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1.
São Paulo; s.n; 20180000. 81 p.
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-1009661

RESUMO

O carcinoma mucoepidermoide (CME) é a neoplasia maligna de glândula salivar mais comum, e com maior frequência de metástase linfonodal. Alterações genéticas estão intimamente associadas à carcinogênese e, também, aos processos de metástase tumoral. Para o CME o tratamento de escolha mais aplicado hoje é a cirurgia seguida de radioterapia, pois a quimioterapia não tem mostrado muita eficiência para o tratamento destas neoplasias. Entre os quimioterápicos mais prescritos para o tratamento de cânceres encontra-se a cisplatina, à base de platina, que atua no DNA da célula, induzindo a apoptose. Pouco se sabe a respeito de seu mecanismo de ação sobre o CME, inclusive sobre os genes homeobox. Estes genes compreendem uma família grande e essencial de reguladores do desenvolvimento que são vitais para o crescimento e diferenciação celular, e a expressão anômala destes genes têm sido implicados na carcinogênese. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a expressão dos genes homeobox em células derivadas de carcinoma mucoepidermoide tratadas com cisplatina. Os genes avaliados neste trabalho foram: PROX1, MEIS1, HOXB5, HOXB7 e HOXB9 por RT-qPCR. Previamente, as linhagens celulares derivadas de carcinoma mucoepidermoide UM-HMC1 UM-HMC2 e UM-HMC3A foram tratadas com a cisplatina por 24h e posteriormente submetidas aos ensaios de RT-qPCR. Adicionalmente, as amostras tratadas e sem tratamento foram analisadas pelo ensaio de formação de esferas e ensaio de ferida para verificar o efeito da cisplatina sobre propriedades relacionadas às células quimiorresistentes (putativas células tronco tumorais). Como resultados, entre os genes analisados foram expressos PROX1, MEIS1 e HOXB7. A UM-HMC3A apresentou maior expressão destes genes que as demais linhagens. Os genes HOXB5 e HOXB9 não foram expressos nas linhagens analisadas. A cisplatina reduziu a expressão de MEIS1 e aumentou a expressão de HOXB7, em todas as linhagens. O gene PROX1 apresentou expressão variável entre as linhagens, sendo expresso na UM-HMC1 apenas quando são tratadas com cisplatina e reduzido nas UM-HMC2 e UM-HMC3A tratadas. O número de esferas formadas não apresentou diferença significativa para UM-HMC1 e UM-HMC3A, o número de esferas aumentou na linhagem UM-HMC2 tratada com cisplatina. No ensaio de ferida, a cisplatina foi capaz de reduzir a migração celular em todas as linhagens quando comparadas com seus controles. Os resultados sugerem que o PROX1 e HOXB7 podem estar relacionados com carcinomas mucoepidermoides mais invasivos, enquanto que o MEIS1 pode estar relacionado à carcinogênese e autorrenovação tumoral. A cisplatina é capaz de afetar a expressão dos genes homeobox PROX1, MEIS1 e HOXB7, os quais foram encontrados nas linhagens de carcinoma mucoepidermoide analisados. A cisplatina não afeta as células formadoras de esferas, mas reduzir a migração das linhagens de carcinoma mucoepidermoide.


Assuntos
Genes Homeobox , Proteína Meis1
2.
São Paulo; s.n; 2015. 110 p. ilus, tab. (BR).
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-867718

RESUMO

Os genes homeobox atuam como reguladores da morfogênese e diferenciação celular embrionária, portanto, é evidente a possibilidade de sua expressão anormal estar presente na progressão de tumores. Estudos preliminares em nosso laboratório verificaram a participação de alguns genes homeobox em carcinoma epidermóide de boca (CEB). Este trabalho teve como objetivo avaliar a amplificação, expressão e o perfil de metilação dos genes HOXA5, HOXA7, HOXA9, HOXB5, HOXB13, HOXC12 em linhagem celular derivadas de CEB e tecidos frescos tumoral e não-tumoral. Além disso, verificar o efeito da desmetilação na expressão gênica de linhagens celulares que apresentaram genes 100% metilados e a participação das enzimas responsáveis pela metilação do DNA, bem como a expressão das DNAmetiltransferases (DNMT) nos tumores. A análise de amplificação do DNA e expressão de mRNA foi realizada por qRT-PCR. O perfil de metilação foi avaliada pelo sistema PCR Array e a análise proteica das DNMT1, DNMT3a, DNMT3b e HOXA9 foi verificada por meio de reações imunohistoquímicas. As linhagens celulares SCC4 e SCC9 foram utilizadas para análise de desmetilação com 5-aza-2'-deoxicitidina e a linhagem SCC4 para avaliar os efeitos do aumento de expressão do HOXA9, na proliferação celular por imunocitoquimica para Ki67, migração celular por transwell e apoptose pela avaliação de células positivas no ensaio de TUNEL. Na comparação entre os grupos, o gene HOXA5 apresentou-se amplificado na margem em relação ao tumor; o HOXA9 apresentou nível de metilação aumentada no tumor; o HOXB5 com amplificação maior na margem, com nível de expressão do mRNA aumentada nos tumores, e nível de metilação do tumor maior em relação a margem, sendo correlacionada com menor sobrevida; HOXB13 se apresentou amplificado no tumor em relação a margem, e com nível de metilação maior nos tumores e,


