Estudo comparativo entre a produção de fosfolipases extracelulares e proteinases do gênero Candida isoladas a partir de infecções de cavidade oral / Comparative study between extracellular phospholipase and proteinase production in clinically important of the genus Candida isolated in oral candidiasis patients

Introdução: A habilidade da Candida spp. em produzir enzimas proteolíticas, tais como fosfolipase e proteinases, tem um papel importante na patogenicidade destas leveduras. Objetivo: Determinar as espécies causadoras das infecções orais por Candida spp., além de investigar a atividade in vitro das fosfolipases e proteinases em isolados clínicos do gênero Candida, provenientes de pacientes com candidíase oral. Material e método: Isolados de Candida spp., pertencentes à Coleção de Cultivos Fúngicos do Laboratório de Microbiologia e Patologia Oral do Departamento de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha, foram analisados. Produção de fosfolipases foi analisada utilizando-se Ágar gema de ovo. Liberação de proteinases foi medida utilizando-se extrato de levedura adicionado à albumina bovina. Resultado: Um total de 35 isolados clínicos do gênero Candida foi testado. C. albicans foi a espécie predominante (77%). Os demais isolados identificados foram: C. parapsilosis (20%) e C. tropicalis (2%). Ao comparar a atividade de fosfolipase do grupo C. albicans com o grupo Candida não-albicans, foi encontrada diferença significativa (P=0,04). Não foi encontrada diferença significativa entre a C. albicans e a C. não-albicans, para a produção de proteinase. A liberação de proteinase foi significativamente maior quando comparada à produção de fosfolipase para o gênero Candida (P=0,04). Diferença estatisticamente significativa foi encontrada quando a atividade de fosfolipase e proteinase da C. albicans foi comparada à atividade das espécies de C. não-albicans (P=0,02). Conclusão: Diferentes quantificações de fosfolipase extracelular e atividade de proteinase têm sido atribuídas aos isolados clínicos de C. albicans quando comparados a outras espécies de Candida.

Introduction: The ability of the genus Candida to produce secretory enzimes such as proteinase and phospholipases to play an important role in the patogenicity of these yeasts. Objective: To determine the Candida species isolates from oral cavity infections and to investigate in vitro phospholipase and protease activities in clinically important of the genus Candida isolated in oral candidiasis patients. Material and method: Candida species isolated of the Fungal Culture Collection of Oral Microbiology and Pathology Testing Service Laboratory of the Dentistry Departament of Faculdade da Serra Gaúcha were evaluated. The phospholipases detection was assayed using the egg yolk agar plate method. Determination of protease production was performed in agar plates containing bovine serum albumine and yeasts extract. Result: A total of 35 isolates of the genus Candida were tested. C. albicans was the species predominant (77% of isolates), followed by C. parapsilosis (20%) and C. tropicalis (2%). When compared the phospholipase activity of the C. albicans group with the non-albicans Candida species types group was observed significant difference among of this groups (P=0.04). No statiscally significant difference between the C.albicans and non-albicans Candida species types when was compared to proteinase production. Proteinase production was higher and statiscally significant when compared to phospholipase activity in the genus Candida isolates (P=0.04). Statiscally significant differences were found between phosphoplipases and proteases activity for C. albicans when compared to non-albicans Candida species types (P=0.02). Conclusion: Differences in the secretion rates of phospholipase extracellular and proteases activity have been attributed to clinical strains of C. albicans when compared to others Candida species types.

Efeito da terapia periodontal sobre a expressão do receptor ativado por protease do tipo 2 (PAR2) em pacientes com periodontite crônica / Evaluation of the protease activated receptor 2 (PAR2) expression in chronic periodontitis patients, before and after non-surgical periodontal treatment

