos tratamentos específicos e eficazes. Este estudo avaliou os efeitos das NETs no contato prévio ou posterior à infecção de células Hep-2 com hRSV. As células Hep-2 foram infectadas com diferentes quantidades de hRSV (multiplicidade de infecção ou MOI 0,5 ou 1,0), antes ou após a incubação com NETs (0,516 g/mL). Células infectadas e não tratadas mostraram redução da viabilidade celular e intensa coloração com azul de tripano, que foi acompanhada pela formação de sincícios numerosos e grandes. O contato prévio entre as NETs e as células não resultou em efeito protetor. As células em monocamadas mostraram um número e área de sincícios reduzidos, mas a morte celular foi semelhante àquela apresentada por células infectadas e não tratadas. A adição de NETs aos tecidos infectados manteve taxa de morte celular e formação de sincícios semelhantes àqueles induzidos pelo vírus em células não tratadas, indicando danos citotóxicos e deletérios. Nossos resultados corroboram achados relatados anteriormente de que as NETs contribuem para a imunopatologia desenvolvida por pacientes infectados com hRSV.

Effects of neutrophil extracellular traps during human respiratory syncytial virus infection in vitro / Efeitos das redes extracelulares dos neutrófilos durante a infecção in vitro pelo vírus sincicial respiratório

The human respiratory syncytial virus (hRSV) is the most common cause of severe lower respiratory tract diseases in young children worldwide, leading to a high number of hospitalizations and significant expenditures for health systems. Neutrophils are massively recruited to the lung tissue of patients with acute respiratory diseases. At the infection site, they release neutrophil extracellular traps (NETs) that can capture and/or inactivate different types of microorganisms, including viruses. Evidence has shown that the accumulation of NETs results in direct cytotoxic effects on endothelial and epithelial cells. Neutrophils stimulated by the hRSV-F protein generate NETs that are able to capture hRSV particles, thus reducing their transmission. However, the massive production of NETs obstructs the airways and increases disease severity. Therefore, further knowledge about the effects of NETs during hRSV infections is essential for the development of new specific and effective treatments. This study evaluated the effects of NETs on the previous or posterior contact with hRSV-infected Hep-2 cells. Hep-2 cells were infected with different hRSV multiplicity of infection (MOI 0.5 or 1.0), either before or after incubation with NETs (0.5–16 μg/mL). Infected and untreated cells showed decreased cellular viability and intense staining with trypan blue, which was accompanied by the formation of many large syncytia. Previous contact between NETs and cells did not result in a protective effect. Cells in monolayers showed a reduced number and area of syncytia, but cell death was similar in infected and non-treated cells. The addition of NETs to infected tissues maintained a similar virus-induced cell death rate and an increased syncytial area, indicating cytotoxic and deleterious damages. Our results corroborate previously reported findings that NETs contribute to the immunopathology developed by patients infected with hRSV.

O vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a causa mais comum de doenças graves do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, resultando em grande número de hospitalizações e gastos significativos para os sistemas de saúde. Neutrófilos são recrutados em massa para o tecido pulmonar de pacientes com doenças respiratórias agudas. No local da infecção, eles liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) que podem capturar e/ou inativar diferentes tipos de microrganismos, incluindo vírus. Evidências demonstraram que o acúmulo de NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos nas células endoteliais e epiteliais. Os neutrófilos estimulados pela proteína F do vírus sincicial respiratório (hRSV-F) geram NETs que são capazes de capturar partículas virais, reduzindo assim sua transmissão. No entanto, a produção maciça de NETs obstrui as vias aéreas e aumenta a gravidade da doença. Assim, um maior conhecimento sobre os efeitos das NETs durante as infecções por hRSV é essencial para o desenvolvimento de novos tratamentos específicos e eficazes. Este estudo avaliou os efeitos das NETs no contato prévio ou posterior à infecção de células Hep-2 com hRSV. As células Hep-2 foram infectadas com diferentes quantidades de hRSV (multiplicidade de infecção ou MOI 0,5 ou 1,0), antes ou após a incubação com NETs (0,5–16 μg/mL). Células infectadas e não tratadas mostraram redução da viabilidade celular e intensa coloração com azul de tripano, que foi acompanhada pela formação de sincícios numerosos e grandes. O contato prévio entre as NETs e as células não resultou em efeito protetor. As células em monocamadas mostraram um número e área de sincícios reduzidos, mas a morte celular foi semelhante àquela apresentada por células infectadas e não tratadas. A adição de NETs aos tecidos infectados manteve taxa de morte celular e formação de sincícios [...].

Effects of neutrophil extracellular traps during human respiratory syncytial virus infection in vitro / Efeitos das redes extracelulares dos neutrófilos durante a infecção in vitro pelo vírus sincicial respiratório

The human respiratory syncytial virus (hRSV) is the most common cause of severe lower respiratory tract diseases in young children worldwide, leading to a high number of hospitalizations and significant expenditures for health systems. Neutrophils are massively recruited to the lung tissue of patients with acute respiratory diseases. At the infection site, they release neutrophil extracellular traps (NETs) that can capture and/or inactivate different types of microorganisms, including viruses. Evidence has shown that the accumulation of NETs results in direct cytotoxic effects on endothelial and epithelial cells. Neutrophils stimulated by the hRSV-F protein generate NETs that are able to capture hRSV particles, thus reducing their transmission. However, the massive production of NETs obstructs the airways and increases disease severity. Therefore, further knowledge about the effects of NETs during hRSV infections is essential for the development of new specific and effective treatments. This study evaluated the effects of NETs on the previous or posterior contact with hRSV-infected Hep-2 cells. Hep-2 cells were infected with different hRSV multiplicity of infection (MOI 0.5 or 1.0), either before or after incubation with NETs (0.5–16 μg/mL). Infected and untreated cells showed decreased cellular viability and intense staining with trypan blue, which was accompanied by the formation of many large syncytia. Previous contact between NETs and cells did not result in a protective effect. Cells in monolayers showed a reduced number and area of syncytia, but cell death was similar in infected and non-treated cells. The addition of NETs to infected tissues maintained a similar virus-induced cell death rate and an increased syncytial area, indicating cytotoxic and deleterious damages. Our results corroborate previously reported findings that NETs contribute to the immunopathology developed by patients infected with hRSV.(AU)

O vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a causa mais comum de doenças graves do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, resultando em grande número de hospitalizações e gastos significativos para os sistemas de saúde. Neutrófilos são recrutados em massa para o tecido pulmonar de pacientes com doenças respiratórias agudas. No local da infecção, eles liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) que podem capturar e/ou inativar diferentes tipos de microrganismos, incluindo vírus. Evidências demonstraram que o acúmulo de NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos nas células endoteliais e epiteliais. Os neutrófilos estimulados pela proteína F do vírus sincicial respiratório (hRSV-F) geram NETs que são capazes de capturar partículas virais, reduzindo assim sua transmissão. No entanto, a produção maciça de NETs obstrui as vias aéreas e aumenta a gravidade da doença. Assim, um maior conhecimento sobre os efeitos das NETs durante as infecções por hRSV é essencial para o desenvolvimento de novos tratamentos específicos e eficazes. Este estudo avaliou os efeitos das NETs no contato prévio ou posterior à infecção de células Hep-2 com hRSV. As células Hep-2 foram infectadas com diferentes quantidades de hRSV (multiplicidade de infecção ou MOI 0,5 ou 1,0), antes ou após a incubação com NETs (0,5–16 μg/mL). Células infectadas e não tratadas mostraram redução da viabilidade celular e intensa coloração com azul de tripano, que foi acompanhada pela formação de sincícios numerosos e grandes. O contato prévio entre as NETs e as células não resultou em efeito protetor. As células em monocamadas mostraram um número e área de sincícios reduzidos, mas a morte celular foi semelhante àquela apresentada por células infectadas e não tratadas. A adição de NETs aos tecidos infectados manteve taxa de morte celular e formação de sincícios [...].(AU)

Effects of neutrophil extracellular traps during human respiratory syncytial virus infection in vitro / Efeitos das redes extracelulares dos neutrófilos durante a infecção in vitro pelo vírus sincicial respiratório

Abstract The human respiratory syncytial virus (hRSV) is the most common cause of severe lower respiratory tract diseases in young children worldwide, leading to a high number of hospitalizations and significant expenditures for health systems. Neutrophils are massively recruited to the lung tissue of patients with acute respiratory diseases. At the infection site, they release neutrophil extracellular traps (NETs) that can capture and/or inactivate different types of microorganisms, including viruses. Evidence has shown that the accumulation of NETs results in direct cytotoxic effects on endothelial and epithelial cells. Neutrophils stimulated by the hRSV-F protein generate NETs that are able to capture hRSV particles, thus reducing their transmission. However, the massive production of NETs obstructs the airways and increases disease severity. Therefore, further knowledge about the effects of NETs during hRSV infections is essential for the development of new specific and effective treatments. This study evaluated the effects of NETs on the previous or posterior contact with hRSV-infected Hep-2 cells. Hep-2 cells were infected with different hRSV multiplicity of infection (MOI 0.5 or 1.0), either before or after incubation with NETs (0.5-16 μg/mL). Infected and untreated cells showed decreased cellular viability and intense staining with trypan blue, which was accompanied by the formation of many large syncytia. Previous contact between NETs and cells did not result in a protective effect. Cells in monolayers showed a reduced number and area of syncytia, but cell death was similar in infected and non-treated cells. The addition of NETs to infected tissues maintained a similar virus-induced cell death rate and an increased syncytial area, indicating cytotoxic and deleterious damages. Our results corroborate previously reported findings that NETs contribute to the immunopathology developed by patients infected with hRSV.

