Efeitos da terapia fotodinâmica na candidose experimental e resposta imunológica no modelo hospedeiro de Galleria mellonella / Effects of photodynamic therapy on experimental candidosis and immune response in the Galleria mellonella host model

A terapia fotodinâmica (TFD) tem demonstrado ação antimicrobiana sobre as leveduras do gênero Candida, sendo considerada uma técnica promissora para o tratamento de candidose. Recentemente foi relatado que a aplicação de TFD também pode resultar em ativação do sistema imunológico, contribuindo para a melhora da infecção. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a ação da TFD e da terapia laser sobre a resposta imunológica à candidose experimental utilizando Galleria mellonella como modelo hospedeiro de infecção. Larvas de G. mellonella foram infectadas com diferentes cepas de Candida albicans e, após 30 min, foram tratadas com TFD mediada por azul de metileno e laser diodo emitido em 660 nm. A seguir, as larvas foram incubadas a 37°C por sete dias e analisadas diariamente para determinação da curva de sobrevivência. Para o estudo da resposta imunológica, após os tempos de 3, 6, 18 h da TFD foram realizados testes de determinação da densidade de hemócitos na hemolinfa de G. mellonella. Os dados obtidos na curva de sobrevivência foram avaliados pelo teste de Log-rank (Mantel Cox) e os resultados da análise imunológica por análise de variância ANOVA e teste de Tukey, com significância de 5%. Os resultados obtidos demonstraram que tanto para a cepa ATCC 18804 como para a cepa clínica 17 de C. albicans, a TFD prolongou a sobrevivência das larvas de G. mellonella infectadas por uma dose fúngica letal. Entretanto, houve diferença estatisticamente significante entre os grupos PDT e controle somente com cepa ATCC (p=0,0056). Foi verificado também que a infecção pela cepa ATCC 18804 de C. albicans em G. mellonella levou a uma redução no número de hemócitos na hemolinfa, e o tratamento com TFD e terapia laser conseguiram aumentar o número de hemócitos, mas sem apresentar diferença estatística significante. Foi possível concluir com esse estudo que a TFD bem como a terapia laser influenciaram de maneira positiva na melhora da infecção por C. albicans no modelo de G. mellonella.(AU)

Photodynamic therapy (PDT) has demonstrated antimicrobial activity on the yeast of the genus Candida and is considered a promising technique for the treatment of candidiasis. Recently it was reported that the application of PDT may also result in activation of the immune system, contributing to the improvement of the infection. The objective of this study is to evaluate the action of PDT and laser therapy on the immune response to experimental candidiasis using Galleria mellonella as host of the infection. G. mellonella larvae were infected with different Candida albicans strains and, after 30 min were treated with methylene blue-mediated PDT and laser diode emitted at 660 nm. Then, the larvae were incubated at 37° C for seven days and analyzed daily in order to determine the survival curve. For the study of the immunological response, after intervals of 3, 6, 18 h of the PDT, tests were performed to determine the density of hemocytes in the hemolymph of G. mellonella. The data obtained in the survival curve were evaluated by the Log-rank test (Mantel Cox) and the results of the immunological analysis by analysis of variance ANOVA and Tukey test, with significance of 5%. The results demonstrated that for both the ATCC 18804 strain and the C. albicans clinical strain 17, PDT prolonged the survival of the infected G. mellonella larvae by a lethal fungal dose. However, there was a statistically significant difference between the PDT and the control groups only with ATCC strain (p = 0.0056). It was also found that infection by the C. albicans ATCC 18804 strain in G. mellonella led to a reduction in the number of hemocytes in the hemolymph, and the treatment with PDT and laser therapy succeeded in increasing the number of hemocytes but without significant statistical difference . It was possible to conclude from this study that PDT as well as laser therapy positively influenced the improvement of C. albicans infection in the G. mellonella model(AU)

Interações entre diferentes espécies de Candida na candidose experimental em modelos de invertebrados e vertebrados / Interactions between Candida species in the experimental candidiasis in invertebrate and vertebrate models

