Expressão de metaloproteinases no adenoma pleomórfico. Análise através de zimografia e de imunofluorescência in vitro e de imunohistoquímica in vivo / Metalloproteinases expression in pleomorphic adenoma. Zimography and imunofluorescence in vitro analysis and imunohistochemistry in vivo analysis

O adenoma pleomórfico é um tumor benigno de origem na glândula salivar caracterizado por um crescimento lento e indolor. Histologicamente apresenta parênquima epitelial de arranjos variáveis, nos quais são vistas células luminais, mioepiteliais e plasmocitóides e um componente estromal rico, cuja gama de macromolélulas constituintes é extensa. Apesar da matriz extracelular tão rica, poucos estudos são realizados para elucidar seu padrão de invasão baseado na proteólise dessa matriz. Além disso, locais de erosão capsular do adenoma pleomórfico por provável proteólise e expressões variáveis em locais distintos de N-CAM nesta neoplasia, foram fatos que nos fizeram supor que o adenoma pleomórfico secreta metaloproteinases e estas devem contribuir para sua invasão. Por isso, realizamos estudo em cultura de células originadas de um adenoma pleomórfico de glândula submandibular, células AP5, e estudo in vivo através de biópsias de adenoma pleomórfico emblocados em parafina. In vitro estudamos os meios condicionados por 24 horas pelas células AP5 através do gel de gelatina em zimografia. Também em cultura dessas células foram feitas reações de imunofluorescência para as MMPs 1, 2, 3 e 9. No material emblocado também realizamos reações de imunohistoquímica para as MMPs 1, 2, 3 e 9. Como resultados verificamos através da zimografia que as células AP5 secretam as MMPs 9 latente e ativa e 2 latente. Na imunofluorescência as células AP5 foram positivas para MMPs 9, 2 e 1. Em imunohistoquímica o tumor foi positivo para MMPs 1, 2, 3 e 9, porém em expressões e padrões variáveis. Apesar da expressão de metaloproteinases no adenoma pleomórfico in vivo e in vitro, é cedo concluir que estas proteases são as principais responsáveis pelo padrão de invasão desta neoplasia, já que a invasão neoplásica é um processo complexo e dinâmico, o qual envolve múltiplas etapas.

Estudo imuno-histoquímico e zimográfico das metaloproteinases da matriz 1, 2 e 9 no ameloblastoma / Immunohistochemical and zymographic study of matrix metalloproteinases 1, 2 and 9 in ameloblastoma

O ameloblastoma é um tumor odontogênico de origem ectodérmica que se caracteriza pelo alto índice de recorrências e invasividade local. Um dos questionamentos importantes, no estudo dessa neoplasia, é o mecanismo pelo qual ela invade os tecidos circunjacentes. Entre os fatores que modulam a invasividade local de uma neoplasia estäo as metaloproteinases da matriz (MMPs). Essas enzimas podem clivar a maioria dos componentes da matriz extracelular. Nosso objetivo foi verificar se os tecidos do ameloblastoma expressam as metaloproteinases 1, 2 e 9 e se essas apresentam-se ativas nessa neoplasia. Para detectar a expressäo das MMPs utilizamos a técnica de imuno-histoquímica, em cortes histológicos de ameloblastoma humano. Os resultados mostraram a expressäo das MMPs 1, 2 e 9. Para verificar a atividade das MMPs foi realizado estudo zimográfico em tecidos de ameloblastoma, que mostrou as MMPs 2, 9 e provavelmente a MMP-1 nas suas formas, tanto inativa quanto funcionalmente ativa. Com isso, nossos resultados mostram que os tecidos do ameloblastoma expressam metaloproteinases da matriz. Essas enzimas podem ter papel importante no processo de invasäo local dessa neoplasia

Análise bioquímica das metaloproteases da matriz extracelular durante atrofia experimental das glândulas salivares submandibulares em ratos / Analysis of the matrix metalloproteases in duct-ligated submandibular salivary glands of rats

O presente estudo teve por objetivo analisar a expressäo das metaloproteases da matriz extracelular durante a atrofia experimental das glândulas submandibulares em ratos, causada pela obstruçäo do ducto excretor principal. Os zimogramas realizados com extratos das porçöes internas e externas das glândulas salivares normais e ligadas mostraram que as principais enzimas gelatinolíticas possuíam pesos moleculares variando entre 72 kDa e 65 kDa. A atividade dessas enzimas aumentou progressivamente até o período entre 5 e 10 dias após a ligaçäo, decrescendo nos períodos subseqüentes. Foram também detectadas bandas migrando entre 92 kDa e 72 kDa, sendo essas enzimas detectadas em quantidades significativas apenas na regiäo da cápsula da glândula, no período de 2 dias. A confirmaçäo de que as metaloproteases da matriz têm um papel importante na remodelaçäo da matriz extracelular durante a atrofia experimental da glândula submandibular