Resumo O vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a causa mais comum de doenças graves do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, resultando em grande número de hospitalizações e gastos significativos para os sistemas de saúde. Neutrófilos são recrutados em massa para o tecido pulmonar de pacientes com doenças respiratórias agudas. No local da infecção, eles liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) que podem capturar e/ou inativar diferentes tipos de microrganismos, incluindo vírus. Evidências demonstraram que o acúmulo de NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos nas células endoteliais e epiteliais. Os neutrófilos estimulados pela proteína F do vírus sincicial respiratório (hRSV-F) geram NETs que são capazes de capturar partículas virais, reduzindo assim sua transmissão. No entanto, a produção maciça de NETs obstrui as vias aéreas e aumenta a gravidade da doença. Assim, um maior conhecimento sobre os efeitos das NETs durante as infecções por hRSV é essencial para o desenvolvimento de novos tratamentos específicos e eficazes. Este estudo avaliou os efeitos das NETs no contato prévio ou posterior à infecção de células Hep-2 com hRSV. As células Hep-2 foram infectadas com diferentes quantidades de hRSV (multiplicidade de infecção ou MOI 0,5 ou 1,0), antes ou após a incubação com NETs (0,5-16 μg/mL). Células infectadas e não tratadas mostraram redução da viabilidade celular e intensa coloração com azul de tripano, que foi acompanhada pela formação de sincícios numerosos e grandes. O contato prévio entre as NETs e as células não resultou em efeito protetor. As células em monocamadas mostraram um número e área de sincícios reduzidos, mas a morte celular foi semelhante àquela apresentada por células infectadas e não tratadas. A adição de NETs aos tecidos infectados manteve taxa de morte celular e formação de sincícios semelhantes àqueles induzidos pelo vírus em células não tratadas, indicando danos citotóxicos e deletérios. Nossos resultados corroboram achados relatados anteriormente de que as NETs contribuem para a imunopatologia desenvolvida por pacientes infectados com hRSV.

A five-year surveillance study of vaccination schedules using viral-vectored vaccines against infectious laryngotracheitis in a high-density layer region / Cinco anos de monitoramento de esquemas vacinais com vacinas virais vetorizadas contra laringotraqueíte infecciosa em uma região altamente povoada por galinhas poedeiras

The effectiveness of vectored recombinant vaccines to control infectious laryngotracheitis (ILT) in chickens from a region (State of Minas Gerais, Brazil) with ~10 million layers was evaluated under field conditions from 2014-2018. During this period, only recombinant turkey herpesvirus (rHVT) or fowl poxvirus (rFPV) vaccines that express antigens of infectious laryngotracheitis virus (Gallid herpesvirus-1; GaHV-1) were used. Layer chickens (n=1,283), from eight different egg-producing companies, were individually sampled and examined (active surveillance), and in instances when government poultry health veterinarians were notified due to respiratory disease (passive surveillance). Clinical, macroscopic, and histopathology examinations were performed to diagnose ILT as well as molecular techniques for the detection and characterization of the GaHV-1 DNA from the trachea and trigeminal ganglia (TG). The layer hens sampled and examined belonged to flocks and farms that used different vaccination protocols (non-vaccinated, single dose vaccination, and prime/ boost vaccination). This is the first long-term field study of the effectiveness of ILT vectored vaccines in a high-density multiple age layer hen region. Using various diagnostic methods, the occurrence of GaHV-1 infection and ILT clinical disease in layer hens vaccinated with vectored recombinant vaccines in one quarantined region of Brazil were investigated. The number of ILTV positive chickens by PCR and ILT clinical disease cases was lower in farms when all chickens were vaccinated with at least one vaccine. However, the difference in the detection rates of GaHV-1 infection was significant only when compared farms with prime/ boost and farms using single dose of HTV-LT.

A efetividade das vacinas recombinantes vetorizadas para o controle da laringotraqueíte infecciosa (LTI) nas aves de uma região (Minas Gerais, Brasil) com aproximadamente 10 milhões de poedeiras foi avaliada em condições de campo, no período de 2014 a 2018. Durante este período, somente as vacinas recombinantes "turkey herpesvirus" (rHVT) ou "fowl poxvirus" (rFPV), que expressam antígenos do vírus da laringotraqueíte (Gallid herpesvirus-1; GaHV-1) foram utilizadas. Galinhas poedeiras (n=1.283), de oito diferentes granjas produtoras de ovos, foram individualmente amostradas e examinadas por monitoramento ativo e, na ocorrência de notificação de doença respiratória aos veterinários do serviço oficial, por monitoramento passivo. Exames clínicos, macroscópicos e histopatológicos foram realizados para o diagnóstico de LTI, bem como técnicas moleculares para a detecção e caracterização do DNA de GaHV-1 da traqueia e gânglio trigêmeo. As galinhas poedeiras pertenciam a lotes e granjas que usavam diferentes protocolos de vacinação (não vacinadas, uma dose ou tipo de vacina e duas doses ou tipos de vacina). Este é o primeiro longo estudo a campo sobre a efetividade das vacinas vetorizadas em uma região com população elevada de poedeiras de múltiplas idades. Utilizando vários métodos de diagnóstico, a ocorrência da infecção por GaHV-1 e a LTI clínica em poedeiras de uma região interditada do Brasil foi investigada. O número de galinhas positivas para o vírus GaHV-1 e para casos clínicos de LTI nas granjas foi menor quando todas as aves estavam vacinadas com, pelo menos, um tipo ou dose de vacina. Entretanto, a diferença na taxa de detecção da infecção por GaHV-1 foi significativa somente quando a comparação foi realizada entre granjas com aves vacinadas com duas doses e aves de granjas vacinadas com uma única dose de HVT-LT.

Primeiros estudos sobre ectoparasitos de pequenos mamíferos terrestres ocorentes em fragmentos de cerrado do centro agrotecnológico de Palmas (agrotins) - TO, Brasil / First studies abaut ectoparasites of the small terrestrial mammals occourrences in the fragments of cerrado of the agrotechnological center of Palmas (agrotins) - TO, Brasil / Primeros estudios sobre ectoparasitos de pequeños mamíferos terrestres ocorentes en fragmentos de cerrado del centro agrotecnológico de Palmas (agrotins) - TO, Brasil

Os roedores e marsupiais são reconhecidos como reservatórios de patógenos de infecções virais, helmintíase, bacteriose e Protozoose, que podem ser prejudiciais à saúde de animal domésticos e humana. O presente estudo teve como objetivo fazer a primeira avaliação da fauna ectoparasitária de roedores e marsupiais ocorrentes em três tipos de fragmentos da Agrotins. Nesta área, existem órgãos públicos que desenvolvem intensas atividades ligadas às pesquisas agrícolas no Estado. Um deles, a UNITINS (Universidade do Estado do Tocantins), além de manter um complexo de laboratórios, desenvolvem atividades de essenciais voltadas para o Curso de Engenharia Agronômica. Foram capturados os roedores: Cerradomys subflavus, Thrichomys inermis e Rattus rattus e marsupiais: Didelphis albiventris e Gracilinanus agilis. Os ectoparasitas: Holoplopleura sp., Laelops agilis e Gyropus sp., são citados pela primeira vez no Tocantins, para D. albiventris, C. subflavus e T. inermis, respectivamente.(AU)

Rodents and marsupials are like reservoirs of viral infections, helminthiasis, bacteriosis and protozoa, which can be harmful to the health of domestic anumals and human. The present study had as objective to make the first evaluation of the ectoparasitic fauna of rodents and marsupials occurring in three types of fragments in the Agrotins. In this area, there are public institution that to develop intense activities connected to agricultural research in the Tocantins. One of them, UNITINS (University of the State of Tocantins), beyond to maintain a complex of laboratories, develops activities of importance for the Agricultural Engineering Course. Rodentes were captured: Cerradomys subflavus, Thrichomys inermis and Rattus rattus and marsupials: Didelphis albiventris and Gracilinanus agilis. The ectoparasites: Holoplopleura sp., Laelops agilis and Gyropus sp., are mentioned for the first time in Tocantins, occurring in D. albiventrise, C. subflavus and T. inermis, respectively.(AU)

