Estudo comparativo da clastogênese entre células MDPC-23 e células da medula óssea de camundongos / Effects of lipopolysaccharide and calcitriol on mdpc-23 differentiation into osteoclasts

Reabsorções internas das paredes dentinárias levantam dúvidas sobre a origem de células clásticas na polpa dentária em casos idiopáticos. Estudos recentes sugeriram que as células MDPC-23 (odontoblast-like) podem se diferenciar em células clásticas, contrariando estudos anteriores. O presente estudo teve como objetivo observar a influência do calcitriol (1,25-dihidroxivitamina D3) e do lipopolissacarídeo (LPS) na indução da diferenciação de células MDPC-23 (semelhantes a odontoblastos) em células semelhantes a clastos. Como as células MDPC-23 têm origem ectomesenquimal e células clásticas possuem origem hematopoiética, o estudo foi proposto para comparar, in vitro, o potencial clastogênico de dois modelos de origem embrionárias distintas frente a diferentes estímulos. Dois grupos, MDPC-23 e células da medula óssea de camundongos, foram cultivados e tratados com LPS ou 1,25-dihidroxivitamina D3 (calcitriol). No sexto dia, o ensaio de metiltiazolil-tetrazólio (MTT) foi realizado para observar a viabilidade celular diante dos tratamentos. Em seguida, o ensaio citoquímico foi executado para identificar células positivas para TRAP. Adicionalmente foi feito estudo da expressão gênica dos marcadores da clastogênese, OPG, RANK, RANKL, Csf1r, M-Csf1 e catepsina K, através da PCRq. No ensaio de MTT, a viabilidade celular não foi alterada com os tratamentos em comparação com os subgrupos controle. Células TRAP positivas estavam presentes apenas nos subgrupos medula óssea, induzidos com LPS ou calcitriol. O grupo medula óssea apresentou amplificação para todos os genes alvos mencionados. Já para os subgrupos do grupo MDPC-23 apresentaram expressão gênica significativa, diante dos tratamentos, apenas para os genes Csf1r e catepsina K. Concluiu-se, portanto, que embora apresente expressão relativa para os genes Csf1r e catepsina K, sob tratamento, as células MDPC-23 não foram capazes de se diferenciar em células clásticas.

Estudo comparativo da clastogênese entre células MDPC-23 e células da medula óssea de camundongos / Effects of lipopolysaccharide and calcitriol on mdpc-23 differentiation into osteoclasts

Reabsorções internas das paredes dentinárias levantam dúvidas sobre a origem de células clásticas na polpa dentária em casos idiopáticos. Estudos recentes sugeriram que as células MDPC-23 (odontoblast-like) podem se diferenciar em células clásticas, contrariando estudos anteriores. O presente estudo teve como objetivo observar a influência do calcitriol (1,25-dihidroxivitamina D3) e do lipopolissacarídeo (LPS) na indução da diferenciação de células MDPC-23 (semelhantes a odontoblastos) em células semelhantes a clastos. Como as células MDPC-23 têm origem ectomesenquimal e células clásticas possuem origem hematopoiética, o estudo foi proposto para comparar, in vitro, o potencial clastogênico de dois modelos de origem embrionárias distintas frente a diferentes estímulos. Dois grupos, MDPC-23 e células da medula óssea de camundongos, foram cultivados e tratados com LPS ou 1,25-dihidroxivitamina D3 (calcitriol). No sexto dia, o ensaio de metiltiazolil-tetrazólio (MTT) foi realizado para observar a viabilidade celular diante dos tratamentos. Em seguida, o ensaio citoquímico foi executado para identificar células positivas para TRAP. Adicionalmente foi feito estudo da expressão gênica dos marcadores da clastogênese, OPG, RANK, RANKL, Csf1r, M-Csf1 e catepsina K, através da PCRq. No ensaio de MTT, a viabilidade celular não foi alterada com os tratamentos em comparação com os subgrupos controle. Células TRAP positivas estavam presentes apenas nos subgrupos medula óssea, induzidos com LPS ou calcitriol. O grupo medula óssea apresentou amplificação para todos os genes alvos mencionados. Já para os subgrupos do grupo MDPC-23 apresentaram expressão gênica significativa, diante dos tratamentos, apenas para os genes Csf1r e catepsina K. Concluiu-se, portanto, que embora apresente expressão relativa para os genes Csf1r e catepsina K, sob tratamento, as células MDPC-23 não foram capazes de se diferenciar em células clásticas.

Correlação entre valores de pixel de tomografia computadorizada e a intensidade do sinal proveniente da medula óssea da mandíbula adquiridos por meio da Ressonância Magnética / Correlation between alveolar bone CT pixel values and bone marrow fat content: an MRI analysis

A análise por imagem das condições morfológicas do osso alveolar é essencial para o planejamento de tratamentos de diversas especialidades na odontologia. Porém, a maioria dos métodos de imagem utilizam radiação ionizante. Assim, a ressonância magnética (RM) ganha grande importância na pesquisa do tecido ósseo. O objetivo deste estudo foi correlacionar valores de pixel (VP) da tomografia Computadorizada Espiral (TCE) e Tomografia Computadorizada por Feixe Cônico (TCFC) com o sinal emitido pela medula óssea da mandíbula pela técnica da RM. Neste estudo retrospectivo, foram utilizados exames de RM e tomografia computadorizada do mesmo paciente. Utilizamos um aparelho de TCFC pareado com uma RM de 1,5T e duas marcas de tomógrafos espirais pareados com uma RM de 3T. Para a análise, foi selecionado um corte axial da mesma região do terço inferior da mandíbula nas duas técnicas de imagens. A media dos VP de uma região de interesse compreendendo toda área dos osso trabecular foi utilizada para análise. Foi observada correlação inversa e moderada para os dois aparelhos de TCE e a RM de 3T (0,62 e 0,56 com p<0,006); não foi observada correlação significante ente a TCFC e a RM de 1,5T. Considerando as limitações deste estudo, podemos concluir que, na mandíbula, existe uma relação inversa entre a densidade mineral óssea e medula óssea adiposa.

Papel dos receptores ß1 e ß2 adrenérgicos sobre a diferenciação osteoblástica de células mesenquimais estromais da medula óssea de ratos espontaneamente hipertensos / Role of ß1 and ß2 adrenergic receptor on bone marrow mesenquimal stem cells osteoblastic differentiation from hypertensive rats

