Efeito de extratos vegetais de Hamamelis virginiana, Persea americana, Cynara scolymus L e Stryphnodendron barbatiman Msobre a expressão fenotípica dos fatores de virulência em biofilmes de Candida albicans / Effect of Hamamelis virginiana, Persea americana, Cynara scolymus L and Stryphnodendron barbatiman M plant extracts on the phenotypic expression of virulence factors in biofilms of the Candida albicans

Objetivo: Analisar a expressão fenotípica de fatores de virulência em biofilmes de Candida albicans frente a extratos glicólicos de plantas. Material e Métodos: Os biofilmes de Candida albicans (ATCC 18804) obtidos a partir de incubação de 48 horas foram expostos por 5 minutos e 24 horas a diferentes concentrações de extratos glicólicos de Hamamelis virginiana e Persea americana, Cynara scolymus L e Stryphnodendron barbatiman M, a fim de verificar a ação antifúngica da proteinase, fosfolipase e hemolisina. Resultados: Todos os extratos foram eficazes na redução do biofilme. Em contato por 5 minutos. os extratos reduziram 50% do biofilme. Após 24 horas. o extrato de Persea americana apresentou o biofilme em 90%, seguido de Cynara scolymus, que o interrompeu em 85%. Houve mudança na intensidade da proteinase após 5 minutos e 24 horas, com uma atividade enzimática média de 0,69 em comparação com o controle de 0,49. Cynara scolymus foi o extrato com maior concentração média de 100 mg/ml; a intensidade da fosfolipase foi alterada com Stryphnodendron barbatiman sendo mais efetivo em 24 horas em relação ao controle (p< 0,0001). A secreção de hemolisina foi modificada por Hamamelis virginiana (12,5 mg/ml) após 5 minutos de exposição e em 24 horas. todos os extratos foram capazes de causar alterações na secreção. Conclusão: Os extratos testados apresentam potencial antifúngico em biofilmes de Candida albicans, implicando em redução significativa dos fatores de virulência. Assim, estes podem ser indicados como uma ferramenta terapêutica alternativa para reduzir a morbidade dessas infecções, já que em ambos os tempos de exposição investigados, eles foram capazes de reduzir a secreção enzimática do fungo (AU)

Objective: Analyze the phenotypic expression of virulence factors in Candida albicans biofilms against plant glycolicextracts. Material and Methods: The biofilms of Candida albicans (ATCC 18804) obtained from incubation for 48 hours were exposed for 5 minutes and 24 hours to different concentrations of glycolic extracts of Hamamelis virginiana and Persea americana, Cynara scolymus L and Stryphnodendron barbatiman M, in order to verify the antifungal activity of the proteinase, phospholipase and hemolysin. Results: All extracts were effective in reducing biofilm. In contact for 5 minutes. the extracts reduced 50% of the biofilm. After 24 hours, the Persea americanaextract showed the biofilm at 90%, followed by Cynara scolymus, which interrupted it at 85%, There was a change in proteinase intensity after 5 minutes and 24 hours. with an average enzymatic activity of 0.69 compared to the control of 0.49. Cynara scolymus was the extract with the highest mean concentration of 100 mg/ml; the phospholipase intensity was changed with Stryphnodendron barbatiman being more effective in 24 hours compared to the control (p< 0.0001). The hemolysin secretion was modified by Hamamelis virginiana (12.5 mg/ml) after 5 minutes of exposure, and in 24 hours. all extracts were capable to cause changes in secretion. Conclusion: The tested extracts have antifungal potential in Candida albicans biofilms, implying a significant reduction in virulence factors. Thus, these can be indicated as an alternative therapeutic tool to reduce the morbidity of these infections, as in both investigated exposure times. they were able to reduce theenzymatic secretion of the fungus (AU)

Estresse e periodontite: avaliação da inervação simpática no periodonto e da resposta adrenérgica após infecção por Porphyromonas gingivalis / Stress and periodontitis: evaluation of sympathetic innervation in the periodontium and the influence of adrenergic signaling on Porphyromonas gingivalis infection

O estresse agrava a doença periodontal por vários mecanismos, sendo a estimulação do sistema nervoso simpático (SNS) um deles. A literatura mostra que a estimulação de receptores ß-adrenérgicos (ß-AR) aumenta a angiogênese em ossos longos, e a expansão microvascular agrava a periodontite. Ainda, catecolaminas aumentam a virulência de periodontopatógenos e agem na resposta imune. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar: (1) a inervação simpática no periodonto e a influência da ativação do SNS na vascularização periodontal em camundongos e (2) a influência do sistema adrenérgico nos fatores de virulência de Porphyromonas gingivalis (Pg) e na resposta imunológica a este patógeno in vivo (Galleria mellonella). Na primeira parte, camundongos receberam injeção intraperitoneal de solução salina (PBS) ou isoproterenol (ISO; agonista não seletivo ß adrenérgico) por 1 mês, para detecção in situ de tirosina hidroxilase, neuropeptídeo Y, transportador de norepinefrina (NET) e endomucina em mandíbulas. Expressão de mRNA de Vegf-a, Il-1ß, Il-6, Adrb2 e Rankl foi quantificada 2 h após administração de ISO/PBS em mandíbula e tíbias, que serviram como controle positivo. Diferentemente das tíbias, não houve alteração na expressão dos genes analisados em mandíbula. Por outro lado, NET foi mais expresso no osso alveolar do que na tíbia, sendo detectado nos osteoblastos, osteócitos e células do ligamento. Embora o padrão de inervação e a expressão de Adrb2 sejam semelhantes entre mandíbula e tíbia, o tratamento com ISO não influenciou no número e área de vasos positivos para endomucina. Na segunda parte, investigamos a influência adrenérgica na resposta imune de G. mellonella durante infecção por Pg utilizando norepinefrina (NE; agonista α e ß adrenérgico) e ISO. Pg também foi cultivada na presença de ISO (PgISO) ou NE para avaliação da ação direta dos compostos na bactéria. ISO sistêmico protegeu as larvas da infecção por Pg, aumentando o número de hemócitos e reduzindo a contagem de células de Pg na hemolinfa, exclusivamente pelo ß-AR. Diferentemente, NE aumentou mortalidade, diminuiu o número de hemócitos. Apenas PgISO aumentou a morte das larvas, apesar de ambos, NE e ISO, terem aumentado a expressão de fatores de virulência na bactéria in vitro. ISO circulante, concomitante com PgISO, reduziu parcialmente a mortalidade das larvas. A influência do estresse na doença periodontal envolve diversas vias que alteram os dois pilares da periodontite (microbiota e sistema imune). No entanto, a ação na resposta do hospedeiro parece ser superior, uma vez que a estimulação ß-AR em osso alveolar saudável não alterou a produção de citocinas pró-inflamatórias ou microvascularização e a modulação da resposta imune em G. mellonella por compostos adrenérgicos foi mais importante para o desfecho da infecção que sua ação direta sobre a bactéria.

Stress aggravates periodontitis, and one possible mechanism is the activation of sympathetic nervous system (SNS). The literature shows that stimulation of ß-adrenergic receptors (ß-AR) induces angiogenesis in long bones, and microvasculature amplification was linked to periodontitis severity. Moreover, catecholamines increase the virulence of some periodontopathogenic bacteria in vitro and influences the innate immunity. Thus, the aim of this study was (1) evaluate the presence and influence of the SNS in the stimulation of periodontal vasculature, and (2) the influence of the adrenergic system on Porphyromonas gingivalis (Pg) virulence and on the immunological response to this pathogen in vivo (Galleria mellonella larvae). For the first part, mice received isoproterenol (ISO, a non-selective ß-AR agonist) or saline (PBS) for 1 month, for in situ analysis of tyrosine hydroxylase, neuropeptide Y, norepinephrine transporter (NET) and endomucin in the mandibles. Vegfa, Il-1ß, Il-6, Adrb2 and Rankl mRNA expression was assessed 2 hours after PBS/ISO treatment for mandibles and tibia, that served as positive control. We observed that, differently from the tibia, the expression of these genes did not alter on the mandible. However, NET expression was detected in osteoblasts, osteocytes, and periodontal ligament fibroblasts, and were higher expressed when compared to the tibias from the same animals. Although the pattern of sympathetic innervation and Adrb2 expression were similar between tissues, ISO treatment did not increase the area or number of endomucin+ vessels. For the second part, we addressed the adrenergic signaling influence on G. mellonella immune system during Pg infection using norepinephrine (NE, α- and ß-AR agonist), ISO and octopamine (insect's endogenous hormone). Pg was also cultivated in the presence of ISO (PgISO) or NE to investigate the direct action of the ligands on bacterial virulence. Systemic administration of ISO protected the larvae from Pg infection by increasing hemocyte density accompanied by reduction of Pg load in hemolymph, in a ß-AR manner. In contrast, NE increased mortality, with decreased hemocyte count and no influence on the other parameters. Only PgISO increased larvae death, despite of ISO and NE increased virulence in vitro. The concomitant injection of systemic ISO partially reversed the toxicity of the PgISO. The influence of stress on periodontitis involves different pathways, that alter the two pillars of disease's pathogenesis (microbiota and immune system). However, the influence on the host's inflammatory response seems to overcome the other players, since ß-AR activation on healthy alveolar bone didn't alter cytokines production or microvasculature. Besides, the modulation of innate immunity by adrenergic signaling in G. mellonella was more important for the disease's outcome than it's direct action on the bacteria.

