Probiotics study with Streptococcus salivarius and its ability to produce bacteriocins and adherence to KB cells / Estudo de probióticos Streptococcus salivarius e sua habilidade de produzir bacteriocinas e aderência à células KB

Abstract Introduction Streptococcus salivarius is a dominant oral species and the best suitable candidate for probiotic of the oral cavity. Since Streptococcus salivarius is able to produce bacteriocins against Streptococcus pyogenes interest has been focused on the use of it as a probiotic to avoid sore throats by Streptococcus pyogenes. Objective This study is for selecting Streptococcus salivarius strains for potential use as probiotics for the oral mucosa, that is, production of bacteriocin against Streptococcus pyogenes and the ability to bind to KB cells. Material and method Tongue material from 45 students was collected and seeded on Mitis Salivarius Agar plaques. The strains were tested by the production of bacteriocin-like substances (BLIS) against S. pyogenes, biochemically and PCR for identification of S. salivarius. The best strains were tested for adherence to KB cells. Briefly, S. salivarius strains were cultured in broth, washed and suspended at 108cells/ml. KB cells were inoculated into plaques, washed and incubated with the bacteria, for adhesion. These were washed for lysis of the KB cells and release bacteria for determination of CFU. Result The bacteriocin test showed that 133 strains presented inhibition of S. pyogenes. The samples tested for adhesion to KB cells, presented different profiles and only three strains presenting high adhesion capacity. Conclusion The selection of strains of Streptococcus salivarius with high inhibitory activity against Streptococcus pyogenes, as well as adherence to KB cells leads us to the next future step, that is, to use the best strains for in vivo colonization tests

Resumo Introdução Streptococcus salivarius é uma espécie dominante na cavidade bucal e tem sido indicada como um ótimo candidato para uso como probiótico. Visto que a espécie Streptococcus salivarius é capaz de produzir bacteriocinas contra Streptococcus pyogenes, desenvolveu-se interesse no uso desse microrganismo como probiótico, para evitar amigdalites causadas por Streptococcus pyogenes. Objetivo A pesquisa em questão tem o objetivo de selecionar cepas de Streptococcus salivarius para seu uso potencial como probióticos na cavidade bucal, ou seja, produção de bacteriocinas contra Streptococcus pyogenes e habilidade de aderência à células KB. Material e método Coletou-se material de língua de 45 estudantes e semeou-se em placas de ágar Mitis Salivarius. As amostras foram testadas para verificar a produção de substâncias semelhantes à bacteriocina (BLIS) contra S. pyogenes, bioquimicamente e através de PCR para identificação de S. salivarius. As melhores cepas foram testadas quanto aderência à células KB. Resumidamente, as cepas de S. salivarius foram cultivadas em caldo, lavadas e suspensas à correspondência de 108 cels/ml. As células KB foram inoculadas em placas, lavadas e incubadas com as bactérias, para adesão. Estas foram lavadas para lise das células KB e liberação das bactérias para determinação de UFC. Resultado O teste de bacteriocina, mostrou que 133 cepas apresentaram atividade inibitória contra Streptococcus pyogenes. As cepas testadas para aderência à células KB, apresentaram diferentes perfis e somente três com alta capacidade de adesão. Conclusão: A seleção de cepas de Streptococcus salivarius com alta atividade inibitória contra Streptococcus pyogenes, bem como aderência a células KB, pode nos levar ao próximo passo, ou seja, o uso das melhores cepas para o estudo de colonização in vivo.

Cytotoxicity and genotoxicity of endodontic irrigants on human cells / Citotoxicidade e genotoxicidade de irrigantes endodônticos em células humanas

OBJECTIVE: Endodontic irrigants solutions with antibacterial activity have been used in treatment of teeth with infected root canals; however, these solutions can irritate periapical tissues. The aim of this study was to evaluate the cytotoxity and genotoxicity of different endodontic irrigants solutions – sodium hypochlorite (1% and 2%), calcium hydroxide (0.2%), and HCT20 in human KB cells. MATERIAL AND METHOD: Cells were incubated with solutions for 2 and 24 hours. The cell viability was assessed after the trypan blue exclusion and the frequency of cell death mechanism (apoptotic or necrotic) was determined by acridine orange/ethidium bromide fluorescent dyeing test. The genotoxicity effects were assessed by the micronucleus assays. RESULTS AND DISCUSSION: The results showed that Ca(OH)2 alone or in combination with tergentol (HCT20), and NaOCl induced cytotoxicity in KB causing death cells by apoptosis. The micronuclei test showed that KB treated with NaOCl (1%) present an increase in the frequency of micronucleus compared to the control group.

OBJETIVO: Soluções irrigadoras com atividade antibacteriana têm sido usadas no tratamento de dentes com canais radiculares infectados; entretanto, essas soluções podem irritar os tecidos periapicais. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e genotoxicidade de diferentes soluções irrigadoras – hipoclorito de sódio (1% e 2%), hidróxidode cálcio (0,2 %) e HCT em células humanas KB. MATERIAL E MÉTODO: As células foram incubadas em soluções por 2 e 24 horas. A viabilidade celular foi determinada após exclusão do tripan blue e a frequência de mecanismo de morte celular (apoptótica ou necrótica) foi determinada pelo teste acridine Orange/ethidium bromide fluorescen dyeing. Os efeitos de genotoxicidade foram determinados pelo ensaio de micronúcleos. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os resultados demonstraram que o Ca(OH2), isoladamente ou em combinação com Tergentol™ (HCT20) e NaOCl, induziram citotoxicidade em KB, causando morte celular por apoptose. O teste de micronúcleos demonstrou que KB tratado codm NaOCl (1%) apresentou aumento na frequência de microdnúcleos quando comparadocom o grupo controle.