Introdução: O remodelamento ósseo é um processo complexo que depende do balanço entre formação e reabsorção óssea, mecanismo regulado pelas células ósseas e fatores sistêmicos, como o Sistema Nervoso Simpático (SNS). Os mediadores deste sistema são capazes de regular o metabolismo ósseo através dos receptores adrenérgicos expressos na superfície dos osteoblastos. Entretanto, o papel dos receptores ß-adrenérgicos ainda não está totalmente elucidado no processo de diferenciação osteogênica. Objetivos: avaliar o papel dos receptores ß-adrenérgicos na diferenciação osteoblástica de células tronco mesenquimais da medula óssea de ratos normotensos e espontaneamente hipertensos (SHR). Métodos: Ratos machos Wistar e SHR (10 semanas) foram utilizados para a coleta da medula óssea a partir do fêmur, as quais foram plaqueadas em garrafas de cultivo celular e depois em placas de 24 poços, onde receberam o meio osteogênico (MO: MEM, mais 50 µg/mL de ácido ascórbico, 10 mM de ß-glicerofosfato e 10-8 M de dexametasona), e o tratamento com Isoprenalina (0,01 µM), Carvedilol (1 µM), antagonista adrenérgico não seletivo, ou Nebivolol (0,1 µM), antagonista ß1-adrenérgico. O ensaio de proliferação celular (MTT) e a atividade de fosfatase alcalina (Fal) foram realizados nos dias 7, 10 e 14. A mineralização foi avaliada no dia 14 através do vermelho de Alizarina. A expressão gênica dos marcadores osteogênicos e dos receptores ß1 e ß2 adrenérgicos foi avaliada no dia 7 por RT-PCR em tempo real. A atividade proteolítica da metaloproteinase de matriz (MMP-2) foi avaliada no mesmo período utilizando zimografia. As vias da MAPK também foram avaliadas ao final de 7 dias. Resultados: A Isoprenalina reduz a fosfatase alcalina na linhagem de células Wistar nos dois primeiros períodos, e ao final de 14 dias apresenta um aumento significativo. A adição dos -bloqueadores reverte tal resposta. Em SHR a Isoprenalina proporciona aumento da atividade de fosfatase alcalina no período intermediário. O Nebivolol inibe essa resposta no mesmo período e, em 7 dias, é capaz de reverter a redução causada pelo agonista. A Isoprenalina aumentou a expressão de todos os fatores de transcrição e o bloqueio dos receptores reverteu essa condição A Isoprenalina aumenta a expressão de Opn, Ocn e BSP nas células de animais Wistar, e em SHR aumenta apenas Ocn e o tratamento com Carvedilol corrige. A atividade de MMP-2 também foi reduzida pelo Nebivolol apenas no grupo Wistar. Além disso, o Nebivolol reduziu a expressão gênica do receptor ß1-adrenérgico. O ensaio de mineralização mostrou menor deposição mineral em Wistar. O Nebivolol também mediou a redução da fosforilação das vias da MAPK neste mesmo grupo de células. Conclusão: Nossos dados sugerem que o receptor ß1-adrenérgico pode estar envolvido na diferenciação osteogênica de células de ratos Wistar mas não em células de ratos SHR(AU)

Introduction: Bone remodeling is a complex process that depends on the balance between formation and resorption bone, a process which is regulated by bone cells and systemic factors, like the Sympathetic Nervous system (SNS). The mediators of these system are able to regulate bone metabolism through adrenergic receptors on the surface os the osteoblastos. However, the role of ß-adrenergic receptors is not clear in he osteogenic differentiation process. Thus, in this study we aimed to evaluate the role of B-adrenergic receptor on osteoblastic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells from normotensive and Spontaneously Hypertensive Rats (SHR). Methods: 70-days-old male Wistar and SHR rats were used for bone marrow collection from femurs, which was placed in cell culture flasks and after in to 24-well plates, where they received osteogenic medium (OM: MEN, plus 50 µg/mL ascorbic acid, 10 mM ß glycerophosphate, and 10-8 M dexamethasone) and the treatment with Isoprenaline (0.01 µM), Carvedilol (1µM), non-selective adrenergic receptor antagonist, or Nebivolol (0,1 µM), ß1-adrenergic receptor antagonist. Cell proliferation (MTT assay) and alkaline phosphatase specific activity (Alp) were analyzed at day 7, 10 and 14. Mineralization was evaluated at day 14, by Alizarin Red S. Gene expression of osteogenic markers and B1 and B2-adrenergic receptor were evaluated at day 7, by real time-RT-PCR. The proteolytic activity of matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) were evaluated at day 7 using gelatin zymography. The MAPK pathway was evaluated at the same period. Results: Isoprenaline provides increased alkaline phosphatase activity in the intermediate period. The addition of Nebivolol includes this response over this same period and, within 7 days, was able to reverse the reduced agonist reduction. Isoprenaline increased expression of all transcription factors and receptor blockade reversed this condition Isoprenaline increases expression of Opn, Ocn and BSP in Wistar animal cells, and in SHR only increases Ocn and Carvedilol-corrected treatment. MMP-2 was reduced by Nebivolol treatment just at Wistar cells. Besides that, Nebivolol reduced Adrb1 gene expression at day 7 in Wistar group. Mineralization showed that Nebivolol reduced mineral deposition in Wistar. Nebivolol reduced MAPK proteins phosphorylation. Conclusion: Our results suggest that ß1 adrenergic receptor seems to be involved in the osteogenic differentiation of cells from Wistar rats but not in SHR cells(AU)

Efeitos à distância de feridas cirúrgicas em mucosa oral sobre populações granulocíticas na medula óssea em modelo murino / Remote effects of surgical oral mucosa wounds on populations granulocytes in the bone marrow in a murine model

Neste trabalho procuramos determinar os efeitos à distância de um ferimento cirúrgico único na cavidade bucal (localizado no palato duro, de extensão 3 mm) sobre a medula óssea em camundongos C57BL/6. Para isto, quantificamos células totais, eosinófilos, neutrófilos e fagócitos mononucleares, tanto na medula óssea recém-coletada, como na medula óssea cultivada em presença de diferentes citocinas. As citocinas foram utilizadas para revelar defeitos sutis que não são detectáveis no exame da medula óssea recém-coletada. Na medula óssea recém-coletada, foi encontrado um aumento modesto, mas significativo, nos números de neutrófilos. Em culturas incubadas com Interleucina (IL)-3, foi observada uma redução significativa dos números de células totais, neutrófilos e fagócitos mononucleares. Em culturas incubadas com Fator Estimulante de Colônias de Granulócitos (G-CSF), foram observados efeitos negativos semelhantes aos encontrados com IL-3, com supressão de células totais, neutrófilos e fagócitos mononucleares. Em culturas incubadas com Fator Estimulante de Colônias de Granulócitos e Macrófagos (GM-CSF), foi observada redução significativa somente sobre o número de neutrófilos. O mesmo ocorreu na presença de Fator Estimulante de Colônias de Macrófagos (M-CSF). Utilizamos também rhG-CSF (Filgrastim®), que tem atividade em cultura de células murinas, sendo observado efeito negativo apenas sobre neutrófilos, em contraste com o observado na presença de G-CSF murino. O efeito positivo sobre o número de neutrófilos na medula óssea recém-coletada poderia ser explicado pela exposição a microrganismos da microbiota bucal no local da lesão, causando bacteremia. Para testar esta hipótese, adotamos uma estratégia de desinfecção local (Clorhexidina a 0,2% e 0,04%) antes da realização do corte, e avaliamos a repercussão deste tratamento sobre as diferentes respostas anteriormente caracterizadas. O tratamento com Clorhexidina a 0,2% eliminou os efeitos observados anteriormente sobre os números de células totais, neutrófilos e fagócitos mononucleares. Em contrapartida, após o tratamento com Clorhexidina a 0,04% alguns dos efeitos anteriormente encontrados, quanto aos números de neutrófilos e de fagócitos mononucleares, persistiram. Procuramos também avaliar se o bloqueio da resposta de glicocorticóides endógenos ao trauma cirúrgico, pelo uso de Mifepristone (RU486), antagonista do receptor de glicocorticóides, poderia modificar os efeitos da ferida na cavidade bucal sobre a medula óssea. Não houve evidência de bloqueio específico dos efeitos do trauma com o uso de RU486, comparativamente aos controles que receberam veículo. Em experimentos-piloto, avaliamos os efeitos do trauma cirúrgico, induzido em camundongos BP-2 segundo os protocolos utilizados anteriormente em camundongos C57BL/6, obtendo evidência de respostas importantes entre cepas no padrão de resposta da medula óssea. Dentro das limitações do presente estudo, podemos concluir que o trauma cirúrgico bucal atinge a medula óssea à distância, demonstrando efeitos positivos 24h após o trauma e negativos quando utilizamos citocinas. Além disso, a presença de bactérias bucais é responsável pela depressão da resposta da medula. (AU)