Efeitos do sobrenadante da cultura de Streptococcus mutans sobre os fatores de virulência de C. albicans: estudos in vitro e in vivo / Effects of the culture supernatant of Streptococcus mutans on the virulence factors of C. albicans: in vitro and in vivo studies

Candida albicans possui capacidade de causar uma ampla variedade de manifestações clínicas devido a múltiplos fatores de virulência que agem simultaneamente para vencer o sistema imune e invadir os tecidos do hospedeiro. Estudos recentes demonstraram que o crescimento de C. albicans pode ser inibido por metabólitos produzidos por Streptococcus mutans, que estão presentes no sobrenadante da cultura bacteriana. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar se o sobrenadante da cultura de S. mutans, além de inibir o crescimento de C. albicans, é capaz de atenuar os mecanismos de virulência desse fungo. Inicialmente, uma suspensão padronizada de S. mutans (107 células/mL) foi incubada em caldo BHI a 37ºC por 4 h em 5% de CO2. O crescimento em BHI foi filtrado em membrana de 0,22 µm, obtendo-se o sobrenadante da cultura de S. mutans livre de células. A seguir, uma suspensão padronizada de C. albicans (107 células/mL) foi adicionada ao sobrenadante filtrado da cultura de S. mutans em caldo BHI, sendo incubada a 37ºC por 24 h. Para os grupos controle, a suspensão de C. albicans foi colocada em caldo BHI ou YPD esterilizados e incubada nas mesmas condições. Após o período de incubação, o crescimento de C. albicans foi centrifugado e lavado para obtenção de uma suspensão padronizada de C. albicans contendo as células sobreviventes da exposição ao sobrenadante de S. mutans. Essa suspensão de C. albicans foi então utilizada nos testes in vitro e in vivo para determinação dos fatores de virulência desse micro-organismo. No estudo in vitro, foi investigada a atividade proteolítica extracelular de C. albicans, bem como sua capacidade de filamentação, adesão e formação de biofilmes (1:30, 6, 24 e 48 h). Para o estudo in vivo, foi utilizado o modelo de Galleria mellonella, analisando-se a curva de sobrevivência, o número de células fúngicas e hemócitos na hemolinfa de larvas infectadas por C. albicans. Para a análise estatística foi utilizado ANOVA, teste de Tukey, Kruskal-Wallis e Log-rank, com nível de significância de 5%. Verificou-se que as células de C. albicans expostas ao sobrenadante de S. mutans apresentaram redução na filamentação, formação de biofilmes e patogenicidade em G. mellonella em relação ao controle. A exposição ao sobrenadante de S. mutans também mudou o padrão de aderência de C. albicans. Entretanto, o sobrenadante de S. mutans não reduziu a atividade proteolítica de C. albicans. Concluiu-se que o sobrenadante de S. mutans apresentou capacidade de inibir importantes mecanismos de virulência de C. albicans, podendo ser uma fonte de novos agentes antifúngicos a ser explorada

Candida albicans has the ability to cause a wide variety of clinical manifestations due to multiple virulence factors that act simultaneously to overcome the immune system and invade host tissues. Recent studies have shown that the growth of C. albicans can be inhibited by metabolites produced by Streptococcus mutans. Thus, the objective of this study was to investigate whether the culture supernatant of S. mutans is able to attenuate the virulence mechanisms of this fungus. Initially, a standardized suspension of S. mutans (107 cells/mL) was incubated in BHI broth at 37ºC for 4 h in 5% CO2. The growth in BHI was filtered through a 0.22 µm membrane, obtaining the cell free culture supernatant of S. mutans. Then, a standardized suspension of C. albicans (107 cells/mL) was prepared and added to the supernatant of the culture of S. mutans in BHI broth, being incubated at 37ºC for 24 h. For the control groups, the suspension of C. albicans was placed in sterile BHI or YPD broth and incubated under the same conditions. After the incubation period, the growth of C. albicans was centrifuged and washed to obtain a standardized suspension of C. albicans containing the surviving cells from exposure to the S. mutans supernatant. This suspension of C. albicans was then used to perform in vitro and in vivo tests to determine the virulence factors of this microorganism. In the in vitro study, the extracellular proteolytic activity of C. albicans was investigated, as well as its capacity for filamentation, adhesion and biofilm formation (1:30, 6, 24 and 48 h). For the in vivo study, the Galleria mellonella model was used, analyzing the survival curve, the number of fungal cells and hemocytes in the hemolymph of larvae infected with C. albicans. For statistical analysis, ANOVA, Tukey's test, Kruskal-Wallis and Log-rank were used, with a significance level of 5%. It was found that the cells of C. albicans exposed to the supernatant of S. mutans showed a reduction in filament, formation of biofilms and pathogenicity in G. mellonella in relation to the control. Exposure to the S. mutans supernatant also changed the pattern of adherence of C. albicans. However, the S. mutans supernatant did not reduce the proteolytic activity of C. albicans. It was concluded that the supernatant of S. mutans had the capacity to inhibit important mechanisms of virulence of C. albicans, being able to be a source of new antifungal agents to be explored.

Efeitos in vitro e in vivo dos inibidores da protease do HIV Atazanavir e Darunavir nos fatores de virulência de Candida albicans: formação de biofilme, filamentação e infecção em modelo de Galleria mellonella / In vitro and in vivo effects of the HIV Protease Inhibitors Atazanavir and Darunavir in virulence factors of Candida albicans: biofilm formation, hyphae formation and infection in Galleria mellonella model

Candida albicans é um fungo que habitualmente coloniza superfícies mucosas de humanos e pode assumir caráter patogênico a depender de fatores do hospedeiro. Portadores da Síndrome da Imunodeficiência Humana, causada pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), são propícios a apresentar candidose nas mucosas devido a imunodeficiência celular que apresentam. A introdução da Terapia Antirretroviral (TARV), em especial o surgimento dos Inibidores da Protease do HIV (IPs-HIV), reduziu drasticamente a incidência e prevalência destas patologias ao longo dos anos. Estudos clínicos e epidemiológicos com IPs-HIV de primeira geração demostraram que tal redução não se deve exclusivamente à melhora imunológica promovida pela TARV, e pesquisas in vitro já demonstraram propriedades antifúngicas e antibiofilme de alguns IPs-HIV de primeiras gerações em C. albicans. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do Atazanavir (ATV) e Darunavir (DRV), dois IPs-HIV de segunda e terceira geração respectivamente em uso clínico atual no Brasil, em diferentes fatores de virulência de C. albicans. Para isso foram realizados estudos com duas cepas clínicas de C. albicans isoladas de lesões de candidose orofaríngea de pacientes portadores de HIV para avaliar a ação in vitro das drogas na morfogênese, formação de biofilme (contagem de células viáveis e quantificação de biomassa) e na expressão dos genes de virulência BRC1 e SAP2, e in vivo no efeito protetor desses medicamentos na infecção experimental por C. albicans em modelo de Galleria mellonella. Os dados foram analisados por teste t, ANOVA, Kruskal-Wallis, Dunn e Kaplan-Meier (p<0,05). A Concentração Inibitória Mínima (CIM) para ambos os IPs-HIV testados foi 512 µg/mL. Nos biofilmes, a redução na contagem de UFC/mL de C. albicans nos grupos tratados com IPs-HIV foi de até 6,81 Log. A biomassa dos biofilmes tratados também sofreu reduções significantes para ATV (82%), DRV (81%) comparada ao grupo controle.DRV e ATV promoveram redução estatisticamente significante de expressão gênica de SAP2 e BRC1, respectivamente, quando comparados ao controle (p<0,05). Em relação à morfogênese de C. albicans, ATV e DRV inibiram significativamente a formação de hifas (p=0,0183). No estudo in vivo, o uso profilático de ATV e DRV em G. mellonella infectadas com C. albicans prolongou em até 40% a sobrevivência das larvas (p=0,0004). Conclui-se que ATV e DRV inibiram a filamentação e apresentaram atividade antifúngica, antibiofilme e na expressão de genes de fatores de virulência de C. albicans e preveniram candidose em G. mellonella(AU)

Candida albicans is a fungus that usually colonizes mucous surfaces of humans and can assume pathogenic character depending on host factors. Patients with Human Immunodeficiency Syndrome, caused by the Human Immunodeficiency Virus (HIV), are favorable to present mucous candidosis due to the cellular immunodeficiency they present. The introduction of Antiretroviral Therapy (ART), especially the emergence of HIV Protease Inhibitors (HIV-PI), has drastically reduced the incidence and prevalence of these mycosis over the years. Clinical and epidemiological studies with firstgeneration HIV-PIs have shown that this reduction is not exclusively due to the immunological improvement promoted by ART, and in vitro research has already demonstrated antifungal and antibiofilm properties of firsts-generations HIV-PIs on C. albicans. Thus, the aim of this study was to evaluate the effects of Atazanavir (ATV) and Darunavir (DRV), two HIV-PIs of second and third generation respectively currently in clinical use in Brazil, on virulence factors of C. albicans. For this purpose, studies were carried out with two clinical strains of C. albicans isolated from lesions of oropharyngeal candidosis of HIV positive patients to evaluate in vitro action of the drugs on morphogenesis, biofilm formation (number of viable cell and biomass determination) and virulence factor genes BRC1 and SAP2 expression and in vivo on the protective effect of these drugs on experimental infection by C. albicans in Galleria mellonella model. Data were analyzed by t Student, ANOVA, Kruskal-Wallis and Dunn and Kaplan-Meier (p<0.05) tests. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) for both tested HIV-PIs was 512 µg/mL. In biofilms, a reduction in the CFU/mL count of C. albicans in the groups treated with HIV-PIs was up to 6.81 log. The biomass of biofilms also suffered significant reductions for ATV (82%) and DRV (81%) compared to the control group. DRV and ATV statistically significantly downregulated the expression of SAP2 and BRC1 genes respectively (p<0,05). Regarding the morphogenesis of C. albicans, ATV and DRV inhibited the formation of hyphae (p = 0.0183). In the in vivo study, the prophylactic use of ATV and DRV in G. mellonella infected with C. albicans prolonged larval survival by up to 40% (p = 0.0004). We can conclude that ATV and DRV inhibited filamentation and showed antifungal activity, being able to inhibit growth, formation and virulence factors gene expression of C. albicans biofilm and prevented candidosis in G. mellonel(AU)

