Probiotics study with Streptococcus salivarius and its ability to produce bacteriocins and adherence to KB cells / Estudo de probióticos Streptococcus salivarius e sua habilidade de produzir bacteriocinas e aderência à células KB

Abstract Introduction Streptococcus salivarius is a dominant oral species and the best suitable candidate for probiotic of the oral cavity. Since Streptococcus salivarius is able to produce bacteriocins against Streptococcus pyogenes interest has been focused on the use of it as a probiotic to avoid sore throats by Streptococcus pyogenes. Objective This study is for selecting Streptococcus salivarius strains for potential use as probiotics for the oral mucosa, that is, production of bacteriocin against Streptococcus pyogenes and the ability to bind to KB cells. Material and method Tongue material from 45 students was collected and seeded on Mitis Salivarius Agar plaques. The strains were tested by the production of bacteriocin-like substances (BLIS) against S. pyogenes, biochemically and PCR for identification of S. salivarius. The best strains were tested for adherence to KB cells. Briefly, S. salivarius strains were cultured in broth, washed and suspended at 108cells/ml. KB cells were inoculated into plaques, washed and incubated with the bacteria, for adhesion. These were washed for lysis of the KB cells and release bacteria for determination of CFU. Result The bacteriocin test showed that 133 strains presented inhibition of S. pyogenes. The samples tested for adhesion to KB cells, presented different profiles and only three strains presenting high adhesion capacity. Conclusion The selection of strains of Streptococcus salivarius with high inhibitory activity against Streptococcus pyogenes, as well as adherence to KB cells leads us to the next future step, that is, to use the best strains for in vivo colonization tests

Resumo Introdução Streptococcus salivarius é uma espécie dominante na cavidade bucal e tem sido indicada como um ótimo candidato para uso como probiótico. Visto que a espécie Streptococcus salivarius é capaz de produzir bacteriocinas contra Streptococcus pyogenes, desenvolveu-se interesse no uso desse microrganismo como probiótico, para evitar amigdalites causadas por Streptococcus pyogenes. Objetivo A pesquisa em questão tem o objetivo de selecionar cepas de Streptococcus salivarius para seu uso potencial como probióticos na cavidade bucal, ou seja, produção de bacteriocinas contra Streptococcus pyogenes e habilidade de aderência à células KB. Material e método Coletou-se material de língua de 45 estudantes e semeou-se em placas de ágar Mitis Salivarius. As amostras foram testadas para verificar a produção de substâncias semelhantes à bacteriocina (BLIS) contra S. pyogenes, bioquimicamente e através de PCR para identificação de S. salivarius. As melhores cepas foram testadas quanto aderência à células KB. Resumidamente, as cepas de S. salivarius foram cultivadas em caldo, lavadas e suspensas à correspondência de 108 cels/ml. As células KB foram inoculadas em placas, lavadas e incubadas com as bactérias, para adesão. Estas foram lavadas para lise das células KB e liberação das bactérias para determinação de UFC. Resultado O teste de bacteriocina, mostrou que 133 cepas apresentaram atividade inibitória contra Streptococcus pyogenes. As cepas testadas para aderência à células KB, apresentaram diferentes perfis e somente três com alta capacidade de adesão. Conclusão: A seleção de cepas de Streptococcus salivarius com alta atividade inibitória contra Streptococcus pyogenes, bem como aderência a células KB, pode nos levar ao próximo passo, ou seja, o uso das melhores cepas para o estudo de colonização in vivo.

Ação moduladora da microbiota de portadores de síndrome de Down sobre bactérias cariogênicas / Modulating action of microbiota of carriers of Down’s syndrome on cariogenic microbiota

Os portadores da Síndrome de Down possuem baixa prevalência de cárie, apesar de apresentarem uma higiene oral deficiente. O estudo foi realizado para detectar cepas produtoras de bacteriocinas, com o intuito de avaliar a sua possível ação como moduladoras da microbiota cariogênica dos sindrômicos. Streptococcus mutans e Streptococcus sobrinus são os principais produtores de ácidos na cavidade oral. Em função disso, esses estreptococos foram testados antagonicamente com cepas isoladas dos indivíduos com Síndrome de Down, para que fosse avaliado se havia inibição das bactérias cariogênicas pelas cepas dos sindrômicos. Streptococcus mutans e Streptococcus sobrinus foram isolados utilizando o meio ágar sacarose bacitracina e identificados através de provas bioquímicas. Uma amostra de placa supragengival dos sindrômicos foi coletada e semeada por disseminação em Ágar Mitis-Salivarius, após o isolamento foram cultivados em caldo BHI. Dez culturas dos sindrômicos foram semeadas no Ágar Muller Hinton. Após o crescimento, as placas foram tratadas com clorofórmio. Sucessivamente, uma porção das culturas de bactérias cariogênicas foi transferida para meio semi-sólido BHI e vertidas nas placas com as culturas testes. Duas das dez cepas testadas apresentaram halo de inibição de crescimento contra cepas de Streptococcus mutans. A descoberta de cepas que produzem substâncias antimicrobianas pode ser responsável pela baixa prevalência de cárie em indivíduos com Síndrome de Down. Esse achado pode ajudar a entender a relação entre microbiota oral e patologia da cárie dentária.

Detecçäo de cepas de Streptococcus mutans produtoras de substâncias semelhantes à bacteriocina (mutacina) / Detection of Streptococcus mutans strains producers of bacteriocin like substances (mutacin)

Utilizando-se a técnica de "antagonismo posposto", em meio BHI sólido e semi-sólido, o esquema da inoculaçäo por spot test, 13 cepas de Streptococcus mutans, isoladas de placa dental de crianças cárie-ativas, foram analisadas quanto à propriedade de serem mutacinogênicas ou näo, pela açäo sobre um conjunto de microrganismos usualmente integrantes da microbiota bucal humana. Os resultados das reaçöes cruzadas, mostrando o comportamento das cepas isoladas, quando testadas entre si, indicaram que seis delas foram bacteriocinogênicas, oito se prestaram, ao menos uma vez, como indicadoras da produçäo de mutacina e nenhuma das cepas demonstrou auto-sensibilidade. Frente às indicadoras Streptococcus mutans, Streptococcus sanguis e Actinomyces viscossus, as cepas testadas mostraram comportamento semelhante ao da reaçäo cruzada, permitindo considerar que o espectro de inibiçäo diferiu de uma cepa à outra. Quando isolados dois biotipos da placa dental de uma mesma criança, os seus espectros de atividade ou de sensibilidade à bacteriocina permitiram comprovar a diferença entre elas. O modelo experimental adotado para a detecçäo de cepas de S. mutans produtoras de substâncias semelhantes à bacteriocina prestou-se, adequadamente para a identificaçäo e individualizaçäo das cepas (mutacinotipagem)