O receptor ativado por protease do tipo 2 (PAR2) está envolvido na patogênese de doenças inflamatórias crônicas, incluindo a periodontite. O PAR2 pode ser ativado pela gingipaína, produzida pela Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) e proteinase 3 (P3) do neutrófilo. A ativação do PAR2 desempenha um papel relevante nos processos inflamatórios ao induzir a liberação de importantes mediadores pró-inflamatórios associados à destruição periodontal. No presente estudo, o efeito do tratamento periodontal não-cirúrgico na expressão do PAR2 por células do fluido gengival, bem como a sua associação com os níveis de mediadores pró-inflamatórios e proteases ativadoras foram investigados em pacientes com periodontite. Além disso, avaliou-se in vitro o envolvimento da via de sinalização MAPK-p38 na ativação do PAR2 e a influência deste na produção de superóxido (O2-) e na capacidade de fagocitose em neutrófilos do sangue periférico humano infectados pela P. gingivalis. Um aumento significativo (P < 0,05) da expressão do RNAm e proteica do PAR2 por células do fluido gengival foi positivamente associado aos parâmetros clínicos inflamatórios e aos níveis de interleucina (IL)-6, IL-8, fator de necrose tumoral-, metaloproteinases da matriz (MMP)-2, MMP-8, fator de crescimento de hepatócitos e fator de crescimento endotelial vascular, avaliados por Bioplex. Níveis elevados de RNAm da gingipaína e P3, expressão reduzida do RNAm da dentilisina (P < 0,05), bem como redução significativa (P < 0,05) dos níveis de inibidores de protease secretados por leucócitos e elafina (avaliados por ELISA), também foram associados à superexpressão do PAR2. Sítios periodontalmente saudáveis de indivíduos com periodontite crônica apresentaram uma menor expressão do RNAm e proteica do PAR2 (P < 0,05). O tratamento periodontal resultou na diminuição significativa da expressão de PAR2 (P < 0,05), correlacionada com a diminuição da expressão de mediadores inflamatórios (P < 0,05), bem como com suas proteases ativadoras (P < 0,05). Além disso, o uso do antagonista do PAR2 suprimiu significativamente (P < 0,05) a produção de superóxido em neutrófilos do sangue periférico humano, denotando o papel do PAR2 nessa importante função celular. Dessa forma, concluímos que o tratamento periodontal, o qual resulta na diminuição dos níveis de proteases e mediadores pró-inflamatórios, está associado com uma diminuição da expressão do PAR2, portanto, sugerindo que a expressão de PAR2 é influenciada pela presença da infecção periodontal, e não uma característica constitutiva favorecendo a inflamação periodontal.

Protease-activated receptor-2 (PAR2) is implicated in the pathogenesis of chronic inflammatory diseases including periodontitis; it can be activated by gingipain, produced by Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis), and by neutrophil-protease 3 (P3). PAR2 activation plays a relevant role in inflammatory processes by inducing the release of important inflammatory mediators associated with periodontal breakdown. In the present study, the effect of non-surgical periodontal treatment on PAR2 expression and its association with levels of pro-inflammatory mediators, and activating proteases were investigated in chronic periodontitis patients. Moreover it was evaluated in vitro the role of MAPK-p38 signaling pathway during PAR2 activation and its influence on superoxide production and phagocytosis capacity in peripheral human neutrophils infected with P. gingivalis. A significant mRNA and protein over-expression of PAR2 (P < 0.05) in gingival crevicular fluid cells was positively associated to inflammatory clinical parameters, and to the levels of interleukin (IL)-6, IL-8, tumor necrosis factor-alpha, matrix metalloproteases (MMP)-2, MMP-8, hepatocyte growth factor, and vascular endothelial growth factor (evaluated by Bioplex). Elevated levels of gingipain and P3 (P < 0.05), and decreased levels of dentilisin mRNA and protease inhibitors, secretory leucocyte protease inhibitor and elafina (P < 0.05) (evaluated by ELISA), were also associated to PAR2 overexpression. Periodontally healthy sites from chronic periodontitis individuals showed a diminished expression of PAR2 mRNA and PAR2 protein level (P < 0.05). Furthermore, periodontal treatment resulted in decreased PAR2 expression (P < 0.05), correlated with decreased expression of inflammatory mediators (P < 0.05) and activating proteases (P < 0.05). Moreover, PAR2 antagonist reduced significantly superoxide production in human neutrophils (P < 0.05) showing the role of PAR2 on this important cellular function. We concluded that periodontal treatment resulted on decreased levels of proteases, and pro-inflammatory mediators is associated to decreased PAR2 expression, therefore suggesting that PAR2 expression is influenced by the presence of periodontal infection, and not a constitutive characteristic favoring periodontal inflammation.