Estudo dos fatores de virulência de Cândida spp. isoladas da cavidade bucal de pacientes pediátricos em UTI / Study of the virulence factors of Candida spp. isolated from the oral cavity of pediatric patients in the ICU

O presente estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, fatores de virulência e susceptibilidade ao fluconazol, associado ou não a Clorexidina, de Candida spp. isoladas de diferentes sítios da cavidade bucal de crianças hospitalizadas em Unidade de Terapia Intensiva (UTI) comparando com isolados de crianças não hospitalizadas. Para isso, foram utilizados isolados de Candida spp., previamente identificados e estocados, oriundos de 30 pacientes de UTI (G1) e 30 pacientes saudáveis (G2), com idade entre 01 e 13 anos, pareados por sexo e idade. A coleta dos espécimes clínicos foi realizada através de esfregaço de mucosa (swab) e raspagem de biofilme dental supragengival, e a identificação das espécies de Candida se deu por espectrometria de massa (MALDI-TOF). Todos os isolados de Candida (n=60, sendo 46 G1 e 14 G2 (C.albicans n=15, C. tropicalis n=5, C. guilliermondii n=32, C. parapsilosis n=5, C. glabrata n=2, C. kefyr n=1) foram então selecionados para a avaliação de fatores de virulência como, formação de biofilme, produção de fosfolipase e protease, susceptibilidade ao fluconazol (FLZ) e clorexidina (CHX); e, verificação de sinergismo, checkerboard, entre as duas drogas. Os resultados foram analisados através do SPSS versão 20 e comparados por meio dos testes Qui-quadrado, Fisher e Razão de chance (95% IC), com nível de significância de 95% (p≤0,05). Tanto os isolados de G1 (97,8%) quanto os de G2 (100%) produziram biofilme (χ2, p=0,76). Quanto a produção de fosfolipase, somente 3 (6,5%) isolados do G1 (todos de C. albicans) foram produtores, sendo um isolado de mucosa (16,7%) e dois em biofilme (40%); No G2, isso aconteceu de modo similar (1 isolado produtor) (χ2, p=0,66). Já em relação a produção de protease, 42 isolados (91,3%), dos quais 100% dos isolados de C. guilliermondii, seguida de C. albicans (81,8%), produziram esta enzima em G1, sendo esta frequência significativamente maior do que a encontrada no G2 com 9 isolados (64,3%) (χ2, p=0,025). Não houve diferença significativa quando comparamos os fatores de virulência entre os isolados oriundos de diferentes sítios, nos dois grupos. Cinquenta e um (85%) isolados foram resistentes ao FLZ, sendo 38 (82,6%) no G1 e 13 (92,9%) no G2 (χ2, p=0,47), sendo a frequência de isolados resistentes similar entre os sítios (mucosa x biofilme dental) (χ2, p=0,40). Foi observado que os poucos isolados resistentes a Clorexidina (n=2; 1 C. tropicalis do G1 e 1 C. albicans do G2), foram sensíveis a combinação FLZ e CHX, mostrando um sinergismo entre as duas drogas. Conclui-se que os pacientes internados em UTI apresentam maior freqüência de isolados de Candida spp. produtores de protease e que isolados de biofilme dental são tão virulentos quanto os de mucosa nesses pacientes. Ainda, a combinação de fluconazol e clorexidina foi eficiente no controle do crescimento de Candida spp. (AU)

The present study aimed to evaluate, in vitro, virulence and susceptibility factors to fluconazole, associated or not with Chlorhexidine, from Candida spp. isolated from different sites in the oral cavity of children hospitalized in an Intensive Care Unit (ICU) compared with isolates from children not hospitalized. For this, Candida spp. Isolates, previously identified and stored, were used, coming from 30 ICU patients (G1) and 30 healthy patients (G2), aged between 01 and 13 years, matched by sex and age. The collection of clinical specimens was carried out through mucosa smear (swab) and scraping of supragingival dental biofilm, and Candida species were identified by mass spectrometry (MALDI-TOF). All Candida isolates (n = 60, 46 G1 and 14 G2 (C.albicans n = 15, C. tropicalis n = 5, C. guilliermondii n = 32, C. parapsilosis n = 5, C. glabrata n = 2, C. kefyr n = 1) were then selected for the evaluation of virulence factors such as biofilm formation, phospholipase and protease production, susceptibility to fluconazole (FLZ) and chlorhexidine (CHX); and, synergism check, checkerboard, between the two drugs. The results were analyzed using SPSS version 20 and compared using the Chi-square, Fisher and odds ratio tests (95% CI), with a 95% significance level (p≤0.05) Both G1 (97.8%) and G2 isolates (100%) produced biofilm (χ2, p = 0.76). Regarding the production of phospholipase, only 3 (6.5%) isolates from G1 (all of C. albicans) were producers, one isolated from the mucosa (16.7%) and two in biofilm (40%); In G2, this happened in a similar way (1 producer isolate) (χ2, p = 0.66). Regarding protease production, 42 isolates (91.3%), of which 100% of the isolates of C. guilliermondii, followed by C. albicans (81.8%), produced this enzyme in G1, this frequency being significantly greater than that found in G2 with 9 isolates (64.3%) (χ2, p = 0.025). There was no significant difference when comparing the virulence factors between the isolates from different sites, in the two groups. Fifty-one (85%) isolates were resistant to FLZ, 38 (82.6%) in G1 and 13 (92.9%) in G2 (χ2, p = 0.47), the frequency of resistant isolates being similar between sites (mucosa x dental biofilm) (χ2, p = 0.40). It was observed that the few isolates resistant to chlorhexidine (n = 2; 1 C. tropicalis from G1 and 1 C. albicans from G2), were sensitive to the combination of FLZ and CHX, showing a synergism between the two drugs. It is concluded that patients admitted to the ICU have a higher frequency of Candida spp. protease producers and that dental biofilm isolates are as virulent as mucosal ones in these patients. Also, the combination of fluconazole and chlorhexidine was effective in controlling the growth of Candida spp. (AU)

Prevalência, susceptibilidade antimicrobiana e virulência de bacilos Gram-negativos e enterococos isolados do biofilme subgengival associado à doenca periodontal' / Prevalence, antimicrobial susceptibility and virulence of Gram-negative bacilli and enterococci isolated from subgingival biofilm associated with periodontal disease

Objetivos: A cavidade oral pode atuar como reservatório de vários patógenos de importância clínica, incluindo bacilos Gram-negativos (BGN) e Enterococcus spp. Essas espécies podem ainda aumentar em uma condição disbiótica, como ocorre nas doenças periodontais. Assim, este estudo teve como objetivo determinar a prevalência, susceptibilidade antimicrobiana e presença de fatores de virulência de BGN e enterococos isolados do biofilme subgengival de indivíduos com diferentes condições periodontais, correlacionando esses achados com parâmetros clínicos e composição da microbiota subgengival. Métodos: Na análise dos BGN, amostras de biofilme subgengival foram obtidas de indivíduos com Saúde Periodontal (SP, n=81), Gengivite (G, n=74) e Periodontite (P, n=207); para Enterococcus spp., amostras foram coletadas de 139 indivíduos com SP, 103 com G e 305 com P. As amostras foram cultivadas em meio seletivo e as colônias isoladas e identificadas por MALDI-ToF. A susceptibilidade antimicrobiana foi determinada por disco-difusão (CLSI); já os genes de virulência de enterococos e genes codificadores de ESBL e carbapenemases em BGN foram pesquisados por PCR. A produção de ESBL e carbapenemases por BGN foi avaliada pelo teste de sinergia de disco duplo e hidrólise de imipenem por espectrofotometria, respectivamente. A microbiota subgengival desses indivíduos foi determinada pelo Checkerboard. Diferenças entre os grupos foram avaliadas pelos testes de KruskalWallis, Mann-Whitney e Qui-quadrado. Resultados: BGN foram isolados em 36.2% das amostras, com maior prevalência (p<0,001) em pacientes com P (46.4%) em comparação com SP (22.2%) e G (22.9%). Pseudomonas aeruginosa (27.5%), Enterobacter cloacae (16.8%) e Enterobacter asburiae (10.7%) foram as espécies mais predominantes. Resistência/sensibilidade reduzida a ≥ 1 antimicrobiano foi encontrada em 60% dos BGN, mas apenas 4.6% eram multirresistentes. Altas taxas de resistência (>40%) foram observadas na família Enterobacteriacea para cefoxitina, cefalotina, amoxicilina- clavulanato e cefazolina. Uma única cepa de K. pneumoniae apresentou resistência/sensibilidade reduzida ao imipenem, embora o fenótipo ESBL e a detecção dos genes codificadores de beta-lactamases foram negativos. Enterococcus spp. foram isolados em 7.4% de todas as amostras, 53.7% eram E. faecalis. Essas espécies foram mais predominantes na P (9.8%) e G (7.8%) do que na SP (2.2%, p< 0,05); entretanto não houve correlação com os níveis de gravidade da P. Altas taxas de resistência/susceptibilidade reduzida foram observadas para ciprofloxacina, eritromicina e rifampicina. Os fatores de virulência mais predominantes incluíram ace, asa e esp, todos relacionados à formação de biofilme e colonização. F. nucleatum foi mais prevalente na microbiota de indivíduos enterococos +. Por outro lado, Dialister pneumosintes foi pouco detectado em indivíduos portadores de enterococos bopD+. Estreptococos orais foram prevalentes (>70%) na microbiota de pacientes que apresentavam enterococos suceptíveis à doxiciclina (p<0,05), frequentemente bopD- e esp- (p<0,01). Conclusão: Uma prevalência elevada de BGN da família Enterobacteriacea com resistência a cefalosporinas e penicilina é observada na microbiota subgengival de indivíduos com P. Enterococcus spp., principalmente E. faecalis são pouco frequentes na microbiota subgengival associada à SP, porém aumentam significativamente nas doenças periodontais. Os mesmos apresentam diversos genes de virulência compatíveis com destruição tecidual, bem como resistência a antimicrobianos de uso na clínica periodontal, o que pode limitar uma resposta terapêutica favorável. (AU)