HOXC12 com níveis de metilação maior nos tumores em relação a margem. É interessante, que os mesmos genes que tiveram níveis de metilação aumentados nos tumores em relação a margem, também estavam 100% metilados nas linhagens celulares SCC4 e SCC9 e tiveram sua expressão restaurada após o tratamento com 5-aza-2´-deoxicitina. Na avaliação do nível de expressão das DNMTs nos tumores, a DNMT3b apresentou-se com níveis aumentados em relação a DNMT1 e DNMT3a, e quando avaliado em nível proteico, a DNMT3a pode ser correlacionada com melhor sobrevida. O aumento da expressão do gene HOXA9 mostrou diminuição da migração celular, porém não alterou a proliferação e apoptose celular. A expressão proteica não apresentou correlação com parâmetros clínicos. Em conclusão, os resultados mostram que os genes homeobox estudados estão pouco metilados nas linhagens celulares e em tecidos de CEB. A amplificação desses genes não é um evento frequente. O gene HOXA9 é pouco expresso no tumor, e o aumento da sua expressão em linhagens celulares diminui a migração celular.


Homeobox genes are important as morphogenetic and embrionary cellular differentiation regulators, therefore there is basis for their abnormal expression in tumor progression. Preliminary studies in our laboratory have shown that homeobox genes are dysregulated in oral squamous cell carcinoma (OSCC). This study evaluates the genomic amplification, mRNA expression and methylation status of HOXA5, HOXA7, HOXA9, HOXB5, HOXB13, HOXC12 in squamous cell carcinoma derived cell lines, and fresh tumor tissue. Also, analyzes the demethylation effect in gene expression of cell lines with genes showing 100% methylation, and the participation of enzymes responsible for DNA methylation, DNAmetiltransferases (DNMT), in gene and protein expression in tumors. DNA amplification and mRNA expression was analyzed by qRT-PCR. The methylation profile was evaluated by PCR Array System and DNMT1, DNMT3a, DNMT3b and HOXA9 protein expression was verified by immunohistochemistry. SCC4 and SCC9 cell lines were submitted to 5-aza-2'-deoxycytidine for demethylation analysis. SCC4 cell lineage was analyzed by immunocytochemistry for Ki67, cell migration by transwell and apoptosis by TUNEL test after increased expression of HOXA9. HOXA5 gene was amplified in the adjacent margin when compared with the tumor; HOXA9 showed increased level of methylation in tumor; HOXB5 showed amplification in the margin, increased mRNA expression in tumors, increased methylation level and was


correlated with decreased survival; HOXB13 was amplified in tumor samples when compared to the margins and also higher methylation level in tumors; and HOXC12 also showed increased methylation levels in tumors when compared to margin. Interestingly, the same genes with increased methylation levels in tumors, were also 100% methylated in cell lines SCC4 and SCC9. The expression of these gens was restored after treatment with 5-aza-2'-deoxycytidine. DNMT3b presented higher levels of protein expression relative to DNMT1 and DNMT3a. DNMT3a protein expression was correlated with improved survival. SCC4 cells overexpressing HOXA9 gene showed decreased cell migration, with no effect on cell proliferation and apoptosis. HOXA9 protein expression was not correlated with clinical parameters. In conclusion, the results shows that homeobox genes are methylated in some OSCC cell lines and tissues. Amplification of these genes is not a frequent event. HOXA9 gene has low expression in OSCC, and when overexpressed in cell lines decreases cell migration.


Assuntos
Carcinoma de Células Escamosas/classificação , Carcinoma de Células Escamosas/complicações , Carcinoma de Células Escamosas/diagnóstico , Genes Homeobox/fisiologia , Neoplasias Bucais/classificação , Neoplasias Bucais/complicações , Neoplasias Bucais/diagnóstico
3.
São Paulo; s.n; 2015. 110 p. ilus, tab. (BR).
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-871115

