Effect of antihistamine-containing syrup on salivary metabolites: an in vitro and in vivo study

Abstract This study tested the null hypothesis that antihistamine-containing syrup does not change salivary metabolites in vitro and in vivo. For the in vitro experiments, saliva from 10 volunteers was mixed with a syrup or pill suspension of loratadine (1 mg/ml Claritin®, Schering-Plough, Rio de Janeiro, Brazil). For the in vivo experiment, 10 volunteers performed a mouth rinse with 10 mL of antihistamine syrup (Claritin®; Schering-Plough, Rio de Janeiro, Brazil) for 20 seconds and then discarded the rinse water. After 20 seconds, 5 mL of unstimulated whole saliva was spit into a plastic tube kept on ice. The protein profile of in vitro and in vivo experiments was analyzed using 12% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. The samples were also analyzed by nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy, followed by Principal Component Analysis and Wilcoxon test (p < 0.05). There were differences in salivary metabolites after syrup interaction. The salivary concentrations of acetate, n-caproate, arginine, glutamate, and lysine among other metabolites were reduced with the syrup in both in vivo and in vitro experiments (p < 0.05), but no differences were observed when the pill suspension was used (p > 0.05). Similar changes in metabolite profiles were observed in both in vitro and in vivo experiments. Electrophoresis revealed no difference in the salivary protein pattern. The null hypothesis was rejected because the intake of syrup medicine changes the salivary composition and influences oral homeostasis and susceptibility to oral diseases.

Expression of epithelial-mesenchymal transition markers at the invasive front of oral squamous cell carcinoma

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is one of the most common malignances. In epithelial-mesenchymal transition (EMT), epithelial cells switch to mesenchymal-like cells exhibiting high mobility. This migratory phenotype is significant during tumor invasion and metastasis. Objective : The aim of this study is to evaluate the expression of the EMT markers E-cadherin, N-cadherin and vimentin in OSCC. Material and Methods : Immunohistochemical detection of E-cadherin, N-cadherin and vimentin was performed on 20 OSCC samples. Differences in the expression of each protein at the invasive front (IF) and in the central/superficial areas (CSA) of the tumor were assessed. Differences in the expression of each protein at the IF of both histologically high- and low-invasive OSCCs were evaluated. Associations among expression of proteins at the IF were assessed. Correlations between the expression levels of each protein at the IF and the tumor stage and clinical nodal status were also evaluated. Results : Reduced expression of E-cadherin was detected in 15 samples (75%). E-cadherin expression was reduced at the IF when compared to the CSA and in high-invasive tumors when compared to low-invasive tumors. All samples were negative for N-cadherin, even though one sample showed an inconspicuous expression. Positive expression of vimentin was observed in 6 samples (30%). Nevertheless, there was no difference in vimentin expression between the IF and the CSA regions or between the low- and high-invasive tumors. Furthermore, no association was observed among protein expression levels at the IF. Finally, no correlations were observed between each protein’s expression levels and tumor stage or clinical nodal status. Conclusions : Reduced E-cadherin expression at the IF and its association with histological invasiveness suggest that this protein is a noteworthy EMT marker in OSCC. Although vimentin was also detected as an EMT marker, its expression was ...

Freshwater and salt-water influence in human identification by analysis of DNA: an epidemiologic and laboratory study

Aim: To investigate the casuistry of drowning cases by reviewing the records from the Forensic Medicine Institute Nina Rodrigues in the city of Salvador, BA, Brazil, and to verify the potential of DNA recovery in human teeth immersed in water. Methods: An epidemiological survey was conducted followed by a laboratorial phase, in which 40 teeth were immersed in fresh and salt-water, the DNA was extracted by the organic method and amplified by polymerase chain reaction, using the amelogenin as initiator. The electrophoresis initially occurred in agarose gel and later in polyacrylamide gel. Results: In the present survey, 346 deaths from drowning were observed, most of them in salt-water (51.73%), with a predominance of male victims (86.13%) aged from 18 to 35 years-old (37.94%). Dentists identified 14.74% of the victims. DNA was recovered in 37.5% from the samples, most from teeth immersed in freshwater. Polyacrylamide gel analysis in samples that were amplified in agarose gel allowed correct gender identification in 83.3% of the cases. However, allele loss was observed in samples of two victims, jeopardizing gender determination. Conclusions: Dental exposure to water interfered in DNA recovery. The gender investigation using the amelogenin as initiator was effective.

SDS-PAGE and Western blot analysis of somatic and extracellular antigens of Corynebacterium pseudotuberculosis

Diferentes técnicas para isolar e descrever antígenos das frações secretadas de superfície e somáticas deCorynebacterium pseudotuberculosis foram estudadas por SDS-PAGE e imunoblot, utilizando-se pool de soros de cabras naturalmente infectadas. Os antígenos secretados foram obtidos do sobrenadante de cultura da bactéria cultivada em meio quimicamente definido ou em meio BHI (Brain Heart Infusion). A fração de superfície foi obtida por tratamento com NaCl 1M, e as frações somßticas foram obtidas por vários procedimentos (detergentes e ultra-som). Pela coloração por Coomassie blue, foram detectadas 20 bandas na fração secretada, 35 bandas no extrato de superfície e entre 40 e 50 bandas, a depender do processo de extração, na fração somßtica. Entre todas as frações estudadas, foram detectadas 16 proteínas imunorreativas. As bandas com pesos moleculares de 125, 108, 75, 68, 41, 40, 31 e 24 kDa foram reconhecidas commaior intensidade e todas elas foram encontradas na fração secretada. A utilização do meio quimicamente definido permitiu revelar, na fração secretada de C. pseudotuberculosis, a presença de proteínas de alto pesomolecular que não tinham sido previamente descritas.