In this study, we aimed to identify, using C57BL/6 mice, long-distance effects of a single, surgical oral wound of 3 mm extension in the hard palate, on the bone marrow. To do so, we enumerated total cells as well as eosinophil, neutrophil and mononuclear phagocytes, from recently harvested bone marrow, and from cultured bone marrow following different cytokine stimuli. Cytokines were used to reveal subtle effects on the recently harvest bone marrow. In recently harvested bone marrow, a small but significant increase was found in neutrophil numbers. In cultures exposed to interleukin (IL)-3 there were decreased total cell, neutrophil and mononuclear phagocyte numbers. In cultures exposed to granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF), reduced total cell, neutrophil and mononuclear phagocyte numbers were observed resembling those in IL-3-exposed cultures. In cultures exposed to granulocytemacrophage-colony stimulating factor (GM-CSF), significant reduction was fund only in neutrophil numbers. The occurred when macrophage-colony stimulating factor (M-CSF) was used. We also used recombinant human G-CSF (rhG-CSF, Filgrastim®), which acts on murine cells, observing reduction in neutrophil numbers, unlike observations of murine G-CSF. The increase in neutrophil numbers in the fresh bone marrow might be induced by exposure of wounded surfaces to oral microorganisms and possibly by bacteremia. To test this hypothesis, the hard palate was disinfected with clorhexidine (CHX) 0.2% or 0.04%, prior to wounding. The treatment with CHX 0.2% abolished the cytokine effects in the total cell, neutrophil and mononuclear phagocyte numbers. By contrast, after treatment with CHX 0.04%, cytokine effects on the neutrophil and mononuclear phagocyte numbers persisted. We also sought to evaluate whether the effect of oral wounding on bone marrow was dependent on endogenous glucocorticoids. Blockade of the glucocorticoid antagonist receptor with mefipristone (RU486) provided results comparable to those of control group given vehicle only, thus ruling out this hypothesis. In pilot experiments, we also evaluated the effects of surgical trauma in BP-2 mice, using the protocol previously used for C57BL/6 mice, and found significant differences in the bone marrow responses between these two strains. Briefly, our limited experimental evidence shows that oral surgical trauma can influence the bone marrow at distance over a 24h postoperative period, and inducing positive or negative effects on various leukocyte lineages, before and after culture with cytokines. Available evidence points to oral bacteria as involved in these long-distance effects on bone-marrow. (AU)

Aspirado de medula óssea e plasma rico em plaquetas, associados ou não à terapia com laser em baixa intensidade no reparo ósseo: estudo histomorfométrico e imunoistoquímico / Bone marrow aspirate and platelet-rich plasma combined or not with low-level laser therapy on bone healing: a histomorphometric and immunohistochemical study

Este estudo avaliou a influência do aspirado de medula óssea (AMO) e do plasma rico em plaquetas (PRP) associados ou não à terapia com laser em baixa intensidade (LLLT) no reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico (DTC), criados cirurgicamente em calvárias de ratos. 96 ratos foram divididos em 6 grupos: C, PRP, AMO, LLLT, PRP/LLLT e AMO/LLLT. Um DTC de 5 mm de diâmetro foi criado na calvária de cada animal. No grupo C, o defeito foi preenchido com coágulo sanguíneo somente. Nos grupos PRP e AMO, o defeito foi preenchido com PRP e AMO, respectivamente. No grupo LLLT, o defeito recebeu aplicação da LLLT (InGaAlP), foi preenchido com coágulo sanguíneo e irradiado novamente. Nos grupos PRP/LLLT e AMO/LLLT, o defeito recebeu aplicação da LLLT, foi preenchido com PRP ou AMO, respectivamente e irradiado novamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 10 ou 30 dias pós-operatórios. Foram realizadas análises histomorfométrica e imunoistoquímica. A área de osso neformado (AON) foi calculada como porcentagem da área total do defeito original. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para detecção do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), proteínas morfogenéticas ósseas 2/4 (BMP-2/4) e osteocalcina (OCN). As células PCNA-positivas, BMP-2/4-positivas e OCN-positivas foram quantificadas. Os dados foram analisados estatisticamente. Aos 10 dias pós-operatórios, o grupo AMO apresentou AON significativamente maior que o grupo C. Aos 30 dias pós-operatórios, o grupo AMO apresentou AON significativamente maior que os grupos C e LLLT, bem como números significativamente maiores de células BMP-2/4-positivas e OCN-positivas que o grupo C. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que a terapia com AMO promoveu a regeneração óssea em defeitos de tamanho crítico em calvárias de ratos, tanto aos 10 dias como aos 30 dias pós-operatórios(AU)

This study evaluated the influence of bone marrow aspirate (BMA) and platelet-rich plasma (PRP) combined or not with low-level laser therapy (LLLT) on bone healing in surgically created critical-size defects (CSD) in rat calvaria. 96 rats were divided into 6 groups: C, PRP, BMA, LLLT, PRP/LLLT and BMA/LLLT. A 5 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C, the defect was filled by blood clot only. In groups PRP and BMA, the defects were filled with PRP and BMA, respectively. In Group LLLT, the defect received laser irradiation (InGaAlP laser), was filled with blood clot and irradiated again. In groups PRP/LLLT and BMA/LLLT, the defect received laser irradiation (InGaAlP laser), was filled with PRP or BMA, respectively, and irradiated again. Animals were euthanized at either 10 or 30 days postoperative. Histomorphometric and immunohistochemical analyses were performed. Newly formed bone area (NFBA) was calculated as a percentage of the total area of the original defect. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA), bone morphogenetic protein 2/4 (BMP-2/4) and osteocalcin (OCN) immunohistochemical staining were performed. PCNA-positive, BMP-2/4-positive and OCNpositive cells were quantified. Data were statistically analyzed. At 10 days postoperative, Group BMA presented significantly greater NFBA than control. At 30 days postoperative, Group BMA presented significantly greater NFBA than control and Group LLLT, as well as significantly higher numbers of BMP-2/4-positive and OCN-positive cells than control. Within the limits of this study, it can be concluded that the treatment with BMA promoted bone regeneration in critical-size rat calvarial defects at both 10 and 30 days postoperative(AU)

Aspirado de medula óssea e plasma rico em plaquetas associados ou não ao enxerto de osso autógeno no reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico criados cirurgicamente em calvárias de ratos: estudo histomorfométrico e imunoistoquímico / Bone marrow aspirate and platelet-rich plasma combined or not with autogenous bone graft on bone healing: a histomorphometric and immunohistochemical study

Este estudo avaliou a influência do aspirado de medula óssea (AMO) e do plasma rico em plaquetas (PRP) associados ou não ao enxerto de osso autógeno (OA) no reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico (DTC), criados cirurgicamente em calvárias de ratos. 96 ratos foram divididos em 6 grupos: C, PRP, AMO, OA, PRP/OA e AMO/OA. Um DTC de 5 mm de diâmetro foi criado na calvária de cada animal. No grupo C, o defeito foi preenchido com coágulo sanguíneo somente. Nos grupos PRP e AMO, o defeito foi preenchido com PRP e AMO, respectivamente. No Grupo OA, o defeito foi preenchido com enxerto de OA. Nos grupos PRP/OA e AMO/OA, o defeito foi preenchido com enxerto de OA combinado com PRP ou AMO, respectivamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 10 ou 30 dias pós-operatórios. Foram realizadas análises histomorfométrica e imunoistoquímica. A área de osso (AO) foi calculada como porcentagem da área total do defeito original. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para detecção do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), proteínas morfogenéticas ósseas 2/4 (BMP-2/4) e osteocalcina (OCN). As células PCNApositivas, BMP-2/4-positivas e OCN-positivas foram quantificadas. Os dados foram analisados estatisticamente. Aos 10 dias, os grupos OA, PRP/OA e AMO/OA apresentaram AO significativamente maior que o controle; e o grupo PRP/OA apresentou maior AO, bem como números significativamente maiores de células PCNA-positivas e BMP-2/4-positivas, que o grupo OA. Aos 30 dias, os resultados favoráveis dos grupos OA, PRP/OA e AMO/OA no reparo ósseoo foram também observados, e o grupo AMO/OA apresentou maior AO, bem como número significativamente maior de células OCN-positivas que o grupo OA. Além disso, o grupo AMO apresentou AO significativamente maior que o controle e similar a dos grupos OA e PRP/OA, mas menor que a do grupo AMO/OA. O grupo AMO apresentou números significativamente maiores de células PCNA-positivas, BMP-2/4-positivas e OCNpositivas que os grupos controle e PRP/OA. Pode-se concluir que, aos 10 dias, a associação PRP/OA proporcionou maior AO em DTC em calvárias de ratos quando comparada ao controle ou a cada terapia única; enquanto que, aos 30 dias, a associação AMO/OA foi a que promoveu maior AO que o controle ou cada terapia única. A terapia única com AMO promoveu AO semelhante àquela obtida com a terapia única com enxerto de OA aos 30 dias. Diferenças significativas na AO não foram observadas entre os grupos tratados com PRP/OA ou com AMO/OA em ambos os períodos de análise; contudo, um reparo ósseo mais avançado foi observado no grupo AMO/OA aos 30 dias(AU)