RESUMO

Os genes homeobox atuam como reguladores da morfogênese e diferenciação celular embrionária, portanto, é evidente a possibilidade de sua expressão anormal estar presente na progressão de tumores. Estudos preliminares em nosso laboratório verificaram a participação de alguns genes homeobox em carcinoma epidermóide de boca (CEB). Este trabalho teve como objetivo avaliar a amplificação, expressão e o perfil de metilação dos genes HOXA5, HOXA7, HOXA9, HOXB5, HOXB13, HOXC12 em linhagem celular derivadas de CEB e tecidos frescos tumoral e não-tumoral. Além disso, verificar o efeito da desmetilação na expressão gênica de linhagens celulares que apresentaram genes 100% metilados e a participação das enzimas responsáveis pela metilação do DNA, bem como a expressão das DNAmetiltransferases (DNMT) nos tumores. A análise de amplificação do DNA e expressão de mRNA foi realizada por qRT-PCR. O perfil de metilação foi avaliada pelo sistema PCR Array e a análise proteica das DNMT1, DNMT3a, DNMT3b e HOXA9 foi verificada por meio de reações imunohistoquímicas. As linhagens celulares SCC4 e SCC9 foram utilizadas para análise de desmetilação com 5-aza-2'-deoxicitidina e a linhagem SCC4 para avaliar os efeitos do aumento de expressão do HOXA9, na proliferação celular por imunocitoquimica para Ki67, migração celular por transwell e apoptose pela avaliação de células positivas no ensaio de TUNEL. Na comparação entre os grupos, o gene HOXA5 apresentou-se amplificado na margem em relação ao tumor; o HOXA9 apresentou nível de metilação aumentada no tumor; o HOXB5 com amplificação maior na margem, com nível de expressão do mRNA aumentada nos tumores, e nível de metilação do tumor maior em relação a margem, sendo correlacionada com menor sobrevida; HOXB13 se apresentou amplificado no tumor em relação a margem, e com nível de metilação maior nos tumores e, HOXC12 com níveis de metilação maior nos tumores em relação a margem. É interessante, que os mesmos genes que tiveram níveis de metilação aumentados nos tumores em relação a margem, também estavam 100% metilados nas linhagens celulares SCC4 e SCC9 e tiveram sua expressão restaurada após o tratamento com 5-aza-2´-deoxicitina. Na avaliação do nível de expressão das DNMTs nos tumores, a DNMT3b apresentou-se com níveis aumentados em relação a DNMT1 e DNMT3a, e quando avaliado em nível proteico, a DNMT3a pode ser correlacionada com melhor sobrevida. O aumento da expressão do gene HOXA9 mostrou diminuição da migração celular, porém não alterou a proliferação e apoptose celular. A expressão proteica não apresentou correlação com parâmetros clínicos. Em conclusão, os resultados mostram que os genes homeobox estudados estão pouco metilados nas linhagens celulares e em tecidos de CEB. A amplificação desses genes não é um evento frequente. O gene HOXA9 é pouco expresso no tumor, e o aumento da sua expressão em linhagens celulares diminui a migração celular.


Homeobox genes are important as morphogenetic and embrionary cellular differentiation regulators, therefore there is basis for their abnormal expression in tumor progression. Preliminary studies in our laboratory have shown that homeobox genes are dysregulated in oral squamous cell carcinoma (OSCC). This study evaluates the genomic amplification, mRNA expression and methylation status of HOXA5, HOXA7, HOXA9, HOXB5, HOXB13, HOXC12 in squamous cell carcinoma derived cell lines, and fresh tumor tissue. Also, analyzes the demethylation effect in gene expression of cell lines with genes showing 100% methylation, and the participation of enzymes responsible for DNA methylation, DNAmetiltransferases (DNMT), in gene and protein expression in tumors. DNA amplification and mRNA expression was analyzed by qRT-PCR. The methylation profile was evaluated by PCR Array System and DNMT1, DNMT3a, DNMT3b and HOXA9 protein expression was verified by immunohistochemistry. SCC4 and SCC9 cell lines were submitted to 5-aza-2'-deoxycytidine for demethylation analysis. SCC4 cell lineage was analyzed by immunocytochemistry for Ki67, cell migration by transwell and apoptosis by TUNEL test after increased expression of HOXA9. HOXA5 gene was amplified in the adjacent margin when compared with the tumor; HOXA9 showed increased level of methylation in tumor; HOXB5 showed amplification in the margin, increased mRNA expression in tumors, increased methylation level and wascorrelated with decreased survival; HOXB13 was amplified in tumor samples when compared to the margins and also higher methylation level in tumors; and HOXC12 also showed increased methylation levels in tumors when compared to margin. Interestingly, the same genes with increased methylation levels in tumors, were also 100% methylated in cell lines SCC4 and SCC9. The expression of these gens was restored after treatment with 5-aza-2'-deoxycytidine. DNMT3b presented higher levels of protein expression relative to DNMT1 and DNMT3a. DNMT3a protein expression was correlated with improved survival. SCC4 cells overexpressing HOXA9 gene showed decreased cell migration, with no effect on cell proliferation and apoptosis. HOXA9 protein expression was not correlated with clinical parameters. In conclusion, the results shows that homeobox genes are methylated in some OSCC cell lines and tissues. Amplification of these genes is not a frequent event. HOXA9 gene has low expression in OSCC, and when overexpressed in cell lines decreases cell migration.


Assuntos
Carcinoma de Células Escamosas/classificação , Carcinoma de Células Escamosas/complicações , Carcinoma de Células Escamosas/diagnóstico , Genes Homeobox/fisiologia , Neoplasias Bucais/classificação , Neoplasias Bucais/complicações , Neoplasias Bucais/diagnóstico
4.
São Paulo; s.n; 2011. 111 p. ilus, tab, graf. (BR).
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-654807