Desenvolvimento e caracterização físico-química de um sistema de liberação controlada da hialuronidase incluída em hidroxipropil--ciclodextrina / Development and physical-chemical characterization of a controlled delivery system of hyaluronidase included in hydroxypropyl- - cyclodextrin

A hialuronidase é uma enzima que vem sendo utilizada como adjuvante anestésico na oftalmologia há décadas para melhorar a eficácia anestésica, por aumentar a difusão do anestésico para o nervo. Na odontologia, quando foi injetada concomitantemente ao anestésico local em bloqueio pterigomandibular, reduziu a duração da anestesia e causou trismo, pois no momento inicial da anestesia ainda havia provavelmente muito anestésico no sítio da injeção, dispersando-o para tecidos adjacentes. Entretanto, em outro protocolo, a enzima foi injetada em outro momento, antes do término do efeito anestésico e, não induziu efeitos adversos e ainda aumentou a duração de ação, provavelmente, por difundir apenas o anestésico remanescente para o nervo. A fim de evitar uma nova puntura para injetar a hialuronidase, a enzima poderia ser incorporada a um carreador, que modularia a sua liberação tardiamente, simulando o protocolo anterior. O desenvolvimento desse sistema de liberação controlada da enzima, a ser futuramente associada aos anestésicos locais visa ainda diminuir a dose necessária para o bloqueio completo, diminuindo assim o risco de toxicidade sistêmica. Este estudo laboratorial teve por objetivo desenvolver o complexo de inclusão utilizando a como carreador da hialuronidase, uma ciclodextrina, a hidroxipropil--xtrina, formando o complexo de inclusão hialuronidase:hidroxipropil--ciclodextrina, em duas proporções molares, 1:1 e 2:1. Neste estudo ainda foram avaliadas as características físico-químicas dos componentes a fim de verificar se havia interação entre as moléculas.

Após o preparo, a análise físico-química das substâncias foi realizada utilizando os seguintes métodos: espectroscopia na região do Infravermelho com transformada de Fourier, análise térmica, ressonância magnética nuclear, além da análise morfológica (por MEV). Mudanças observadas na espectroscopia na região do infravermelho e na calorimetria diferencial exploratória indicam interação molecular entre a hialuronidase e a hidroxipropil --ciclodextrina, em ambas razões molares, como sugerem o aspecto morfológico do complexo.

Hyaluronidase is an enzyme that has been used as an adjuvant anesthetic in ophthalmology for decades to improve the effectiveness of anesthesia by increasing the diffusion of the anesthetic to the nerve. In dentistry, when it was injected concomitantly with local anesthetic in inferior alveolar nerve blockade, reduced the duration of anesthesia and caused trismus, because in the initial moment of anesthesia there was probably a lot of anesthetic in the injection site, spreading it to adjacent tissues. However, in another protocol, the enzyme was injected later, before the regression of the anesthetic effect and did not induce adverse effects, and also increased the duration of action, probably by spreading only the remaining anesthetic to the nerve. In order to avoid another puncture to inject hyaluronidase, the enzyme could be incorporated into a carrier, which modulates its release later, simulating the previous protocol, while maintaining its benefits. The development of such controlled release system of the enzyme, to be in the future associated to local anesthetics, also designed to decrease the dose required to obtain the complete block, thus reducing the risk of systemic toxicity. This laboratory study aimed to develop the inclusion complex using as carrier to hyaluronidase, a cyclodextrin, the hydroxypropyl--cyclodextrin forming hyaluronidase : hydroxypropyl--cyclodextrin inclusion complex, in both molar ratios 1:1 and 2:1.

This study also evaluated the physico-chemical characteristics in order to ascertain whether there was interaction between the molecules. After being prepared, the physical-chemical analysis of the substances was performed using the following methods: Fourier transform infrared spectroscopy, thermal analysis, nuclear magnetic resonance (RMR), besides the morphological analysis by scanning electronic microscopy (SEM). Changes observed in infrared spectroscopy and differential scanning calorimetry indicate molecular interaction between hyaluronidase and hydroxypropyl-beta-cyclodextrin, in both molar ratios, as suggested by the morphological aspect of the complex.