This study evaluated the influence of bone marrow aspirate (BMA) and platelet-rich plasma (PRP) combined or not with the autogenous bone (AB) graft on bone healing in surgically created critical-size defects (CSD) in rat calvaria. 96 rats were divided into 6 groups: C, PRP, BMA, AB, PRP/AB and BMA/AB. A 5 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C, the defect was filled by blood clot only. In groups PRP and BMA, the defects were filled with PRP and BMA, respectively. In Group AB, the defect was filled with AB graft. In groups PRP/AB and BMA/AB, the defect was filled with AB graft combined with PRP or BMA, respectively. Animals were euthanized at either 10 or 30 days postoperative. Histomorphometric and immunohistochemical analyses were performed. Bone area (BA) was calculated as a percentage of the total area of the original defect. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA), bone morphogenetic protein 2/4 (BMP-2/4) and osteocalcin (OCN) immunohistochemical staining were performed. PCNA-positive, BMP-2/4-positive and OCN-positive cells were quantified. Data were statistically analyzed. At 10 days, groups AB, PRP/AB and BMA/AB presented significantly greater BA than control; and group PRP/AB presented greater BA, as well as significantly higher numbers of PCNA-positive and BMP-2/4-positive cells than group AB. At 30 days, the favorable results of groups AB, PRP/AB and BMA/AB on bone healing were also observed; and group BMA/AB presented greater BA, as well as significantly higher number of OCN-positive cells than group AB. In addition, group BMA presented significantly greater BA than control and similar to groups AB and PRP/AB but lower than group BMA/AB. Group BMA presented significantly higher numbers of PCNA-positive, BMP-2/4-positive, and OCN-positive cells than control and PRP/AB. It can be concluded that, at 10 days, the combination of PRP/AB promoted greater BA in CSD in rat calvaria when compared to control or either treatment alone; while, at 30 days, the combination of BMA/AB promoted greater BA than control or either treatment alone. The treatment with BMA only yielded BA similar to that obtained with the treatment with AB graft only at 30 days. Significantly differences in BA were not observed between groups treated with PRP/AB or BMA/AB at both periods of analysis; however, a more advanced bone healing process was observed in group BMA/AB at 30 days(AU)

Reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico tratados com aspirado de medula óssea associado ou não a terapia com laser em baixa intensidade: estudo imunoistoquímico em calvárias de ratos / Bone healing in critical-size defects treated with bone marrow aspirate combined or not with low-level laser therapy: an immunohistochemical study in rat calvaria

Este estudo imunoistoquímico avaliou a influência do aspirado de medula óssea (AMO) associado ou não à terapia com laser em baixa intensidade (LLLT) no processo de reparo de defeitos de tamanho crítico (DTC), criados cirurgicamente em calvárias de ratos. 64 ratos foram aleatoriamente distribuídos em 4 grupos: C (controle), AMO, LLLT e AMO/LLLT. Um DTC de 5 mm de diâmetro foi criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito foi preenchido com coágulo sanguíneo somente. No Grupo AMO, o defeito preenchido com AMO. Nos grupos LLLT e AMO/LLLT, o defeito recebeu irradiação com laser (InGaAlP laser), foi preenchido com coágulo sanguíneo ou AMO, respectivamente, e irradiado novamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 15 e 30 dias pós-operatórios. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para detecção do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), fator de transcrição relacionado à Runt (Runx2), proteína óssea morfogenética-2 (BMP-2), osteopontina (OPN) e osteocalcina (OCN). Um método semi-quantitativo foi usado para avaliar a imunomarcação para VEGF. As células PCNA-positivas, Runx2-positivas, BMP-2-positivas, OPN-positivas e OCN-positivas foram quantificadas. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente. Aos 15 dias pós-operatórios, o Grupo LLLT apresentou números de células OPN-positivas e OCN-positivas significativamente maiores que o Grupo C; o Grupo AMO apresentou números de células PCNA-positivas, Runx2-positivas, BMP-2-positivas e OPN-positivas significativamente maiores do que os grupos C e LLLT, além de número de células OCN-positivas significativamente maior que o controle; o Grupo AMO/LLLT apresentou imunomarcação para VEGF e números de células Runx2-positivas, OPN-positivas e OCN-positivas significativamente maiores que o Grupo C. Aos 30 dias pós-operatórios, o Grupo LLLT apresentou imunomarcação para VEGF e números de células OPN-positivas e OCN-positivas significativamente...

This immunohistochemical study evaluated the influence of bone marrow aspirate (BMA) combined or not with low-level laser therapy (LLLT) on bone healing in surgically created critical-size defects (CSDs) in rat calvaria. 64 rats were randomly divided into 4 groups: C (control), BMA, LLLT and BMA/LLLT. A 5 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C, the defect was filled by blood clot only. In Group BMA, the defect was filled with BMA. In groups LLLT and BMA/LLLT, the defect received laser irradiation (InGaAlP laser), was filled with blood clot or BMA respectively, and irradiated again. Animals were euthanized at either 15 or 30 days postoperative. Vascular endothelial growth factor (VEGF), proliferating cell nuclear antigen (PCNA), runt-related transcription factor-2 (Runx2), bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), osteocalcin (OCN) and osteopontin (OPN) immunohistochemical staining were performed. A semi-quantitative method was used to evaluate VEGF immunolabeling. PCNA-positive, Runx2-positive, BMP-2-positive, OPN-positive and OCN-positive cells were quantified. Data were statistically analyzed. At 15 days postoperative, Group LLLT presented a significantly higher number of OPN-positive and OCN-positive cells than Group C; Group BMA presented a significantly higher number of PCNA-positive, Runx2-positive, BMP-2-positive and OPN-positive cells than groups C and LLLT, and a significantly higher number of OCN-positive cells than control; Group BMA/LLLT presented significantly higher VEGF immunolabeling and number of Runx2-positive, OPN-positive and OCN-positive cells than Group C. At 30 days postoperative, Group LLLT presented significantly higher VEGF immunolabeling and number of OPN-positive and OCN-positive cells than Group C; Group BMA presented a higher number of Runx2-positive, BMP-2-positive and OCN-positive cells than Group C; Group BMA/LLLT presented a significantly higher number of PCNA-positive, BMP-2-positive...

