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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-207706

Resumo

O estudo comparativo de tumores mamários em cães e humanos é possível devido à similaridade compartilhada de processos biológicos e genética tumoral. Algumas proteínas, enzimas, RNAm e genes são utilizados como biomarcadores para diagnóstico precoce e para prognóstico do câncer. Assim, pesquisas de biomarcadores tumorais humanos com resultados promissores servem de base para o estudo de alvos moleculares em cães, visando a confirmação da importância destes biomarcadores também para o prognóstico na rotina clínica veterinária. Os genes BRCA2 e PGAM1 aparentam serem marcadores prognósticos promissores, assim como os genes ABCB1 e CBR1, marcadores terapêuticos de relevância para cadelas com neoplasias mamárias. O gene BRCA2 participa da manutenção da estabilidade do genoma, enquanto o gene PGAM1 atua na via glicolítica. O gene TP53 é sinalizado como regulador da via glicolítica atuando diretamente sobre o gene PGAM. O gene ABCB1 codifica a glicoproteína P (gp-P), associada a efeitos adversos e resistência a várias drogas, inclusive a quimioterápicos. Porém, além desta já conhecida característica, estudos também associam ABCB1 ao processo de carcinogênese. Outro gene associado à efeitos adversos ao tratamento é o CBR1, o qual codifica a enzima carbonil redutase 1, envolvida com a cardiotoxicidade associada ao quimioterápico doxorrubicina. O objetivo desse estudo é identificar mutações nos genes PGAM1, BRCA2, ABCB1 e CBR1, assim como a expressão do RNAm de PGAM1 e TP53 em neoplasias mamárias de cadelas, correlacionando com dados clínicos dos animais e características histopatológicas do tumor. Foram estudados 100 tumores mamários de 57 cadelas cujas cadeias mamárias extirpadas foram divididas em três amostras: uma para análise histopatológica; outra para identificação de mutações nos genes BRCA2, PGAM1, ABCB1; e a terceira para avaliação da expressão de RNAm de PGAM1 e TP53. Além disso, coletou-se amostra de sangue total de cada cadela para identificação de mutações nos genes BRCA2 e CBR1 no DNA constitutivo do indivíduo. Identificou-se uma alta frequência (97,9%, n = 47/48) de mutações germinativas no éxon 11 do BRCA2 de cadelas com tumores mamários. Um total de sete polimorfismos foi encontrado, dentre os quais três teriam potencial para alterar a função proteica. Em relação a PGAM1, nossos achados sustentam que a p53 regula negativamente via glicolítica através da interação com PGAM1, tendo em vista que a maioria dos carcinomas mamários caninos estudados (71,5%; n = 15/21) apresentaram níveis reduzidos de RNAm de PGAM1 e níveis normais de RNAm do TP53. Em relação ao gene ABCB1, cães da raça poodle com tumores mamários apresentaram uma frequência significativamente maior dos polimorfismos c.985T>A e c.3442A>G nos éxons 9 e 26, respectivamente, quando comparados as demais raças analisadas, tendo um risco 10 vezes maior de apresentar as variações encontradas. Considerando que cães da raça poodle estão predispostos ao desenvolvimento de tumores mamários, pode-se hipotetizar que os polimorfismos detectados neste estudo poderiam aumentar o risco de desenvolvimento de neoplasias mamárias em cães. Não foram encontradas variantes na região codificante do gene CBR1 nos animais analisados.

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The comparative study of mammary tumors between dogs and humans is possible due a shared similarity of biological processes and tumor genetics. Some proteins, enzymes, mRNA and genes are used as biomarkers for early diagnosis and prognosis of cancer. Thus, human tumor biomarkers with promising results serve as the basis for the study of molecular targets also for dogs, aiming to confirm the importance of these biomarkers for prognosis in veterinary clinical routine. The BRCA2 and PGAM1 genes appear to be promising prognostic markers, as well as the ABCB1 and CBR1 genes, therapeutic markers for bitches with breast neoplasms. The BRCA2 gene plays a role in maintaining the stability of the genome, while the PGAM1 gene acts in the glycolytic pathway. The TP53 gene is a regulator of glycolytic pathway acting directly on PGAM gene. The ABCB1 gene encodes the P glycoprotein, associated with adverse effects and resistance to various drugs, including chemotherapeutic agents. However, in addition to this well-known feature, studies also associate ABCB1 with the carcinogenesis process. Another gene associated with adverse effects is CBR1, which encodes the enzyme carbonyl reductase 1, involved with the individual cardiotoxicity associated with some drugs, among them the chemotherapeutic doxorubicin. The aim of this study was to identify mutations in the genes PGAM1, BRCA2, ABCB1 and CBR1, as well as the expression of PGAM1 and TP53 mRNA in canine mammary tumors, correlating with animal clinic data and histopathological characteristics of the tumor. A total of 100 mammary tumors were studied from 57 bitches whose extirpated mammary chains. Samples were divided: one for histopathological analysis; other for identification of mutations in BRCA2, PGAM1, ABCB1 genes; and a third for evaluation of PGAM1 mRNA expression. In addition, whole blood samples were collected from each dog for identification of mutations in the BRCA2 and CBR1 genes in constitutive DNA. A high frequency (97.9%, n = 47/48) of germinative mutations in BRCA2 exon 11 from bitches with mammary tumors was identified. A total of seven polymorphisms were found, among which three would have potential to alter protein function. Regarding PGAM1, our findings support that p53 negatively regulates glycolytic pathway through the interaction with PGAM1, considering that the majority of canine mammary carcinomas studied (71.5%, n = 15/21) had reduced PGAM1 mRNA levels and normal TP53 mRNA levels. In relation to ABCB1 gene, poodle dogs with mammary tumors presented a significantly higher frequency of c.985T> A and c.3442A> G polymorphisms in exons 9 and 26, respectively, when compared to the other breeds analyzed, with a 10 times to present the variations found. Considering that poodle dogs are predisposed to the development of mammary tumors, it can be hypothesized that the polymorphisms detected in this study could increase the risk of developing mammary neoplasias in dogs. No variants were found in CBR1 coding region in the animals analyzed.

Biblioteca responsável: BR68.1