Los roedores y marsupiales son reconocidos como depósitos de patógenos de infecciones virales, helmintiasis, bacteriosis y Protozoosis, que pueden ser perjudiciales para la salud de los animales domésticos y humanos. El presente estudio tuvo como objetivo hacer la primera evaluación de la fauna ectoparásito de roedores y marsupiales ocurridos en tres tipos de fragmentos de Agrotins. En esta área, existen organismos públicos que desarrollan intensas actividades ligadas a las investigaciones agrícolas en el Estado. Uno de ellos, la UNITINS (Universidad del Estado de Tocantins), además de mantener un complejo de laboratorios, desarrollan actividades de esenciales dirigidas al Curso de Ingeniería Agronómica. Se capturaron los roedores: Cerradomys subflavus, Thrichomys inermis y Rattus rattus y marsupiales: Didelphis albiventris y Gracilinanus agilis. Los ectoparasitos: Holoplopleura sp., Laelops agilis y Gyropus sp., son citados por primera vez en Tocantins, apareciendo en D. albiventris, C. subflavus y T. inermis, respectivamente.(AU)

Prospect of microbial food borne diseases in Pakistan: a review / Perspectiva de doenças microbianas transmitidas por alimentos no Paquistão: uma revisão

Abstract Nowadays food borne illness is most common in people due to their epidemic nature. These diseases affect the human digestive system through bacteria, viruses and parasites. The agents of illness are transmitted in our body through various types of food items, water and uncooked. Pathogens show drastic changes in immunosuppressant people. This review gives general insights to harmful microbial life. Pakistan is a developed country and because of its improper food management, a lot of gastrointestinal problems are noted in many patients. Bacteria are most common agents to spread diarrhoea, villi infection, constipation and dysenteric disease in human and induce the rejection of organ transplant. Enhancement of their lifestyle, properly cooked food should be used and to overcome the outbreak of the diseases.

Resumo Hoje em dia, as doenças transmitidas por alimentos são mais comuns em pessoas devido à sua natureza epidêmica. Essas doenças afetam o sistema digestivo humano por meio de bactérias, vírus e parasitas. Os agentes das doenças são transmitidos em nosso corpo por meio de diversos tipos de alimentos, água e crus. Os patógenos mostram mudanças drásticas em pessoas imunossupressoras. Esta revisão fornece uma visão geral da vida microbiana prejudicial. O Paquistão é um país desenvolvido e, devido ao seu manejo alimentar inadequado, muitos problemas gastrointestinais são observados em muitos pacientes. As bactérias são os agentes mais comuns para espalhar diarreia, infecção de vilosidades, obstipação e doença disentérica em humanos e induzem a rejeição de transplantes de órgãos. Melhoria de seu estilo de vida, alimentos devidamente cozidos devem ser utilizados e para superar o aparecimento de doenças.

Prospect of microbial food borne diseases in Pakistan: a review / Perspectiva de doenças microbianas transmitidas por alimentos no Paquistão: uma revisão

Abstract Nowadays food borne illness is most common in people due to their epidemic nature. These diseases affect the human digestive system through bacteria, viruses and parasites. The agents of illness are transmitted in our body through various types of food items, water and uncooked. Pathogens show drastic changes in immunosuppressant people. This review gives general insights to harmful microbial life. Pakistan is a developed country and because of its improper food management, a lot of gastrointestinal problems are noted in many patients. Bacteria are most common agents to spread diarrhoea, villi infection, constipation and dysenteric disease in human and induce the rejection of organ transplant. Enhancement of their lifestyle, properly cooked food should be used and to overcome the outbreak of the diseases.(AU)

Resumo Hoje em dia, as doenças transmitidas por alimentos são mais comuns em pessoas devido à sua natureza epidêmica. Essas doenças afetam o sistema digestivo humano por meio de bactérias, vírus e parasitas. Os agentes das doenças são transmitidos em nosso corpo por meio de diversos tipos de alimentos, água e crus. Os patógenos mostram mudanças drásticas em pessoas imunossupressoras. Esta revisão fornece uma visão geral da vida microbiana prejudicial. O Paquistão é um país desenvolvido e, devido ao seu manejo alimentar inadequado, muitos problemas gastrointestinais são observados em muitos pacientes. As bactérias são os agentes mais comuns para espalhar diarreia, infecção de vilosidades, obstipação e doença disentérica em humanos e induzem a rejeição de transplantes de órgãos. Melhoria de seu estilo de vida, alimentos devidamente cozidos devem ser utilizados e para superar o aparecimento de doenças.(AU)

Canine pyometra: interferences of age and type in blood count and serum biochemistry / Piometra canina: interferências da idade e tipo sobre o hemograma e a bioquímica sérica

Hematological and serum biochemical characteristics and prevalence of microorganisms in the uterine content of bitches with pyometra were described, according to type and age. This study was carried out at the Veterinary Medicine Hospital Renato Rodenburg de Medeiros Netto of the UFBA with 132 patients diagnosed with pyometra through imaging and laboratory tests, divided into two groups: Group 1 - less than eight years (n=72) and Group 2 - more than eight years (n=60). Both groups were submitted to Ovariohysterectomy (OH), in which blood and uterine lumen secretion samples were collected. The highest incidence of pyometra was found in bitches under 8 years (54.5%), Poodle breed (31.8%) and mixed-breed (27.3%). Open pyometra represented 80.3% of all cases. The death rate (6.0%) did not show significant difference between the types. Anemia (73.0%), thrombocytopenia (41.2%) and leukocytosis (77.0%) were observed. Urea and ALP were above the reference values in 41.8% and 52.2% of each group, respectively, while ALT (94.0%) and creatine (82%) remained normal in most animals. Serum biochemistry did not show significant differences (P<0.05). Escherichia coli and Klebsiella sp. grew in 33.3% and 16.7% of the samples, respectively. Therefore, no significant hematological and serum biochemical differences were observed in bitches with pyometra in both age categories.(AU)

Descreveu-se características hematológicas, bioquímicas séricas e prevalência de microrganismos no conteúdo uterino de cadelas com piometra, de acordo com o tipo e idade. Realizou-se este estudo no Hospital de Medicina Veterinária Renato Rodenburg de Medeiros Netto da UFBA com 132 pacientes diagnosticadas com piometra, por exames de imagem e laboratoriais, divididas em dois grupos: Grupo 1 menos de oito anos (n=72) e Grupo 2 mais de oito anos (n=60), submetidas a Ovariectomia (OH), quando se coletou amostras de sangue e secreção do lúmen uterino. A incidência maior deu-se em cadelas abaixo de 8 anos (54,5%), da raça Poodle (31,8%) e sem raça definida (SRD) (27,3%), sendo 80,3% de piometra aberta. A taxa de óbito (6,0%) não apresentou diferença significativa entre os tipos. Observou-se a ocorrência de anemia (73,0%), trombocitopenia (41,2%) e leucocitose (77,0%). Os valores de ureia e FA estiveram acima dos valores de referência em 41,8% e 52,2% das cadelas respectivamente, enquanto a ALT (94,0%) e a creatina (82%) mantiveram-se dentro dos valores de referência na maioria dos animais. A bioquímica sérica não apresentou diferenças significativas (P<0,05). Observou-se crescimento de Escherichia coli e Klebsiella sp. em 33,3% e 16,7% das amostras, respectivamente. Sendo assim, não se observou diferenças significativas hematológicas e na bioquímica sérica de cadelas com piometra nas categorias de idade.(AU)

Canine pyometra: interferences of age and type in blood count and serum biochemistry / Piometra canina: interferências da idade e tipo sobre o hemograma e a bioquímica sérica

Hematological and serum biochemical characteristics and prevalence of microorganisms in the uterine content of bitches with pyometra were described, according to type and age. This study was carried out at the Veterinary Medicine Hospital Renato Rodenburg de Medeiros Netto of the UFBA with 132 patients diagnosed with pyometra through imaging and laboratory tests, divided into two groups: Group 1 - less than eight years (n=72) and Group 2 - more than eight years (n=60). Both groups were submitted to Ovariohysterectomy (OH), in which blood and uterine lumen secretion samples were collected. The highest incidence of pyometra was found in bitches under 8 years (54.5%), Poodle breed (31.8%) and mixed-breed (27.3%). Open pyometra represented 80.3% of all cases. The death rate (6.0%) did not show significant difference between the types. Anemia (73.0%), thrombocytopenia (41.2%) and leukocytosis (77.0%) were observed. Urea and ALP were above the reference values in 41.8% and 52.2% of each group, respectively, while ALT (94.0%) and creatine (82%) remained normal in most animals. Serum biochemistry did not show significant differences (P<0.05). Escherichia coli and Klebsiella sp. grew in 33.3% and 16.7% of the samples, respectively. Therefore, no significant hematological and serum biochemical differences were observed in bitches with pyometra in both age categories.