Defeito osteoporótico focal nos maxilares: estudo transversal retrospectivo em 525 tomografias computadorizadas de feixe cônico / A cross-sectional retrospective study on focal osteoporotic bone marrow jaw defects: evaluation of 525 CBCT images

Objetivo: avaliar a prevalência do defeito osteoporótico focal nos maxilares (DOFMO) através de imagens radiográficas. Material e métodos: neste estudo transversal e retrospectivo, tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC) – voxel = 0,2 mm, 120 KVp, 36,12 mA – foram selecionadas a partir de um banco de dados e analisadas em um programa de computador específico. O DOFMO foi definido como uma imagem hipodensa no trabeculado medular, circunscrita, sem limites muito definidos e sem envolvimento cortical, ausência de expansão, sem aspectos de lesão cística e nenhum envolvimento odontogênico, delimitado por linhas hiperdensas finas e contínuas separadas do trabeculado ósseo vizinho. Dois examinadores calibrados foram constituídos, e as discordâncias foram resolvidas por um terceiro avaliador. Resultados: o número total de TCFCs investigadas foi 525 (maxila = 258, mandíbula = 267), sendo 195 homens e 330 mulheres, com média de idade de 50,7 anos. Foram observados 91 DOFMOs (17,3%), sendo 32 (61,5%) no sexo feminino e 21 (38,4%) no sexo masculino. Em 44 casos (83,1%), observou-se o defeito na mandíbula; em nove casos (6,9%), observou-se o defeito na maxila. Em 38 casos (71,7%), o DOFMO se deu bilateralmente; em 15 casos (28,3%), foi observada distribuição unilateral, sendo que 12 foram encontrados na mandíbula e três na maxila. Conclusão: através deste estudo, pôde-se concluir que o DOFMO não se apresentou incomum e deve ser considerado durante o planejamento cirúrgico de instalação de implantes dentários.

Objective: to evaluate the prevalence of osteoporotic focal defect in the jaw (OFDJ) through radiographic images. Material and methods: in the cross-sectional retrospective study, CBCTs (voxel = 0.2 mm, 120 KVp, 36.12 mA) were selected from a databank and analyzed with a specifi c computer program. OFDJ was defined as circumscribed, hypodense image at the marrow area without defined limits without cortical involvement, no expansion, no aspects of cystic lesion and no odontogenic involvement, bounded by thin and continuous hyperdense lines separated from the adjacent trabecular bone. Two calibrated examiners made the diagnosis; disagreements were arbitrated by a third reviewer. Results: 525 CBCTs were investigated (maxilla = 258; mandible = 267), being 195 men and 330 women (mean age of 50.7 years). 91 OFDJ cases (17.3%) were seen, being 32 (61.5%) female and 21 (38.4%) and male. In 44 cases (83.1%) there was a mandibular defect, whereas 9 cases (6.9%) were seen in the maxillary arch. Bilateral distributions were seen for 38 cases (71.7%), while the unilateral pattern was observed only for 15 cases (28.3%), being these 12 in the mandible and 3 in the maxilla. Conclusion: OFDJ is not uncommon and must be considered during the planning for dental implant placement.

Influência do plasma rico em plaquetas derivado do aspirado de medula óssea na cicatrização de defeitos periodontais: estudo histológico, histométrico e imunoistoquímico em ratos / Influence of platelet-rich plasma derived from bone marrow aspirate on the healing of periodontal fenestration defects: a histologic, histometric and immunohistochemical study in rats

Este estudo avaliou a influência do plasma rico em plaquetas derivado do aspirado de medula óssea (PRP-bma) na cicatrização de defeitos de fenestração periodontal (PFD) em ratos. PFD foram criados cirurgicamente na mandíbula de 40 ratos. Os animais foram divididos randomicamente em 2 grupos: C e PRP-bma – os defeitos foram preenchidos com coágulo sanguíneo ou PRP-bma, respectivamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 10 ou 30 dias pós-operatórios. Foram realizadas análises histológica, histométrica e imunoistoquímica. A porcentagem de novo osso (NB), densidade do novo osso formado (DNB), novo cemento (NC) e extensão do defeito remanescente (ERD) foram avaliados histometricamente. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para detecção de antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), sialoproteína óssea (BSP), osteocalcina (OCN) e fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP). Células imunomarcadas foram quantificadas. Os dados foram analisados estatisticamente (ANOVA; Tukey, P < 0,05). Aos 10 dias, os grupos C e PRP-bma apresentaram quantidades similares de NB e DNB, e não foi observada formação de NC. Aos 30 dias, os grupos C e PRP-bma apresentaram quantidades similares de NB e DNB; o Grupo PRP-bma mostrou significativa formação de NC, com fibras colágenas inseridas obliquamente ou perpendicularmente à superfície radicular, sendo que nenhum espécime do Grupo C apresentou formação de NC. O Grupo PRP-bma apresentou um número significativamente maior de células PCNA-postivas (aos 10 dias) e BSP-positivas (aos 10 e 30 dias) que o Grupo C. Não foram observadas diferenças significativas no número de células OCN-positivas ou TRAP-positivas entre os grupos aos 10 ou 30 dias. Pode-se concluir que o PRP-bma promoveu formação de NC com ligamento periodontal funcional

This study evaluated the influence of platelet-rich plasma derived from bone marrow aspirate (PRP-bma) on the healing of periodontal fenestration defects (PFD) in rats. PFD were surgically created in the mandible of 40 rats. The animals were randomly divided into 2 groups: C and PRP-bma – defects were filled with blood clot or PRP-bma, respectively. Animals were euthanized at either 10 or 30 days post-operative. Histologic, histometric and immunohistochemical analyses were performed. Percentage of new bone (NB), density of newly formed bone (DNB), new cementum (NC) and extension of remaining defect (ERD) were histometrically evaluated. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA), bone sialoprotein (BSP), osteocalcin (OCN), and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) immunohistochemical staining were performed. Immunolabeled cells were quantified. Data were statistically analyzed (ANOVA; Tukey, P < 0.05). At 10 days, groups C and PRP-bma presented similar amounts of NB and DNB, NC formation was not observed. At 30 days, groups C and PRP-bma presented similar amounts of NB and DNB; Group PRP-bma showed significant NC formation, with collagen fibers inserted obliquely or perpendicularly to the root surface, while NC formation was not observed in any Group C specimen. Group PRP-bma presented a significantly higher number of PCNA-positive (at 10 days) and BSP-positive cells (at 10 and 30 days) than Group C. No significant differences in the number of either OCN-positive or TRAP-positive cells were observed between groups at 10 or 30 days. It can be concluded that PRP-bma promoted NC formation with a functional periodontal ligament

Terapia celular em regeneração óssea. Avaliação histomorfométrica de diferentes metodologias / Cell therapy on bone regeneration. An histomorphometric evaluation of different methodologies

Proposição: este estudo analisou a associação de diferentes metodologias de terapia celular a um enxerto ósseo xenógeno (Bio-Oss). Material e Métodos: 33 coelhos Nova Zelândia foram divididos, randomicamente, em cinco grupos experimentais (n=6) e um grupo controle (n=3). Foram criadas situações de defeitos ósseos bilaterais com o auxílio de fresas trefinas com 12 mm de diâmetro preenchidos – no grupo 1 com Bio-Oss; no grupo 2 com Bio-Oss enriquecido com medula óssea fresca; no grupo 3 com Bio-Oss enriquecido com a fração de células mononucleares da medula óssea; no grupo 4 com Bio-Oss enriquecido com células-tronco mesenquimais da medula óssea; e no grupo 5 com Bio-Oss enriquecido com células-tronco mesenquimais do tecido adiposo. Em cada animal, um dos defeitos ósseos foi recoberto com uma membrana colágena e o outro foi mantido sem recobrimento. Após oito semanas, os animais foram sacrificados, sendo seus ossos parietais fixados em formol 10% e processados para análise histomorfométrica. Resultados: no grupo-controle não existiu formação óssea. A histomorfometria demonstrou, para os lados sem recobrimento por membrana nos grupos de 1 a 5, TMV de 6,56 + 1,20%; 12,45 + 11,65%; 21,13 + 0,55; 27,9 + 5,79 e 16,67 + 5,0; respectivamente. O TMV para os lados com recobrimento pela membrana, nos grupos de 1 a 5, foi de 13,06 + 5,24%; 21,14 + 7,38%; 28,17 + 3,19; 28,24 + 6,17 e 17,21 + 7,3; respectivamente. Conclusão: a terapia celular pode maximizar os resultados regenerativos, normalmente propiciados por um biomaterial osseocondutor. O uso do concentrado de células mononucleares da medula óssea pareceu ser a metodologia com maior potencial para uso clínico.

