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EFEITO DAS VITAMINAS C E E ASSOCIADAS AO DMSO E METILGLICOL SOBRE A CRIOPRESERVAÇÃO SEMINAL DE Prochilodus brevis (ACTINOPTERYGII)

PRISCILA SILVA DE ALMEIDA.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-204346

Resumo

O Prochilodus brevis é um peixe reofílico, e as ações antrópicas têm ameaçado sua sobrevivência. Assim, é necessário o desenvolvimento de biotecnologias de conservação dessa espécie, como a criopreservação de gametas. Contudo, esta técnica causa estresse às células, podendo estimular a formação de espécies reativas de oxigênio, reduzindo a integridade estrutural e funcional dos espermatozoides. Portanto, é necessário utilizar substâncias com poder antioxidante para combater os radicais livres. Dessa forma, objetivou-se avaliar o efeito das vitaminas C e E e dos crioprotetores DMSO e metilglicol sobre a qualidade do sêmen criopreservado de P. brevis. Os machos receberam dose única de extrato hipofisário de carpa (3 mg.Kg-1 peso corporal) e, após 14h, foram sedados e o sêmen coletado. Para a criopreservação, o experimento foi realizado em duas etapas. Na primeira, o sêmen de 10 animais foi submetido a seis diferentes meios de congelação, oriundos da combinação de glicose 5%, dois crioprotetores (DMSO ou metilglicol) e duas vitaminas (C ou E a 0,0001 mg). Na segunda etapa, amostras seminais de oito animais foram diluídas em glicose 5% e DMSO, associados a três diferentes concentrações das vitaminas C ou E (0,01; 0,001 e 0,0001 mg). Após diluição, as amostras foram envasadas em palhetas de 0,25 mL, congeladas em Dry shipper (-176 ºC/15 min), armazenadas em botijão criogênico por, aproximadamente, 15 dias e descongeladas em banho-maria (30 °C/16 s). Em ambas as etapas, as amostras in natura e pós-descongeladas foram submetidas às análises de cinética (CASA/SCA), morfologia e integridade de membrana espermática. O sêmen criopreservado com DMSO apresentou resultados significativamente superiores (p<0,05) comparado ao congelado com metilglicol, independente da vitamina utilizada. A taxa de espermatozoides morfologicamente normais foi superior (p<0,05) nas amostras contendo vitamina, contudo a vitamina E reduziu as taxas de motilidade espermática, independente do crioprotetor utilizado. Quanto às concentrações das vitaminas, obteve-se maiores taxas de motilidade (p<0,05) quando se criopreservou sêmen com 0,01 e 0,0001 mg de qualquer uma das vitaminas. Entretanto, a maior concentração teve efeito deletério sobre a morfologia espermática de P. brevis. Portanto, a glicose associada ao DMSO e à menor concentração de vitamina C proporciona boa qualidade ao sêmen pós-descongelado de P. brevis.
Prochilodus brevis is a rheophilic fish whose human actions have threatened its survival. Thus, the development of conservation biotechnologies of this species, such as cryopreservation, is necessary. However, this technique causes stress to the cells and may stimulate the formation of reactive oxygen species, reducing the structural and functional integrity of spermatozoa. Therefore, it is necessary to use substances with antioxidant power to combat free radicals. The objective of this study was to evaluate the effect of vitamins C and E and cryoprotectants DMSO and methylglycol on the quality of the cryopreserved semen of P. brevis. Males were given a single dose of pituitary carp extract (3 mg.Kg-1 weight body) and after 14 h, they were sedated and the semen collected. For cryopreservation, the experiment was carried out in two stages. In the first one, the semen of 10 animals was submitted to six different freezing means, coming from the combination of 5% glucose, two cryoprotectants (DMSO or methylglycol) and two vitamins (C or E to 0.0001 mg). In the second step, sperms samples of eight animals were diluted in 5% glucose and DMSO, associated to three different concentrations of vitamins C or E (0.01, 0.001 and 0.0001 mg). After dilution, the samples were packed in 0.25 mL vats, frozen in Dry shipper (-176 ºC / 15 min), stored in a cryogenic bottle for about 15 days and thawed in a 30 ° C / 16 s). In both steps, the in natura and post-thawed samples were submitted to kinetic analysis (CASA / SCA), morphology and sperm membrane integrity. The cryopreserved semen with DMSO presented significantly higher results (p <0.05) compared to frozen with methylglycol, regardless of the vitamin used. The morphologically normal spermatozoa rate was higher (p <0.05) in the vitamin-containing samples, however vitamin E reduced sperm motility rates, independent of the cryoprotectant used. As for vitamin concentrations, higher motility rates were obtained when cryopreserved semen with 0.01 and 0.0001 mg of any of the vitamins. In addition, the highest concentration had a deleterious effect on the spermatic morphology of P. brevis. Therefore, the glucose associated with DMSO and the lower concentration of vitamin C provides good quality to the post-thawed semen of P. brevis.
Biblioteca responsável: BR68.1