Descreveu-se características hematológicas, bioquímicas séricas e prevalência de microrganismos no conteúdo uterino de cadelas com piometra, de acordo com o tipo e idade. Realizou-se este estudo no Hospital de Medicina Veterinária Renato Rodenburg de Medeiros Netto da UFBA com 132 pacientes diagnosticadas com piometra, por exames de imagem e laboratoriais, divididas em dois grupos: Grupo 1 – menos de oito anos (n=72) e Grupo 2 – mais de oito anos (n=60), submetidas a Ovariectomia (OH), quando se coletou amostras de sangue e secreção do lúmen uterino. A incidência maior deu-se em cadelas abaixo de 8 anos (54,5%), da raça Poodle (31,8%) e sem raça definida (SRD) (27,3%), sendo 80,3% de piometra aberta. A taxa de óbito (6,0%) não apresentou diferença significativa entre os tipos. Observou-se a ocorrência de anemia (73,0%), trombocitopenia (41,2%) e leucocitose (77,0%). Os valores de ureia e FA estiveram acima dos valores de referência em 41,8% e 52,2% das cadelas respectivamente, enquanto a ALT (94,0%) e a creatina (82%) mantiveram-se dentro dos valores de referência na maioria dos animais. A bioquímica sérica não apresentou diferenças significativas (P<0,05). Observou-se crescimento de Escherichia coli e Klebsiella sp. em 33,3% e 16,7% das amostras, respectivamente. Sendo assim, não se observou diferenças significativas hematológicas e na bioquímica sérica de cadelas com piometra nas categorias de idade.

A molecular survey reveals high occurrence of co-infections in intensive pork production farms with increased rates of mummified swine fetuses in Southern Brazil / [Pesquisa molecular revela alta ocorrência de coinfecções em granjas de produção intensiva de suínos com altas taxas de mumificação fetal no sul do Brasil]

Neste estudo, 308 amostras de fetos mumificados foram testadas para parvovírus suíno (PPV), circovírus suíno tipos 2 e 3 (PCV2 e PCV3) e leptospiras patogênicas. A idade gestacional no momento da perda gestacional e a frequência da mumificação fetal de acordo com a ordem de parto também foram investigadas. As amostras foram coletadas em granjas comerciais de criação de suínos da região sul do Brasil que apresentassem taxas de mumificação fetal igual ou maiores a 2,5%. Fragmentos de pulmão, rim, fígado e coração de fetos suínos mumificados foram coletados para análise molecular. Resultados da PCR foram classificados de acordo com a região de origem das amostras, tendo Santa Catarina, Paraná e Rio Grande do Sul contabilizado 87 (28,25%), 89 (28,90%) e 132 (42,86%) do total de amostras de fetos suínos mumificados, respectivamente. Coinfecções foram observadas na maioria dos casos e PCV3 foi o agente mais prevalente detectado, encontrado em 298 amostras (96,75%). A maioria das perdas gestacionais foi observada entre 50 e 70 dias de gestação (168; 54,5%) e a mumificação fetal não foi associada à ordem de parto das matrizes. Os achados sugerem que as altas taxas de fetos suínos mumificados na região Sul do Brasil podem ser explicadas pela infecção com esses agentes virais.(AU)

ANÁLISE MOLECULAR DE VÍRUS SUÍNOS ATRAVÉS DE ABORDAGEM METAGENÔMICA

A carne suína é a segunda maior fonte de proteína animal consumida no mundo. O sucesso na profunda expansão da suinocultura deve-se principalmente às melhorias sanitárias implantadas nos sistemas de produção intensiva. Todavia, o aumento da densidade de animais contribuiu para a emergência e reemergência de doenças virais, facilitou a transmissão viral entre os animais e promoveu o surgimento de síndromes de etiologia desconhecida ou multifatoriais, incluindo doenças respiratórias e gastrointestinais. A metagenômica viral aliada ao sequenciamento de alto desempenho (HTS) oferece uma oportunidade para identificação, monitoramento e diagnóstico de infecções virais. Por meio dessa abordagem, é possível caracterizar virtualmente todos os genomas virais presentes em determinada amostra (o viroma). A caracterização do viroma de diferentes tipos de amostras alimenta os bancos de dados com informações para análises genéticas comparativas acelerando o entendimento acerca de cadeias de transmissão, taxa de evolução viral e origem de doenças zoonóticas. Além disso, os vírus possuem papel fundamental na saúde de seus hospedeiros e explorar a diversidade viral natural dos suínos é o primeiro passo para a compreensão de síndromes de etiologia indefinida ou de origem multifatorial. Nesse trabalho, o viroma de suínos domésticos foi explorado por meio da abordagem metagenômica viral aliada ao HTS e ferramentas de bioinformática. O soro de suínos com sinais clínicos de doença respiratória revelou a presença de vários vírus de genoma circular DNA fita simples (ssDNA) codificadores de replicase (CRESS DNA) (Artigo 1), dentre os quais foram classificados nas famílias Genomoviridae, Smacoviridae (no qual um novo gênero é proposto), Redondoviridae e Nenyaviridae; outros não puderam ser classificados em nenhuma família reconhecida atualmente. Ainda nesse estudo, foram detectados vírus das famílias Anelloviridae, Parvoviridae (eucarióticos), Microviridae e Inoviridae (procarióticos). O viroma do soro de suínos clinicamente saudáveis oriundos de granjas de reprodutores suídeos certificadas (GRSC) também foi explorado e revelou vírus das famílias Anelloviridae, Parvoviridae e vários CRESS DNA não classificados. Em outro estudo ainda em andamento, o viroma de fezes de suínos com, ou sem diarreia, foi investigado e diversas famílias virais foram detectadas. Por fim, esse trabalho também apresenta a continuação de um estudo anterior que, por meio da metagenômica viral e HTS, identificou circovírus suíno tipo 3 (PCV3) em matrizes com natimortos. Aqui, a relação do PCV3 com a natimortalidade em suínos foi investigada por meio de PCR em tempo real nas amostras individuais de matrizes com ou sem natimortos, revelando que esse vírus está amplamente disseminado entre os suínos (Artigo 2). Os resultados apresentados nessa tese ampliam o conhecimento sobre a comunidade viral presente em suínos domésticos, enriquecem os bancos de dados virais e fornecem uma base para a comparação da diversidade viral em estudos futuros.

Pork meat is the second largest source of animal protein consumed in the world. The success in the deep expansion of pig farming is mainly due to the sanitary improvements implemented in intensive production systems. However, the increase in animal density contributed to the emergence and reemergence of viral diseases, facilitated viral transmission between animals and promoted the emergence of syndromes of unknown or multifactorial etiology, including respiratory and gastrointestinal diseases. Viral metagenomics combined with high-throughput sequencing (HTS) offers a valuable opportunity for the identification, monitoring and diagnosis of viral infections. Through this approach, it is possible to characterize virtually all viral genomes present in a given sample, the viroma. The viroma characterization of different types of samples feeds the databases with information for comparative genetic analyzes, accelerating the understanding about transmission chains, viral evolution rate and origin of zoonotic diseases. In addition, viruses play a fundamental role in the health of their hosts and exploring the natural viral diversity of pigs is the first step towards understanding syndromes of undefined etiology or of multifactorial origin. In this work, the domestic swine viroma was explored using viral metagenomic approach combined with HTS and bioinformatics tools. Swine serum with clinical signs of respiratory disease revealed the presence of several circular single-stranded DNA (ssDNA) Rep-encoding (CRESS DNA) viruses (Article 1), which were classified into the viral families Genomoviridae, Smacoviridae (by which one new genus is proposed), Redondoviridae and Nenyaviridae; others could not be classified in any currently recognized family. Also, viruses from the families Anelloviridae, Parvoviridae (eukaryotic), Microviridae and Inoviridae (prokaryotic) were detected. The serum virome of clinically healthy pigs from certified swine breeders (GRSC) farms was also explored and revealed viruses from the Anelloviridae, Parvoviridae and several unclassified CRESS DNA families. In another study still in progress, swine feces virome with or without diarrhea was investigated and several viral families were detected. Finally, this work also presents the continuation of a previous study that, using viral metagenomics and HTS, identified porcine circovirus type 3 (PCV3) in sows with stillbirths. Here, the relationship between PCV3 and stillbirth was investigated using realtime PCR in individual samples from sows with or without stillbirths, revealing that this virus is widely disseminated in pigs (Article 2). The results presented in here expand the knowledge about the viral community in domestic swine, enrich the viral databases and provide a baseline for viral diversity comparison in future studies.

