Papel dos receptores ß1 e ß2 adrenérgicos sobre a diferenciação osteoblástica de células mesenquimais estromais da medula óssea de ratos espontaneamente hipertensos / Role of ß1 and ß2 adrenergic receptor on bone marrow mesenquimal stem cells osteoblastic differentiation from hypertensive rats

Introdução: O remodelamento ósseo é um processo complexo que depende do balanço entre formação e reabsorção óssea, mecanismo regulado pelas células ósseas e fatores sistêmicos, como o Sistema Nervoso Simpático (SNS). Os mediadores deste sistema são capazes de regular o metabolismo ósseo através dos receptores adrenérgicos expressos na superfície dos osteoblastos. Entretanto, o papel dos receptores ß-adrenérgicos ainda não está totalmente elucidado no processo de diferenciação osteogênica. Objetivos: avaliar o papel dos receptores ß-adrenérgicos na diferenciação osteoblástica de células tronco mesenquimais da medula óssea de ratos normotensos e espontaneamente hipertensos (SHR). Métodos: Ratos machos Wistar e SHR (10 semanas) foram utilizados para a coleta da medula óssea a partir do fêmur, as quais foram plaqueadas em garrafas de cultivo celular e depois em placas de 24 poços, onde receberam o meio osteogênico (MO: MEM, mais 50 µg/mL de ácido ascórbico, 10 mM de ß-glicerofosfato e 10-8 M de dexametasona), e o tratamento com Isoprenalina (0,01 µM), Carvedilol (1 µM), antagonista adrenérgico não seletivo, ou Nebivolol (0,1 µM), antagonista ß1-adrenérgico. O ensaio de proliferação celular (MTT) e a atividade de fosfatase alcalina (Fal) foram realizados nos dias 7, 10 e 14. A mineralização foi avaliada no dia 14 através do vermelho de Alizarina. A expressão gênica dos marcadores osteogênicos e dos receptores ß1 e ß2 adrenérgicos foi avaliada no dia 7 por RT-PCR em tempo real. A atividade proteolítica da metaloproteinase de matriz (MMP-2) foi avaliada no mesmo período utilizando zimografia. As vias da MAPK também foram avaliadas ao final de 7 dias. Resultados: A Isoprenalina reduz a fosfatase alcalina na linhagem de células Wistar nos dois primeiros períodos, e ao final de 14 dias apresenta um aumento significativo. A adição dos -bloqueadores reverte tal resposta. Em SHR a Isoprenalina proporciona aumento da atividade de fosfatase alcalina no período intermediário. O Nebivolol inibe essa resposta no mesmo período e, em 7 dias, é capaz de reverter a redução causada pelo agonista. A Isoprenalina aumentou a expressão de todos os fatores de transcrição e o bloqueio dos receptores reverteu essa condição A Isoprenalina aumenta a expressão de Opn, Ocn e BSP nas células de animais Wistar, e em SHR aumenta apenas Ocn e o tratamento com Carvedilol corrige. A atividade de MMP-2 também foi reduzida pelo Nebivolol apenas no grupo Wistar. Além disso, o Nebivolol reduziu a expressão gênica do receptor ß1-adrenérgico. O ensaio de mineralização mostrou menor deposição mineral em Wistar. O Nebivolol também mediou a redução da fosforilação das vias da MAPK neste mesmo grupo de células. Conclusão: Nossos dados sugerem que o receptor ß1-adrenérgico pode estar envolvido na diferenciação osteogênica de células de ratos Wistar mas não em células de ratos SHR(AU)

Introduction: Bone remodeling is a complex process that depends on the balance between formation and resorption bone, a process which is regulated by bone cells and systemic factors, like the Sympathetic Nervous system (SNS). The mediators of these system are able to regulate bone metabolism through adrenergic receptors on the surface os the osteoblastos. However, the role of ß-adrenergic receptors is not clear in he osteogenic differentiation process. Thus, in this study we aimed to evaluate the role of B-adrenergic receptor on osteoblastic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells from normotensive and Spontaneously Hypertensive Rats (SHR). Methods: 70-days-old male Wistar and SHR rats were used for bone marrow collection from femurs, which was placed in cell culture flasks and after in to 24-well plates, where they received osteogenic medium (OM: MEN, plus 50 µg/mL ascorbic acid, 10 mM ß glycerophosphate, and 10-8 M dexamethasone) and the treatment with Isoprenaline (0.01 µM), Carvedilol (1µM), non-selective adrenergic receptor antagonist, or Nebivolol (0,1 µM), ß1-adrenergic receptor antagonist. Cell proliferation (MTT assay) and alkaline phosphatase specific activity (Alp) were analyzed at day 7, 10 and 14. Mineralization was evaluated at day 14, by Alizarin Red S. Gene expression of osteogenic markers and B1 and B2-adrenergic receptor were evaluated at day 7, by real time-RT-PCR. The proteolytic activity of matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) were evaluated at day 7 using gelatin zymography. The MAPK pathway was evaluated at the same period. Results: Isoprenaline provides increased alkaline phosphatase activity in the intermediate period. The addition of Nebivolol includes this response over this same period and, within 7 days, was able to reverse the reduced agonist reduction. Isoprenaline increased expression of all transcription factors and receptor blockade reversed this condition Isoprenaline increases expression of Opn, Ocn and BSP in Wistar animal cells, and in SHR only increases Ocn and Carvedilol-corrected treatment. MMP-2 was reduced by Nebivolol treatment just at Wistar cells. Besides that, Nebivolol reduced Adrb1 gene expression at day 7 in Wistar group. Mineralization showed that Nebivolol reduced mineral deposition in Wistar. Nebivolol reduced MAPK proteins phosphorylation. Conclusion: Our results suggest that ß1 adrenergic receptor seems to be involved in the osteogenic differentiation of cells from Wistar rats but not in SHR cells(AU)

