Isolamento e identificação do vírus da Artrite encefalite caprina, a partir do co-cultivo de células mononucleares do sangue com células de membrana sinovial de cabra / Isolation and identification of the caprine arthritis-encephalitis virus from the co-cultivation of peripheral blood mononuclear cells with goat membrane sinovial cells

O vírus da Artrite encefalite caprina é o agente causal de uma doença progressiva e debilitante em caprinos, em que as células da linhagem monócito/macrófago são as principais hospedeiras do vírus in vivo. Essas células estão presentes no colostro, no leite ou no sangue. Estudos demonstram que a replicação viral é dependente do nível de maturação ou diferenciação da célula monocítica, influenciando na sensibilidade de detecção do vírus. Neste estudo, utilizamos o cocultivo de monócitos/macrófagos com células de membrana sinovial de cabras, para o isolamento do vírus circulante no campo; a técnica de double nested PCR (dn PCR) dos co-cultivos e sangue, viabilizou a confirmação do isolamento viral, e a detecção direta do vírus no sangue. Através dessa técnica, detectou-se a presença do DNA proviral em animais soronegativos por Imunodifusão em Gel de Agarose (IDGA); esses achados confirmam que o tempo entre o inicio da infecção e o aparecimento de anticorpos no sangue é variável, facilitando a permanência de animais falsos-negativos no rebanho. Nas amostras processadas, tivemos uma divergência de resultados entre amostras sorologicamente positivas, entretanto, negativas por dn PCR, quando se utilizou a amplificação direta do sangue. Quanto ao cultivo de monócitos/ macrófagos in vitro e posterior co-cultivo com células de MSC obteve-se êxito pelo isolamento do vírus em quatro animais, havendo sido um deles soronegativo. O presente estudo demonstra o primeiro isolamento do vírus nos rebanhos do estado da Bahia, além da implementação da técnica de dn PCR, em co-cultivo de células.

Estudo morfológico dos componentes do pedículo ovariano de cabra / Morphologic study of the ovarian pedicle components in goat

Introdução - Este trabalho teve como objetivo estudar a morfologia dos componentes de pedículos ovarianos de cabras, com intuito de identificar também a possibilidade de passagem de substâncias do sangue venoso procedente do útero para o sangue arterial ovariano, fato importante no processo de reprodução. Método - Pedículos ovarianos de 15 cabras adultas foram estudados mediantes cortes histológicos de 6 micrômetros de espessura de diferentes segmentos corados segundo os métodos de Hematoxilina e Eosina, tricômico de Masson, van Gieson, Verhoeff, reticulina de Gomori e Picrosirius-red. Os componentes vasculares também foram examinados após injeção de látex corado, emulsão de sulfato de bário, acetato de vinil e tinta da China, seguidos, respectivamente pelas técnicas de dissecção, exames radiográficos, corrosão em ácido sulfúrico a 30% e exames histológicos. Resultados - Foram descritos os aspectos histológicos dos vasos do pedículo ovariano, seus envoltórios, suas relações e constituição do tecido conjuntivo intervascular. Foi identificada ainda a passagem de tinta da China do sistema venoso uterino para a artéria ovárica. Conclusão - Os achados permitem concluir que, nesta espécie, existe a possibilidade de passagem direta de substâncias do sistema venoso uterino para o sistema arterial ovariano.

SDS-PAGE and Western blot analysis of somatic and extracellular antigens of Corynebacterium pseudotuberculosis

Diferentes técnicas para isolar e descrever antígenos das frações secretadas de superfície e somáticas deCorynebacterium pseudotuberculosis foram estudadas por SDS-PAGE e imunoblot, utilizando-se pool de soros de cabras naturalmente infectadas. Os antígenos secretados foram obtidos do sobrenadante de cultura da bactéria cultivada em meio quimicamente definido ou em meio BHI (Brain Heart Infusion). A fração de superfície foi obtida por tratamento com NaCl 1M, e as frações somßticas foram obtidas por vários procedimentos (detergentes e ultra-som). Pela coloração por Coomassie blue, foram detectadas 20 bandas na fração secretada, 35 bandas no extrato de superfície e entre 40 e 50 bandas, a depender do processo de extração, na fração somßtica. Entre todas as frações estudadas, foram detectadas 16 proteínas imunorreativas. As bandas com pesos moleculares de 125, 108, 75, 68, 41, 40, 31 e 24 kDa foram reconhecidas commaior intensidade e todas elas foram encontradas na fração secretada. A utilização do meio quimicamente definido permitiu revelar, na fração secretada de C. pseudotuberculosis, a presença de proteínas de alto pesomolecular que não tinham sido previamente descritas.