Viral type characterization and clinical aspects of canine parvovirus in naturally infected dogs in São Paulo State, Brazil / Caracterização viral e aspectos clínicos de parvovirose em cães naturalmente infectados no Estado de São Paulo

Since the first isolation of canine parvovirus type 2 (CPV-2) in late 70's new virus types as CPV-2a and CPV-2b have been emerged and becoming prevalent in natural canine population and more recently, a third subtype was identified , CPV-2c. The main purpose of this study was to detect and characterize canine parvovirus currently present in Central-West region of São Paulo state, in Brazil. Fecal samples were collected of vaccinated and non-vaccinated dogs, clinically suspected of having CPV infection brought to the Infectious Diseases Service, Veterinary Hospital of FMVZ-UNESP. All samples (n=30) were screening for canine parvovirus through hemagglutination test and those resulting as positive (n=20) were submitted to PCR and the products were subsequently sequenced for subtype characterization. Results were tested for association with age, hematological values, viral hemagglutination titers in the feces, vaccination status and survival. Leukopenia was found in all animals, death occurred in 30% of unvaccinated dogs and in 42% of vaccinated ones. In a total of 20 positive sequenced samples, 18 were classified as CPV-2b, one as CPV-2c, and one as CPV-2a, being CPV2a and CPV2c detected in unvaccinated puppies. Compared to the reference samples amino acid change at position 426 in those circling virus was identified. The study results demonstrate the predominance of CPV-2b and the presence of CPV-2a and CPV-2c in naturally infected, vaccinated and unvaccinated dogs in in São Paulo region.(AU)

Desde o primeiro isolamento do parvovirus canino tipo 2 (CPV-2) no final dos anos 70 novos subtipos virais como CPV-2a e CPV-2b surgiram e foram se tornando prevalentes na população canina; posteriormente um terceiro subtipo foi identificado, CPV- 2-C. O principal objetivo deste estudo foi detectar e caracterizar os subtipos de parvovírus canino atualmente presente na região Centro-Oeste do Estado de São Paulo-Brasil. Amostras de fezes foram coletadas de cães vacinados e não vacinados, atendidos no Serviço de Enfermidades Infecciosas dos Animais, Hospital Veterinário da FMVZ-UNESP, com suspeita clínica parvovirose . Todas as amostras (n = 30) foram submetidas teste de hemaglutinação para parvovirus canino e as positivas (n = 20) submetidas a PCR; os produtos amplificados foram subsequentemente sequenciados para caracterização do subtipo viral. Os resultados foram associados com a idade, os valores hematológicos, os títulos de hemaglutinação viral nas fezes, estado de vacinação e sobrevivência. A leucopenia foi encontrada em todos os animais; Obito foi observado em 30% dos cães não vacinados e 42% dos vacinados. Em um total de 20 amostras positivas sequenciadas, 18 foram classificadas como CPV-2b, uma como CPV-2c, e uma como CPV-2a. CPV 2a e CPV2c foram detectados em filhotes não vacinados. Em comparação com a amostra de referência foi evidenciada uma mudança de aminoácido na posição 426 nas amostras virais circulantes. Os resultados do estudo demonstram a predominância de CPV-2b e a presença de CPV-2a e CPV-2c em cães naturalmente infectados, vacinados e não vacinados na região de São Paulo.(AU)

Viral type characterization and clinical aspects of canine parvovirus in naturally infected dogs in São Paulo State, Brazil / Caracterização viral e aspectos clínicos de parvovirose em cães naturalmente infectados no Estado de São Paulo

Since the first isolation of canine parvovirus type 2 (CPV-2) in late 70s new virus types as CPV-2a and CPV-2b have been emerged and becoming prevalent in natural canine population and more recently, a third subtype was identified , CPV-2c. The main purpose of this study was to detect and characterize canine parvovirus currently present in Central-West region of São Paulo state, in Brazil. Fecal samples were collected of vaccinated and non-vaccinated dogs, clinically suspected of having CPV infection brought to the Infectious Diseases Service, Veterinary Hospital of FMVZ-UNESP. All samples (n=30) were screening for canine parvovirus through hemagglutination test and those resulting as positive (n=20) were submitted to PCR and the products were subsequently sequenced for subtype characterization. Results were tested for association with age, hematological values, viral hemagglutination titers in the feces, vaccination status and survival. Leukopenia was found in all animals, death occurred in 30% of unvaccinated dogs and in 42% of vaccinated ones. In a total of 20 positive sequenced samples, 18 were classified as CPV-2b, one as CPV-2c, and one as CPV-2a, being CPV2a and CPV2c detected in unvaccinated puppies. Compared to the reference samples amino acid change at position 426 in those circling virus was identified. The study results demonstrate the predominance of CPV-2b and the presence of CPV-2a and CPV-2c in naturally infected, vaccinated and unvaccinated dogs in in São Paulo region.(AU)

Desde o primeiro isolamento do parvovirus canino tipo 2 (CPV-2) no final dos anos 70 novos subtipos virais como CPV-2a e CPV-2b surgiram e foram se tornando prevalentes na população canina; posteriormente um terceiro subtipo foi identificado, CPV- 2-C. O principal objetivo deste estudo foi detectar e caracterizar os subtipos de parvovírus canino atualmente presente na região Centro-Oeste do Estado de São Paulo-Brasil. Amostras de fezes foram coletadas de cães vacinados e não vacinados, atendidos no Serviço de Enfermidades Infecciosas dos Animais, Hospital Veterinário da FMVZ-UNESP, com suspeita clínica parvovirose . Todas as amostras (n = 30) foram submetidas teste de hemaglutinação para parvovirus canino e as positivas (n = 20) submetidas a PCR; os produtos amplificados foram subsequentemente sequenciados para caracterização do subtipo viral. Os resultados foram associados com a idade, os valores hematológicos, os títulos de hemaglutinação viral nas fezes, estado de vacinação e sobrevivência. A leucopenia foi encontrada em todos os animais; Obito foi observado em 30% dos cães não vacinados e 42% dos vacinados. Em um total de 20 amostras positivas sequenciadas, 18 foram classificadas como CPV-2b, uma como CPV-2c, e uma como CPV-2a. CPV 2a e CPV2c foram detectados em filhotes não vacinados. Em comparação com a amostra de referência foi evidenciada uma mudança de aminoácido na posição 426 nas amostras virais circulantes. Os resultados do estudo demonstram a predominância de CPV-2b e a presença de CPV-2a e CPV-2c em cães naturalmente infectados, vacinados e não vacinados na região de São Paulo.(AU)

AVALIAÇÃO DA OZONIOTERAPIA NO TRATAMENTO DA PAPILOMATOSE BOVINA

A Papilomatose bovina é uma doença infectocontagiosa, crônica, causada por um vírus DNA, de natureza fibroepitelial, pertencente à família Papillomaviriade, gênero Papillomavirus, e tem como característica se manifestar principalmente em animais imunodeficientes e com idade inferior a dois anos. O vírus causa infiltração de células basais do epitélio, produzindo lesões tumorais superficiais em pele e mucosas, causando projeções digitiformes. O presente estudo foi realizado em fazendas de gado leiteiro, localizadas no sul do estado da Bahia, utilizando-se bovinos com diagnóstico clínico confirmado para papilomatose, sem tratamentos prévios, a fim de ser avaliada a eficácia da ozonioterapia como tratamento da papilomatose bovina. Ao todo, foram utilizados 18 bovinos, divididos em três grupos de tratamento, sendo um o grupo controle. Foi utilizado como tratamento a autohemoterapia e a ozonioterapia através da insuflação retal e autohemoterapia menor. Todos os grupos foram tratados com intervalos de sete dias entre as aplicações, durante seis semanas. Procedeu-se a avaliação estatística, referente à contagem de papilomas e os resultados obtidos nas análises hematológicas, pré- tratamento e pós-tratamento, sendo verificados pela análise de variância (ANOVA) referente aos tratamentos, no nível de 1% de probabilidade, seguido pelo teste de comparação entre médias dos tratamentos (Teste Tukey), no nível de 5% de probabilidade. Os dois tratamentos demonstraram respostas positivas, havendo regressão dos papilomas ao longo do experimento. No entanto, a autohemoterapia se mostrou com maior percentual de regressão e resposta de tratamento mais rápida. Contudo, devido ao tipo de distribuição feita no presente estudo é possível concluir também, que para o grupo ozonioterapia, houve um desafio de tratamento maior, quando comparado com o grupo autohemoterapia. Na avaliação dos resultados dos hemogramas é possível concluir que para o grupo ozonioterapia, houve uma regressão considerável em todos os parâmetros inflamatórios avaliados, reforçando a ideia de agente antinflamatório da ozonioterapia. Sendo assim, sugere-se a necessidade de realização de maiores estudos, em ambientes controlados, para melhor avaliar a eficácia da ozonioterapia como agente antinflamatório e antiviral além da necessidade de estudos para melhor esclarecer os tipos de cepas virais envolvidas nos animais acometidos com Papilomatose bovina.