O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro e in vivo as interações entre as diferentes espécies de Candida por meio da formação de biofilme em placas de 96 poços, indução de candidose experimental em modelo de Galleria mellonella e de camundongos imunossuprimidos. Foram estudadas as cepas padrão das seguintes espécies: C. albicans (ATCC 18804), C. krusei (ATCC 6258) e C. glabrata (ATCC 90030). A partir de cada espécie, foram formados biofilmes monotípicos e heterotípicos no fundo da placa de 96 poços por 48 h. A seguir, a quantidade de biofilme formado foi analisada pela determinação do número de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). G. mellonella foi inoculada com suspensões homotípicas e heterotípicas de Candida (105 células/mL) e incubadas a 37°C. Durante 5 dias, o número de lagartas mortas foi avaliado diariamente para análise da curva de sobrevivência. Em outro experimento, após 0, 2, 4, 8, 12 e 24 h da infecção por Candida, a hemolinfa das lagartas foi extraída para contagem das células fúngicas (UFC/mL). Para a indução da candidose bucal em camundongos, os animais foram inoculados com suspensões microbianas homotípicas ou heterotípicas contendo 108 células/mL. Após 48 h da última inoculação, amostras do dorso da língua foram coletadas e semeadas em ágar cromogênico HiCrome para contagem de UFC/mL recuperadas da cavidade bucal. Em seguida, os animais foram eutanasiados e as línguas retiradas para análise macroscópica e microscópica. A análise dos dados de UFC/mL dos biofilmes in vitro, de Candida na hemolinfa de G. mellonella e da recuperação dos camundongos foi feita por Análise de Variância, Teste de Tukey ou t de Student. A análise da curva de sobrevivência foi realizada utilizando o teste Log-rank (Mantel-Cox). Para avaliação dos escores obtidos na análise macroscópica e histológica foram aplicados os testes de Kruskal-Wallis ou Mann-Whitney (p≤0,05). Os resultados dos biofilmes formados in vitro demonstraram um menor número de UFC/mL ..

The aim of this study was to evaluate in vitro and in vivo interactions between different Candida species through the formation of biofilms in 96-well plates, induction of experimental candidiasis in Galleria mellonella model and immunosuppressed mice. We studied the standard strains of the following species: C. albicans (ATCC 18804), C. krusei (ATCC 6258) and C. glabrata (ATCC 90030). Monotypic biofilms of each species and heterotypic biofilms were performed on the bottom of 96-well plate for 48 h. Then, the amount of biofilm was analyzed by determining the number of colony forming units (CFU/mL). The larvae of G. mellonella were inoculated with homotypic and heterotypic suspensions of Candida (105 cells/mL) and incubated at 37°C. For 5 days, the number of dead larvae was assessed daily for survival curve analysis. In another experiment, after 0, 2, 4, 8, 12 and 24 h of infection with Candida, hemolymph of worms was extracted for counting the fungal cells (CFU/mL). For induction of oral candidiasis in mice, the animals were inoculated with homotypic or heterotypic microbial suspensions containing 108 cells/mL. After 48 h of the last inoculation, samples of the tongue were collected and seed in HiCrome chromogenic agar for counting of CFU/mL recovered from the oral cavity. Then, the animals were euthanized and their tongues removed for macroscopic and microscopic analysis. The analysis of Candida biofilms in vitro CFU/mL, the hemolymph of G. mellonella and recovery of mice were made by ANOVA, Tukey test or Student’s t test. The analysis of the survival curve was performed using GraphPad Prism using the Log-rank test (Mantel - Cox). Kruskal-Wallis or Mann-Whitney were applied for evaluation scores of macroscopic and histological analysis (p≤0,05). The results of biofilms in vitro have demonstrated a lower number of CFU/mL of C. albicans biofilms in heterotypic biofilm compared to monotypic. In the G. mellonella model, 100% of the larvae died within 18 h of ..