IFN-γR2 is strongly expressed on endothelial cells of gingival tissues from patients with chronic periodontitis

Abstract Chronic periodontitis (CP) is characterized by gingival inflammation and bone destruction. It has been reported that interferon-gamma (IFN-γ) levels are high in CP patients; however, the IFN-γ receptor (IFN-γR) has not been studied in gingival tissue from these patients. Objective: To evaluate IFN-γ levels and IFN-γR expression in gingival tissue biopsies from chronic periodontitis patients compared with healthy subjects (HS). Material and Methods: Gingival tissues were obtained from all study subjects, CP (n = 18) and healthy subjects (HS) (n = 12). A tissue section of each study subject was embedded in paraffin blocks to determine the expression of IFN-γ R (IFN-γR1 and IFN-γR2) through immunohistochemistry. Another section of the tissue was homogenized and IFN-γ was measured by the ELISA technique. Results: No significant differences were found in the IFN-γR1 expression within the cell layers of the gingival tissue of the study groups. When analyzing the IFN-γR2 expression it was found that IFN-γR2 is strongly expressed in the endothelial cells of CP patients when compared to HS (p<0.05). IFN-γ concentrations in the gingival tissue were significantly higher in CP patients than in HS. No significant correlation between IFN-γ levels and the expression of IFN-γR1 and IFN-γR2 was found. However, a positive correlation between IFN-γ levels and clinical parameters [probing depth (PD) and clinical attachment level (CAL)] was found. Conclusion: The study of IFN-γR expression in gingival tissue samples from patients with CP showed an increase only in the IFN-γR2 chain in endothelial cells when compared to HS.

Hiperplasia Endotelial Papilífera Intravascular Oral: relato de dois casos / Oral intravascular papillary endothelial hyperplasia: two cases report

A hiperplasia endotelial papilífera intravascular (HEPI) é uma lesão vascular não neoplásica, benigna e rara, especialmente em cavidade bucal. O presente artigo relata dois casos com diferentes apresentações clínicas de HEPI, envolvendo o lábio inferior. O primeiro caso se refere a um paciente que apresentava nódulo único submucoso, endurecido, arroxeado e assintomático em mucosa labial inferior. E o segundo se reporta a uma paciente que apresentava aumento de volume assintomático em lábio inferior com a mucosa entumecida e arroxeada desde o fundo de sulco. O exame histológico revelou vasos dilatados com proliferação de células endoteliais arredondadas, associadas a estruturas papilares, de tecido conjuntivo projetadas para o lúmen vascular, associadas a um trombo organizado, no primeiro caso, e a um hemangioma, no segundo. A ausência de células inflamatórias, atipia e necrose celular excluíram outras lesões vasculares, sendo o diagnóstico final de HEPI. O prognóstico da HEPI é excelente, uma vez que recidivas são raramente relatadas. A HEPI pode ser incluída no diagnóstico diferencial clínico de lesões labiais únicas, arroxeadas e endurecidas. E por caracterizarse histologicamente por uma proliferação de células endoteliais, é importante estabelecer o diagnóstico diferencial com o angiossarcoma, uma lesão de tratamento mais agressivo e pior prognóstico... (AU)

Intravascular papillary endothelial hyperplasia (IPEH) is a nonneoplastic vascular benign and rare lesion, especially in oral cavity. This article reports two cases of IPEH, with different clinical presentation, involving the inferior lip. The first case refers to a patient presenting a single submucosal indurated purplish and asymptomatic nodule in the lower labial mucosa. And the second, to a patient presenting an asymptomatic increase in the lower lip associated with a swelling and purplish oral mucosa. Histological examination showed dilated vessels with rounded endothelial cells proliferation associated with papillary structures of connective tissue projected to vascular lumen, associated with an organized thrombus in first case and a hemangioma in the second. The absence of inflammatory cells, cytologic atypia and necrosis excluded other vascular lesions, being the final diagnosis of IPEH. The prognosis of IPEH is excellent since recurrences are rarely reported. Isolated purplish and indurated labial lesions can include the IPEH as a possible clinical hypothesis. And, since is histologically characterized by a proliferation of endothelial cells, is crucial the establishment of the histological differential diagnosis with angiosarcoma, which requires a more aggressive treatment and has worse prognosis... (AU)