Bovine papillomatosis is a chronic, infectious and contagious disease caused by a DNA virus, of fibroepithelial nature, belonging to the Papillomaviriade family, genus Papillomavirus, and has the characteristic of manifesting mainly in immunodeficient animals and under the age of two years. The virus causes infiltration of basal cells of the epithelium, producing superficial tumor lesions on the skin and mucous membranes, causing digitiform projections. The present study was carried out in dairy cattle farms, located in the south of the state of Bahia, using cattle with a confirmed clinical diagnosis for papillomatosis, without previous treatments, in order to evaluate the effectiveness of ozone therapy as a treatment for bovine papillomatosis. In all, 18 cattle were used, divided into three treatment groups, one being the control group. Autohemotherapy and ozone therapy were used as treatment through rectal insufflation and minor autohemotherapy. All groups were treated at seven-day intervals between applications for six weeks. The statistical evaluation was performed, referring to the papillomas count and the results obtained in the hematological analysis, pre-treatment and post-treatment, being verified by the analysis of variance (ANOVA) referring to the treatments, at the level of 1% of probability, followed by the comparison test between treatment means (Tukey test), at the level of 5% probability. Both treatments showed positive responses, with regression of the papillomas throughout the experiment. However, autohemotherapy showed a higher percentage of regression and faster treatment response. However, due to the type of distribution made in the present study, it is also possible to conclude that for the ozone therapy group, there was a greater treatment challenge when compared to the autohemotherapy group. In the evaluation of the results of the hemograms it is possible to conclude that for the ozone therapy group, there was a considerable regression in all the inflammatory parameters evaluated, reinforcing the idea of an ozone therapy anti-inflammatory agent. Therefore, it is suggested the need for further studies in controlled environments to better assess the effectiveness of ozone therapy as an antiinflammatory and antiviral agent, in addition to the need for studies to better clarify the types of viral strains involved in animals affected with bovine papillomatosis.

ANATOMOPATOLOGIA E BACTERIOLOGIA DE LESÕES PULMONARES EM SUÍNOS AO ABATE

A suinocultura intensiva e tecnificada trouxe como resultado o aumento de problemas sanitários na produção. Entre eles, as doenças respiratórias levam maior destaque. Visto isso, a monitoria sanitária no abate de suínos é importante para a realização de vigilância sanitária epidemiológica e monitoramento da sanidade dos rebanhos. A presente dissertação está dividida em três capítulos. No capítulo 1, foi apresentada uma revisão de literatura sobre os fatores de risco na ocorrência das pneumonias, os diferentes tipos de pneumonia e os principais agentes infecciosos que são responsáveis pelas doenças respiratórias em suínos. As pneumonias são divididas em broncopneumonia, pneumonia broncointersticial, pneumonia intersticial e pneumonia embólica. Os principais agentes bacterianos são o Mycoplasma hyopneumoniae, Pasteurella multocida, Actinobacillus pleuropneumoniae e Glaesserella parasuis e virais são o Vírus da Influenza Suína, Circovírus Suíno Tipo 2 e Vírus da Síndrome Reprodutiva e Respiratória Suína. Dada a grande variedade de agentes e a interação entre eles, os fatores de risco ambientais e de manejo nas granjas devem ser controlados. No capítulo 2 foram descritas as lesões macroscópicas e histopatológicas de pulmões suínos condenados por alterações macroscópicas, e os agentes bacterianos encontrados nas granjas de procedência destes suínos. Os pulmões foram coletados em um abatedouro estadual localizado na Região Metropolitana de Curitiba, Paraná. Foi realizado antibiograma do principal agente isolado. Observou-se lesões macroscópicas de pneumonia em 86,89% dos pulmões condenados. As lesões de consolidação com distribuição cranioventral tiveram maior ocorrência, assim como a presença de linfonodos mediastinais reativos. O exame histopatológico demonstrou que a hiperplasia de BALT, atelectasia, pleurisia e infiltrado inflamatório alveolar misto foram os achados mais frequentes. Foram encontradas 40,98% de broncopneumonias, 36,86% de pneumonia broncointersticial e 9,02% de pneumonia crônica. O exame bacteriológico demonstrou maior participação da Pasteurella multocida tipo A e 40% dos antimicrobianos testados apresentaram algum grau de resistência ao agente: lincomicina, clindamicina, tetraciclina, doxiciclina, penicilina, eritromicina, cefalotina, cloranfenicol, amicacina e cefalexina. Esse tipo de pesquisa auxilia a evidenciar os aspectos epidemiológicos e de diagnóstico para melhor planejamento de medidas e ações de intervenção que visem a prevenção e controle de doenças respiratórias no rebanho suíno. No capítulo 3, foi apresentado um atlas com as principais lesões macroscópicas e microscópicas encontradas envolvendo os pulmões suínos condenados.

Intensive and technically advanced pig farming has resulted in increased health problems in production. Among them, respiratory diseases are more prominent. In view of this, health monitoring in the slaughter of pigs is important for carrying out epidemiological health surveillance and monitoring the health of herds. This dissertation is divided into three chapters. In chapter 1, a literature review was presented about the risk factors for the occurrence of pneumonia, the different types of pneumonia and the main infectious agents that are responsible for respiratory diseases in pigs. Pneumonia is divided into bronchopneumonia, bronchointerstitial pneumonia, interstitial pneumonia and embolic pneumonia. The main bacterial agents are Mycoplasma hyopneumoniae, Pasteurella multocida, Actinobacillus pleuropneumoniae and Glaesserella parasuis and viruses are Swine Influenza Virus, Swine Circovirus Type 2 and Swine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus. Given the wide variety of agents and the interaction between them, environmental and management risk factors on farms must be controlled. In chapter 2, macroscopic and histopathological lesions of pig lungs condemned because of macroscopic changes were described, and the bacterial agents found in the farms of origin of these pigs. The lungs were collected in a state slaughterhouse located in the Metropolitan Region of Curitiba, Paraná. Antibiogram of the main isolated agent was performed. Macroscopic lesions of pneumonia were observed in 86,89% of the condemned lungs. The consolidation lesions with cranioventral distribution had a higher occurrence, as well as the presence of reactive mediastinal lymph nodes. Histopathological examination showed that BALT hyperplasia, atelectasis, pleurisy and mixed alveolar inflammatory infiltrate were the most frequent findings. There were 40,98% of bronchopneumonia, 36,86% of bronchointerstitial pneumonia and 9,02% of chronic pneumonia. The bacteriological examination showed a greater participation of Pasteurella multocida type A and 40% of the tested antimicrobials showed some degree of resistance to the agent: lincomycin, clindamycin, tetracycline, doxycycline, penicillin, erythromycin, cephalothin, chloramphenicol, amikacin and cephalexin. This type of research helps to highlight the epidemiological and diagnostic aspects for better planning of measures and intervention actions aimed to prevention and control of respiratory diseases in swine herd. In chapter 3, an atlas was presented with the main macroscopic and microscopic lesions found involving the condemned pig lungs.