Characterization of the binding of delmopinol to salivary precipitates / Caracterização da associação de delmopinol com precipitados salivares

O objetivo do trabalho é determinar a quantidade de delmopinol associado com cada componente salivar de diferente peso molecular. Saliva não estimulada foi coletada com cinco indivíduos e misturada com delmopinol radioativo obtendo-se uma concentração final de 9,7 mM. As misturas de saliva e delmopinol foram analisadas com eletroforese tanto para o pelete como para o supernatante. Cada amostra foi analisada três vezes em eletroforese. A primeira foi corada com corante de prata. A segunda amostra foi preparada para fazer uma auto-radiografia. A terceira fileira foi cortada em pedaços iguais dissolvidos e analisados com cintilografia. O resultado de cintilografia demonstrou que um grande nível de radioatividade foi detectado em alto peso molecular (600-700 kDa). Em todas as amostras dos peletes foram encontradas grandes quantidades de delmopinol. O resultado da auto-radiografia confirmou que o delmopinol interagiu com proteínas de alto peso molecular (600-700 kDa)

Resolution of whole proteins of some oral Streptococci by polyacrylamide gel electrophoresis on slab and disc

Com o propósito de se aplicar as técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida em placa vertical e disco como uma contribuiçäo aos estudos de identificaçäo e da caracterizaçäo de Streptococcus orais e ainda ressaltar a capacidade de resoluçäo de cada técnica, amostras de culturas do grupo mutans foram analisadas empregando-se três metodologias distintas na obtençäo de proteínas intracelulares. Amostras de microorganismos foram semeadas em tubos contendo meio de cultura TYE. Em seguida, incubados a 37ºC em jarra de anaerobiose durante 48 horas. Após o crescimento bacteriano, as células foram centrifugadas (3000 rpm - 13 minutos) e lavadas duas vezes em soluçäo estéril de NaCl 0,15 M. Aos precipitados resultantes foram aplicadas as seguintes metodologias: Método I - o precipitado final foi ressuspendido em pequeno volume de SDS (solubilizaçäo direta); Método II - ao precipitado resultante, adicionou-se 0,15 grama de pérolas de vidro (74 a 110 µm de diâmetro), o qual foi submetido em seguida à agitaçäo por dois períodos de 3 minutos cada (mod. Phoenix AT 56) - choque mecânico; Método III - o precipitado foi ressuspendido em sacarose 0,5M e EDTA e mantido em banho de gelo por 20 minutos (choque osmótico). As suspensöes finais obtidas foram dissociadas por imersäo em água a 100ºC por 3 minutos. A eletroforese (placa e disco) processou-se em temperatura ambiente a 100 V em corrente constante de 20 mA. De modo geral, os resultados obtidos demonstraram, em primeiro lugar, que as metodologias de solubilizaçäo direta e choque mecânico permitem melhor visualizaçäo e separaçäo das diversas proteínas nos géis. Em segundo, verificou-se que o PAGE em placa permite uma melhor resoluçäo dos perfis protéicos, além de possibilitar que várias amostras possam ser analisadas em um único gel

Periodontopatias: aspectos bioquímicos da doença periodontal inflamatória / Periodontal diseases: biochemical aspects of inflammatory periodontal disease

Neste trabalho, estudamos a concentraçäo das enzimas: protease, desidrogenase lática, fosfatase alcalina, transaminase glutâmico-oxaloacético (GOT), transaminase glutâmico-pirúvico (GPT) e creatina fosfotransferase (CPK) em extratos teciduais de gengivas obtidas de pacientes com diferentes graus de doença periodontal inflamatória. Também realizamos o estudo do perfil proteico dos extratos teciduais através de eletroforese em gel de poliacrilamida em pH 8,6, pH 4,0 e contendo SDS. Para este propósito, selecionamos 81 pacientes de sexo masculino, com idade variando entre 14 e 51 anos, previamente classificados de acordo com os índices: gengival de Loe e Silness e de Ramfjord, além do exame radiográfico da área em estudo. Os pacientes foram divididos em sete grupos, distribuídos da seguinte maneira: Normal 10, Gengivite I 12, Gengivite II 12, Gengivite III 11, Periodontite I 10, Periodontite II 15 e Periodontite III 11. A análise dos nossos estudos mostraram os seguintes resultados: - A concentraçäo da protease é maior no grupo da periodontite grau I. A média da concentraçäo da enzima no grupo da gengivite é menor que no grupo normal. A média da concentraçäo da enzima no grupo da periodontite é ligeiramente superior à média no grupo normal. - A concentraçäo da desidrogenase lática é maior no grupo da gengivite grau II. A concentraçäo da enzima em UE/g de tecido é maior que o grupo normal na gengivite II e III. A média da concentraçäo da enzima no grupo da gengivite é maior do que o valor do grupo normal. A média no grupo da periodontite é inferior à média no grupo normal. - A concentraçäo da fosfatase alcalina em UE/mg de proteína apresentou valores maiores que o grupo normal nos grupos da gengivite II e III e periodontite I, II e III. A concentraçäo da fosfatase alcalina em UE/g de tecido apresentou valores maiores que o grupo normal, nos grupos da gengivite III e periodontite II e III. A média da concentraçäo da fosfatase alcalina foi crescente na seguinte ordem: normal, gengivite e periodontite...