ABSTRACT
Bovine tuberculosis is an
infectious disease with a high impact on the
cattle industry , particularly in
developing countries .
PCR is a very sensitive
method for
detection of infectious agents, but the
sensitivity of molecular
diagnosis is largely dependent on the
efficiency of the
DNA extraction
methods . The objective of this study was to evaluate
DNA extraction
methods for direct
detection of
Mycobacterium bovis in bovine
tissue . Nine commercial kits for
DNA extraction were evaluated when combined with two real
time PCRs. The DNeasy
Blood &
Tissue Kit from QIAGEN showed better performance and
sensitivity followed by the
DNA Mini Kit RBC and FTA Elute Micro Card. Results suggested that, even when the analytical
sensitivity of the qPCR is very high, the extraction
method can influence the diagnostic
sensitivity .
RESUMO A
tuberculose bovina é uma
doença infecciosa com um alto impacto na
pecuária , particularmente em
países em desenvolvimento . A
PCR é um
método muito sensível para a
detecção de
agentes infecciosos , mas a sensibilidade do
diagnóstico molecular é em grande parte dependente da
eficiência dos
métodos de extração de
DNA . O objetivo deste estudo foi avaliar
métodos de extração de
DNA para
detecção direta de
Mycobacterium bovisem
tecido bovino. Nove kits comerciais para extração de
DNA foram avaliados, quando combinados com duas PCRs em
tempo real. O Kit Dneasy Blood & Tissue da Qiagen apresentou melhor
desempenho e sensibilidade, seguido dos kits
DNA Mini RBC e FTA Elute Micro Card (
protocolo modificado com
digestão enzimática prévia). Os resultados sugerem que, mesmo quando a sensibilidade analítica do qPCR é muito elevada, o
método de extração pode influenciar na sensibilidade de
diagnóstico .