Estudo da matriz orgânica dentinária modificada por agentes naturais ricos em proantocianidina e seu uso para aumentar a efetividade de restaurações adesivas / Study of the dentin organic matrix modified by proanthocyanidin rich agents and their use to increase short and long-term bond strength

O objetivo deste trabalho foi elucidar a interação entre a proantocianidina (PA), um agente natural e não tóxico de ligação cruzada, e o colágeno dentinário tipo I. A hipótese proposta é que o modelamento de uma dentina desmineralizada mais resistente e com melhores propriedades propiciará um substrato mais estável e íntegro para restaurações adesivas. Para isto, o estudo foi dividido em 4 fases: 1) Validação da PA como agente exógeno de ligação cruzada, testando matrizes de dentina desmineralizadas tratadas com extratos a base de PA em teste microflexural para análise do módulo de elasticidade (ME), variando o tempo de exposição (10, 30, 60, 120, 240 min), o tipo de extrato usado (semente de uva-GSE, semente de cacau-CSE, oxicoco-CRE, canela-CNE e açaí-ACE) e a longevidade (imediato, 3, 6 e 12 meses); 2) Estudar parâmetros relacionados às soluções de PA, como solubilidade (água, etanol e acetona), fonte (GSE e CSE) e concentração (0,65%, 3,25%, 6,5%, 15% e 30%), através da mensuração do ME pelo teste micro-flexural de matrizes de dentina desmineralizada; 3) Caracterização da dentina tratada com PA (GSE e CSE), sorção de água, calorimetria e degradação enzimática; 4) Analisar a resistência de união entre a dentina tratada com PA (GSE/CSE) e sistemas de adesivos comerciais (Adapter Single Bond Plus e One Step Plus), variando a concentração (6,5% e 30%), tempo de exposição (1, 10 e 60 min) e longevidade (imediato, 3, 6 e 12 meses). Foram realizadas análises de variâncias e teste de contraste de médias, quando necessário, para todos os ensaios. Os resultados de ME foram influenciados pelo tratamento com PA, dependendo do tipo de extrato usado, exibindo os melhores resultados para o maior tempo de exposição (240 min) para os extratos GSE e CSE. Embora os resultados imediatos com os extratos CRE e CNE não tenham aumentado, estes se mantiveram constantes apos 1 ano de armazenamento, o que não aconteceu para o ACE e os grupos controles...

The aim of this study was to elucidate the interaction between proanthocyanidin based extracts (PA), a natural and non-toxic cross-linker, and type I dentin collagen. The hypothesis is that if a stronger and more stable collagen layer is chemically engineered, the resultant hybrid layer will be stronger and less prone to degradation. So, this research was divided into four phases: 1) PA validation as an exogenous cross-linking agent, testing the elastic modulus (E) of demineralized dentin treated with various PA based extracts (grape seed-GSE, cocoa seed-CSE, cranberry-CRE, cinnamon-CNE, and açai berry-ACE), exposure times (10, 30, 60, 120, 240 min), and long term effectiveness (immediate, 3, 6 and 12 months); 2) Evaluation of different parameters related to PA solutions, like solubility (water, ethanol and acetone), manufacturer (GSE and CSE) and concentration (0.65%, 3.25% 6.5%, 15% and 30%), E was also obtained by micro-flexural strength measurements of demineralized dentin matrix, 3) Characterization of PA treated dentin (GSE and CSE): water sorption, calorimetry and enzymatic degradation and 4) Analyze the bond strength ( BS) of PA treated dentin (GSE / CSE) with commercial adhesives systems (Adapter Single Bond Plus-SB and One Step Plus-OS), varying concentration (6.5% and 30%), exposure time (1, 10 and 60 min) and long-term effectiveness (immediate, 3, 6 and 12 months). Data were statistically analyzed at a 95% confidence interval. GSE and CSE extracts showed a time-dependant effect and were able to improve and stabilize the E of the organic matrix. CRE and CNE extracts were able to maintain the E of collagen matrices constant after 12 months artifical saliva storage...