Background/Aim: The oral cavity can act as a reservoir for several pathogens of clinic importance, including Gram-negative bacilli (GNB) and Enterococcus spp. These species may increase even more in a dysbiotic condition as seen in periodontal diseases. Thus, this study aimed to determine the prevalence, antimicrobial susceptibility and virulence factors of GNB and enterococci isolated from subgingival biofilm of individuals with different periodontal conditions, correlating these findings with clinical parameters and the composition of the subgingival microbiot. Methods: For GNB analysis, subgingival biofilm was obtained from individuals with periodontal health (PH, n=81), gingivitis (G, n=74) and periodontitis (P, n=207), whereas for enterococci isolation samples were taken from 139 patients with PH, 103 with G, and 305 with P. Samples were cultivated in selective media and isolated colonies were identified by MALDI-ToF. Antimicrobial susceptibility was determined by CLSI disk diffusion, whereas virulence genes by PCR. Production of ESBL and carbapenemases were evaluated by double disk synergy test and spectrophotometric detection of imipenem hydrolysis, respectively, and ESBL and carbapenemase encoding genes were surveyed by PCR. The subgingival microbiota was determined by checkerboard. Differences among groups were examined by Chi-square, Kruskal-Wallis or Mann-Whitney tests. Results: GNB were isolated from 36.2% of all samples, with a significantly greater prevalence (p<0.001) in P patients (46.4%) compared to PH (22.2%) and G (22.9%). Pseudomonas aeruginosa (27.5%), Enterobacter cloacae (16.8%) and Enterobacter asburiae (10.7%) were the most predominant species. Resistance/reduced sensitivity to ≥ 1 antimicrobial was found in 60% of GNB, but only 4.6% were multidrug resistant. High resistance rates (>40%) were seen in the Enterobacteriaceae family for cefoxitin, cephalotin, amoxicillin-clavulanate, and cefazolin. One strain of K. pneumoniae showed resistance/reduced sensitivity to imipenem, although the ESBL-phenotype and PCR targeting beta-lactamase encoding genes were negative. Enterococcus spp. were isolated from 7.4% of all samples; 53.7% were E. faecalis. Enterococci were more predominant in P (9.8%) and G (7.8%) samples than PH (2.2%; p<0.05), however there were no associations with distinct levels of disease severity. High rates of low susceptibility/resistance were seen for ciprofloxacin, erythromycin and rifampicin. Predominant virulence factors included ace, asa and esp, all related to colonization and biofilm formation. F. nucleatum was prevalent in the microbiota of enterococci+ individuals. In contrast, lower frequency of Dialister pneumosintes was found in patients carrying bopD+ enterococci. Oral streptococci were prevalent (>70%) in the microbiota of patients carrying enterococci susceptible to doxycycline (p<0.05), which were also frequently bopD- and esp- (p<0.01). Conclusion: A high prevalence of GNB of the Enterobacteriacea family, resistant to cephalosporins and penicillins is observed in the subgingival microbiota of patients with P, Enterococcus spp., mainly E.faecalis are not commonly detected in the healthy-related subgingival microbiota, however their frequency increases significantly in patients with periodontal diseases. These species carry several genes related to tissue destruction, as well as resistance to antimicrobials routinely used in the periodontal clinic, which may hinder a successful therapeutic response. (AU)

Virulence factors of Candida species from the oral mucosa and prostheses of elderly people from a riverside community in the Amazon state, Brazil / Fatores de virulência de espécies de Candida provenientes da mucosa oral e das próteses dos idosos de uma comunidade ribeirinha no Amazonas - Brasil

Abstract Introduction Candida albicans is the yeast most commonly affecting the oral cavity, sometimes causing infection. However, several factors may be associated with the onset of candidiasis, which may be related not only to the hygiene and health of individuals, but also to the pathogenicity of these microorganisms. Objective To evaluate the virulence factors of Candida yeasts isolated from the oral mucosa of elderly people living in the "Comunidade Lago do Limão", municipality of Iranduba, Amazonas state, Brazil. Material and method Testes were performed to assess the production of urease, proteinase, phospholipase and hemolysin. Statistical analysis used the Fisher's exact test and the Chi-squared test. Result Prevalence of non-albicans species was observed. As for virulence factors, all isolates were negative ureases, and there was prevalence of very strong proteinase production, whereas most isolates did not produce this enzyme in the phospholipase test. All yeasts analyzed presented hemolysin production, with grade IV hemolysis as the most prevalent. There was no statistically significant difference between the virulence of isolates from the oral cavity and the prostheses of the elderly analyzed. Conclusion Several virulence factors may present with high intensity in the presence of oral microbiota changes. In addition, non-albicans species present number of virulence factors similar to that of C. albicans, with high pathogenicity. This study allows a better analysis of candidiasis prevention strategies aiming to promote improvement in the health and quality of life for the elderly.

Resumo Introdução A Candida albicans é a levedura que mais acomete a cavidade oral, podendo causar infecção. Porém diversos fatores podem estar associados ao aparecimento da candidíase, que podem estar relacionados com a higiene e saúde dos indivíduos, mas também com a patogenicidade destes microrganismos. Objetivo Avaliar os fatores de virulência de leveduras do gênero Candida isoladas da mucosa oral dos idosos residentes na Comunidade Lago do Limão - Iranduba - Amazonas - Brasil. Material e método Foram realizados os testes de urease, proteinase, fosfolipase, e avaliação da produção de hemólise. Na análise estatística utilizou-se teste Exato de Fisher e Quiquadrado. Resultado Obteve-se a prevalência de espécies não-albicans, quanto aos fatores de virulência, todos os isolados foram ureases negativos, houve prevalência de produção muito forte de proteinase, enquanto que no teste da fosfolipase, a maioria dos isolados não apresentou produção desta enzima; todas as leveduras analisadas apresentaram produção de hemolisina, sendo mais prevalente a hemólise grau IV. Não houve diferença estatisticamente significativa entre a virulência dos isolados oriundos da cavidade oral e da prótese dos idosos analisados. Conclusão Diversos fatores de virulência podem apresentar-se com alta intensidade na presença de alterações da microbiota oral. Além disso, as espécies não-albicans apresentam fatores de virulência tanto quanto a C. albicans, com graus de patogenicidade elevados. Este estudo permite a análise de estratégias de prevenção da candidíase, com intuito de promover melhor saúde e qualidade de vida para os idosos.

Influência de extratos vegetais nos fatores de virulência de Candida albicans em biofilme: estudo in vitro / Plant extract and the virulence factors of Candida albicans

Cepas isoladas de infecções graves por Candida albicans expressam inúmeros fatores de virulência e a compreensão destes fatores permite esclarecer os mecanismos inerentes ao patógeno no processo infeccioso, assim como ferramentas terapêuticas que modulem a expressão destes fatores e permitam o controle de infecções persistentes. O objetivo deste estudo foi analisar a influência de 4 extratos vegetais no crescimento deste fungo quando em bifilme, assim como na expressão dos fatores de virulência (proteinase, fosfolipase e hemolisina) de C. albicans. Para isso, biofilmes de 48 horas de C. albicans (ATCC 18804) foram expostos a diferentes concentrações dos extratos glicólicos de Hamamelis virginiana, Persea. americana, Cynara scolymus L e Stryphnodendro barbatiman M, por 5 minutos e 24 h, para verificar a atividade antifúngica (redução em relação ao controle), e a secreção de proteinase, fosfolipase e hemolisina, utilizando meios especificos. Todos os extratos testados foram efetivos na redução do biofilme de C. albicans. Quando em contato por 5 min os extratos foram capazes de reduzir o biofilme em 50% em média, reduções mais expressivas foram encontradas depois de 24 h de exposição. O extrato de P. americana (25 mg/mL) reduziu o biofilme em 90%, em relação ao controle, seguido de C. scolymus (100 mg/mL), que reduziu em 85%. A secreção de proteinase foi alterada, tanto em 5 min como em 24 h, sendo a Pz (atividade enzimática) média de 0,69, em relação ao controle Pz= 0,49. Cynara scolymus foi o extrato que induziu a maior Pz média na concentração de 100 mg/mL, 0,73 e 0,78, quando tratados por 5 min e 24 h, respectivamente, em relação ao controle (Pz=0,48) (p<0,0001). A secreção de fosfolipase sofreu alteração depois do tratamento, sendo o extrato de S. barbatiman (100 mg/mL) o mais efetivo em 24 h, com Pz de 0,74 em relação ao controle (Pz= 0,50) (p<0,0001). A secreção de hemolisina foi alterada pela exposição ao extrato de H. virginiana (12,5 mg/mL) em 5 min de exposição. Em 24 h todos os extratos foram capazes de alterar o padrão hemolítico da cepa testada, sendo o extrato de H. virginiana (12,5 mg/mL) a apresentar Pz= 0,70. Os extratos vegetais testados demostram potencial antifúngico; e influenciam negativamente a secreção dos fatores de virulência testados, podendo ser apontados como ferramentas terapêuticas alternativas visando a redução da morbidade das infecções causadas por este patógeno (AU)

