Investigação de perda de heterozigosidade e expressão da proteína Ki-67 em lesão liquenóide oral associada ao amálgama / Investigation of loss of heterozygosity and expression the Ki-67 protein in oral Lichenoid lesion associated with the amalgam

A Lesão liquenóide oral associada ao amálgama (LLOAA) é uma lesão incomum de patogênese ainda incerta. A lesão apresenta características clínicas e histopatológicas semelhantes ao líquen plano bucal (LPB), que é considerada uma lesão com potencial de transformação maligna. Pesquisas moleculares a fim de aprimorar os conhecimentos sobre a patogênese e o comportamento clínico de LLOAA ainda são escassas. O objetivo do estudo foi investigar a perda de heterozigosidade (loss of heterozygosity ­ LOH) em amostras de LLOAA, LPB e mucosa bucal normal (MBN) em regiões cromossômicas 9p22, 11q13.4 e 17p13.1 e avaliar o índice de proliferação celular das mesmas amostras, buscando uma associação entre o índice de proliferação celular e LOH. Foram selecionadas 9 amostras de LLOAA, 10 de LPB e 8 de MBN, pareadas por sexo e idade. A LOH nas regiões cromossômicas 9p22, 11q13.4 e 17p13.1 foi avaliada por meio dos marcadores microssatélites polimórficos D9S157, D9S162, D9S171, D11S1369, TP53, AFM238WF2. O índice de proliferação celular foi avaliado pela expressão imuno-histoquímica da proteína Ki-67 (MIB-1) em 8 amostras de LLOAA, 10 de LPB e 8 de MBN. Amostras de LLOAA exibiram LOH em 3 dos 6 marcadores (AFM238WF2, D9S157 e D11S1369), de LPB exibiram LOH em 2 destes marcadores (AFM238WF2, D9S157) enquanto que amostras de MBN não apresentaram LOH. A perda alélica foi mais frequente para os marcadores AFM238WF2 (17p13.1, 21%) e D9S157 (9p22, 17,64%) e a média da frequência de perda alélica na amostras de LLOAA foi de 26,6% enquanto que nas amostras de LPB foi de 7,5%. A imuno-histoquímica apresentou positividade nuclear nas células variando entre 0,29% a 28% e não houve associação entre o índice de proliferação celular e LOH em LLOAA e LPB (p>0,05). Este estudo demonstrou que LLOAA, semelhante ao LPB, apresentou LOH nas regiões cromossômicas 9p22, 11q13.4 e 17p13.1, independentemente da taxa de proliferação celular. Apesar de não ter sido encontrada tal associação, LOH ocorre em LLOAA e pode estar envolvida na patogênese desta lesão

The Amalgam-associated oral lichenoid lesion (AAOLL) is an infrequent disease of uncertain pathogenesis. The lesion shows clinical and histopathological features similar to oral lichen planus (OLP), which is considered a lesion with malignant transformation potential. Molecular researches in order to improve knowledge of the pathogenesis and clinical behavior of AAOLL are still scarce. The purpose of the current study was to evaluate the loss of heterozygosity - LOH in AAOLL, in OLP, and in normal oral mucosa (NOM) using polymorphic microsatellite markers at chromosome regions 9p22, 11q13.4 and 17p13.1, located around important tumor suppressor genes and to evaluate the immunohistochemical expression of Ki67 protein in the same samples. The sample comprised 09 AAOLLs, 10 OLPs and 8 NOMs matched by patients' gender and age. The LOH at chromosome regions 9p22, 11q13.4 and 17p13.1 was evaluated by microsatellite polymorphic markers D9S157, D9S162, D9S171, D11S1369, TP53, AFM238WF2. Cell proliferation was assessed by immunohistochemical expression of Ki-67 (MIB-1) in eight AAOLL, ten OLP and eight NOM. AAOLL exhibited LOH at 3 of 6 LOH markers (AFM238WF2, D9S157 AND D11S1369), while OLP demonstrated LOH at two of these markers (AFM238WF2, D9S157) while NOM showed no LOH. The allelic loss were most frequently in marker AFM238WF2 (17p13.1, 21%) and D9S157 (9p22, 17,64%). The mean fractional allelic loss of AAOLL was 26,6% whereas mean fractional allelic loss of OLP was 7,5%. Immunohistochemistry revealed nuclear positivity ranging from 0,29% to 28% of the cells and there was no association between cell proliferation and LOH in LLOAA e LPB (p>0,05). Our study shows that AAOLL, similar to OLP, exhibits LOH, irrespective of cell proliferation index. Despite the lack of association between LOH and cell proliferation we can assume that LOH occurs in AAOLL and it should be considered in the pathogenesis of this lesion

Perda de heterozigose dos genes p53, dcc e apc em carcinomas epidermóides de boca / Loss of heterozygosity of p53, DCC and APC genes in oral squamous cell carcinoma

Neste estudo foi analisada a perda de heterozigose (LOH) para os genes supressores de tumor p53, APC e DCC, em 40 casos de carcinoma epidermóide de boca (CEB) e nos tecidos normais correspondentes, utilizando-se a técnica da reação em cadeia da polimerase e análise de polimorfismo de comprimento dos fragmentos de restrição (PCR-RFLP). Também foi avaliada a presença do papilomavírus humano (HPV). Foram observados 70,3 por cento de casos informativos para o gene p53, 72,5 por cento para o exon 11 e 82,5 por cento para o exon 15 do gene APC, e 31,4 por cento para o gene DCC. DNA tumoral de apenas um caso (3,8 por cento) de 26 casos informativos mostraram LOH para o lócus do gene p53. LOH para o gene APC foi observada em 2 (6,9 por cento) de 29 casos informativos, para o exon 11 e em nenhum caso para o exon 15. DNA de dois (18,2 por cento) de 11 casos informativos mostraram LOH para o lócus do gene DCC. Nenhum dos carcinomas de boca em estudo mostrou amplificação para o DNA do HPV. Nossos resultados sugerem que a inativação dos genes p53 (exon 4), APC e DCC têm um papel minoritário no processo de carcinogênese dos CEB.