Objective: this study investigated the combination of different cell therapy approaches in combination with a xenograft (Bio-Oss). Material and Methods: 33 New Zealand rabbits were randomly divided into five experimental groups (n=6) and one control group (n=3). Bilateral bone defects were created using 12 mm diameter trefin burs filled – in group 1, with Bio-Oss, in group 2 with Bio-Oss enriched with fresh bone marrow, in group 3 with Bio-Oss enriched with bone marrow mononuclear fraction, in group 4 with Bio-Oss enriched with bone marrow stem cells and, in group 5, with Bio-Oss enriched with adipose tissue stem cells. In each animal, one bone defect was covered by a collagen membrane and the other defect was not covered. After eight weeks, the animals were sacrificed and their parietal bone fixed in 10% formalin and processed for histomorphometric analysis. Results: in control group bone formation did not occur. Histomorphometry demonstrated, for the sides not covered by the collagen membrane, in groups 1, 2, 3, 4 and 5, a VMT of 6.56 + 1.20%; 12.45 + 11.65%; 21.13 + 0.55; 27.9 + 5.79 and 16.67 + 5.0, respectively. The sides covered by the collagen membrane demonstrated, in groups 1, 2, 3, 4 and 5, a VMT of 13.06 + 5.24%; 21.14 + 7.38%; 28.17 + 3.19; 28.24 + 6.17 and 17.21 + 7.3, respectively. Conclusion: cell therapy can maximize the regenerative results normally obtained by an osseoconductor biomaterial. The use of bone marrow mononuclear fraction concentration seems to be the methodology with higher potential for clinical use

Utilização de células-tronco mesenquimais em procedimentos visando o crescimento ósseo maxilomandibular û revisão de literatura / Use of mesenchymal stem cells in procedures for maxilo-mandibular bone growth û literature review

As células-tronco mesenquimais são uma população de células adultas obtidas através da medula óssea, sangue do cordão umbilical, e estão cada vez mais sendo utilizadas para tratamentos regenerativos e pesquisas de engenharia tecidual nas mais diversas áreas da medicina, isto devido ao fato de essas células serem multipotenciais, que conseguem se diferenciar em quase todos os tipos de tecidos humanos, com exceção da placenta e anexos embrionários. Quando coletadas são criopreservadas a temperaturas abaixo de 180°C para manterem o seu potencial de proliferação e diferenciação osteogênica in vitro. Elas possuem capacidade de se autoproliferar e se diferenciar ao longo de várias linhagens, incluindo osso, cartilagem, tecido adiposo, células musculares e neurais. O objetivo deste artigo é revisar a literatura sobre a capacidade que as células-tronco possuem em se diferenciar e proporcionar o crescimento ósseo através de seu potencial osteogênico (contendo células formadoras de osso), osteoindutor (contendo substâncias osteoindutoras) e osteocondutor (servem como uma base para formação de osso). Uma variedade de opiniões a respeito do tipo de materiais que deve ser utilizado para aplicações clínicas em defeitos ósseos torna ampla a discussão sobre resultados de traumas e ressecções de tumores ósseos. Para isso, os biomateriais fornecem uma excelente base para o crescimento ósseo quando combinado com um aspirado de concentrado de medula óssea. Apesar de estar comprovado cientificamente que as células estromais podem formar ossos, ainda não há estudos clínicos suficientes.

The mesenchymal stem cells are a population of mature cells obtained from bone marrow and umbilical cord blood. These cells are being widely used on regenerative treatment and tissue engineering research in several areas of medicine. That is occurring due to the fact that these cells are multipotent, being able to differentiate themselves into almost every type of human tissues, with the exception of the placenta and embryonic annexes. When collected these cells, are cryopreserved at temperatures below -180°C to preserve their potential for proliferation and osteogenic differentiation in vitro. They also have the ability to self-proliferate and differentiate along various cell lineages, including bone, cartilage, adipose tissue, muscle, and nerve cells. The aim of this study was to review the literature on the ability that mesenchymal cells have to differentiate themselves and provide bone growth through its osteogenic potential (containing bone-forming cells), osteoinductivity potential (containing osteoinductive substances) and osteoconductive (serve as a basis for bone formation). A variety of opinions about the type of materials that should be used for clinical application in bone defects amplifies the discussion around trauma and bone tumors resections.Biomaterials provide an excellent foundation for new bone growth when combined with an aspirated bone marrow concentrate. Although, it has been scientifically proven that stromal cells can form new bones, there are not enough clinical studies about it.

Cicatrização óssea de defeitos de tamanho crítico tratados com aspirado de medula óssea, laser em baixa intensidade ou a associação de ambas as terapias: estudo histológico e histométrico em calvárias de ratos / Bone healing in critical-size defects treated with either bone marrow aspirate, low-level laser therapy or a combination of both therapies: a histologic and histometric study in rat calvaria

O propósito deste estudo foi avaliar, histologicamente e histometricamente, o processo de cicatrização óssea em defeitos de tamanho crítico (DTC), criados cirurgicamente em calvárias de ratos e tratados com aspirado de medula óssea (AMO), laser em baixa intensidade (LLLT) ou a associação de ambas as terapias. 40 ratos foram divididos em 4 grupos: C (controle), AMO, LLLT e AMO/LLLT. Um DTC de 5 mm de diâmetro foi criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito foi preenchido com coágulo sangüíneo somente. No Grupo AMO, o defeito foi preenchido com AMO. Nos grupos LLLT e AMO/LLLT, o defeito recebeu aplicação da LLLT (InGaAlP laser), foi preenchido com coágulo sanguíneo e AMO, respectivamente, e recebeu novamente a aplicação da LLLT. Todos os animais foram submetidos à eutanásia aos 30 dias pós-operatórios. Análises histomorfométrica, usando software de análise de imagem, e histológica foram realizadas. A Área de Osso Neoformado (AON) foi calculada como uma porcentagem da área total do defeito original. Os dados foram analisados estatisticamente (ANOVA, Tukey, p<0,05). O Grupo AMO/LLLT (38,92 ± 7,12%) apresentou AON significativamente maior que os grupos C (13,75 ± 4,32%), AMO (28,71 ± 10,42%) e LLLT (18,40 ± 7,41%). O Grupo AMO apresentou AON significativamente maior que o controle. Não foram observadas diferenças significativas na AON dos grupos LLLT e C. Dentro dos limites desse estudo, pode-se concluir que a associação AMO/LLLT produziu formação óssea significativamente maior em DTC cirurgicamente criados em calvárias de ratos quando comparada ao controle ou a cada tratamento isoladamente