Strains isolated from severe Candida. albicans infections express numerous virulence factors, which suggest the understanding of these factors allows to clarify the mechanisms inherent to the pathogen in the infectious process, as well as therapeutic tools that modulate the expression of these factors and allow the control of persistent infections. Biofilms of 48 hours of C. albicans (ATCC 18804) were exposed to different concentrations of the glycolic extracts of Hamamelis virginiana and Persea. americana, Cynara. scolymus L and Stryphnodendron. barbatiman M, for 5 minutes and 24 h, to verify the antifungal activity, and secretion of proteinase, phospholipase and hemolysin. All extracts tested were effective in reducing the biofilm of C. albicans. When in contact for 5 min the extracts were able to reduce the mean of 50% of the biofilm. More significant reductions were found after 24 h of exposure. The extract of P. americana (25 mg/ml) reduced biofilm by 90% compared to control, followed by C. scolymus (100 mg/ml), which reduced by 85%. The enzymatic activiti (Pz) of proteinase was altered, both in 5 min and 24 h, the mean Pz being 0.69, in relation to the control Pz = 0.49. C. scolymus was the extract with the highest mean Pz at the concentration of 100 mg/ml, 0.73 and 0.78, when treated for 5 min and 24 h, respectively, in relation to the control (Pz = 0.48) (p <0,0001). Phospholipase secretion was altered after treatment, with S. barbatiman (100 mg/ml) being the most effective in 24 h, with Pz of 0.74 in relation to the control (Pz = 0.50) (p <0,0001). Hemolysin secretion was altered by exposure to H. virginiana (12.5 mg/ml) in 5 min of exposure. In 24 h all the extracts were able to change the hemolytic pattern of the tested strain, being the H. virginiana extract (12.5 mg/ml) to present Pz = 0,70. The tested plant extracts show antifungal potential; and negatively influence the secretion of the virulence factors tested, and can be indicated as alternative therapeutic tools aiming at reducing the morbidity of the infections caused by this pathogen(AU)

Expressão dos genes ALS3, HWP1, BCR1, TEC1, CPH1 e EFG1 de Candida albicans em biofilmes após inativação fotodinâmica / Expression of the Candida albicans genes ALS3, HWP1, BCR1, TEC1, CPH1 and EFG1 in biofilms after photodynamic inactivation

Os micro-organismos estão se tornando cada vez mais resistentes aos antimicrobianos e cepas de Candida albicans resistentes aos antifúngicos tem sido isoladas, assim, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a inativação fotodinâmica antimicrobiana (aPDI). Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da inativação fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes TEC1 (fator de transcrição), HWP1 (proteína de parede celular das hifas), EFG1 (regulador transcricional relacionado com a morfogênese), BCR1 (regulador da formação de biofilme e da parede celular), CPH1 (regulador transcricional envolvido na morfogênese) e ALS3 (adesina) de C. albicans. Foram avaliadas 30 amostras isoladas de pacientes portadores de HIV e 30 amostras de pacientes com estomatite protética, quanto a produção de biofilme, peso seco e filamentação. Destas, foram selecionadas as amostras mais virulentas de cada grupo que apresentaram melhor capacidade de formação de biofilme e filamentação. Assim, foi utilizada uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente portador de HIV, uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente com estomatite protética e uma cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção desses genes nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se ensaio de PCR em tempo real. Para a aPDI, foram utilizados os fotossensibilizadores azul de metileno a 300 µM e eritrosina a 400 µM sensibilizados com laser de Índio-Gálio-Alumínio-Fósforo de baixa potência (vermelho visível, 660 nm) e LED verde (532 ± 10 nm), respectivamente. Foram avaliados quatro grupos experimentais para a aPDI: a) F+L+: sensibilização com o corante e irradiação com luz; b) F+L-: somente tratamento com o fotossensibilizador; c) F-L+: somente irradiação com luz e d) F-L-: sem sensibilização com o corante e ausência de luz. Os resultados foram analisados por t-test, com um nível de significância de 5%. Após a análise fenotípica, as amostras Ca30 e 39 S foram selecionadas para a realização da aPDI. Como esperado, apenas para o grupo F+L+, quando comparado com o grupo F-L-, todos os genes analisados foram sub expressos após a aPDI. O fold-decrease para os genes ALS3, HWP1, BCR1, TEC1, CPH1 e EFG1 foram 0,73; 0,39; 0,77; 0,71; 0,67 e 0,60; para laser, respectivamente, e 0,66; 0,61; 0,50; 0,43; 0,54 e 0,66; para LED, respectivamente. Pode-se concluir que a aPDI mostrou uma redução na expressão dos genes de C. albicans, sugerindo a diminuição de sua virulência(AU)

Os micro-organismos estão se tornando cada vez mais resistentes aos antimicrobianos e cepas de Candida albicans resistentes aos antifúngicos tem sido isoladas, assim, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a inativação fotodinâmica antimicrobiana (aPDI). Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da inativação fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes TEC1 (fator de transcrição), HWP1 (proteína de parede celular das hifas), EFG1 (regulador transcricional relacionado com a morfogênese), BCR1 (regulador da formação de biofilme e da parede celular), CPH1 (regulador transcricional envolvido na morfogênese) e ALS3 (adesina) de C. albicans. Foram avaliadas 30 amostras isoladas de pacientes portadores de HIV e 30 amostras de pacientes com estomatite protética, quanto a produção de biofilme, peso seco e filamentação. Destas, foram selecionadas as amostras mais virulentas de cada grupo que apresentaram melhor capacidade de formação de biofilme e filamentação. Assim, foi utilizada uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente portador de HIV, uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente com estomatite protética e uma cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção desses genes nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se ensaio de PCR em tempo real. Para a aPDI, foram utilizados os fotossensibilizadores azul de metileno a 300 µM e eritrosina a 400 µM sensibilizados com laser de Índio-Gálio-Alumínio-Fósforo de baixa potência (vermelho visível, 660 nm) e LED verde (532 ± 10 nm), respectivamente. Foram avaliados quatro grupos experimentais para a aPDI: a) F+L+: sensibilização com o corante e irradiação com luz; b) F+L-: somente tratamento com o fotossensibilizador; c) F-L+: somente irradiação com luz e d) F-L-: sem sensibilização com o corante e ausência de luz. Os resultados foram analisados por t-test, com um nível de significância de 5%. Após a análise fenotípica, as amostras Ca30 e 39 S foram selecionadas para a realização da aPDI. Como esperado, apenas para o grupo F+L+, quando comparado com o grupo F-L-, todos os genes analisados foram sub expressos após a aPDI. O fold-decrease para os genes ALS3, HWP1, BCR1, TEC1, CPH1 e EFG1 foram 0,73; 0,39; 0,77; 0,71; 0,67 e 0,60; para laser, respectivamente, e 0,66; 0,61; 0,50; 0,43; 0,54 e 0,66; para LED, respectivamente. Pode-se concluir que a aPDI mostrou uma redução na expressão dos genes de C. albicans, sugerindo a diminuição de sua virulência(AU)

Estudo comparativo entre a produção de fosfolipases extracelulares e proteinases do gênero Candida isoladas a partir de infecções de cavidade oral / Comparative study between extracellular phospholipase and proteinase production in clinically important of the genus Candida isolated in oral candidiasis patients

Introdução: A habilidade da Candida spp. em produzir enzimas proteolíticas, tais como fosfolipase e proteinases, tem um papel importante na patogenicidade destas leveduras. Objetivo: Determinar as espécies causadoras das infecções orais por Candida spp., além de investigar a atividade in vitro das fosfolipases e proteinases em isolados clínicos do gênero Candida, provenientes de pacientes com candidíase oral. Material e método: Isolados de Candida spp., pertencentes à Coleção de Cultivos Fúngicos do Laboratório de Microbiologia e Patologia Oral do Departamento de Odontologia da Faculdade da Serra Gaúcha, foram analisados. Produção de fosfolipases foi analisada utilizando-se Ágar gema de ovo. Liberação de proteinases foi medida utilizando-se extrato de levedura adicionado à albumina bovina. Resultado: Um total de 35 isolados clínicos do gênero Candida foi testado. C. albicans foi a espécie predominante (77%). Os demais isolados identificados foram: C. parapsilosis (20%) e C. tropicalis (2%). Ao comparar a atividade de fosfolipase do grupo C. albicans com o grupo Candida não-albicans, foi encontrada diferença significativa (P=0,04). Não foi encontrada diferença significativa entre a C. albicans e a C. não-albicans, para a produção de proteinase. A liberação de proteinase foi significativamente maior quando comparada à produção de fosfolipase para o gênero Candida (P=0,04). Diferença estatisticamente significativa foi encontrada quando a atividade de fosfolipase e proteinase da C. albicans foi comparada à atividade das espécies de C. não-albicans (P=0,02). Conclusão: Diferentes quantificações de fosfolipase extracelular e atividade de proteinase têm sido atribuídas aos isolados clínicos de C. albicans quando comparados a outras espécies de Candida.

Introduction: The ability of the genus Candida to produce secretory enzimes such as proteinase and phospholipases to play an important role in the patogenicity of these yeasts. Objective: To determine the Candida species isolates from oral cavity infections and to investigate in vitro phospholipase and protease activities in clinically important of the genus Candida isolated in oral candidiasis patients. Material and method: Candida species isolated of the Fungal Culture Collection of Oral Microbiology and Pathology Testing Service Laboratory of the Dentistry Departament of Faculdade da Serra Gaúcha were evaluated. The phospholipases detection was assayed using the egg yolk agar plate method. Determination of protease production was performed in agar plates containing bovine serum albumine and yeasts extract. Result: A total of 35 isolates of the genus Candida were tested. C. albicans was the species predominant (77% of isolates), followed by C. parapsilosis (20%) and C. tropicalis (2%). When compared the phospholipase activity of the C. albicans group with the non-albicans Candida species types group was observed significant difference among of this groups (P=0.04). No statiscally significant difference between the C.albicans and non-albicans Candida species types when was compared to proteinase production. Proteinase production was higher and statiscally significant when compared to phospholipase activity in the genus Candida isolates (P=0.04). Statiscally significant differences were found between phosphoplipases and proteases activity for C. albicans when compared to non-albicans Candida species types (P=0.02). Conclusion: Differences in the secretion rates of phospholipase extracellular and proteases activity have been attributed to clinical strains of C. albicans when compared to others Candida species types.