Análise do papel dos exossomos derivados das linhagens celulares SCC-15 e HSC-3 no processo de angiogênese tumoral / Analysis of the role of exosomes derived from cell lines SCC-15 and HSC-3 in the process of tumor angiogenesis

Os exossomos são vesículas extracelulares originadas por brotamento interno da membrana de endossomos tardios que representam uma eficiente forma de comunicação intercelular. Devido às suas múltiplas funções biológicas, o foco de alguns estudos atuais tem se concentrado na análise do seu papel no desenvolvimento do câncer, progressão da doença, invasão, angiogênese e formação de metástases tumorais. Nesta perspectiva, o presente estudo objetivou caracterizar os exossomos secretados por duas linhagens celulares de carcinomas epidermoide oral (CEO) (SCC-15 e HSC-3) e avaliar seus efeitos sobre uma linhagem de células endoteliais (HUVEC), em relação à sua capacidade de formação de estruturas vasculares, taxas de migração, proliferação e índices de apoptose/necrose. Médias significativamente maiores de células com potencial invasivo (p<0,0001) e migratório (p<0,0001) foram observadas para a linhagem HSC-3. Ultraestruturalmente, verificou-se que as partículas derivadas da linhagem SCC-15 exibiram morfologia arredondada e diâmetro inferior a 150 nm. Nenhuma diferença estatisticamente significativa foi revelada entre as linhagens celulares estudadas, considerando a quantificação de nanovesículas (p=0,2252) e tamanho exossomal (p=0,1765). Por imunofluorescência indireta, identificou-se que 22,15% dos exossomos secretados pelas células SCC-15 e 18,37% dos exossomos derivados da linhagem HSC-3 expressaram o anticorpo anti-Anexina. No que se refere aos ensaios funcionais com as HUVECs, o tratamento com exossomos derivados da linhagem SCC-15 induziu um aumento significativo da capacidade de formação de estruturas vasculares (p<0,0001), potencial migratório (p=0,0016) e taxa de apoptose (p<0,0001), enquanto que uma redução da proliferação celular foi apontada (p=0,0030). Por outro lado, o tratamento com exossomos secretados pela linhagem HSC-3 promoveu uma redução significativa da formação tubular (p<0,0001), motilidade (p=0,0042) e proliferação celular (p=0,0010), ao passo que nenhuma diferença estatisticamente significativa foi observada no índice apoptótico (p=0,3004). Os resultados do presente estudo indicaram a participação dos exossomos derivados de linhagens de CEO no processo de angiogênese tumoral, onde as células SCC-15 exibiram forte resposta proangiogênica e a linhagem HSC-3 demonstrou efeito antiangiogênico (AU).