RESUMO

Os genes homeobox são responsáveis por codificar proteínas nucleares que agem como fatores de transcrição durante o desenvolvimento embrionário, regulando proliferação e diferenciação celular. A expressão alterada do gene homeobox PROX1 já foi identificado em diferentes neoplasias, incluindo mama, esôfago, fígado, sistema biliar, linfomas e cavidade bucal. Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da superexpressão do gene PROX1 em linhagem celular derivada de carcinoma epidermóide bucal nos mecanismos de proliferação e diferenciação celular, apoptose e perfil global de expressão gênica. Após a superexpressão deste gene na linhagem celular SCC-9, foi realizada a análise de proliferação por meio dos ensaios de curva de proliferação celular, citometria de fluxo, índice de incorporação de BrdU ao DNA e expressão de Ki67. A diferenciação celular foi verificada por meio de reações imunocitoquímicas para as citoqueratinas 1, 10, 13, 14, 16, 18 e 19 e a apoptose foi avaliada por meio de células positivas para anexina-V e iodeto de propídeo. O ensaio de microarray foi realizado para avaliação do perfil global de expressão gênica na linhagem celular SCC9 com superexpressão do gene PROX1. Observou-se que a superexpressão do gene PROX1 promove redução da proliferação celular, bem como reduz a expressão das citoqueratinas 1, 13, 18 e 19. Não houve alteração na taxa de apoptose entre as células com superexpressão do gene PROX1 e controles. Os resultados do microarray revelaram a expressão diferencial significante de genes envolvidos com os processos de desenvolvimento, adesão e invasão celular. Desta maneira, estes resultados são fortemente sugestivos de que o gene PROX1 inibe a proliferação celular e contribui para a diferenciação do carcinoma epidermóide bucal.


Homeobox genes encode transcription factors with an important role during normal development by controlling cellular proliferation and differentiation. Altered expression of PROX1 homeobox gene is related to many cancers, including those of the breast, esophagus, liver, billiary system and lymphomas. The aim of this study was evaluate the effects of PROX1 overexpression, in an oral squamous cell carcinoma cell line, on cellular proliferation and differentiation, apoptosis as well as gene expression prolfile. After overexpression of PROX1 gene in SCC9 cell line, proliferation was assessed by proliferation curve, flow citometry, BrdU incorporation to DNA and Ki67 expression. Cell differentiation was verified by immunocytochemistry to cytokeratins 1, 10, 13, 14, 16, 18 and 19 and apoptosis was measured by annexin V positive cells. Gene expression profile was analyzed by microarray in PROX1-overexpressing cells and control. PROX1-overexpressing cells showed a statistically significant decrease in proliferation as well cytokeratin 1, 13, 18 and 19 expression. No significant differences from controls and PROX1- overexpressing cells were observed in apoptosis. Microarray analyses showed differential expression of genes related to development, cellular adhesion an invasion. Our results strongly suggest that overexpression of PROX1 inhibit cell proliferation and contributes to differentiation of oral squamous cell carcinoma.


Assuntos
Carcinoma de Células Escamosas/diagnóstico , Genes Homeobox , Linhagem Celular
5.
RPG rev. pos-grad ; 16(1): 33-37, jan.-mar. 2009. tab, ilus, graf
Artigo em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-557476

RESUMO

Os genes HOX são importantes para o controle do desenvolvimento embrionário e regulam aspectos da morfogênese e diferenciação celular. A associação entre os genes HOX e o processo da oncogênese tem sido verificada em casos de carcinomas de cólon, pele, rim, pulmão, mama, leucemias e outros tipos de câncer. O objetivo deste trabalho foi verificar a expressão de genes HOX em linhagens celulares de carcinomas epidermoides de cabeça e pescoço. Para tanto, utilizamos a técnica RT-PCR para analisar a expressão de três grupos de genes HOX em linhagens celulares de carcinomas epidermoides de cabeça e pescoço: HN-6, HN-19, HN-30 e HN-31, utilizando-se os primeiros degenerados HOX1, HOX2 e HOX3 e coamplificação com o gene constitutivo da β-actina. Material de gengiva humana e embrião de camundongo foram utilizados como controle de expressão do gene HOX. Os resultados obtidos mostraram que a expressão dos genes HOX apresentou padrão semelhante aos controles utilizados. Houve, porém, subexpressão do grupo HOX1 nas linhagens HN-6 e HN-19 e superexpressão do grupo HOX-2 na linhagem HN-31. Esses achados nos permitem levantar a hipótese de que os genes HOX podem participar das alterações moleculares observadas em carcinomas epidermoides de cabeça e pescoço.


Assuntos
Carcinoma de Células Escamosas , Genes Homeobox , Técnicas In Vitro , Reação em Cadeia da Polimerase , Gengiva , Neoplasias de Cabeça e Pescoço , RNA Mensageiro
6.
São Paulo; s.n; 2009. 111 p. ilus, Cd Rom, tab, graf. (BR).
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-558041

RESUMO

O carcinoma epidermóide de boca, neoplasia maligna de boca mais comum, pode originar-se de lesões potencialmente malignas. O ácido retinóico, que atua no crescimento e diferenciação celular, tem sido comumente estudado como um possível quimioterápico na prevenção dessa progressão. Embora o mecanismo pelo qual o ácido retinóico previne essa progressão, e promove a parada do crescimento celular, não esteja estabelecido, sabe-se que os genes homeobox são importantes alvos do ácido retinóico durante o desenvolvimento embrionário e diferenciação tecidual. Este estudo visa determinar se a modulação da expressão desses genes está envolvida na inibição do crescimento pelo ácido retinóico em carcinoma epidermóide de boca. Para isso, foi realizado PCR array para avaliar a expressão de 84 genes homeobox na linhagem celular de carcinoma epidermóide de boca sensível ao ácido retinóico SSC-25, comparando com a linhagem resistente, SSC-9, após o tratamento com ácido retinóico por sete dias. Os resultados mostraram nove genes com perda de expressão e quatro com alta expressão. A validação por qPCR de 7 desses genes confirmou os resultados. Desses, três genes(ALX1, DLX3, TLX1) foram selecionados para terem a expressão avaliada em amostras tratadas por 3, 5 e 7 dias. O gene ALX1 apresentou baixa expressão apenas no dia 7. O gene DLX3 apresentou baixa expressão no terceiro dia com maior decréscimo no sétimo. Já o gene TLX1, mostrou baixa significativa no quinto dia, com valores semelhantes nosétimo. Os dados mostram genes homebox são modulados pelo ácido retinóico em linhagens de carcinoma epidermóide de boca. No entanto, esses genes não parecem ser alvo direto da inibição do crescimento promovida pelo ácido retinóico.