Análise de fatores de virulência de Candida albicans na associação com Streptococcus mitis e Streptococcus sanguinis in vitro e in vivo / Analysis of virulence factors of Candida albicans in association with Streptococcus mitis and Streptococcus sanguinis in vitro and in vivo

O objetivo foi avaliar as interações entre Candida albicans (ATCC 18804) com Streptococcus mitis (49456) e Streptococcus sanguinis (10556) in vitro e in vivo avaliando-se a possível influência destas associações, na expressão de genes, na filamentação e formação de biofilme de Candida albicans. A formação de biofilme, foi realizado mono e multiespécie em placa de 96 poços por 48 h à 37 ºC com 5% CO2. Os biofilmes foram desagregados e diluídos para semeadura em ágar e após incubação as UFC/mL foram contadas. A filamentação de C. albicans, in vitro foi realizada em placas de 24 poços e in vivo em Galleria mellonella, com análise histológica e contagem de UFC/mL. A avaliação da expressão gênica de ALS1, ALS3, BRC1, CPH1, EFG1 e HWP1, foi realizada por PCR em tempo real utilizando o gene normalizador ACT1. Os resultados da UFC/mL (p < 0.05), demonstrou que o biofilme de C. albicans monoespécie apresentou maior crescimento, quando comparado com o biofilme associado com S. mitis (p = 0,001) ou com S. sanguinis (p = 0,001). A filamentação in vitro demonstrou que a interação com S. mitis inibiu a filamentação de C. albicans (p = 0,0006), entretanto, a interação com S. sanguinis não inibiu (p = 0,1554). Os genes ALS1, ALS3 e HWP1 foram super expressos na interação com S. mitis. A interação com S. sanguinis, promoveu super expressão dos genes ALS3 e HWP1. Os genes BRC1, CPH1 e EFG1 foram super expressos na interação com S. mitis e sub expressos, na interação com S. sanguinis. Não houve diferença estatística nos estudos in vivo de filamentação e UFC/mL. Conclui-se que in vitro, S. mitis e S. sanguinis foram capazes de inibir a formação de biofilme de C. albicans. Assim como a interação com S. mitis inibiu a sua filamentação. A interação com S. mitis parece aumentar o fator de virulência de C. albicans, quanto a expressão dos genes de aderência ALS1, ALS3 e HWP1, bem como na associação com S. sanguinis (ALS3 e HWP1). Os genes de formação de biofilme, BRC1, CPH1 e EFG1, na interação com S. mitis promoveu aumento do fator de virulência(AU)

The objective was to evaluate the interactions between Candida albicans (ATCC 18804) with Streptococcus mitis (49456) and Streptococcus sanguinis (10556) in vitro and in vivo evaluating the possible influence of these associations, in the expression of genes, in the filamentation and biofilm formation of Candida albicans. Biofilm formation was performed mono- and multispecies in 96-well plate for 48 h at 37 ºC with 5% CO2. Biofilms sonicated and diluted for sowing on agar and after incubation the colonies counted to obtain the colony forming units (CFU/mL). The filamentation in vitro was performed in 24-well plate and in vivo Galleria mellonella, with histological and CFU/mL. The evaluation of gene expression ALS1, ALS3, BRC1, CPH1, EFG1 and HWP1 was performed by real-time PCR using the normalizing gene ACT1. The results of CFU/ml (p<0.05), found that C. albicans biofilm monoespécie showed increased growth, as compared to the biofilm associated with S. mitis (p = 0.001) and S. sanguinis (p = 0.001). The filamentation in vitro demonstrated that the interaction with S. mitis inhibited C. albicans filamentation (p = 0.0006), interaction with S. sanguinis could not (p = 0.1554). The ALS1, ALS3, HWP1 gene, were superexpressed in S. mitis interaction. Interaction with S. sanguinis, promoted overexpression of ALS3 and HWP1 genes. The BRC1 genes, CPH1 and EFG1 were super expressed in interaction with S. mitis and sub expressed when there was interaction with S. sanguinis. There was no statistical difference in the in vivo studies of filamentation and CFU/mL. It follows that in vitro, S. mitis and S. sanguinis were able to inhibit the formation of C. albicans biofilms. Like the interaction with S. mitis inhibited its filamentation. The interaction with S. mitis appears to increase the virulence factors of C. albicans. ALS1, ALS3, HWP1 as the expression of adhesion genes, and as well as in association with S. sanguinis (ALS3 and HWP1). Biofilm formation genes, BRC1, CPH1 and EFG1 in interaction with S. mitis promoted increased virulence factor(AU)

Efeito da redução do aporte nutricional na diversidade genotípica e nos fatores de virulência de bactérias cariogênicas isoladas de dentina cariada selada / Stress starvation effect on the genotypic diversity and virulence factors of cariogenic bacteria isolated from sealed carious dentin

No tratamento de lesões profundas de cárie, a Remoção Parcial de Dentina Cariada (RPDC) e restauração tem sido proposta como alternativa conservadora para evitar perda de tecido dentário e exposição pulpar. Existe uma hipótese de que uma seleção de bactérias ocorre abaixo de restaurações devido a um acesso limitado de nutrientes. No entanto, há falta de conhecimento sobre a diversidade e potencial de virulência das bactérias cariogênicas residuais seladas abaixo de restaurações sobre dentina cariada. O objetivo deste estudo foi caracterizar Streptococcus mutans e lactobacilos isolados de dentina cariada antes e após o estresse nutricional por selamento da cavidade. S. mutans e lactobacilos foram obtidos por cultivo da dentina cariada de lesões cavitadas de quatro e seis pacientes, respectivamente. Duas amostras de dentina cariada foram coletadas e cultivadas por paciente: uma antes e outra após três meses de selamento da cavidade. Colônias de S. mutans e lactobacilos preditos foram selecionadas, isoladas e analisadas por coloração de Gram. Genes “housekeeping” foram utilizados na identificação da espécie (gtfB para S. mutans e pheS/rpoA/groEL/16SrRNA para lactobacilos) e a técnica de AP-PCR foi utilizada para genotipagem. A análise fenotípica (produção de ácido e de tolerância ao ácido) foi realizada. Um total de 48 isolados representativos de S. mutans foram analisados (31 antes e 17 após estresse nutricional por meio do selamento). O número de genótipos diferentes de S. mutans encontrado foi de nove e seis antes e após selamento, respectivamente. Pelo menos um dos genótipos encontrados antes do selamento foi também encontrado na dentina após o estresse nutricional por meio do selamento...

A hypothesis exists that a selection of bacteria occurs underneath restoration due to a limited access of nutrients. However, there is a lack of evidence regarding their role in the progression of carious process beneath restorations after Partial Dentin Caries Removal. It still unclear if the diversity and the virulence potential of the sealed bacteria remain the same after sealing. The aim of this study was to characterize Streptococcus mutans and Lactobacillus species isolated from caries dentin before and after starvation stress by cavity sealing. S. mutans and lactobacilli were obtained by culture of carious dentin from four and six patients, respectively. Two carious dentin samples were collected and cultured per patient: 1st before and 2nd after three months of cavity sealing. Presumptive S. mutans and lactobacilli were selected, isolated and analyzed by Gram staining. Housekeeping genes sequencing were used to the species identification (gtfB for S. mutans and pheS/rpoA/groEL/16SrRNA for lactobacilli) and Arbitrary Primer-PCR (AP-PCR) was used for genotyping. Phenotypic analysis (acid production and acid tolerance) was performed. A total of 48 representative S. mutans isolates were genotyped (31 before and 17 after the sealing). The number of different genotypes identified was nine and six before and after sealing, respectively. At least one of the genotypes found before the sealing was also found on dentin after the sealing in all patients. Regarding lactobacilli, it was analyzed 86 strains, 41 before and 45 after starvation stress by sealing. L. paracasei and L. rhamnosus prevailed and only four isolates did not belong to these species. A total of 27 and 15 different genotypes were found before and after sealing, respectively...

Efeito do farnesol sobre fatores de virulência de Candida albicans e Streptococcus mutans / Effect of farnesol on virulence factors of Candida albicans and Streptococcus mutans

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade da molécula de quorum sensing farnesol na formação de biofilmes simples e misto de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175. Inicialmente o farnesol foi diluído em metanol e posteriormente em saliva artificial (SA). Os testes de concentração inibitória mínima (CIM) do farnesol contra as células de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175 em suspensão foram baseados no método da microdiluição. O farnesol diluído nas concentrações de 1,56, 3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 70, 150 e 300 mM foi aplicado sobre os biofilmes de Candida albicans e Streptococcus mutans (formação) e após 48 horas de contato sua atividade antibiofilme foi determinada por meio da quantificação da biomassa total (coloração com violeta cristal (CV)), enumeração das unidades formadoras de colônias (UFCs) e atividade metabólica (XTT). Foi ainda realizada uma curva de tempo de morte celular para os dois microrganismos estudados. Após o tratamento com o farnesol, a matriz dos biofilmes foi extraída e analisada em termos de concentração de proteínas e carboidratos, além do teste de pH para S. mutans e verificação das atividades enzimáticas de proteinase, fosfolipase e hemolítica para Candida albicans, ainda a estrutura dos biofilmes foi analisada por meio da microscopia eletrônica de varredura. Os resultados de CIM foram de 150 mM para C. albicans e de 6.25 mM para S. mutans. O farnesol diminuiu a formação de biofilmes simples e mistos, com reduções significativas de 37-90% e 64-96%, respectivamente para a biomassa total e atividade metabólica. Para os biofilmes simples, concentrações de farnesol iguais ou maiores que 3,125 mM promoveram reduções significativas (1,3-4,2 log10; p < 0,05) nas UFCs, enquanto que para os biofilmes mistos reduções (0,67-5,32 log10; p < 0,05) foram notadas a partir da concentração de 1,56 mM. Para a curva de morte celular com uma hora de contato entre os microrganismos e o farnesol...