Exosome are extracellular microvesicles originated by inward budding of late endosomal membrane that represent an efficient form of intercellular communication. Because of its multiple biological functions, the focus of some recent studies has concentrated on the analysis of its role in cancer development, disease progression, invasion, angiogenesis and tumor metastasis formation. In this perspective, the present study aimed to characterize the secreted exosomes by two cell lines of oral squamous cell carcinomas (OSCC) (SCC-15 and HSC-3) and to evaluate its effects on a cell line of endothelial cells (HUVEC), in relation to their ability to form vascular structures, rates of migration, proliferation, and apoptosis / necrosis indices. Significantly higher means of cells with invasive (p<0.0001) and migratory potential (p = <0.0001) were observed for the HSC-3 cell line. Ultrastructurally, it was found that particles derived from the SCC-15 cell line exhibited a rounded morphology and diameter of less than 150 nm. No statistically significant difference was revealed between the studied cell lines, considering the nanovesicles quantization (p=0.2252) and exossomal size (p=0.1765). By indirect immunofluorescence, it was found that 22.15% of exosomes secreted by SCC-15 cells and 18.37% of exosomes derived from HSC-3 cells expressed anti-annexin antibody. With regard to the functional tests with HUVECs, treatment with exosomes derived from SCC-15 cell line induced a significant increase in their capacity of formation of vascular structures (p = <0.0001), migratory potential (p=0.0016) and rate of apoptosis (p<0.0001), while a decrease in cell proliferation was noted (p = 0.0030). On the other hand, the treatment with exosomes secreted by HSC-3 cell line produced a significant reduction in tubule formation (p<0.0001), motility (p = 0.0042) and cell proliferation (p=0.0010), whereas no statistically significant difference was observed in the apoptotic index (p=0.3004). The results of this study indicated the involvement of exosomes derived from OSCC cell lines in tumor angiogenesis process, in which the SCC-15 cells exhibited strong proangiogenic response and HSC-3 cell line showed antiangiogenic effect (AU).

Associação entre periodontite e disfunção endotelial: parâmetros clínicos periodontais e níveis dos marcadores inflamatórios IL-1ß, TNF-α, MMP2 e óxido nítrico / Association between periodontitis and Endothelial dysfunction: periodontal clinical parameters and levels of inflammatory markers IL-1ß, TNF-α, MMP2 and nitric oxide

Objetivos: A periodontite aumenta o risco das doenças cardiovasculares ateroscleróticas (DCA) e ambas doenças apresentam mecanismos fisiopatológicos semelhantes. A disfunção endotelial (DE) é um parâmetro precoce das DCA e sua associação com a periodontite foi pouco investigada até o presente momento. Neste contexto o objetivo geral deste estudo foi avaliar a associação entre a periodontite e a disfunção endotelial por meio de parâmetros clínicos periodontais e a presença dos marcadores inflamatórios IL-1ß, TNF-α, MMP2/TIMP2 e óxido nítrico. Métodos: A amostra foi constituída por 47 indivíduos de ambos os gêneros, sem alterações sistêmicas conhecidas, divididos em dois grupos: um grupo com 24 indivíduos com periodontite crônica e outro com 23 indivíduos sem periodontite crônica. Foram realizados exames periodontais de sangramento a sondagem (SS), profundidade de sondagem (PS), nível de inserção clínica (NIC) e avaliada a DE por meio da dilatação mediada por fluxo (DMF) da artéria braquial. A concentração dos mediadores inflamatórios IL-1ß, TNF-α, MMP2/TIMP2 foi avaliada pelo método ELISA e o óxido nítrico (ON) pela reação de Griess na saliva. Resultados: Os indivíduos com periodontite apresentaram significativamente maior DE quando comparados com indivíduos sem periodontite (p= 0,034 após hiperemia reativa e p= 0,049 após nitrato sublingual). Em relação aos mediadores inflamatórios avaliados, houve uma associação significativa entre a produção de MMP2/TIMP2 com a presença de periodontite (p=0,008) além de uma correlação positiva com todos parâmetros clínicos de gravidade da inflamação periodontal avaliados (PS, NIC, SS). Para os demais marcadores (IL-1ß, TNF-α e ON) os grupos com e sem periodontite apresentaram resultados similares. Foi identificada também uma correlação positiva significativa entre a produção de ON e uma menor DE (após hiperemia reativa p= 0,027 e após nitrato sublingual p=0,016). . Conclusão: Indivíduos com periodontite apresentaram maior DE, expressa por menor % de DMF da artéria braquial e maiores níveis de MMP2/TIMP2 que indivíduos sem periodontite. O ON foi significativamente associado com uma menor DE