PREVALÊNCIA, FATORES DE RISCO E INFECÇÕES VIRAIS ASSOCIADAS COM ESCHERICHIA COLI RESISTENTES A CEFALOSPORINAS DE ESPECTRO ESTENDIDO EM CÃES

A Resistência Antimicrobiana (RAM) é atualmente um dos maiores problemas de saúde animal e humana. Apesar de Enterobacteriaceae resistentes a cefalosporinas de espectro estendido (ESCR-E) ser cada vez mais relatado em cães, os fatores de risco promovendo sua circulação entre animais de companhia têm recebido pouca atenção. Em particular, a influência de infecções e tratamentos de vírus entéricos na circulação de ESCR-E é desconhecida. Nesta tese, nosso objetivo foi estimar a prevalência global e a estrutura populacional de Escherichia coli produtoras de -lactamases de espectro estendido (ESBL-E. coli) a nível mundial e investigar a influência de vários fatores de risco dos tutores e dos cães na presença de ESCR-E. coli em cães, incluindo a infecção e a antibioticoterapia profilática de parvovirose canina (CPV) e cinomose (CDV) no Brasil (Botucatu, São Paulo). No capítulo 1, realizamos uma scoping review e meta-análise para estimar a prevalência e estrutura populacional de ESBL-E. coli em cães e gatos. A prevalência foi estimada em 8.63% [IC 95%: 8.04; 9.27] em cães e 8.31% [IC 95%: 7.24; 9.52] em gatos e 60 diferentes genótipos de ESBL e 171 tipos sequenciais (ST) distintos de cepas E. coli resistentes foram descritos em cães e gatos globalmente. Além disso, blaCTX-M-15 e blaSHV-12 assim como ST38 e ST131 isolados de animais de companhia foram encontrados em todos os continentes. No segundo capítulo, estimamos a prevalência de ESCR-E. coli em cães (9,2%) e conduzimos questionários aos tutores para identificar os fatores de risco associados com a colonização fecal. O uso de antibióticos no último ano, contato direto com animais de produção e ausência de vermifugação aumentou a probabilidade de colonização fecal por ESCR-E. coli em cães. No terceiro capítulo, mostramos que a infecção e tratamento para CPV aumentou significativamente a prevalência de ESCR-E (E. coli e Klebsiella pneumoniae) em cães (36,5%) comparado com a infecção de CDV (15%) ou ausência de doenças infecciosas (9,2%). Além disso, genes ESBL foram amplamente detectados (70%) entre isolados recuperados antes da antibioticoterapia, principalmente blaCTX-M-type. Também mostramos que a prevalência aumenta 1-28 dias após antibioticoterapia e ESCR-E. coli foram detectados até 50 dias após o tratamento. Nossos resultados sugerem que cães com enteropatógenos (endoparasitas e vírus entéricos) podem exercer um importante papel na disseminação de ESCR-E. coli embora os mecanismos responsáveis por essas observações permaneceram desconhecidas. Esta tese sugere que o aumento da vermifugação e cobertura vacinal contra vírus entéricos poderiam potencialmente reduzir a disseminação de ESCR-E. coli em cães. Nossos resultados enfatizam a necessidade de implementar programas de vigilância nacional sobre o uso de antibióticos no setor veterinário e bactérias resistentes a antimicrobianos em animais de companhia para implementar estratégias eficazes para limitar a propagação da RAM.

Antimicrobial resistance (AMR) is currently one of the major threats for both animal and human health. Despite extended-spectrum cephalosporin-resistant Enterobacteriaceae (ESCR-E) being increasingly reported in dogs, the risk factors promoting their circulation among companion animals has received less attention. In particular, the influence of infections and treatments of enteric virus on the circulation of ESCR-E is unknown. In this thesis, we aimed to estimate the global prevalence and population structure of extended-spectrum beta-lactamases producing-Escherichia coli (ESBL-E. coli) worldwide and to investigate the influence of several owner and dogs risk factors on the presence of ESCR-E. coli in dogs including the infection and prophylactic antibiotic therapy of canine parvovirus (CPV) and canine distemper (CDV) in Brazil (Botucatu, Sao Paulo). In the chapter 1, we performed a scoping review and metanalyses to estimate the global prevalence and population structure of ESBL-E. coli in dogs and cats. The estimated prevalence was 8.63% [95% CI: 8.04; 9.27] in dogs and 8.31% [95% CI: 7.24; 9.52] in cats and 60 different genotypes of ESBL and 171 distinct sequence types (ST) of resistant E. coli strains have been described in dogs and cats worldwide. In addition, blaCTX-M-15 e blaSHV-12 as well ST38 and ST131 from companion animals were found in all continents. In the second chapter, we estimated the prevalence of ESCR-E. coli in dogs (9.2%) and conducted questionnaires to owners to identify risk factors associated with the fecal carriage. The use of antibiotics in the last year, direct contact with livestock, and absence of deworming increased the likelihood for fecal carriage of ESCR-E. coli in dogs. In our third chapter, we showed that CPV infection and treatment significantly increases the prevalence of ESCR-E (i.e., E. coli and Klebsiella pneumoniae) in dogs (36.5%) compared to CDV infection (15%) or absence of infectious diseases (9.2%). In addition, ESBL genes were widely detected (70%) among isolates recovered before antibiotic therapy, particularly blaCTX-M-type. We also showed that the prevalence increases 1-28 days after antibiotic therapy and ESCR-E. coli were detected up to 50 days after the treatment. Our results suggest that dogs with enteropathogens (i.e., endoparasites and enteric viruses) may play an important role in the dissemination of ESCR-E. coli although the mechanisms behind of these observations remained unclear. This thesis suggests that increasing deworming and vaccination coverage of enteric virus could potentially the dissemination of ESCR-E. coli in dogs. Our result stress the need to implement national surveillance of antibiotic use on the veterinary sector and antimicrobial resistant bacteria in companion animals to implement effective strategies to limit the spread of AMR.

CARACTERIZAÇÃO IMUNO-HISTOQUÍMICO E MOLECULAR DE EQUÍDEOS NATURALMENTE INFECTADOS PELO VÍRUS DA ANEMIA INFECCIOSA EQUINA

A anemia infecciosa equina (AIE), doença causada pelo vírus da anemia infecciosa equina (EIAV), é considerada um obstáculo para o desenvolvimento da equideocultura. O EIAV é transmitido por insetos hematófagos, principalmente da família Tabanidae e também pela forma iatrogênica. A AIE não tem tratamento, nem vacina e a patogênese, assim como a resposta imune do hospedeiro contra o vírus não são totalmente compreendidas. Além disso, o desempenho do diagnóstico laboratorial por testes sorológicos é questionado. Nesse sentido, o método imuno-histoquímico tem sido utilizado para aumentar o conhecimento sobre o tropismo e a patogenicidade de vários agentes infecciosos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um ensaio imuno-histoquímico para detecção de antígenos virais em tecidos e órgãos de equídeos naturalmente infectados pelo EIAV. Fragmentos de órgãos de equídeos (n = 6) de Apodi - RN, Brasil, diagnosticados como positivos para AIE em testes sorológicos foram fixados em formalina tamponada a 10% e embebidos em parafina. Cortes histológicos foram aderidos em lâminas de vidro polarizadas e a antigenicidade recuperada pelo calor, utilizando tampão citrato (pH = 6). Estas secções foram incubadas com anticorpo policlonal anti-EIAV overnight e, mais tarde, com anticorpo secundário anti-IgG equino conjugado com peroxidase (Sigma - Aldrich) durante 50 minutos. A reação antigeno/anticorpo foi revelada com o kit ImmPACTTM DAB Peroxidase Substrate (Vector Laboratories), contrastado com hematoxilina de Mayer (Sigma-Aldrich). Antígenos do EIAV foram observados na região intracitoplasmática do baço, fígado, rins e células pulmonares. Marcações imuno-histoquímicas estavam presentes principalmente na polpa vermelha do baço, uma região com abundância de macrófagos, e nos sinusóides hepáticos, onde as células de Kupffer (macrófagos hepáticos) se encontram. As imunomarcações também estavam presentes no epitélio bronquiolar e no septo alveolar, assim como no epitélio dos túbulos distal e proximal dos rins. A maior quantidade de EIAV foi observada no baço e no fígado, locais normalmente repletos de macrófagos, confirmando o tropismo viral aos fagócitos mononucleares. No entanto, a presença de EIAV em células epiteliais do pulmão e rim indica que o vírus também pode infectar outros tipos de células além dos macrófagos, possibilitando a eliminação do mesmo na urina e nas secreções oronasais, propiciando novos mecanismos de transmissão que devem ser investigados.

Equine infectious anemia (EIA), a disease caused by Equine infectious anemia virus (EIAV), is considered an obstacle to the development of horse industry. EIAV is transmitted by hematophagous insects mainly of the Tabanidae family and also iatrogenicaly. EIA has no treatment or vaccine and pathogenesis, as well as immune response against the virus are not fully understood. Also, the performance of laboratorial diagnosis by serological tests can be poor or limited. In this sense, the immunohistochemistry method has been used to enhance the knowledge about tropism and pathogenicity of several infectious agentes, such as viruses. Therefore, the objective of this work was the development of an immunohistochemical assay for detection of viral antigens in tissues and organs of naturally EIAV infected equids. Fragments of organs of equids (n=6) from Apodi RN, Brazil, diagnosed as positive for EIA by serological tests were fixed in 10% buffered formalin and paraffin-embedded. Histological sections were collected on polarized slides and antigenicity recovered by heat, using citrate buffer (pH=6). These sections were incubated with polyclonal antibody overnight, and later, with peroxidase-conjugated secondary antibody (Sigma Aldrich) for 50 minutes. Antigen/antibody reaction was revealed with the ImmPACT DAB Peroxidase Substrate (Vector Laboratories) kit counterstained with hematoxylin (Sigma-Aldrich). EIAV antigens were observed in intracytoplasmic region of spleen, liver, kidneys and lungs cells. Immunohistochemical marks were present mainly in red pulp of the spleen, a region with plenty of macrophages, and in hepatic sinusoids, where Kupffer cells (liver macrophages) lies. In addi tion, marks were found in bronchiolar epithelium and alveolar septum, as well as in epithelium of distal and proximal tubule of kidneys. The highest amount of EIAV was observed in spleen and liver, sites normally full of macrophages, confirming viral tropism to the mononuclear phagocytes. However, presence of EIAV in epithelial cells of lungs and kidneys indicates that the virus may also infect other types of cells besides macrophages, making possible elimination of virus in urine and in oronasal secretions, and facilitating new transmission mechanisms that must be investigated.