The aim of this study was to evaluate the activity of a quorum sensing molecule, farnesol, in biofilm formation of Candida albicans ATCC 10231 and Streptococcus mutans ATCC 25175. Initially farnesol was diluted in methanol and then in artificial saliva (AS). Minimum inhibitory concentration tests (MIC) of farnesol against Candida albicans ATCC 10231 cells and Streptococcus mutans ATCC 25175 suspension were based on the microdilution method. Farnesol was prepared at concentrations of 1.56, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 70, 150 and 300 mM, and placed in contact with biofilms in formation of Candida albicans and Streptococcus mutans for 48 hours. Its antibiofilm activity was determined by quantifying the total biomass (stained with crystal violet (CV)), enumeration of colony forming units (CFUs) and metabolic activity (XTT). It was further carried out a cell death time curve for both microorganisms studied. After the treatment with farnesol, the matrix of the biofilm was extracted and analyzed in terms of protein and carbohydrates, in addition to the pH test for S. mutans and examination of enzymatic activities of proteinase, fosfolipase and hemolytic for Candida albicans. The structure of biofilms was analyzed by scanning electron microscopy. The MIC values were 150 mM for C. albicans and 6.25 mM for S. mutans. Farnesol decreased the formation of single and mixed biofilms, with significant reductions of 37-90% and 64-96% respectively for the total biomass and metabolic activity. For single biofilms, farnesol concentrations equal to or higher than 3.125 mM promoted significant reductions (1,3-4,2log10; p <0.05) in the CFU for single biofilms, while in mixed biofilms the reductions (0,67-5,32log10; p <0.05) were noted at concentrations of 1.56 mM. For cell death curve after an hour in contact with those microorganisms, farnesol reduced 1 log10 for C. albicans and 3 log10 for S. mutans. For quantification of proteins and carbohydrates, proteins generally were reduced...

Fatores de virulência de Candida spp. isoladas da cavidade bucal de crianças infectadas pelo HIV / Virulence factors of Candida spp. isolated from the oral cavity of HIV-infected children

Candida spp. são responsáveis por infecções graves em indivíduos imunossuprimidos. Diversos fatores de virulência contribuem para sua transição de comensais a patógenos, como a formação de biofilme, produção de fosfolipase, produção de protease e a resistência a antifúngicos. O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar a formação de biofilme, produção de fosfolipase e protease e a susceptibilidade ao Fluconazol de isolados Candida spp., provenientes da saliva de crianças infectadas pelo HIV (Grupo HIV) e crianças saudáveis (Grupo controle). Também estes fatores foram correlacionados com o uso do HAART, estado imunológico, presença de AIDS e carga viral do grupo HIV. Foi analisado um total de 79 isolados, sendo 48 isolados de C. albicans (33/15) e 20 isolados do complexo C. parapsilosis lato sensu (12/8) dos grupos HIV e controle, respectivamente, e isolados de C. krusei (8), C. tropicalis (1), C. dubliniensis (1) e C. guilliermondii (1) do grupo HIV. Dados médicos e laboratoriais (CD4%, carga viral) foram coletados dos respectivos prontuários médicos. A formação de biofilme foi avaliada pela redução do XTT. Isolados de cada espécie com a habilidade de formar maior quantidade de biofilme maduro (grupo HIV) foram submetidos à microscopia confocal de fluorescência para a visualização da morfologia e estrutura do biofilme. As análises da produção de fosfolipase e protease se deram por meio da metodologia de placas de àgar de gema de ovo e Albumina de Soro Bovino, respectivamente. A susceptibilidade ao Fluconazol foi determinada por meio da técnica de microdiluição. Todos os isolados formaram biofilme (n= 79) e quantitativamente, esta formação foi semelhante em ambos os grupos (p>0.05). A formação de biofilme dos isolados de C. albicans foi maior do que a dos isolados de Candida não-albicans (p<0.05).A atividade de fosfolipase foi detectada em 40,5% (32/79) de todos os isolados e foi significativamente maior no grupo HIV (p=0.006) e nos isolados de C. albicans deste grupo (p=0,007). A atividade de protease foi detectada em 66 isolados (84,8%) e em ambos os grupos a maioria era produtor relativamente forte ou muito forte. Trinta e três (33/41, 7%) isolados eram resistentes ao Fluconazol, sendo 42,9% do grupo HIV e 39,1% do grupo controle. Não foi observada correlação entre a expressão dos fatores de virulência e os dados médicos relativos ao grupo HIV. No entanto, a expressão dos fatores de virulência dos isolados orais de Candida spp. de crianças infectadas pelo HIV se mostrou acentuada. Este achado pode destacar o papel da imunossupressão na regulação da expressão dos fatores de virulência de Candida spp (AU)

Candida species are responsible for life threatening infections in severely immunocompromised individuals. Several virulence attributes support their transition from commensal to parasite, as the biofilm formation, secretion of phospholipase, protease and the resistance to antifungals. The aims of this study were to assess the in vitro biofilm formation, phospholipase production, protease production and the susceptibility to Fluconazole of Candida spp. recovered from the saliva of HIV infected children and controls. Also, to correlate these features with the use of HAART, immunological status, presence of AIDS and viral load of HIV group. A total of 79 isolates were analyzed: 48 C. albicans isolates (33/15) and 20 C. parapsilosis sensu lato complex isolates (12/8) from HIV and control patients, respectively, while C. krusei (8), C. tropicalis (1), C. dubliniensis (1) and C. guilliermondii (1) from HIV patients only. Medical data was collected, considering antiretroviral therapy, CD4 count and viral load. The biofilm forming ability was analyzed through the XTT reduction assay technique. Representative isolates of each specie with the ability to form more quantity of mature biofilm (HIV group) underwent confocal laser scanning microscopy for the visualization of biofilm morphology and structure. Phospholipase and protease assays were performed through the egg yolk and Bovine Serum Albumin agar plate methods, respectively. Fluconazole susceptibility was determined through the microdilution assay. All isolates were able to form biofilm (n= 79). Quantitatively, Candida isolates from HIV-positive and negative children presented similar ability to form biofilm (p>0.05). In C. albicans isolates from both, HIV and control groups, the biofilm formation was higher than in non-albicans Candida isolates (p<0.05).Phospholipase activity was detected in 40.5% (32/79) of all isolates. Its activity was significantly higher in HIV group (p=0.006) and C. albicans isolates from HIV group (p=0.007). Protease activity was detected in 66 isolates (84.8%) and most of them from both groups were relatively/very strong producers. Thirty three (33/41.7%) of all isolates were resistant to Fluconazole. Most non-albicans Candida isolates from HIV (87.0%) and control (87.5%) groups were susceptible to this drug. No significant difference was detected between groups in biofilm, protease and Fluconazole susceptibility assays. Correlation with medical data in HIV group was not found. Candida spp. isolates of HIV-positive children present increased virulence expression due to significant higher in vitro phospholipase production. This finding may enlighten the relevant role played by immunosuppression in the modulation of Candida virulence attributes (AU)

Investigation of virulence factors of Enterococcus faecalis strains isolated in secondary/ persistent infections / Investigação de fatores de virulência de estirpes de Enterococcus faecalis isoladas em infecções secundárias persistentes

More virulent strains may result from the acquisition of genes by genetic exchange, pathogenicity islands in several species encoding toxins, adhesion factors and other factors associated with virulence. The aim of this study was to investigate the prevalence of E. faecalis strains in secondary endodontic/ persistent using endodontic infection by culture and PCR technqiues; and to investigate for the presence of virulence factor genes of gelatinase (gelE), cytolysin activator (Cyla), surface adhesion of Enterococcus (ESP) and collagen adhesin of Enterococcus (ACE). Material and methods: Microbial samples were obtained from 12 teeth with secondary/ persistent endodontic infection showing apical periodontitis. Culture techniques were used including serial dilution, plating, incubation, and biochemical identification. For PCR detection, samples were analyzed using a species-specific primer of the 16S rDNA and the downstream intergenic spacer region. Results: Culture and PCR detected the test species in 3/12 (25%) and 5/12 (41.6%) of teeth,respectively. A total of 38 Enterococcus faecalis strains were isolated and submitted to the virulence factor genes analysis. PCR products consistent with genes encoding surface adhesion (ESP), gelatinase (gelE) and collagen binding antigen (ACE) were found in 26/38 (68%), 31/38 (81%) and 38/38 (100%) of the isolates. The Cytolysin activator (Cyla) gene was not recovered from E. faecalis isolates. Conclusions: In conclusion, the present study revealed by culture and molecular methods revealed a high prevalence of E. faecalis in teeth with secondary/ persistent endodontic infection. Moreover, of a clinical relevance, we found different E. faecalis strains carrying different virulence determinants.

Objetivos: O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de cepas de E. faecalis em canais com infecções endodônticas secundárias/persistentes por meio de cultura e PCR, além de analisar a presença de fatores de virulência genéticos como: gelatinase (gelE), ativador de citolisina (Cyla), adesina de superfície (ESP) e adesina de colágeno (ACE). Material e métodos: Foram coletadas amostras de 12 canais radiculares com infecção endodôntica secundária/persistente e presença de lesão periapical. Para a cultura microbiológica foi realizada diluição em série, incubação e identificação bioquímica dos microrganismos, enquanto que no PCR as amostras foram analisadas através de primers específicos 16S rDNA. Os casos com presença de Enterococcus faecalis foram selecionadas para realização de análise quanto aos fatores de virulência: gelE, Cyla, ESP e ACE. Resultados: Enterococcus faecalis foi detectado através de cultura e PCR em 3/12 (25%) e 5/12 (41,6%) dos casos, respectivamente. No total, foram isoladas 38 amostras com presença de E. faecalis. Os produtos de PCR consistentes com os genes ESP, gelE e ACE foram encontrados em 26 /38 (68%), 31 /38 (81%) e 38/38 (100%) dos isolados. Cyla não foi recuperado a partir de E. faecalis em nenhum dos isolados. Conclusões: O presente estudo revelou alta prevalência de E. faecalis em dentes com infecção endodôntica secundária/ persistente. Estes microrganismos apresentaram elevado índice de diferentes fatores de virulência.