Background: The periodontitis and atherosclerotic cardiovascular diseases (ACD) are chronic diseases which have a large number of risk factors and inflammatory mediators in common. The ACD has endothelial dysfunction (ED) with an important role in the initiation and progression of atherosclerosis. However, few investigations were conducted on a possible association between periodontitis and higher ED. In this context the general aim of this study is to evaluate the association between the endothelial function and the periodontitis using periodontal clinical parameters and the presence of inflammatory markers IL-1ß, TNF-α, MMP2 and nitric oxide. Methods: This study consisted of 47 subjects of both genders, systemically healthy divided into two groups: a group with 24 subjects with chronic periodontitis and another with 23 subjects without chronic periodontitis. Were done complete periodontal examination and evaluated ED by the flow-mediated dilatation (FMD) of the brachial artery and measured the levels of systemic inflammation mediators IL1ß, TNF-α, MMP2 and the nitric oxide (NO) in the saliva. Results: The subjects with periodontitis showed % DMF significantly worse when compared with subjects without periodontitis (p= 0.034 after reactive hyperemia and p= 0.049 after sublingual nitrate), thus subjects with periodontitis showed significantly higher ED. In relation to inflammatory mediators evaluated, there was a significant association between MMP2 with the presence of periodontitis (p=0.008) and a positive correlation with all clinical parameters of periodontal variation. For the other markers (IL-1ß, TNF-α, and nitric oxide) the groups with and without periodontitis showed similar results. It was also identified a significant positive correlation between the nitric oxide and a better endothelial function. Conclusion: subjects with periodontitis showed higher ED, expressed by smaller % of DMF brachial artery and higher levels of MMP2 that subjects without periodontitis

Deteccão de diferentes microorganismos na periodontite crônica, da glicoproteína EMMPRIN (CD-147) e sua correlação com a produção de MMP-2 e MMP-9 / Detection of different microorganisms in chronic periodontitis, glycoprotein EMMPRIN (CD-147) and its correlation with production of MMP-2 and MMP-9

A periodontite é uma doença infecciosa caracterizada pela secreção de uma variedade de mediadores inflamatórios que levam a destruição dos tecidos de suporte dental, incluindo o osso alveolar e possível perda dos dentes, em associação com a infecção por múltiplas espécies de bactérias gram-negativas. Estima-se que mais de 400 espécies microbianas colonizam o biofilme dental e algumas das espécies bucais relacionadas à doença periodontal apresentem-se no biofilme subgengival incluindo Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola. Entretanto, outros microrganismos podem também estar relacionados a patologia desta doença, como Filifactor alocis, Prevotella tannerae e Candida albicans. Estes microrganismos juntamente com seus subprodutos como as endotoxinas liberadas no meio extracelular levam ao estímulo da glicoproteina Indutora de Metaloproteinases (EMMPRIN-CD147) a qual estimula a liberação de metaloproteinases da matriz (MMPs) pelas células do hospedeiro, por exemplo, fibroblastos e células endoteliais levando assim a destruição tecidual. Com o objetivo de detectar novos patógenos relacionados à doença periodontal como F. alocis, P. tannerae, C. albicans e T. denticola e também avaliar a glicoproteína EMMPRIN (CD- 147) e sua correlação com MMP-2 e MMP-9 em amostras de fluido subgengival de pacientes com periodontite crônica, foram coletadas amostras de fluido subgengival de sítios sadios e doentes de 20 indivíduos com periodontite crônica antes do tratamento periodontal básico, e após um período de 60 dias do tratamento foi realizada nova coleta de sítios sadios e doentes. Os respectivos DNAs foram extraídos e trechos do gene 16S foram amplificados e posteriormente realizados PCR convencional para a análise microbiológica dos microrganismos em estudo. Para a análise imunológica e quantificação de EMMPRIN-CD147, MMP-2 e MMP-9 foi utilizado a técnica de ELISA-Sanduíche. Os resultados demonstraram que o grupo doente mostrou valores significativamente elevados de T. denticola, F. alocis e P. tannerae quando comparado com sítios sadios. MMP-2 e MMP-9 foram detectados em concentrações elevadas, com redução estatisticamente significativa após o tratamento periodontal para MMP-2 e sem correlação com EMMPRIN