The purpose of this study was to analyze, histologically and histometrically, the influence of bone marrow aspirate (BMA), low-level laser therapy (LLLT) or their combination on bone healing in surgically created critical-size defects (CSD) in rat calvaria. 40 rats were divided into 4 groups: C (control), BMA, LLLT and BMA/LLLT. A 5 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C, the defect was filled by blood clot only. In Group BMA, the defect was filled with bone marrow aspirate. In groups LLLT and BMA/LLLT, the defect received laser irradiation (InGaAlP laser), was filled with blood clot or BMA respectively, and then irradiated again. All animals were euthanized at 30 days postoperatively. Histometric, using image analysis software, and histologic analyses were performed. Amount of newly formed bone (NFB) was calculated as a percentage of the total area of the original defect. Data were statistically analyzed (ANOVA, Tukey p<0.05). Group BMA/LLLT (38.92 ± 7.12%) had significantly greater NFB than groups C (13.75 ± 4.32%), BMA (28.71 ± 10.42%) and LLLT (18.40 ± 7.41%). Group BMA presented significantly greater NFB than control, while group LLLT did not. Within the limits of this study, it can be concluded that the combination of BMA/LLLT yielded significantly greater bone formation in surgically created CSD in rat calvaria when compared to control, or either treatment alone

Bone marrow mesenchymal cell adhesion to polished and nitrided titanium surfaces

Aim: To evaluate the adhesion of mouse bone marrow mesenchymal cells (MBMMC) on differenttitanium surfaces. Methods: Grade II titanium discs (ASTM F86) received two different surfacetreatments: polished (S1) and cathodic cage plasma nitriding (S2). MBMMC were cultured ontitanium discs in 24-well cell culture plates, at a density of 1 x 104 cells per well. After 24 h, theadhesion was evaluated using a hemocytometer. Results: The mean adhesion was greater onS2, though without statistically significant difference from S2 (p>0.05). Conclusions: It wasdemonstrated that titanium surface treatment with ionic nitriding in a cathodic cage is biocompatiblesince it preserved the integrity of the cultivated MBMMC for a period of 24 h, allowing theiradhesion.

Resposta tecidual de dentes reimplantados utilizando plasma pobre em plaquetas, plasma rico em plaquetas e células-tronco da medula óssea: estudo em cães / Tissue response of replanted teeth using platelet-poor plasma, platelet-rich plasma and bone marrow stem cells: study in dogs

A avulsão dentária é um tipo de trauma que resulta na perda da continuidade de um complexo e múltiplo compartimento de tecidos. Componentes derivados do sangue, incluindo o plasma pobre em plaquetas (PPP) e o plasma rico em plaquetas (PRP) constituem uma opção terapêutica para o reparo tecidual. O gel de PRP tem sido usado como arcabouço para células-tronco da medula óssea em Engenharia Tecidual. O propósito da presente investigação foi avaliar o efeito do PPP, PRP ativado ou não por trombina e células-tronco (CT) originárias da medula óssea associadas ao PRP no reparo de reimplantes dentários. Quatro cães foram utilizados neste estudo. PRP e PPP foram obtidos pelo método de dupla centrifugação a partir do sangue coletado da veia jugular dos animais. CT foram obtidas por aspiração da medula óssea (AMO) e isoladas pelo método de centrifugação por densidade de gradiente. A citometria de fluxo (CF) foi realizada após AMO utilizando marcadores celulares CD34 e CD90. Após 30 minutos da extração, os dentes foram reimplantados e, de acordo com a proposta metodológica, divididos em 5 grupos: Grupo I – dentes reimplantados sem material (Controle); Grupo II – dentes reimplantados com o Plasma Pobre em Plaquetas (PPP); Grupo III – dentes reimplantados com o Plasma Rico em Plaquetas ativado por cloreto de cálcio (PRP); Grupo IV – dentes reimplantados com o Plasma Rico em Plaquetas ativado por trombina de origem bovina e cloreto de cálcio (PRP + TR) e Grupo V – dentes reimplantados com células-tronco da medula óssea associadas ao PRP ativado por cloreto de cálcio (CT + PRP). Análises histológica, histomorfométrica e imuno histoquímica foram realizadas 120 dias após o reimplante. Análise de variância (ANOVA) e o teste post-hoc de Tukey foram utilizados para a análise estatística, com nível de significância de 5%. CF mostrou 55,98% de CD34+ e 33,28% de CD90+ após AMO. O grupo V (CT + PRP) apresentou as maiores áreas de reabsorção por substituição, confirmado por intensa...

Dental avulsion constitutes a traumatism which results in the loss of a complex and multiple tissue compartments. Blood-components products, including platelet-poor plasma (PPP) and platelet-rich plasma (PRP), constitute a therapeutic option for tissue healing. PRP gel has also been used as a scaffold for bone marrow stem cells in Tissue Engineering. This study aimed to evaluate the effect of PPP, PRP activated or not with thrombin and bone marrow stem cells (BMSC) associated with PRP on the healing of replanted teeth. Four adult hybrid dogs were used in this study. PRP and PPP were obtained trough double centrifugation technique of blood collected from the jugular vein of the animals. CTM were obtained from bone marrow aspiration (BMA) and isolated by density gradient centrifugation method. Flow Cytometry Analysis (FCA) was performed after BMA using CD34 and CD90 cells markers. After 30 minutes of extraction, teeth were replanted and, according to the methodological proposal, divided into 5 Groups: Group I – teeth replanted without any material (Control); Group II – teeth replanted with Platelet-poor Plasma (PPP); Group III – teeth replanted with Platelet-rich plasma activated by sodium chloride (PRP); Group IV – teeth replanted with Platelet-rich plasma activated by bovine thrombin and sodium chloride (PRP + TR) and Group V – teeth replanted with bone marrow stem cells associated with PRP activated by sodium chloride (BMSC + PRP). Histological, histomorphometric and immunohistochemical analysis were assessed 120 days after reimplantation. Analysis of variance (ANOVA) and Tukey post-hoc test were used for the statistical analysis, with the level of significance set at 5%. FCA showed 55.98% of CD34+ and 33.28% of CD90+ after BMA. Group V (BMSC + PRP) presented the largest areas of replacement resorption, confirmed by intense immunomarcation for osteopontin, with a significant difference during the histomorphometric analysis when compared to the other groups…

Resposta tecidual de dentes reimplantados utilizando plasma pobre em plaquetas, plasma rico em plaquetas e células-tronco da medula óssea: estudo em cães / Tissue response of replanted teeth using platelet-poor plasma, platelet-rich plasma and bone marrow stem cells: study in dogs

A avulsão dentária é um tipo de trauma que resulta na perda da continuidade de um complexo e múltiplo compartimento de tecidos. Componentes derivados do sangue, incluindo o plasma pobre em plaquetas (PPP) e o plasma rico em plaquetas (PRP) constituem uma opção terapêutica para o reparo tecidual. O gel de PRP tem sido usado como arcabouço para células-tronco da medula óssea em Engenharia Tecidual. O propósito da presente investigação foi avaliar o efeito do PPP, PRP ativado ou não por trombina e células-tronco (CT) originárias da medula óssea associadas ao PRP no reparo de reimplantes dentários. Quatro cães foram utilizados neste estudo. PRP e PPP foram obtidos pelo método de dupla centrifugação a partir do sangue coletado da veia jugular dos animais. CT foram obtidas por aspiração da medula óssea (AMO) e isoladas pelo método de centrifugação por densidade de gradiente. A citometria de fluxo (CF) foi realizada após AMO utilizando marcadores celulares CD34 e CD90. Após 30 minutos da extração, os dentes foram reimplantados e, de acordo com a proposta metodológica, divididos em 5 grupos: Grupo I – dentes reimplantados sem material (Controle); Grupo II – dentes reimplantados com o Plasma Pobre em Plaquetas (PPP); Grupo III – dentes reimplantados com o Plasma Rico em Plaquetas ativado por cloreto de cálcio (PRP); Grupo IV – dentes reimplantados com o Plasma Rico em Plaquetas ativado por trombina de origem bovina e cloreto de cálcio (PRP + TR) e Grupo V – dentes reimplantados com células-tronco da medula óssea associadas ao PRP ativado por cloreto de cálcio (CT + PRP). Análises histológica, histomorfométrica e imuno histoquímica foram realizadas 120 dias após o reimplante. Análise de variância (ANOVA) e o teste post-hoc de Tukey foram utilizados para a análise estatística, com nível de significância de 5%. CF mostrou 55,98% de CD34+ e 33,28% de CD90+ após AMO. O grupo V (CT + PRP) apresentou as maiores áreas de reabsorção por substituição, confirmado por intensa...