Associação de tetraciclina à membrana de osso cortical bovino desmineralizado aumenta atividade de enzimas lisossomais / Association of tetracycline and membrane of demineralized bovine cortical bone increase lysosomal enzyme activity

A regeneração tecidual e óssea guiadas utilizando membranas (M) à base de colágeno é usual. A tetraciclina é utilizada algumas vezes para auxiliar a regeneração tecidual na forma tópica ou associada às barreiras absorvíveis, contudo acelerando a degradação da membrana. Enzimas lisossomais estão envolvidas na resposta celular a biomateriais. O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da associação da tetraciclina à membrana derivada do osso cortical bovino desmineralizado (MT) na atividade de enzimas lisossomais. As membranas (M e MT) foram implantadas no tecido subcutâneo de ratos (n = 120) e 1, 3, 7, 14, 28 e 60 dias após a cirurgia os animais foram mortos e os respectivos tecidos reacionais coletados para análise bioquímica. O lisado do tecido foi obtido em tampão acetato 0,1 M, pH 5, contendo EDTA e β-mercaptoetanol 1 mM para a determinação da atividade das isoformas da fosfatase ácida, fosfatase alcalina de membrana e arilsultase e β-hexosamidase. No grupo MT observou-se maior atividade das enzimas lisossomais nos períodos de 1, 3 e 7 dias (p < 0,05). Os resultados obtidos permitem concluir que a associação de tetraciclina à membrana aumenta a atividade específica das enzimas analisadas, concorrendo para a aceleração da degradação da membrana + tetraciclina.

Guided bone and tissue regeneration using collagen-derived membranes (M) is a common practice. Topical application of tetracycline or its association to membranes intends to complement guided tissue regeneration, however, accelerated degradation was observed. Lysosomal enzymes are involved in the cell response to biomaterials. The aim of this work was to evaluate the effect of tetracycline association to the membrane (MT) obtained from demineralized bovine cortical bone to lysosomal enzymes. Membranes (M and MT) were implanted in the subcutaneous tissue of rats (n=120) 1, 3, 7, 14, 28 and 60 days after implantation the animals were killed and the granuloma removed for enzymatic analysis. Tissue lyses was obtained using 0.1M acetate buffer, pH 5.0, plus 1 mM of EDTA and β-mercaptoethanol for determination of acid phosphatase isoforms, cell membrane alkaline phosphatase, arilsulfatase and β-hexosaminadase activities. MT group showed higher lysosomal activity at 1, 3 and 7 days (p<0.05) than M group. Based on the results it could be concluded that the treatment of membranes with tetracycline significantly altered the specific activity of the enzymes, increasing MT degradation in the tissue.

Deficiência da enzima G6PD em pacientes com paralisia cerebral / G6PD deficiency among patient with cerebral palsy

A icterícia neonatal severa é a principal causa da paralisia cerebral do tipo atetoide e pode ser decorrente da deficiência de uma enzima chamada Glicose-6-Fosfato-Desidrogenase (G6PD). Esta pesquisa tem como objetivo avaliar laboratorialmente a deficiência de G6PD em pacientes com paralisia cerebral e a história clínica de icterícia ou kernicterus, a fim de verificar uma possível relação entre a deficiência dessa enzima e a incidência de paralisia cerebral. Foram incluídos no estudo, pacientes com paralisia cerebral e história clínica de icterícia ou kernicterus. Após o aceite, os pacientes foram submetidos a exames de sangue para avaliar a deficiência de G6PD. A análise das amostras foi realizada pelo método enzimático, de acordo com o princípio colorimétrico, que consiste na mistura por inversão das amostras e reagentes (glicose 5%, nitritode sódio 1,25% e azul de metileno), ficando em banho-maria por três horas a 37 °C. Em seguida, retirou-se 0,1 mL do sedimento, acrescentaram-se 10 mL de água destilada e fez-se a leitura. Dos20 pacientes pré-selecionados, quatro (20%) não participaram, pois estavam doentes no momento da coleta. Dos 16 pacientes que foram submetidos ao exame de sangue, quatro (25%) tiveram resultadopositivo para deficiência de G6PD. Baseado nos resultados desta pesquisa, pode-se concluir que a deficiência de G6PD é um fator predisponente à paralisia cerebral e o cirurgião-dentista deve terprecaução, principalmente quanto à prescrição de medicamentos de risco para o desenvolvimento de anemia severa em pacientes com deficiência de G6PD.