Influência do sistema nervoso simpático na periodontite induzida e em glândula salivar de ratos / Adrenergic neuromodulation during periodontal disease induction and its effects in rats salivary glands

A ação de beta-bloqueadores na melhoria da qualidade óssea e sua ação anti-inflamatória embasam a hipótese de que a modulação simpática pode influenciar a evolução da doença periodontal (DP). Estudos demonstram relação entre disfunção salivar e DP; no entanto, os efeitos da DP nas glândulas salivares, cuja secreção é controlada pelo sistema nervoso autônomo, são pouco estudados. Objetivou-se analisar os efeitos do bloqueio e da ativação de receptores beta-adrenérgicos na reabsorção alveolar na DP em ratos, assim como os efeitos da DP, associada ou não a tratamento adrenérgico, nas glândulas salivares. Foram utilizados 40 ratos divididos em quatro grupos: (1) Grupo Propranolol 0,1mg/Kg com indução de DP; (2) Grupo Isoproterenol 0,75mg/Kg e DP; (3) Grupo Controle sem DP, com administração solução fisiológica ; (4) Grupo Controle com DP, com administração solução fisiológica. Depois de 14 dias de tratamento, ocorreu a eutanásia. Removeram-se as hemi mandíbulas e as glândulas submandibulares e sublinguais para análise. O suporte e a perda óssea alveolar foram determinados radiográfica e macroscopicamente. As glândulas foram pesadas, medidase submetidas à preparação de rotina para coloração com hematoxilina e eosina e Alcian Blue. Avaliou-se histomorfometricamente a área de ácinos, ductos e a vacuolização celular. Após estatística (p<0,05), verificou-se menor suporte e maior perda alveolar na presença de ligadura e maior perda alveolar em animais com tratados com isoproterenol. O isoproterenol aumentou significantemente peso e dimensões glandulares, reduziu área ductal e vacuolização, e aumentou área acinar na submandibular. Propranolol apenas reduziu vacuolização em relação ao controle com DP, e as demais comparações não foram estatisticamente significantes. Concluiu-se que a estimulação simpática agravou a DP, porém não houve alteração pelo bloqueio beta adrenérgico. A associação entre DP e isoproterenol levou às alterações glandulares significativas,...

The action of beta-blockers in the improvement of bone quality and their anti-inflammatory actions base the hypothesis that sympathetic nervous system modulation can influence periodontal disease (PD). Studies demonstrate a relation ship between salivary dysfunction and PD;however, there are few studies about the effects of PD in salivary glands,whose secretion is controlled by the autonomic nervous system. The aim of this study was to analyze the effects of the blockade and of the activation of beta-adrenergic receptors in alveolar resorption in PD in rats, as well as the effects of PD, associated or not to adrenergic treatment, in salivary glands. Forty rats were divided into four groups: (1) group Propranolol 0.1mg/Kg with PD induction; (2) group Isoproterenol0.75mg/Kg and PD; (3) group Control without PD, which received saline;(4) group Control with PD, which also received saline. After 14 days oftreatment, euthanasia occurred. Hemi mandibles and submandibular andsublingual glands were removed for analysis. Alveolar bone support andalveolar bone loss were evaluated by radiographic and macroscopic analysis. Gland weight and dimensions were measured, and then the samples were submitted to routine preparation for hematoxilin and eosin and Alcian blue stainings. Acinar and ductal area and cellular vacuolization were histomorphometrically evaluated. After statistical analysis (p <0.05), less alveolar bone support and larger alveolar loss were verified in animals with ligatures for PD induction and larger alveolar loss were also verified in rats treated with isoproterenol. Isoproterenol also increased significantly glandular weight, size and acinar area, and reduced ductal area and cellular vacuolization in submandibular glands. Group Propranolol presented less vacuolization than group Control with DP. Other comparisons were not statistically significant. It was concluded thatthe sympathetic stimulation worsened PD, however, it was not ...