Oral squamous cell carcinoma, the most frequent oral cancer, may arise from potentially malignant oral lesions. Retinoic acid, which plays a role in cell growth and differentiation, has been frequently studied as a possible chemotherapeutic agent in the prevention of this progression. While the mechanism by which retinoic acid prevents progression and suppresses cell growth has not been completely elucidated, it is known that homeobox genes represent important targets of retinoic acid during embryogenesis and differentiation. The present study aims to determine if modulation of the expression of these genes is involved in inhibition of OSCC cell growth by retinoic acid. In order to achieve this goal a PCR array was performed to evaluate the expression of 84 homeobox genes in retinoic acid sensitive SCC-25 cells compared to retinoic acid resistant SCC-9 cells following treatment with retinoic acid for 7 days. Results showed that 9 homeobox genes are downregulated and 4 are upregulated by retinoic acid. The validation confirmed these results. Three genes (ALX1, DLX3, TLX1) were selected for having their expression evaluated on samples treated with retinoic acid for 3, 5 and 7 days. Three different patterns of gene expression were observed. Gene ALX1 showed down-regulation only on day 7. Homeobox gene DLX3 showed reduced expression on day 3 and decreased expression on day 7. TLX1 showed a substantial down-regulation on day 5 with similar values on. The data presented show that a number of homeobox genes aremodulated by retinoic acid in oral squamous cell carcinoma cell lines. However, these genes do not appear to be direct targets of growth suppression trigged by retinoic acid.


Assuntos
Carcinoma , Genes Homeobox , Retinoides/uso terapêutico
7.
São Paulo; s.n; 2008. 133 p. ilus, tab, graf.
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-546293

RESUMO

Genes da família homeobox têm sido alvo de intensas pesquisas científicasrelacionadas ao câncer. Recentemente, mostramos que o gene homeobox TGIF1está expresso no carcinoma epidermóide de boca na sua forma genérica. Porém,não foi feita uma discriminação entre quais variantes transcricionais, ou “subtipos”,do TGIF1 estariam expressas. Neste estudo, propusemo-nos a verificar diferençasna freqüência de expressão das variantes transcricionais do TGIF1 em carcinomasepidermóides de boca (CEB) em relação a tecidos morfologicamente não tumorais(TN), avaliar possíveis associações entre essas variantes nos pacientes portadoresde CEB e relacionar o grau de expressão dessas variantes com aspectos clínicos,histológicos e com a sobrevida dos pacientes. Adicionalmente, procuramos analisara expressão da proteína do TGIF1. Foram analisadas 48 amostras congeladas deCEB e 12 de TN. O RNA total de cada amostra foi extraído utilizando-se solução deTRizol®. Os transcritos do TGIF1 foram amplificados por RT-PCR para cada casode CEB e TN utilizando-se inicialmente um par de iniciadores genéricos para todasas suas variantes. Após essa triagem, os casos positivos foram amplificadosutilizando-se pares de iniciadores específicos para cada variante. Não houvediferença estatística entre a freqüência de expressão das variantes do TGIF1 nosgrupos CEB e TN, porém as variantes 4 e 8 foram as que apresentaram p-valoresmenores. Dentro do grupo de CEB, houve associação significativa entre algumas...


Genes of the homeobox family have been the subject of intense scientific researchrelated to cancer. Recently, we show that this gene is expressed in oral squamouscell carcinoma in its generic form. However, it was not made a discriminationbetween which transcript variants, or “subtypes", of TGIF1 were expressed. In thisstudy, we aim to verify differences in the expression of the eight transcript variantsdescribed for the homeobox gene TGIF1 in oral squamous cell carcinomas (OSCC)related with morphologically non-tumoral tissues (NT), evaluate possible associationsbetween these variants in patients with OSCC and relate the degree of expression ofthese variants with clinical, histological and survival aspects of patients. Additionally,we analyzed the expression of TGIF1 protein. It was analyzed 48 frozen samples ofOSCC and 12 of NT. The total RNA from each sample was extracted using TRizolsolution. TGIF1 transcripts were first amplified by RT-PCR for each case of OSCCand NT using a generic pair of primers. After these screening, the positive caseswere amplified using specific pair of primers for each variant. There was no statisticaldifference between the frequency of expression of TGIF1 transcript variants in OSSCand NT groups, but the variants 4 and 8 had the lowest p-values. Within the OSCCgroup, there was a significant association between some variants among themselves(seven of the twenty-one associations), in a way that the variants 1 and 4 were theones that had most association with other variants. Thus, we chose to continue thestudy using only variants 1, 4 and 8. There was no correlation between theexpression of the selected variants with the clinical and histological aspects.Regarding survival, the expression of variants 1 and 8 showed statistical correlationwith the outcome death, in a way that the group of patients that most expressed bothvariants was that one with the lower risk of death...