POTENCIAL ONCOLÍTICO DE ENTEROVÍRUS ANIMAIS FRENTE A CULTIVOS PRIMÁRIOS DE TECIDOS NEOPLÁSICOS PULMONARES DE SERES HUMANOS

A incessante busca por novas possibilidades terapêuticas no combate ao câncer de pulmão conduziu à descoberta de que neoplasias dos mais variados tipos e subtipos histológicos são suscetíveis ao efeito de vírus a partir de dois princípios de ação, o ataque celular direto e a promoção da resposta imune, inata ou adquirida. A terapia por vírus oncolíticos consiste no uso de partículas virais naturais ou modificadas geneticamente, as quais replicam-se seletivamente no interior de células tumorais. Apesar desta linha de pesquisa ser quase secular, somente nos últimos anos conseguiu-se demonstrar, em ensaios clínicos significativos, os benefícios da viroterapia em pacientes portadores de neoplasia. A partir destes estudos e levando-se em conta a escassez bibliográfica de ensaios clínicos impactantes em pacientes com câncer de pulmão primário e secundário, além da constatação de que tais estudos prioritariamente utilizam linhagens tumorais imortalizadas e não amostras de cultivo primário, formulamos a hipótese de desenvolver um estudo específico em pacientes portadores de neoplasia pulmonar, primária e secundária. O objetivo do estudo consiste na determinação e quantificação da atividade oncolítica viral em amostras biológicas tumorais. Para tanto, 15 amostras pulmonares tumorais humanas, oriundas de pacientes atendidos pelo Serviço de Cirurgia Torácica do Hospital Regina, localizado em Novo Hamburgo (RS), foram expostas a potenciais vírus oncolíticos, especificamente enterovírus bovino (BEV) e suíno (Senecavirus SVV-001), a fim de correlacionar a infecção viral subpatogênica com atividade antitumoral. Duas amostras teciduais pulmonares adaptaram-se adequadamente ao cultivo celular primário e foram testadas com BEV e SVV-001. Os resultados demonstraram haver claro efeito citopático nas amostras submetidas ao BEV, ilustrado por redução de mais de 50% na contagem celular após inoculação, quando comparado ao controle. Os testes com SVV-001 não demonstraram efeito citopático significativo. Espera-se, com isso, que possamos entender melhor o funcionamento da terapia viral oncolítica e aplicar os resultados na busca por mais uma ferramenta terapêutica no combate a esta enfermidade que, somente neste ano, matará centenas de milhares de pessoas no mundo.

The incessant search for new therapeutic possibilities in the fight against lung cancer has led to the discovery that neoplasms of various types and histological subtypes are susceptible to the effect of viruses from two principles of action, direct cell attack and the promotion of immune response, innate or acquired. Oncolytic virus therapy consists of the use of natural or genetically modified viral particles, which selectively replicate within tumor cells. Although this line of research is almost secular, it has only been demonstrated in recent years in significant clinical trials the benefits of virotherapy in patients with cancer. From these studies and considering the bibliographic scarcity of impactful clinical trials in patients with primary and secondary lung cancer, and the finding that such studies primarily use immortalized tumor lines and not primary culture samples, we hypothesized that develop a specific study in patients with primary and secondary lung cancer. The aim of this study is to determine and quantify viral oncolytic activity in tumor biological samples. To this end, 15 human tumor lung samples from patients treated by the Thoracic Surgery Service of Hospital Regina, located in Novo Hamburgo (RS), were exposed to potential oncolytic viruses, specifically bovine (BEV) and swine enterovirus (Senecavirus SVV-001) in order to correlate subpatogenic viral infection with antitumor activity. Two lung tissue samples were adapted to primary cell culture and were tested with BEV and SVV-001. The results showed a clear cytopathic effect in samples submitted to BEV, illustrated by a reduction of more than 50% in cell count after inoculation, when compared to the control. Tests with SVV-001 showed no significant cytopathic effect. It is hoped, therefore, that we can better understand the functioning of oncolytic viral therapy and apply the results in the search for another therapeutic tool to combat this disease that, this year alone, will kill hundreds of thousands of people in the world.

Molecular detection of canine distemper virus (CDV), canine adenovirus A type 1 and 2 (CAdV-1 and CAdV-2), and canine parvovirus type 2 (CPV-2) in the urine of naturally infected dogs / Detecção molecular do vírus da cinomose canina (CDV), adenovírus canino A tipos 1 e 2 (CAdV-1 e CAdV-2) e parvovírus canino tipo 2 (CPV-2) em urina de cães naturalmente infectados

Canine distemper virus (CDV) causes systemic, respiratory, cutaneous, and neurological manifestations, in dogs and other mammalians. Canine adenovirus A (CAdV) is divided in two types, CAdV-1 and CAdV-2, and cause infectious canine hepatitis and infectious tracheobronchitis, respectively. Canineparvovirus type 2 (CPV-2)-induced enteritis is one of the most common infectious cause of diarrhea inpuppies. The aim of this study was to detect the urinary excretion of major viral pathogens that cause systemic infections in dogs. From December 2011 to December 2012, 41 urine samples were collected from dogs that presented systemic clinical signs of infectious diseases. The samples were evaluated by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) for CDV and by PCR for CAdV-1, CAdV- 2, and CPV-2. RT-PCR amplified a partial fragment of the CDV N gene (287 bp) in 15 (36.6%) urine samples. PCR for E gene of CAdV-1 (508 bp) and CAdV-2 (1,030 bp) was positive in 4 (9.8%) and 1 (2.4%) sample, respectively; CPV-2 partial VP2 capsid protein gene (583 bp) was amplified in 6 (14.6%) samples. These results suggest that urine can be used as a clinical sample for the ante mortem diagnosis by molecular tools such as RT-PCR and PCR for CDV, CAdV-1 and 2, and CPV-2 systemic infections in dogs. Urinary excretion might be an important route for maintaining these viruses within the environment, and should be considered as a source of infection for healthy dogs.(AU)

O vírus da cinomose canina (CDV) é um Morbilivirus que causa manifestações clínicas sistêmicas, respiratórias, cutâneas e neurológicas em cães e outros mamíferos. O adenovírus canino A (CAdV) pode ser diferenciado em dois tipos, CAdV-1 e CAdV-2, e causam hepatite infecciosa canina etraqueobronquite infecciosa, respectivamente. Enterite pelo parvovírus canino tipo 2 (CPV-2) é uma das diarreias infecciosas mais comuns em cães, especialmente em filhotes. O objetivo deste estudo foi detectar a excreção urinária de alguns dos principais vírus que ocasionam infecções sistêmicas em cães. No período de dezembro de 2011 a dezembro de 2012 foram colhidas 41 amostras de urina de cães com sinais clínicos sistêmicos. As amostras foram avaliadas por reação em cadeia da polimerase precedida por transcrição reversa (RT-PCR) para o CDV e por PCR para CAdV-1, CAdV-2 e CPV-2. A RT-PCR amplificou um fragmento do gene N do CDV (287 pb) em 15 (36,6%) amostras. A PCR para o gene E do CAdV-1 (508 pb) e do CAdV-2 (1030 pb) foi positiva em 4 (9,8%) e 1 (2,4%) amostra, respectivamente; o gene VP2 da proteína do capsídeo do CPV-2 (583 pb) foi amplificado em 6 (14,6%) amostras. Estes resultados sugerem que a urina pode ser utilizada como amostra clínica para o diagnóstico ante mortem de infecções sistêmicas por CDV, CAdV-1 e 2 e CPV-2 por técnicas moleculares como RT-PCR e PCR. Adicionalmente, a excreção viral pela urina parece ser uma importante rota para a manutenção destes vírus no ambiente e deve ser considerada como fonte de infecção para cães saudáveis.(AU)