Crescimento de glândulas parótidas de ratos estimulado por tratamento crônico com isoproterenol: estudo das modificaçöes morfológicas quantitativas nos ductos estriados / Growth of rat parotid glands induced by chronic isoproterenol administration: a quantitative morphological study of the modifications in the striated ducts

As modificaçöes que sofrem os ductos estriados durante o enorme crescimento das glândulas parótidas do rato induzido por tratamento diário com cloridrato de isoproterenol por 14 dias, foram estudadas pela estereologia. Avaliamos em glândulas provenientes de ratos tratados durante 0, 3, 5, 7 e 14 dias, a densidade de volume, volume total, diâmetro externo, comprimento total, volume celular e número absoluto de células dos ductos estriados. A análise dos resultados obtidos mostrou que após 3 dias de estímulo com a droga, os ductos estriados haviam modificado a altura das células, o diâmetro externo e o comprimento total; voltando do grupo controle no 14§ dia do experimento

Crescimento de glândulas salivares maiores de roedores induzido pelo isoproterenol: uma revisäo / Growth of major salivary glands of rodents induced by isoproterenol: a review

Revisäo sobre vários aspectos do enorme crescimento de glândulas salivares de roedores sob estímulos crônico com isoproterenol

Estudo morfométrico do crescimento de glândulas submandibulares de ratos tratados com isoproterenol. II. Modificaçöes no comportamento dos ductos granulosos / Morphometric study of the rat submandibular glands enlargement induced by isoproterenol. II. Changes in the convoluted granular tubule compartment

Estudou-se através de métodos estereológicos ao microscópio óptico, as modificaçöes que ocorrem no compartimento dos ductos granulosos de glândulas submandibulares de ratos induzidos ao crescimento por injeçöes de cloridrato de isoproterenol por 14 dias. A análise dos resultados obtidos mostrou que as dimensöes morfométricas absolutas do sistema de ductos granulosos, praticamente näo se modificaram durante todo o período de crescimento glandular induzido pelo isoproterenol, assim o seu volume total, o volume celular médio, o número total de células e o comprimento total, mantiveram-se ao redor, respectivamente, de 39mmü, 972µmü, 34x10(6) células e 86m. As únicas dimensöes morfométricas que exibiram modificaçöes estatisticamente significativas foram a sua densidade de volume na glândula e o seu diâmetro externo, ambas no intervalo de 0 a 3 dias de tratamento, quando decresceram, respectivamente, de 48 por cento e 21 por cento. Desse modo, os resultados mostraram que as células serosas dos ductos granulosos, ao contrário das células acinosas, näo exibem o efeito sialadenotrófico quando submetido a tratamento crônico com isoproterenol

Estudos estereológico do crescimento de glândulas submandibulares de ratos induzido pelo isoproterenol. I. Modificaçöes no comportamento acinar / Stereological study of the rat submandibular glands growth induced by isoproterenol. I. Changes in the acinar compartment

O objetivo desta pesquisa foi de verificar, através de quantificaçöes esteriológicas ao microscópio óptico, a participaçäo dos processos hiperplásicos e hipertrófico no crescimento do comportamento dos ácinos de glândulas submandibulares de ratos machos, induzido por injeçöes diárias de cloridrato de isoproterenol por 14 dias. A análise dos resultados obtidos mostrou que: a) a massa glandular aumentou 135,8 por cento entre 0 a 14 dias, sendo que entre 0 a 3 dias foi observada a maior velocidade de crescimento; b) a densidade de volume, ou seja, o percentual de volume glandular ocupada pelos ácinos aumentou nos períodos de 0 a 3 e 5 a 7 dias, respectivamente, de 1,33 e 1,10 vezes; c) o volume absoluto desse comportamento passou de 131,9 milímetros cúbicos aos 0 dias para 522,5 milímetros cúbicos aos 14 dias de tratamento, o que representou um aumento de 296,1 por cento; d) o volume celular médio exibiu um soberbo crescimento de 585,4 por cento após 14 dias de tratamento, sendo que entre 0 a 3 e 5 a 7 dias, os aumentos foram, respectivamente, 286,3 por cento e 45 por cento; e) o número absoluto ora apresentados, mostraram que o crescimento do volume total do comportamento acinar de glândulas submandibulares de ratos induzidos pelo isoproterenol, ocorre essencialmente por um mecanismo hipertrófico

Efeito transplacentário do isoproterenol (IPT) no desenvolvimento do palato secundário e de estruturas buco-dentárias de camundongos Mus musculus / Transplacental effects of isoproterenol (IPT) on development of the secondary palate and buco-dental structures of the mice Mus musculus