Assuntos
Genes Homeobox , Patologia Bucal
8.
São Paulo; s.n; 2008. 118 p. ilus. (BR).
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-533572

RESUMO

A busca de marcadores moleculares para o refinamento diagnóstico, classificação eestabelecimento do prognóstico dos tumores, e individualização terapêutica tem sidofoco de várias pesquisas. O presente estudo teve como objetivo investigar, emcarcinoma epidermóide de língua e/ou assoalho bucal, a presença de transcritos dosgenes homeobox que pudessem se revelar marcadores moleculares de prognósticoe/ou agressividade tumoral. Após análise por microarray utilizando-se amostras detumores e margens classificados como mais e menos agressivos, os geneshomeobox HOXC13, HOXD10, HOXD11, IRX4, PROX1 e ZHX1 foram selecionadose sua hiper-expressão foi parcialmente validada por qRT-PCR. Observou-seaumento da expressão de HOXD10, HOXD11 e IRX4 em tumores com relação àsmargens correspondentes, bem como nos tumores menos agressivos em relação àssuas respectivas margens. Por outro lado, os genes PROX1 e ZHX1 estavam maisexpressos nas margens que nos tumores correspondentes. Esses resultadossugerem que a expressão alterada de HOXD10, HOXD11 e IRX4 pode participar nodesenvolvimento do carcinoma epidermóide de língua e/ou assoalho bucal,enquanto os genes PROX1 e ZHX1 provavelmente exibem perda de função ouestão silenciados na neoplasia. Houve uma tendência de associação entre aexpressão elevada de HOXD11 e presença de infiltrações linfática e perineural, egrau moderado de diferenciação da neoplasia, bem como entre a expressão elevadade HOXD10 e infiltração linfática. O gene IXR4 foi relacionado com um menor tempode sobrevida global. Não foi possível estabelecer, dentre os genes homeoboxvalidados por qRT-PCR, um gene ou uma combinação deles que pudesse(m) serutilizado(s) como marcador(es) de agressividade tumoral.


The search for molecular markers to diagnosis improvement, treatmentindividualization and establishment of oral squamous cell carcinoma prognosis hasbeen the focus of several studies. The present study investigated the presence ofspecific transcript of homeobox genes in squamous cell carcinoma of the tongueand/or floor of the mouth that might reflect relevant molecular markers of prognosisand/or tumor aggressiveness. After microarray analysis of tumor samples classifiedas more or less aggressive, and non tumoral margins, HOXC13, HOXD10, HOXD11,IRX4, PROX1 and ZHX1 selected and partially validated by qRT-PCR. Increasedexpression of HOXD10, HOXD11, IRX4 in tumors in comparison to margins as wellas in less aggressive tumors related to their margins was observed. On the otherhand, a decreased expression of PROX1 and ZHX1 was observed in marginscompared to their respective tumors. These results suggest that the alteredexpression of HOXD10, HOXD11 and IRX4 may participate in the development ofsquamous cell carcinoma of the tongue and/or floor of the mouth, while PROX1 andZHX1 probably present loss of function or are silenced in tumors. A tendency ofassociation between increased expression of HOXD11 and lymphatic and perineuralinfiltration, as well as moderately differentiated tumors, and increased expression ofHOXD10 and lymphatic infiltration was observed. Still, increased expression of IRX4may apparently influence global survival rate. However, the results of the presentstudy must be confirmed in a greater number of samples, and complemented with theevaluation of HOXD10, HOXD11, IRX4 protein levels. It was not possible toestablish, among homeobox genes validated through qRT-PCR, a gene or acombination of genes capable of predicting tumor aggressiveness.


Assuntos
Carcinoma de Células Escamosas , Genes Homeobox , Patologia Bucal
9.
São Paulo; s.n; 2008. 133 p. ilus, tab, graf, CD. (BR).
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-538764

RESUMO

Genes da família homeobox têm sido alvo de intensas pesquisas científicas relacionadas ao câncer. Recentemente, mostramos que o gene homeobox TGIF1 está expresso no carcinoma epidermóide de boca na sua forma genérica. Porém, não foi feita uma discriminação entre quais variantes transcricionais, ou “subtipos”, do TGIF1 estariam expressas. Neste estudo, propusemo-nos a verificar diferenças na freqüência de expressão das variantes transcricionais do TGIF1 em carcinomas epidermóides de boca (CEB) em relação a tecidos morfologicamente não tumorais(TN), avaliar possíveis associações entre essas variantes nos pacientes portadores de CEB e relacionar o grau de expressão dessas variantes com aspectos clínicos, histológicos e com a sobrevida dos pacientes. Adicionalmente, procuramos analisar a expressão da proteína do TGIF1. Foram analisadas 48 amostras congeladas de CEB e 12 de TN. O RNA total de cada amostra foi extraído utilizando-se solução de TRizol®. Os transcritos do TGIF1 foram amplificados por RT-PCR para cada caso de CEB e TN utilizando-se inicialmente um par de iniciadores genéricos para todasas suas variantes. Após essa triagem, os casos positivos foram amplificados utilizando-se pares de iniciadores específicos para cada variante. Não houve diferença estatística entre a freqüência de expressão das variantes do TGIF1 nos grupos CEB e TN, porém as variantes 4 e 8 foram as que apresentaram p-valores menores. Dentro do grupo de CEB, houve associação significativa entre algumas...