Periodontitis is an infectious disease characterized by the secretion of a variety of inflammatory mediators that lead to destruction of tooth supporting tissues, including the possible loss of alveolar bone and teeth, in association with infection with multiple species of gramnegative bacteria. It is estimated that more than 400 species of microorganisms colonize the biofilm and some oral species related to periodontal disease is present in the subgingival including Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia and Treponema denticola. However, other organisms may also be related to pathology of this disease, as Filifactor allocis, Prevotella tannerae and Candida albicans. These microorganisms along with subproducts such as endotoxins released into the extracellular lead to the stimulation of metalloproteinase inducer glycoprotein (EMMPRIN, CD-147), which stimulates the release of MMPs by host cells, like fibroblasts and endothelial cells, thus leading to tissue destruction . The objective of this study was to detect new pathogens relationed with periodontal disease such as F. allocis, P. tannerae, C. albicans, T. denticola and also the glycoprotein EMMPRIN (CD-147) and its correlation with MMP-2 and MMP-9 in subgingival fluid samples of patients with chronic periodontitis. Fluid were collected from healthy and disease subgingival sites of 20 healthy individuals with chronic periodontitis before basic periodontal treatment, and after a period of 60 days of treatment was performed new collection of healthy and diseased sites. Their DNAs were extracted and portions of the 16S gene were amplified and subsequently performed conventional PCR for the microbiological analysis of the microorganisms this study. For immunological analysis and quantification of EMMPRIN (CD-147), MMP-2 and MMP-9 was used ELISA-Sandwich. Results demonstrated that the disease group showed significantly high amounts of T. denticola, F. alocis and P. tannerae when compared with health sites. MMP-2 and MMP-9 were detected in high concentrations with statistically significantly reduction after periodontal treatment to MMP-2, but without correlation with EMMPRIN

Hiperplasia endotelial papilar intravascular em língua: relato de caso / Intravascular papillary endothelial hyperplasia in tongue: case report

Este relato de caso descreve diagnóstico e tratamento de uma patologia oral rara: hiperplasia endotelial papilar intravascular. Uma paciente jovem do sexo feminino possuía lesão nodular avermelhada na borda lateral de língua com diascopia positiva. Características histopatológicas incluíram vasos sanguíneos calibrosos com lesão bem circunscrita composta por abundantes estruturas papilares revestidas por endotélio (vimentina+, colágenoIV+ e CD31+). A cicatrização completa ocorreu 4 meses após a cirurgia final, sem recorrência após 5 anos de acompanhamento. Esta lesão pode mimetizar o angiosarcoma, por isso diagnóstico diferencial e tratamento correto são de grande importância.

Estudo comparativo da citotoxicidade de cimentos obturadores sobre culturas de células endoteliais da linhagem ECV 304 / Comparative study of cytotoxicity of sealers on cultured endothelial cells line ECV 304