Neo-birth severe jaundice is the main cause for cerebral palsy of the athetoid type and may be due to the deficiency of an enzyme called Glicosis-6-Phosphate-Dehydrogenase (G6PD). This paper aimed to evaluate, in laboratory, the deficiency of G6PD in patients with cerebral palsy in order to enable a better action by the surgeon-dentist, besides tutoring and furnishing to the patient?s companion a diagnosis of G6PD deficiency, a list of medicines which may be avoided due to anemia risk. It was included, in this paper with cerebral palsy and clinical record of jaundice or kernicterus. After agreement, patients underwent blood examination in order to evaluate G6PD deficiency. Sample analysis was performed by the enzymatic, according to the calorimetric principlewhich consists in the mixture by inversion of samples and reagents (glucose 5%, sodium nitrite 1.25%) e methylene blue in double boiling for three hours at 37 °C and, right after, it was taken 0.1 mL of the sediment, added 10 mL of distilled water and the records were measured. Fromthe 20 patients who have been pre-selected, 4 (25%) did not participate for they were sick at the moment of collection; and from the 16 patients who underwent blood examination, 4 (25%) were positive for G6PD deficiency. Based on results of this research it may be concluded that G6PD deficiency is a factor that prepares to cerebral palsy and the surgeon-dentist shall be precautious when prescribe medicines with risk to development anemia in patient with cerebral palsy.

Capacidade de remoção do biofilme por meio de um produto enzimático para higienização de bases protéticas / Biofilm removal ability of an enzymatic cleanser used for denture bases cleansing

A colonização de fungos e bactérias nas bases de resina acrílica é um dos fatores responsáveis pela estomatite protética, uma das lesões mais prevalentes da mucosa bucal. Este estudo se propôs a avaliar, in vivo, a limpeza de próteses totais imersas em um produto enzimático, por meio de análises microbiológicas e imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV). A pesquisa teve duas fases com duração de uma semana cada. Na 1ª fase, 10 pacientes utilizaram escova e pasta para higienizar suas próteses. Na 2ª fase, associaram escovação com imersão da prótese em produto químico enzimático durante a noite. A análise microbiológica revelou que a eficiência do tratamento químico em eliminar os microorganismos foi de 53% e as observações em MEV confirmaram os resultados acima. Concluiu-se que a associação dos dois métodos reduziu quase à metade a quantidade de microorganismos presentes nas próteses e removeu parcialmente o biofilme que cobria a superfície interna das bases protéticas.

Characterization of pectinases from Acrophialophora nainiana and Trichoderma harzianum strain T6

Duas preparações de pectinases foram isoladas de culturas em estado líquido de Acrophialophora nainiana e Trichoderma harzianum linhagem T6, contendo pectina como a fonte de carbono. As atividades de pectina liase e pectina metilesterase foram somente detectadas nas preparações enzimáticas de A. nainiana. A exo-polymethylgalacturonase de A. nainiana foi mais ativa a pH 7,0 e 60oC, enquanto que a atividade ótima da exo-polymethylgalacturonase de T. harzianum linhagem T6 foi obtida a pH 4,3 e 40oC. As suas estabilidades a 40, 50 e 65oC diferiram, sendo que a atividade de exo-polymethylgalacturonase de A. nainiana apresentou maior estabilidade. Ambas preparações enzimáticas mostraram boa estabilidade em pH ácido. Os extratos brutos foram parcialmente parcialmente purificados por ultrafiltração e cromatografia de filtração em gel em coluna de Sephacryl S-100. Estudos de parâmetros cinéticos mostraram que os valores de Km mais baixos foram obtidos com exo-polimetilgalacturonase de T. harzianum linhagem T6. O tratamento de sucos de frutas com amostras de pectinase de A. nainiana e T. harzianumlinhagem T6 resultou em um decréscimo na viscosidade. A pectinase de T. harzianum linhagem T6 parece ser mais eficiente na redução da turbidez de suco de maça. Somente a pectinase de T. harzianum linhagem T6 foi capaz de extrair suco da banana.