Estudou-se o efeito tóxico e teratogênico do IPT em uma linhagem nao isogênica de camundongos albinos Mus musculus, com especial referência ao desenvolvimento do palato secundário. O tratamento feito utilizando-se a dose final de 8mg/animal, administradas em épocas diferentes do desenvolvimento fetal e de duas formas diferentes. Os resultados mostraram que o efeito da droga tanto no desenvolvimento do palato secundário quanto nas demais estruturas embrionárias estudadas, está relacionado à idade fetal na época do tratamento bem como à freqüência diária de administraçäo da droga, e näo com a dose final utilizada. Por outro lado, tal efeito é reversível com a supressäo do tratamento. O efeito embriotóxico é diretamente proporcional à dose diária administrada. Embora ambos os efeitos possam se manifestar independentemente, há indicaçäo de que dependem dos genotipos dos animais utilizados. As alteraçöes observadas parecem ser conseqüência de perturbaçöes na fisiologia materna e näo de um efeito primário do fármaco utilizado

Estudo estereológico do crescimento da glândula parótida de rato induzido pelo isoproterenol / Steriological study of growth of the parotid gland of rats as induced by isoproterenol

O crescimento da glândula parótida de rato, induzido pelo tratamento diário com isoproterenol, por duas semanas, foi analisado através de métodos estereológicos aplicados à microscopia de luz. A massa glandular, após 14 dias de tratamento, apresenta um crescimento de 337,57 por cento, sendo os primeiros três dias o período de maior crescimento. O volume total do compartimento acinar apresenta um aumento de 473 por cento em todo o período, enquanto o volume das células acinosas apresenta um crescimento de 735,95 por cento, sendo os primeiros três dias de tratamento os de maior crescimento destas células, näo havendo aumento no número absoluto deste compartimento todo o período. Esses dados mostram, portanto, que o crescimento celular estimulado pelo I.P.R. nas condiçöes desta pesquisa é essencialmente hipertrófico. No entanto, observou-se, ainda, um aumento significante do número de mitoses bipolares e multipolares, principalmente no terceiro e quinto dia de tratamento. Como durante o crescimento näo há aumento de número de células acinosas, a presença dessas mitoses indica que durante o aumento glandular ocorre alta taxa de morte celular. Deste modo, as mitoses polares ocorreriam para repor células que provavelmente se degeneram durante o tratamento, enquanto as mitoses multipolares levariam à ocorrência de poliploidia. Apesar do enorme crescimento do volume individual dos ácinos näo se detectou aumento da sua superfície externa total. Os ductos estriados sofreram pequenas modificaçöes na altura das células, no diâmetro externo e no comprimento total, após três dias de tratamento, voltando aos valores do grupo controle no décimo-quarto dia. Quanto ao estroma, ocorreu aumento significante no seu volume total e no número absoluto de células

Estudo comparativo das propriedades antimitótica e antiflogística do Imuran e das combinaçoës Imuran/Zyloric e Imuran/Dectancil / Antiphlogistic and antimitotic properties of Imuran and Imuran/Zyloric or Imuran/Dectancil combination

Foram utilzados 138 ratos para avaliar a intensidade e a correlaçäo dos efeitos antimitótico e antiflogístico do Imuran e sua associaçäo com o Zyloric e com o Dectancil. O efeito antiflogístico foi avaliado pelos testes edemogênico, contagem global e diferencial dos leucócitos e pelos fluxo de macrófagos em granulomas. O efeito antimitótico foi avaliado pela proliferaçäo das células das glândulas salivares e da medula óssea, estimuladas pelo isoproterenol. Com a associaçäo Imuran/Dectancil, obteve-se acentuado efeito antiflogístico e antimitótico. Conclui-se assim que ambos se correlacionaram no referido esquema terapêutico. O Imuran apresentou-se efetivo como droga antimitótica, e pouco eficiente em relaçäo ao efeito antiproliferativo e da açäo antilogística, de onde se conclui pela existência de uma correlaçäo positiva entre as drogas

Changes in glucose metabolism in submandibular salivary glands of rats after isoproterenol or incisor-tooth amputation / Alterações do metabolismo da glicose em glândulas sumandibulares de ratos tratados com isoproterenol ou submetidos a amputação dos dentes incisivos

Rats were infected daily with isoproterenol (2 mg/kg of body wt) for up to five days, or their incisor teeth were amputated on every other day for up to five amputations. The animals were subdivided in two subgroups killed 12 or 24 h after the first or last intervention. At 12 h all enzymes except hexokinase (HK) and pyruvatekinase (PFK) showed decreased activities after isoproterenol. After incisor amputation, only increased HK and PFK activities were observed. With both procedures, there is activation of ß-adrenergic receptors but results show that different biochemical events take place, suggesting different mechanisms