Este estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, a citotoxicidade dos cimentos endodônticos Densell Endo®, Pulp-Fill®, Endofill®, Sealer 26®, Pulp Canal Sealer® e GuttaFlow® após 12, 24 e 72 horas de tempo de contato, utilizando-se uma linhagem de células endoteliais ECV-304. Para a avaliação da viabilidade celular, utilizou-se o teste de citotoxicidade MTT. Para cada cimento foram preparados 12 corpos de prova que foram distribuídos em seis grupos experimentais de acordo com as marcas comerciais, sendo quatro para cada tempo. Foi criado um grupo controle que não foi submetido à ação de cimento. Para avaliação do efeito dos cimentos sobre as células endoteliais, os corpos de prova foram inseridos nos poços da placa cultura, incubados a 37ºC em presença de 5% de CO2 e 100% de umidade. Os testes MTT foram realizados, em quadruplicata, após 12, 24 e 72 horas de contato das amostras com o tapete celular. Foi utilizada a prova Two-Way Anova com o teste Post Hoc de Bonferroni com nível de significância de 5%. Na análise de 12 horas, foi possível observar que o cimento GuttaFlow® apresentou média de absorbância de 0,055, seguido do Sealer 26® (média = 0,038). Os cimentos Pulp Canal Sealer® e Densell Endo® apresentaram a mesma média de absorbância (0,031). O Pulp Fill® e o Endofill® foram os cimentos que apresentaram maior citotoxicidade (média de absorbância = 0,024 e 0,021, respectivamente). O grupo controle apresentou média de absorbância de 0,158. Em 24 horas observou-se que os cimentos GuttaFlow® e Sealer 26® apresentaram as maiores médias de absorbância (0,041 e 0,037, respectivamente), seguidos pelo cimento Pulp Canal Sealer® que apresentou média de absorbância de 0,035. Já os cimentos Densell Endo® e Pulp Fill® apresentaram médias de absorbância de 0,033 e 0,032, respectivamente. O cimento Endofill® apresentou uma média de 0,026 e o grupo controle de 0,086. Quando analisados em 72 horas, o cimento Pulp Canal Sealer® obteve média de absorbância ...

This study aimed to evaluate, in vitro, cytotoxicity of root canal sealers Densell Endo®, Pulp-Fill®, Endofill®, Sealer 26®, Pulp Canal Sealer® and GuttaFlow® after 12, 24 and 72 hours of contact time, using a endothelial cell line ECV-304. For the assessment of cell viability, used the MTT cytotoxicity test. For any cement were prepared 12 specimens that were divided into six groups according to the trademarks, four for each time. Created a control group that was not subjected to action of cement. To assess the effects of cements on endothelial cells, the specimens were placed in culture plate wells, incubated at 37°C with 5% CO2 and 100% humidity. MTT tests were performed, in quadruplicate, after 12, 24 and 72 contact hours of the samples with monolayers. Was used to test Two-Way Anova with Bonferroni Post Hoc test with significance level of 5%. In the analysis of 12 hours, was observed that the cement GuttaFlow® had a mean absorbance of 0,055, followed by Sealer 26® (average = 0,038). Cements Pulp Canal Sealer® and Densell Endo® had the same mean absorbance (0,031). The Pulp Fill® and Enfofill® were the cements with higher cytotoxicity (mean absorbance = 0,024 and 0,021, respectively). The control group had a mean absorbance of 0,158. In 24 hours it was observed that the cements Sealer 26® and GuttaFlow® had the highest average absorbance (0,041 and 0,037, respectively), followed by cement Pulp Canal Sealer® that had a mean absorbance of 0.035. Already cements Densell Endo® and Pulp Fill® showed means absorbance of 0,033 and 0,032, respectively. Cement Endofill showed an average of 0,026 and the control group, 0,086. When analyzed at 72 hours, the cement Pulp Canal Sealer® had an average absorbance of 0,049, followed by cement GuttaFlow® and Pulp Fill®, both with 0,048. Cements Densell Endo®, Sealer 26® and Endofill® showed respectively, averaging 0,044, 0,040 and 0,036. The control group differed significantly ...(AU)

Estudo comparativo da citotoxicidade de cimentos obturadores sobre culturas de células endoteliais da linhagem ECV 304 / Comparative study of cytotoxicity of sealers on cultured endothelial cells line ECV 304