Enzimas do hospedeiro no fluido gengival como potenciais indicadores de atividade de doença periodontal / Host enzymes in gingival crevicular fluid as potential diagnostic indicators of periodontal disease activity

A patogênese das periodontites está associada à produção de várias enzimas, liberadas por células conjuntivas, epiteliais ou inflamatórias, e a análise bioquímica do fluido gengival oferece um método não invasivo de detectá-las. Estudos que correlacionam essas enzimas com atividade de doença periodontal foram revisados, enfocando as enzimas proteolíticas e hidrolíticas oriundas de células inflamatórias e os potenciais marcadores de morte celular

Abordagem imunológica da cárie dental / Immunological approach of dental carie

A descoberta de um sistema de defesa mucoso imunoenzimático, aliado aos avanços da imunologia demonstram a necessidade do conhecimento dos seus conceitos e suas possíveis interrelações frente à instalação e progressão do processo cariogênico. Diante deste fato, o presente trabalho se propõe realizar uma revisão de literatura, acerca destes conhecimentos, buscando verificar a sua relação com os microorganismos e o desenvolvimento da doença cárie

Papel da proteína tirosina fosfatase de baixa massa molecular relativa (LMW-PTP) no controle da proliferaçäo celular e na origem de neoplasias / Involvement of low molecular weight protein tyrosine phosphatase in cell transformation

A fosfotirosina proteina fosfatase de baixa massa molecular relativa (LMW-PTP) é uma fosfohidrolase de distribuiçäo ubíqua na natureza, presente nas células como duas isoenzimas (IF1 e IF2), as quais säo codificadas por três alelos. Estas isoenzimas diferem entre si na regiäo compreendida entre os resíduos de aminoácido de 40-73, exibindo diferentes afinidades pelo substrato, sensibilidade a moduladores e inibidores. A IF2 está envolvida na mitogênese e rearranjo do citoesqueleto induzido pelo fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF). Em fibroblastos normais, o aumento da IF2 resulta em decréscimo na taxa de proliferaçäo celular. Neste trabalho realizamos a clonagem e expressäo da IF2. O RNA total extraído de pâncreas humano foi usado para RT-PCR com "primers" oligo-dT. O fragmento da LMW-PTP foi amplificado utilizando os "primers" 5'-GAAATGCAGGATCCTCAGG-3' e 5'-GGACCATGGCGGAACAGGCTACCAAGTCCG-3' e clonado no vetor pUC18. A seqüência da IF2 foi confirmada pelo seqüênciamento automático de DNA (Sistema ABI). A LMW-PTP foi sub-clonada no vetor pRSET B (sem cauda de Histidina) e usado para transformar bactérias BL21 DE3 para produçäo em larga escala. A expressäo da IF2 foi induzida por IPTG, sendo as colônias positivas confirmadas por PCR, SDS-PAGE e atividade enzimática. A fim de avaliar o papel da LMW-PTP na reversäo fenotípica tumoral-normal e na transformaçäo maligna induzida por oncogenes foram utilizados os sistemas: 1) as linhagens celulares C6/ST1 e C6/P7 derivadas de glioma de rato quimicamente induzido, sendo a variante ST1 sensível e a P7 resistente a glucocorticóides (GC); 2) linhagens celulares expressando oncoproteinas do vírus polioma (antígenos "middle" e "large" T), mutadas ou näo. A atividade enzimática foi determinada em pH 5,0 usando o p-nitrofenil fosfato como substrato ('37 graus C', 20 min), nas seguintes condiçöes: a) ausência de inibidores (fosfatase ácida total, FAT);...

Enzima como agente higienizador de dentadura: revisäo da literatura / Enzyme as a denture cleanser: review of the literature

A correta higienizaçäo da prótese total é muito importante, pois, poderá ocorrer acúmulo de biofilme similar ao dente natural, como também, acúmulo de cálculo e pigmentaçäo. Paralelamente, poderá desenvolver alteraçäo na mucosa como a candidíase atrófica crônica ou inflamaçäo da mucosa. Atualmente, um novo método foi incorporado como meio alternativo de higienizadores de dentadura do tipo imersäo, que se constitui no uso de enzimas. A razäo de seu uso é devido ao fato, que a higienizaçäo oral é geralmente precária entre os portadores de prótese total e as enzimas säo bem aceitas pelos pacientes, pois, preferem as soluçöes de imersäo

Efeito da amputaçäo unilateral do incisivo inferior sobre o metabolismo da glicose em glândulas submandibulares de ratos submetidas a desnervaçäo simpática e parassimpática / Effect of unilateral incisor tooth amputation on the glucose metabolism in submandibular glands of rats following sympathetic and parasympathetic denervation