Dental avulsion constitutes a traumatism which results in the loss of a complex and multiple tissue compartments. Blood-components products, including platelet-poor plasma (PPP) and platelet-rich plasma (PRP), constitute a therapeutic option for tissue healing. PRP gel has also been used as a scaffold for bone marrow stem cells in Tissue Engineering. This study aimed to evaluate the effect of PPP, PRP activated or not with thrombin and bone marrow stem cells (BMSC) associated with PRP on the healing of replanted teeth. Four adult hybrid dogs were used in this study. PRP and PPP were obtained trough double centrifugation technique of blood collected from the jugular vein of the animals. CTM were obtained from bone marrow aspiration (BMA) and isolated by density gradient centrifugation method. Flow Cytometry Analysis (FCA) was performed after BMA using CD34 and CD90 cells markers. After 30 minutes of extraction, teeth were replanted and, according to the methodological proposal, divided into 5 Groups: Group I – teeth replanted without any material (Control); Group II – teeth replanted with Platelet-poor Plasma (PPP); Group III – teeth replanted with Platelet-rich plasma activated by sodium chloride (PRP); Group IV – teeth replanted with Platelet-rich plasma activated by bovine thrombin and sodium chloride (PRP + TR) and Group V – teeth replanted with bone marrow stem cells associated with PRP activated by sodium chloride (BMSC + PRP). Histological, histomorphometric and immunohistochemical analysis were assessed 120 days after reimplantation. Analysis of variance (ANOVA) and Tukey post-hoc test were used for the statistical analysis, with the level of significance set at 5%. FCA showed 55.98% of CD34+ and 33.28% of CD90+ after BMA. Group V (BMSC + PRP) presented the largest areas of replacement resorption, confirmed by intense immunomarcation for osteopontin, with a significant difference during the histomorphometric analysis when compared to the other groups…

Utilização de medula óssea autóloga na integração de enxertos ósseos homólogos / The use of autogenic bone marrow associated to homologous bone grafts: case series

Este artigo mostra a resolução de quatro casos clínicos onde a perda dos quatro elementos dentais superiores anteriores 11/22 trouxe uma reabsorção óssea maxilar dessa região que impedia a instalação dos implantes osseointegrados. Todos os pacientes foram submetidos a cirurgias de regeneração óssea, com a utilização de osso córtico medular homógeno fresco congelado, em bloco, sendo que, em dois dos pacientes esses blocos ósseos foram impregnados com medula óssea autóloga aspirada do próprio paciente e nos outros dois pacientes foram apenas fixados os blocos ósseos sem associação alguma. Após um período de seis meses, implantes foram instalados nessa região e uma biópsia foi realizada, o que proporcionou a confecção de lâminas histológicas. A associação da medula óssea autóloga ao osso homógeno resultou na obtenção de um maior volume ósseo.

This paper shows four clinical cases where the anterior upper incisors were lost, which resulted in inadequate bone volume for implant placement. All patients were submitted to bone graft surgery with fresh frozen homogenous block graft. In two patients the blocks were embedded in an autologous bone marrow aspirate in the other two the homogenous block was used alone. After six months, implants were positioned and biopsy removed for histological evaluation. The association of the autologous bone marrow to the homogenous bone block resulted in an adequate bone volume that was considered superior to the other sites where the bone marrow was not used.

Avaliação do efeito de centrifugado de medula óssea no processo de reparo ósseo ao redor de implantes instalados em tíbia de coelho: análise histológica e histométrica / Evaluation of the effect of bone marrow centrifuged in the bone repair around implant installed in tibia’s rabbit: histological and histometric analys

O objetivo deste estudo experimental foi comparar histologicamente o reparo ósseo ao redor de implantes preenchidos por coágulo local com ou sem a associação de centrifugado de medula óssea, por meio de análises histológica e histométrica. Doze coelhos receberam dois implantes osseointegráveis em cada tíbia direita, onde a primeira cortical foi preparada com 5 mm e a segunda, ou cortical inferior, com 3 mm. Os implantes foram estabilizados na cortical inferior com 40 N, sendo um defeito preenchido por coagulo sanguíneo e o outro com coágulo e centrifugado de medula óssea. O sacrifício dos animais foi realizado nos períodos de 7, 21 e 60 dias. As peças foram submetidas a processamento laboratorial de rotina e coradas com vermelho de alizarina e azul de Stevenel. Tanto o grupo coágulo quanto o grupo coágulo e centrifugado de medula, após 60 dias, tiveram seus defeitos preenchidos por tecido ósseo, não apresentando diferença estatística entre os grupos quanto à extensão linear de contato entre tecido ósseo e implante

The objective of this experimental study was to compare histologically the bone repair around implant filled out by local coagulum with or without association of bone marrow centrifuged through histological and histometric analysis. Twelve rabbits received two implants in the right tibia, where the first cortical it was prepared with 5 mm and the second or lower cortical, with 3 mm. The implants were stabilized in lower cortical with 40 N, being one defect filled out by blood coagulum and the other filled out by blood coagulum and bone marrow centrifuged. The sacrifice of the animals was accomplished in the periods of 7, 21 and 60 days. The pieces were submitted to routine laboratorial process and stained with alizarin red and Stevenel’s blue. Both groups had their defects filled by bone after 60 days, not presenting statistical difference between the groups about the linear extension of contact between bone tissue and implant

Avaliação do efeito de centrifugado de medula óssea no processo de reparo ósseo ao redor de implantes instalados em tíbia de coelho: análise histológica e histométrica / Evaluation of the effect of bone marrow centrifuged in the bone repair around implant installed in tibia’s rabbit: histological and histometric analys

O objetivo deste estudo experimental foi comparar histologicamente o reparo ósseo ao redor de implantes preenchidos por coágulo local com ou sem a associação de centrifugado de medula óssea, por meio de análises histológica e histométrica. Doze coelhos receberam dois implantes osseointegráveis em cada tíbia direita, onde a primeira cortical foi preparada com 5 mm e a segunda, ou cortical inferior, com 3 mm. Os implantes foram estabilizados na cortical inferior com 40 N, sendo um defeito preenchido por coagulo sanguíneo e o outro com coágulo e centrifugado de medula óssea. O sacrifício dos animais foi realizado nos períodos de 7, 21 e 60 dias. As peças foram submetidas a processamento laboratorial de rotina e coradas com vermelho de alizarina e azul de Stevenel. Tanto o grupo coágulo quanto o grupo coágulo e centrifugado de medula, após 60 dias, tiveram seus defeitos preenchidos por tecido ósseo, não apresentando diferença estatística entre os grupos quanto à extensão linear de contato entre tecido ósseo e implante

The objective of this experimental study was to compare histologically the bone repair around implant filled out by local coagulum with or without association of bone marrow centrifuged through histological and histometric analysis. Twelve rabbits received two implants in the right tibia, where the first cortical it was prepared with 5 mm and the second or lower cortical, with 3 mm. The implants were stabilized in lower cortical with 40 N, being one defect filled out by blood coagulum and the other filled out by blood coagulum and bone marrow centrifuged. The sacrifice of the animals was accomplished in the periods of 7, 21 and 60 days. The pieces were submitted to routine laboratorial process and stained with alizarin red and Stevenel’s blue. Both groups had their defects filled by bone after 60 days, not presenting statistical difference between the groups about the linear extension of contact between bone tissue and implant