BVS Doenças Infecciosas e Parasitárias

A vacina BCG (Bacilo de Calmette-Guèrin), única medida profilática contra a tuberculose (TB), foi obtida no início do século XX por Calmette e Guèrin após 231 passagens de um isolado clínico de M. bovis cultivado em meio glicerinado contendo bile bovina. Sua eficácia protetora contra a TB pulmonar em adultos varia de 0-80% e as diferenças genéticas entre as diversas cepas vacinais utilizadas mundialmente contribuem para esta variação. A cepa vacinal brasileira, BCG Moreau, é considerada uma cepa primitiva, mais próxima do BCG original, quando comparada às cepas mais recentes, como BCG Pasteur (cepa de referência). Dados prévios indicaram um perfil proteômico bidimensional diferencial entre a cepa brasileira e a de referência, quando cultivadas em meio Sauton, sem agitação (condição de produção da vacina). Essas proteínas (PepA, DnaK, GroEL2, AhpC, HspX, BCG2993 e GroES) foram identificadas e pertencem ao grupo de proteínas que respondem a diferentes tipos de estresse. A partir desses dados optamos por investigar o estresse oxidativo, com o objetivo de caracterizar o perfil de resposta da cepa BCG Moreau, comparado ao da cepa de referência. Para isso, selecionamos dois agentes oxidantes peróxido de hidrogênio (H2O2) e diamida. A fração protéica intracelular foi resolvida em eletroforese bidimensional (2D) (pH 4-7) para confecção de mapas protéicos de alta resolução; o perfil transcricional dos genes codificantes para as proteínas selecionadas foi avaliado por PCR em tempo real (qRT-PCR) e a expressão proteica foi quantificada por western-blot empregando anticorpos policlonais produzidos a partir da forma recombinante destas proteínas (HspX, AhpC e BCG2993) expressas em E. coli. Na condição de cultivo para produção da vacina, o proteoma 2D revelou a maior expressão intracelular das proteínas PepA, HspX, AhpC e GroES na cepa BCG Moreau. Enquanto que as proteínas DnaK, GroEL2 e BCG2993 foram mais expressas na cepa BCG Pasteur. A comparação do meio vacinal com o meio 7H9 revelou que as proteínas PepA e DnaK estão sendo diferentemente expressas nesses meios. Os ensaios com diamida e H2O2 revelaram a ausência do transcrito para o gene hspX e consequentemente da proteína (2D e WB). A análise transcricional revelou que o agente oxidativo H2O2 modulou todos os genes em estudo, enquanto que o composto diamida só não alterou a transcrição do gene ahpC. Os resultados da análise proteômica mostram que as proteínas selecionadas foram moduladas de forma diferente pelos agentes oxidantes e que o comportamento diferencial entre a cepa Moreau e Pasteur foi evidenciado na condição com peróxido de hidrogênio. Estes resultados contribuem para a caracterização molecular da resposta ao estresse da cepa BCG Moreau comparada à cepa BCG Pasteur, permitindo uma melhor compreensão da cepa vacinal brasileira contra a TB.