Estudo in vivo dos efeitos da terapia fotodinâmica, mediada pelo Photothazine® e luz Led, sobre Cândida Albicans resistente a Fluconazol / In vivo study of the effects of photodynamic therapy, mediated by Photodithazine and LED light, on Fluconazole-resistant Candida albicans

Este estudo avaliou os efeitos da Terapia Fotodinâmica (PDT), mediada pelo Photodithazine® (PDZ) e luz LED, sobre Candida albicans resistente a fluconazol em um modelo de candidose oral induzida. Para isso, camundongos fêmeas de 6 semanas foram imunussuprimidos e inoculados com C. albicans (107 células/mL). Em seguida, aplicou-se 100 mg/L de PDZ (diluído em salina ou hidrogel) na cavidade bucal por 20 min e o dorso lingual foi iluminado (37,5 J/cm² dose de luz). Animais adicionais foram tratados somente com LED ou PDZ. O grupo controle positivo não recebeu nenhum tratamento e, adicionalmente, animais saudáveis receberam tratamento com PDT (n=5). Em seguida, foi feita a recuperação do micro-organismo da língua dos animais. O número de colônias viáveis foi quantificado e os valores de UFC/mL foram determinados. Os animais foram sacrificados e as línguas foram removidas cirurgicamente para análise histológica. Duas colônias de cada animal foram isoladas da placa de cultura para avaliação dos fatores de virulência: adesão e formação de biofilme em superfície abiótica, formas filamentares de crescimento e produção de exoenzimas. Os dados foram analizados por ANOVA (P < 0,05). Os resultados demonstraram que a PDT resultou em redução significativa de C. albicans resistente a fluconazol (1,91 e 1,96 log10) em relação ao grupo controle positivo. Somente a aplicação da luz ou PDZ não reduziu a viabilidade celular. A PDT não ocasionou efeitos adversos no tecido lingual dos animais e reduziu apenas a produção de fosfolipase. A PDT foi efetiva na inativação da C. albicans resistente a fluconazol, sem causar efeitos adversos no tecido lingual.

This study evaluated the effects of Photodynamic Therapy (PDT), mediated by Photodithazine® (PDZ) and LED light, on fluconazole-resistant Candida albicans in a murine model of oral candidosis. For this, six-week-old female mice were immunosuppressed and inoculated with C. albicans (107 células/mL). Then, 100 mg/L of PDZ (diluted in saline or hydrogel) was applied on the oral cavity for 20 min and the dorsum of the tongue was illuminated (37.5 J/cm2 of fluence). The use of PDZ or light only was also investigated. Additionally, healthy animals received treatment with PDT. Positive control animals did not receive any treatment and negative control animals were not inoculated (n=5). After treatment the dorsum of the tongue was swabbed to recover C. albicans. The yeast colony counts were quantified and the number of CFU/mL was determined. The animals were killed and the tongues were surgically removed for histological analysis. Two yeast colony of each group were isolated from the culture plate for the evaluation of virulence factors: adhesion and biofilm formation in abiotic surface, filamentous forms of growth and production of exoenzymes. Data were analyzed by ANOVA (P < 0.05). PDT resulted in a significant reduction of fluconazole-resistant C. albicans (1.91 e 1.96 log10). The application of PDZ or LED only did not reduce the cell viability. PDT did not cause adverse effects in the local mucosa and it was able to reduce only phospholipase production. PDT was effective in the inactivation of fluconazole-resistant C. albicans without harming the tongue tissue

Genótipos fimA de porphyromonas gingivalis e periodontite / Porphyromonas gingivalis fimA genotypes and periodontitis

Porphyromonas gingivalis é um dos principais patógenos envolvidos com o início e progressão da doença periodontal. Este microorganismo exibe uma diversidade genotípica e fenotípica que pode resultar em diferenças na capacidade dos clones induzirem destruição periodontal. Variações no potencial patogênico dos distintos genótipos do gene fimA de P. gingivalis foram relacionadas a diferentes doenças periodontais em diversos estudos. Esta revisão teve o objetivo de analisar criticamente os estudos que relacionaram as condições periodontais e os diferentes genótipos fimA de P. gingivalis. Foram incluídas publicações na língua inglesa de estudos clínicos em humanos, que avaliaram a relação entre as condições periodontais e os diferentes genótipos fimA de P. gingivalis. Doze estudos foram considerados válidos para a realização desta revisão. Pôde-se concluir que os genótipos fimA II e IV de P. gingivalis encontram-se frequentemente associados à periodontite crônica

Porphyromonas gingivalis is a major pathogen involved in the initiation and progression of periodontal disease. This microorganism exhibits a genotypic and phenotypic diversity which may result in differences in the ability to induce periodontal destruction of the clones. Variations in the pathogenic potential of different genotypes of fimA gene of P. gingivalis were related to different periodontal diseases in several studies. This systematic review aimed to critically analyze the studies that have linked periodontal conditions and the different fimA genotypes of P. gingivalis. We included English language publications of human clinical studies that evaluated the relationship between periodontal conditions and the different fimA genotypes of P. gingivalis. Twelve studies were considered valid for the completion of this review. It was concluded that fimA genotypes II and IV of P. gingivalis are often associated with chronic periodontitis.

Evidências científicas da colonização de Candida spp. em bolsas periodontais / Scientific evidence of Candida spp. colonization in periodontal pockets

Objetivo: o objetivo do presente trabalho é apresentar uma breve revisão de literatura a respeito da colonização de Candida spp. em bolsas periodontais, seus principais fatores de virulência e possível influência sobreas doenças periodontais. Revisão de Literatura: Apesar de a mucosa bucal ser considerada o principal reservatóriode Candida spp, este micro-organismo pode estar coagregado a bactérias do biofilme dental, sendo considerado um fator importante para o processo decolonização de bolsas periodontais. Além disso, possui vários fatores de virulência relevantes na patogênese dadoença periodontal, tais como a capacidade de aderir ao epitélio e invadir o tecido conjuntivo gengival. Também pode inibir a função de neutrófilos polimorfonucleares, bem como produzir enzimas como colagenases e proteinases, que são capazes de degradar imunoglobulinas.Considerações finais: Os fatores de virulência de Candida spp. associada à suscetibilidade do hospedeiro poderiam desempenhar um papel importante nasalterações inflamatórias associadas com as doenças periodontais destrutivas

Biotypes of Candida albicans isolates from the oral mucosa of HIV seropositive and control subjects / Biótipos de amostras de Candida albicans isoladas da mucosa oral de sujeitos HIV soropositivos e controles

Purpose: This study evaluated the Candida albicans biotypes from oral mucosa according to some host variables, such as HIV infection; medication use - protease inhibitors (PI), non protease inhibitors (NPI) or no medication (NM); dental prosthesis wearing (PW) or not (NPW); and yeast variables (activity levels of protease and phospholipase). Methods: Samples from the oral mucosa of 193 HIV+ subjects and 205 HIV- subjects were collected by means of sterile swabs and seeded onto Sabouraud dextrose agar. The isolates were identified by microculture on slide, germ tube formation, auxanogram, and zimogram. Ninety-two isolates were obtained from HIV+ individuals: 49 from patients under PI, 31 from patients under NPI and 12 from patients with no medication. The control group comprised 63 isolates from HIV- patients. Results: From the 95 possible C. albicans biotypes, 46 were identified in the sample, and the most prevalent were: 10122 (46.4%); 11122 (38.01%); 01031 (42.4%); 00022 (40%); (P<0.01 - Spearman correlation test). No difference was detected among PI, NPI, and NM groups. The control group exhibited intermediate enzymatic activity level from dentate isolates, and high protease activity level amongst isolates from prosthesis wearers.Conclusion: It was not possible to detect any inhibitory action of PI drugs on the enzymatic activity of C. albicans.

Objetivo: Este estudo avaliou biótipos de isolados de Candida albicans da mucosa oral utilizando-se variáveis do hospedeiro: infecção pelo HIV; medicação - uso de inibidores de protease (IP), não inibidores (NIP), ausência de medicação (SM); e uso ou não de prótese. Da levedura foram utilizadas as variáveis relativas à produção de protease e fosfolipase (nível de atividade). Metodologia: O material da mucosa bucal de 193 sujeitos HIV+ e 205 sujeitos HIV- foi coletado com swab estéril e semeado em Agar Sabouraud dextrose. A identificação dos isolados foi obtida pelos testes de micro cultivo em lâmina, tubos germinativos, auxanograma e zimograma. Utilizaram-se 92 amostras isoladas de indivíduos HIV+, sendo 49 de pacientes IP, 31 de pacientes NIP e 12 de pacientes sem uso de medicação (SM). O controle constou de 63 amostras isoladas de indivíduos HIV-. Resultados: Dos 95 diferentes biótipos possíveis, obteve-se 46, sendo os mais prevalentes: 10122 (46,4%); 11122 (38,01%); 01031 (42,4%); 00022 (40%); (P<0,01 - teste de correlação de Spearman). Não houve nenhuma diferença entre os subgrupos IP, NIP e SM. As amostras isoladas dos controles exibiram atividade intermediária de protease (dentados) e alta atividade de protease (portadores de próteses). Conclusão: Não foi possível constatar interferência dos IP na atividade enzimática de C. albicans.