Efeitos do sobrenadante da cultura de Streptococcus mutans sobre os fatores de virulência de C. albicans: estudos in vitro e in vivo / Effects of the culture supernatant of Streptococcus mutans on the virulence factors of C. albicans: in vitro and in vivo studies

Candida albicans possui capacidade de causar uma ampla variedade de manifestações clínicas devido a múltiplos fatores de virulência que agem simultaneamente para vencer o sistema imune e invadir os tecidos do hospedeiro. Estudos recentes demonstraram que o crescimento de C. albicans pode ser inibido por metabólitos produzidos por Streptococcus mutans, que estão presentes no sobrenadante da cultura bacteriana. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar se o sobrenadante da cultura de S. mutans, além de inibir o crescimento de C. albicans, é capaz de atenuar os mecanismos de virulência desse fungo. Inicialmente, uma suspensão padronizada de S. mutans (107 células/mL) foi incubada em caldo BHI a 37ºC por 4 h em 5% de CO2. O crescimento em BHI foi filtrado em membrana de 0,22 µm, obtendo-se o sobrenadante da cultura de S. mutans livre de células. A seguir, uma suspensão padronizada de C. albicans (107 células/mL) foi adicionada ao sobrenadante filtrado da cultura de S. mutans em caldo BHI, sendo incubada a 37ºC por 24 h. Para os grupos controle, a suspensão de C. albicans foi colocada em caldo BHI ou YPD esterilizados e incubada nas mesmas condições. Após o período de incubação, o crescimento de C. albicans foi centrifugado e lavado para obtenção de uma suspensão padronizada de C. albicans contendo as células sobreviventes da exposição ao sobrenadante de S. mutans. Essa suspensão de C. albicans foi então utilizada nos testes in vitro e in vivo para determinação dos fatores de virulência desse micro-organismo. No estudo in vitro, foi investigada a atividade proteolítica extracelular de C. albicans, bem como sua capacidade de filamentação, adesão e formação de biofilmes (1:30, 6, 24 e 48 h). Para o estudo in vivo, foi utilizado o modelo de Galleria mellonella, analisando-se a curva de sobrevivência, o número de células fúngicas e hemócitos na hemolinfa de larvas infectadas por C. albicans. Para a análise estatística foi utilizado ANOVA, teste de Tukey, Kruskal-Wallis e Log-rank, com nível de significância de 5%. Verificou-se que as células de C. albicans expostas ao sobrenadante de S. mutans apresentaram redução na filamentação, formação de biofilmes e patogenicidade em G. mellonella em relação ao controle. A exposição ao sobrenadante de S. mutans também mudou o padrão de aderência de C. albicans. Entretanto, o sobrenadante de S. mutans não reduziu a atividade proteolítica de C. albicans. Concluiu-se que o sobrenadante de S. mutans apresentou capacidade de inibir importantes mecanismos de virulência de C. albicans, podendo ser uma fonte de novos agentes antifúngicos a ser explorada

Candida albicans has the ability to cause a wide variety of clinical manifestations due to multiple virulence factors that act simultaneously to overcome the immune system and invade host tissues. Recent studies have shown that the growth of C. albicans can be inhibited by metabolites produced by Streptococcus mutans. Thus, the objective of this study was to investigate whether the culture supernatant of S. mutans is able to attenuate the virulence mechanisms of this fungus. Initially, a standardized suspension of S. mutans (107 cells/mL) was incubated in BHI broth at 37ºC for 4 h in 5% CO2. The growth in BHI was filtered through a 0.22 µm membrane, obtaining the cell free culture supernatant of S. mutans. Then, a standardized suspension of C. albicans (107 cells/mL) was prepared and added to the supernatant of the culture of S. mutans in BHI broth, being incubated at 37ºC for 24 h. For the control groups, the suspension of C. albicans was placed in sterile BHI or YPD broth and incubated under the same conditions. After the incubation period, the growth of C. albicans was centrifuged and washed to obtain a standardized suspension of C. albicans containing the surviving cells from exposure to the S. mutans supernatant. This suspension of C. albicans was then used to perform in vitro and in vivo tests to determine the virulence factors of this microorganism. In the in vitro study, the extracellular proteolytic activity of C. albicans was investigated, as well as its capacity for filamentation, adhesion and biofilm formation (1:30, 6, 24 and 48 h). For the in vivo study, the Galleria mellonella model was used, analyzing the survival curve, the number of fungal cells and hemocytes in the hemolymph of larvae infected with C. albicans. For statistical analysis, ANOVA, Tukey's test, Kruskal-Wallis and Log-rank were used, with a significance level of 5%. It was found that the cells of C. albicans exposed to the supernatant of S. mutans showed a reduction in filament, formation of biofilms and pathogenicity in G. mellonella in relation to the control. Exposure to the S. mutans supernatant also changed the pattern of adherence of C. albicans. However, the S. mutans supernatant did not reduce the proteolytic activity of C. albicans. It was concluded that the supernatant of S. mutans had the capacity to inhibit important mechanisms of virulence of C. albicans, being able to be a source of new antifungal agents to be explored.