Este estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, a citotoxicidade dos cimentos endodônticos Densell Endo®, Pulp-Fill®, Endofill®, Sealer 26®, Pulp Canal Sealer® e GuttaFlow® após 12, 24 e 72 horas de tempo de contato, utilizando-se uma linhagem de células endoteliais ECV-304. Para a avaliação da viabilidade celular, utilizou-se o teste de citotoxicidade MTT. Para cada cimento foram preparados 12 corpos de prova que foram distribuídos em seis grupos experimentais de acordo com as marcas comerciais, sendo quatro para cada tempo. Foi criado um grupo controle que não foi submetido à ação de cimento. Para avaliação do efeito dos cimentos sobre as células endoteliais, os corpos de prova foram inseridos nos poços da placa cultura, incubados a 37ºC em presença de 5% de CO2 e 100% de umidade. Os testes MTT foram realizados, em quadruplicata, após 12, 24 e 72 horas de contato das amostras com o tapete celular. Foi utilizada a prova Two-Way Anova com o teste Post Hoc de Bonferroni com nível de significância de 5%. Na análise de 12 horas, foi possível observar que o cimento GuttaFlow® apresentou média de absorbância de 0,055, seguido do Sealer 26® (média = 0,038). Os cimentos Pulp Canal Sealer® e Densell Endo® apresentaram a mesma média de absorbância (0,031). O Pulp Fill® e o Endofill® foram os cimentos que apresentaram maior citotoxicidade (média de absorbância = 0,024 e 0,021, respectivamente). O grupo controle apresentou média de absorbância de 0,158. Em 24 horas observou-se que os cimentos GuttaFlow® e Sealer 26® apresentaram as maiores médias de absorbância (0,041 e 0,037, respectivamente), seguidos pelo cimento Pulp Canal Sealer® que apresentou média de absorbância de 0,035. Já os cimentos Densell Endo® e Pulp Fill® apresentaram médias de absorbância de 0,033 e 0,032, respectivamente. O cimento Endofill® apresentou uma média de 0,026 e o grupo controle de 0,086. Quando analisados em 72 horas, o cimento Pulp Canal Sealer® obteve média de absorbância...

This study aimed to evaluate, in vitro, cytotoxicity of root canal sealers Densell Endo®, Pulp-Fill®, Endofill®, Sealer 26®, Pulp Canal Sealer® and GuttaFlow® after 12, 24 and 72 hours of contact time, using a endothelial cell line ECV-304. For the assessment of cell viability, used the MTT cytotoxicity test. For any cement were prepared 12 specimens that were divided into six groups according to the trademarks, four for each time. Created a control group that was not subjected to action of cement. To assess the effects of cements on endothelial cells, the specimens were placed in culture plate wells, incubated at 37°C with 5% CO2 and 100% humidity. MTT tests were performed, in quadruplicate, after 12, 24 and 72 contact hours of the samples with monolayers. Was used to test Two-Way Anova with Bonferroni Post Hoc test with significance level of 5%. In the analysis of 12 hours, was observed that the cement GuttaFlow® had a mean absorbance of 0,055, followed by Sealer 26® (average = 0,038). Cements Pulp Canal Sealer® and Densell Endo® had the same mean absorbance (0,031). The Pulp Fill® and Enfofill® were the cements with higher cytotoxicity (mean absorbance = 0,024 and 0,021, respectively). The control group had a mean absorbance of 0,158. In 24 hours it was observed that the cements Sealer 26® and GuttaFlow® had the highest average absorbance (0,041 and 0,037, respectively), followed by cement Pulp Canal Sealer® that had a mean absorbance of 0.035. Already cements Densell Endo® and Pulp Fill® showed means absorbance of 0,033 and 0,032, respectively. Cement Endofill showed an average of 0,026 and the control group, 0,086. When analyzed at 72 hours, the cement Pulp Canal Sealer® had an average absorbance of 0,049, followed by cement GuttaFlow® and Pulp Fill®, both with 0,048. Cements Densell Endo®, Sealer 26® and Endofill® showed respectively, averaging 0,044, 0,040 and 0,036. The control group differed significantly...