O sistema nervoso autônomo é de grande importância na regulaçäo da fisiologia das glândulas salivares, incluindo o processo sialadenotrófico. Já é bem conhecido o fato de que a funçäo secretora, bem como, outras funçöes desempenhadas pelas glândulas salivares dependem de energia produzida nas glândulas. A histometria dos ácinos, algumas enzimas do metabolismo de carboidratos como, hexoquinase, fosfofrutoquinase-1, piruvato quinase, glicose-6-fosfato desidrogenase e lactato desidrogenase foram avaliados na glândula submandibular de ratos com desnervaçäo simpática e parassimpática, submetidos a amputaçäo unilateral dos dentes incisivos, cinco dias após a desnervaçäo. Nas glândulas simpatectomizadas submetidas a amputaçäo dos incisivos observou-se uma reduçäo nas atividades da hexoquinase (27,5-36,7 por cento) e da fosofofrutoquinase-1 (22,8-38,4 por cento). Embora, nenhuma variaçäo foi observado nas atividades enzimáticas, houve uma reduçäo significante do volume acinar

Quantificaçäo das enzimas lisossomais aril-sulfatase, beta hexosaminidase e fosfatase ácida na placa bacteriana dental / Detection of lysossomal enzymes acid phosphatase, beta hexosaminidase and arylsulphatase in human supra gingival plaque

Neste experimento quantificaram-se as enzimas lisossomais fosfatase ácida, beta hexosaminidase e aril-sulfatase na placa bacteriana supragengival. De acordo com a metodologia empregada, somente as enzimas fosfatase ácida e bete hexosaminidase puderam ser detectadas

Actividades glutamico-oxaloacetico transaminase (GOT) y lactato deshidrogenasa (LDH) en pacientes con enfermadad periodontal / The glutamic-oxaloacetic transminase (GOT) and lactic dehydrogenase (LDH) activities in patients with periodontal disease

El presente trabajo muestra la correlación entre las actividades enziniticas en el fluido crevicular y la enfermedad periodontal. Las mediciones de las actividades de la Glutámico-oxaloacético transaminasa (GOT) y Láctico deshidrogenasa (LDH) en pacientes con enfermedad periodontal avanzada del adulto y sujetos clinicamente sanos se estableció adaptando un micrométodo espectrofotométrico. Cuando se compararon las actividades enzimáticas del grupo experimental con el grupo control, se observó una diferencia estadisticamente significativa en la actividad de ambas enzimas (p<0,005 para GOT y p<0,0001 para LDH). Las mediciones de volúmenes de fluido crevicular tambien resultaron estadisticamente significativas al Comparar los pacientes del grupo experimental con los del grupo control p<0,0001)

Resposta do hospedeiro em algumas formas de doenças periodontal: estado atual da questäo / An up to date rewiew on host response in some forms of periodontal disease

O conhecimento atual sobre a resposta do hospedeiro em algumas formas de doença periodontal foi revisado, com o objetivo de se examinarem possíveis marcadores de doença e de se encontrar embasamento científico para o uso de drogas capazes de modular a resposta do hospedeiro, como coadjuvante no tratamento periodontal. Foram analisados os trabalhos sobre associaçäo do HLA (antígeno do leucócito humano) com doença periodontal, células de defesa, mediadores solúveis e enzimas na resposta do hospedeiro. Este trabalho compilou o conhecimento atual sobre a participaçäo da resposta do hospedeiro na etiopatogenia da doença periodontal. Conclui que, dos marcadores de doença propostos na literatura, as citocinas IL-1, IL-6 e fator de necrose tumoral, bem como as enzimas colagenase, beta glucoronidase, aspartate aminotransferase e mieloperoxidase podem ser sugeridas como marcadores de doenças. Elastase, catepsinas B, H e L e prostaglandina E2 säo sugeridas como marcadores de fatura perda de inserçäo e perda óssea. Os anti-inflamatórios näo esteróides e as tetraciclinas têm capacidade de modular a resposta do hospedeiro na doença periodontal. A utilizaçäo desses fármacos como coadjuvantes no tratamento pode ser avaliada em casos especiais