Genes of the homeobox family have been the subject of intense scientific research related to cancer. Recently, we show that this gene is expressed in oral squamous cell carcinoma in its generic form. However, it was not made a discrimination between which transcript variants, or “subtypes", of TGIF1 were expressed. In this study, we aim to verify differences in the expression of the eight transcript variants described for the homeobox gene TGIF1 in oral squamous cell carcinomas (OSCC) related with morphologically non-tumoral tissues (NT), evaluate possible associations between these variants in patients with OSCC and relate the degree of expression of these variants with clinical, histological and survival aspects of patients. Additionally, we analyzed the expression of TGIF1 protein. It was analyzed 48 frozen samples of OSCC and 12 of NT. The total RNA from each sample was extracted using TRizol solution. TGIF1 transcripts were first amplified by RT-PCR for each case of OSCC and NT using a generic pair of primers. After these screening, the positive cases were amplified using specific pair of primers for each variant. There was no statistical difference between the frequency of expression of TGIF1 transcript variants in OSSC and NT groups, but the variants 4 and 8 had the lowest p-values. Within the OSCC group, there was a significant association between some variants among themselves (seven of the twenty-one associations), in a way that the variants 1 and 4 were the ones that had most association with other variants. Thus, we chose to continue the ...


Assuntos
Carcinoma , Genes Homeobox , Patologia Bucal
10.
São Paulo; s.n; 2008. 114 p. ilus, tab, graf, CD. (BR).
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-538790

RESUMO

Genes homeobox, vitais para muitos aspectos relacionados com crescimento e diferenciação celular, têm sido descritos desregulados em alguns cânceres. Seu papel na carcinogênese, principalmente de carcinomas epidermóides de boca permanece pouco claro e pobremente caracterizado. Desse modo, esse estudo objetivou avaliar, em cultura de células, o perfil de expressão de seis genes homeobox (ASH2L, HOXA7, HHEX, PKNOX1, PITX1, TGIF) selecionados dentre aqueles previamente identificados no Projeto Genoma Câncer de Cabeça e Pescoço (2001) sob estímulo de EGF e TGF-β1. Para tal, linhagens celulares de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço primário (HN6) e metastático (HN31) e uma linhagem não-tumoral (HaCat) foram cultivadas sob condições-padrão. Após a confecção do cDNAs de cada linhagem, por meio de RT-PCR, os transcritos foram amplificados e quantificados pela técnica de PCR em tempo real. Os dados foram normalizados com o gene HPRT e a quantificação relativa foi realizada seguindo o método do ΔCt. De acordo com os resultados foi possível verificar que o EGF produziu uma modulação variável da expressão dos genes avaliados em todas as linhagens celulares, enquanto que, em geral, o TGF-β1 foi capaz de aumentar significantemente (ANOVA, p<0,05) a expressão dos transcritos de 5 genes homeobox (HOXA7, HHEX, PKNOX1, PITX1, TGIF). Particularmente transcritos dos genes PITX1 e TGIF foram signicantemente mais expressos nas linhagens tumorais (HN6 e HN31) frente à linhagem não-tumoral quando tratados com TGF-β1. Desse modo, sugere-se que os genes homeobox estudados desempenhem diferentes funções na carcinoma epidermóide de boca, e que, especialmente PITX1 e TGIF atuem como oncogenes inibindo a resposta anti-proliferativa dependente de TGF-β elevando a progressão tumoral...


Homeobox genes, vital to many aspects related with cellular growth and differentiation, had been described as deregulated in some cancers. Their role in carcinogenesis, mainly oral squamous cell carcinomas, remains unclear and poorly characterized. Thus, this study had the purpose to evaluate, in cell cultures, the expression profile of six homeobox genes (ASH2L, HOXA7, HHEX, PKNOX1, PITX1,TGIF) selected among genes previously identified in the Head and Neck Cancer Genoma Project (2001), under stimulation with EGF and TGF-β1. Oral squamous cell carcinoma cell lines from primary tumour (HN6) and from methastasis (HN31), and anon-tumoral cell line (HaCat) were cultured under standard procedures. CDNAs were obtained by RT-PCR and the transcripts were amplified and quantified by real-time PCR. Data were normalized by HPRT gene and the relative quantification was madeby the ΔCt method. According to the results, it was possible to observe that EGF produced a variable modulation of the analyzed genes, in all cell lines. Generally, TGF-β1 was able to significantly increase (ANOVA, p<0,05) the expression of the transcripts of 5 homeobox genes (HOXA7, HHEX, PKNOX1, PITX1, TGIF). Transcripts of PITX1 and TGIF genes were particularly more expressed in the tumoral cell lines (HN6 e HN31), when compared to the non-tumoral cell line, when treated with TGF-β1. It is suggested that the studied homeobox genes play different roles in oral squamous cell carcinoma and that, especially the PITX1 and TGIF act as oncogenes, inhibitting the TGF-dependent anti-proliferative response, leading totumour progression...