Mecanismos envolvidos na diferenciação de células-tronco de dentes decíduos exfoliados humanos (SHED) em odontoblastos e células endoteliais / Mechanisms underlying the differentiation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) into odontoblasts and endothelial cells

A engenharia de tecido pulpar tem como objetivo substituir a polpa dentária inflamada ou necrosada por um tecido saudável e funcional, capaz de formar nova dentina para reparar a estrutura dentária perdida. Assim, os objetivos deste trabalho foram: avaliar a habilidade de diferenciação de células tronco de dentes decíduos exfoliados humanos (SHED) em odontoblastos funcionais, demonstrando a formação de tecido mineralizado in vivo; e estudar o efeito de VEGF em SHED com relação à estimulação de vias de sinalização celular (STAT3, AKT e ERK), proliferação, migração, formação de estruturas tubulares e diferenciação em células endoteliais. O início do processo de mineralização de SHED tratadas com dexametasona, ácido ascórbico 'beta' - glicerofosfato pôde ser detectado por meio da produção da enzima fosfatase alcalina a partir da segunda semana de cultura, mas a expressão de RNAm para DSPP só foi observada após 28 dias de indução. Utilizando-se o modelo de fatias de dentes e matrizes condutivas implantadas no dorso de camundongos imunodeprimidos, demonstrou-se a diferenciação de SHED em células semelhantes a odontoblastos, as quais tiveram imunomarcação positiva com o anticorpo DMP-1. A deposição de dentina, seguindo um ritmo centrípeto de crescimento, numa taxa de 14,1 µm por dia também foi demonstrada por meio da marcação com tetraciclina. O tratamento das SHED com VEGF estimulou a fosforilação de ERK e AKT e a diminuiu a fosforilação de STAT3 em um período de uma hora, provavelmente por meio de sua ligação com os receptores VEGFR-1 e NP-1 presentes nestas células. Além disso, VEGF intensificou a organização das SHED em estruturas tubulares, havendo diferença estatisticamente significativa entre os grupos tratado e não tratado a partir do 5o dia de tratamento. Entretanto, VEGF não estimulou a proliferação nem a migração destas células. Os resultados de RT-PCR mostraram que SHED cultivadas em fatias de dentes e ...

Dental pulp tissue engineering aims to replace the inflamed or necrotic pulp by a healthy and functionally competent tissue able to form new dentin in order to repair lost structure. The purposes of this work were: to evaluate the differentiation ability of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) into functional odontoblasts, showing the formation of mineralized tissue in vivo; and to study the effect of VEGF on SHED with regards to the stimulation of cell signaling pathways (STAT3, AKT and ERK), the proliferation, migration, capillary sprouting, and the differentiation into endothelial cells. The beginning of the mineralization process of SHED treated with dexamethasone, ascorbic acid and beta-glycerophosphate could be detected through the production of alkaline phosphatase after the second week of culture, but the expression of DSPP mRNA was only observed after 28 days of induction. Using the tooth slice and scaffold model implanted in the dorsum of immunocompromised mice, the differentiation of SHED into odontoblast-like cells, which were immunostained with DMP-1 antibody, was demonstrated. Dentin deposition following a centripetal rhythm, in a rate of 14.1 µm per day, was also shown through the tetracycline labeling. VEGF treatment of SHED stimulated the ERK and AKT phosphorilation, and decreased the phosphorilation of STAT3 over 1 hour period, presumably due to its binding to VEGFR-1 and NP-1 receptors in these cells. In addition, VEGF enhanced SHED organization into tubular structures, with statistically significant difference between the treated group and the non-treated one after the 5th day of treatment. However, VEGF did not stimulate proliferation and migration of these cells. RT-PCR results demonstrated that SHED seeded in the tooth slices and scaffolds expressed VEGFR-2 after the first day of VEGF stimulation...