Assuntos
Carcinoma , Genes Homeobox , Patologia Bucal
12.
São Paulo; s.n; 2005. 113 p. ilus, tab. (BR).
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-436121

RESUMO

Os genes homeobox são uma família de genes reguladores que são vitais para vários aspectos do crescimento e diferenciação celular. Recentemente, implicações dos genes HOXA7, HOXC6 e TGIF na gênese e progressão tumoral vêm sendo verificadas. Entretanto, o envolvimento desses genes em carcinomas epidermóides (CE) de boca ainda não foi demonstrado. A possível presença de transcritos dos genes HOXA7, HOXC6 e TGIF em carcinomas epidermóides de boca e em tecidos não tumorais adjacentes (TN) foi analisada. Os transcritos dos genes foram amplificados por RT-PCR e sua localização celular determinada por hibridização in situ (ISH) com sondas de mRNA específicas. A amplificação do HOXA7 foi observada em 70 por cento dos casos sendo 15 por cento apenas nas amostras TN, 45 por cento somente nos CEs e 10 por cento em ambos tecidos. Nenhuma amplificação do HOXC6 foi observada. O TGIF foi amplificado em 80 por cento dos casos, sendo 5 por cento somente nas amostras TN, 20 por cento nos CEs e 55 por cento em ambos tecidos. Análises estatísticas mostraram que não havia diferença significante entre a amplificação do transcrito HOXA7 ou TGIF e o tipo de tecido analisado. Além disso, nenhuma associação entre a amplificação dos transcritos nas amostras CE e os aspectos clínicos foi observada. O sinal de hibridização in situ foi similar para os transcritos HOXA7 e TGIF. Nas amostras TN o sinal da ISH foi intenso no epitélio, ora disperso sendo mais proeminente na camada espinhosa ora mais proeminente nas camadas basais e suprabasais. Nos CEs os transcritos foram localizados por toda neoplasia sendo que o sinal era menor em áreas menos diferenciadas. Esses resultados mostram que o HOXC6 não está envolvido com a carcinogênese oral enquanto que a presença dos transcritos HOXA7 e TGIF principalmente em regiões bem diferenciadas dos carcinomas epidermóides de boca sugere uma participação desses genes nesta neoplasia


Assuntos
Carcinoma de Células Escamosas , Genes Homeobox , Hibridização In Situ , Patologia Bucal , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa
15.
Pesqui. odontol. bras ; 17(1): 94-98, jan.-mar. 2003. ilus
Artigo em Inglês | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-343782

RESUMO

Os genes homeobox são genes reguladores que codificam proteínas nucleares as quais atuam como fatores de transcrição, regulando vários aspectos da morfogênese e da diferenciação celular durante o desenvolvimento embrionário normal de diversos animais. Os genes homeobox de vertebrados podem ser subdivididos em duas famílias: os agrupados, ou HOX, e os não agrupados, ou divergentes. Durante as últimas décadas, vários genes homeobox, agrupados e não agrupados, foram identificados em tecidos normais, em células malignas e em diferentes doenças e condições metabólicas. Os genes homeobox estão envolvidos, por exemplo, no desenvolvimento normal do dente e em agenesias dentárias de ocorrência familiar. O desenvolvimento normal e o câncer têm muito em comum, já que ambos envolvem proliferação celular e diferenciação. A literatura tem mostrado um número cada vez maior de trabalhos relacionando os genes homeobox à oncogênese. Muitos tipos de câncer exibem expressão ou alteração nos genes homeobox. Eles incluem leucemias, câncer de cólon, pele, próstata, mama e ovário, entre outros. Esta revisão objetiva levar os leitores a conhecer algumas das funções da família homeobox nos tecidos normais e especialmente no câncer.


Assuntos
Genes Homeobox , Neoplasias
17.
Rev. odontol. Univ. St. Amaro ; 3(1): 17-9, jan.-jun. 1998. ilus
Artigo em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-247294

RESUMO

A Genética do Desenvolvimento é a área da Biologia voltada para o estudo e entendimento da regulaçäo dos genes que permitem a um ovócito fertilizado desenvolver-se até um organismo maduro. Este estudo é direcionado em campos de desenvolvimento e, um deles é o segmento craniofacial. Acredita-se que os genes HOXB1, A2, B2, A3, B3, D3, B4 e C4 sejam transcritos nas regiöes das bolsas faríngeas, e assim, envolvidos com a gênese, por exemplo, da síndrome de DiGeorge (com fendas lábio-palatinas, filtro curto e outros comemorativos). Além dos genes homeobox, genes estruturais simples estäo envolvidos na etiologia de malformaçöes craniofaciais como a Displasia Crânio-Fronto-Nasal cujo gene foi recentemente mapeado em Xp22. O entendimento dos mecanismos anormais destes genes pode propiciar novas perspectivas diagnósticas e terapêuticas no campo da dismorfologia craniofacial


Assuntos
Biologia do Desenvolvimento , Genes Homeobox , Regulação da Expressão Gênica no Desenvolvimento
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