Titanium dioxide nanotubes added to glass ionomer cements affect S. mutans viability and mechanisms of virulence

Abstract This in vitro study evaluated the impact of TiO2 nanotubes (n-TiO2) incorporated into glass ionomer cement (GIC) on Streptococcus mutans (S. mutans) characteristics at cellular and molecular levels. n-TiO2, synthesized by the alkaline method (20 nm in size), was added to Ketac Molar EasyMix® at 0%, 3%, 5%, and 7% by weight. S. mutans strains were cultured on GIC disks with addition or not of n-TiO2 for 1, 3, and 7 days and the following parameters were assessed: inhibition halo (mm) (n=3/group); cell viability (live/dead) (n=5/group); cell morphology (SEM) (n=3/group); and gene expression by real-time PCR (vicR, covR, gtfB, gtfC, and gtfD) (n=6/group). The data were analyzed by the Kruskal-Wallis test, repeated-measures ANOVA or two-way ANOVA, and Tukey's and Dunn's post-hoc tests (α=0.05). The agar diffusion test showed a higher antibacterial property for 5% n-TiO2 compared with 3% and 7% (p<0.05) with no effect of time (1, 3, and 7 days). The cell number was significantly affected by all n-TiO2 groups, while viability was mostly affected by 3% and 5% n-TiO2, which also affected cell morphology and organization. Real-time PCR demonstrated that n-TiO2 reduced the expression of covR when compared with GIC with no n-TiO2 (p<0.05), with no effect of time, except for 3% n-TiO2 on vicR expression. Within-group and between-group analyses revealed n-TiO2 did not affect mRNA levels of gtfB, gtfC, and gtfD (p>0.05). Incorporation of n-TiO2 at 3% and 5% potentially affected S. mutans viability and the expression of key genes for bacterial survival and growth, improving the anticariogenic properties of GIC.

Periodontal vaccines: a systematic review / Vacinas periodontais: uma revisão sistemática

Background: vaccination is the best known application of immunology to human health. Effective vaccines have successfully eradicated the prevalence of several infectious diseases that were common less than a generation ago. The success of Periodontal vaccines is still elusive due to the complexity of periodontal pathogens that have multiple serotypes. No periodontal vaccine trials have satisfied all the requirements such as preventing colonization of pathogens, protection against tissue destruction and alveolar bone loss, elicit immunoglobulins for phagocytosis, stimulation of T-helper cells. This review aims to discuss the various immunization strategies attempted so far. Objective: this review aims to discuss the various in-vitro and in vivo studies that present supporting evidence for the feasibility of formulating a prophylactic periodontal vaccine that could emerge as an adjunct to mechanical therapy in the future. Material and Methods: an extensive literature Search was performed in electronic databases, such as PUBMED, Cochrane central register of controlled trials, Google scholar and science direct using various search terms such as " periodontal vaccines", " porphyromonas gingivalis", "chronic periodontitis", " genomic vaccine ", " recombinant vaccine", "immune response", " vaccination against periodontal bacteria". No limits and language restriction were applied during the electronic search to include all the possible animal studies, clinical trials in the potential relevant article search phase of the systematic review. Conclusion: Studies evaluating Porphyromonas gingivalis are the most common and the structures showing the most potential as a vaccine candidate are Outer membrane proteins, fimbriae and gingipains, the structure having the least potential is Lipopolysaccharide. (AU)

Fundamentação: a vacinação é a aplicação mais conhecida da imunologia à saúde humana. As vacinas eficazes erradicaram com sucesso a prevalência de várias doenças infecciosas que eram comuns há menos de uma geração atrás. O sucesso das vacinas periodontais ainda é ilusório devido à complexidade de patógenos periodontais que possuem múltiplos sorotipos. Nenhum estudo de vacina periodontal atendeu a todos os requisitos, como prevenção da colonização de patógenos, proteção contra destruição de tecidos e perda óssea alveolar, estimulação de imunoglobulinas para fagocitose, estimulação de células T auxiliares. Esta revisão tem como objetivo discutir as várias estratégias de imunização tentadas até o momento. Objetivo: esta revisão tem como objetivo discutir os vários estudos in vitro e in vivo que apresentam evidências de apoio à viabilidade de formular uma vacina periodontal profilática que possa emergir como um complemento da terapia mecânica no futuro. Material e Métodos: Foi realizada uma extensa pesquisa bibliográfica em bancos de dados eletrônicos, como PUBMED, registro central de ensaios controlados Cochrane, Google Acadêmico e science direct, usando vários termos de pesquisa como "vacinas periodontais", "porphyromonas gingivalis", "periodontite crônica" , "Vacina genômica", "vacina recombinante", "resposta imune", "vacinação contra bactérias periodontais". Nenhum limite e restrição de idioma foi aplicado durante a busca eletrônica para incluir todos os possíveis estudos em animais e ensaios clínicos na fase de busca de artigos potencialmente relevantes da revisão sistemática. Conclusão: Estudos avaliando Porphyromonas gingivalis são os mais comuns e as estruturas que mostram maior potencial como candidato a vacina são proteínas de membrana externa, fímbrias e gengivinas, a estrutura com o menor potencial é lipopolissacarídeo.(AU)

Investigations of the prevalence and virulence of Candida albicans in periodontal and endodontic lesions in diabetic and normoglycemic patients

Abstract Pulpal and periodontal tissues have similar microbiota that allows cross-contamination between the pulp and periodontal tissues. Objective The aim of this study was to investigate the prevalence of isolated Candida albicans from periodontal endodontic lesions in diabetic and normoglycemic patients, and the fungi's virulence in different atmospheric conditions. Material and Methods A case-control study was conducted on 15 patients with type 2 diabetes mellitus (G1) and 15 non-diabetics (G2) with periodontal endodontic lesions. Samples of root canals and periodontal pockets were plated on CHROMagar for later identification by polymerase chain reaction (PCR) and virulence test. Results C. albicans was identified in 79.2% and 20.8% of the 60 samples collected from diabetic and normoglycemic patients, respectively. Of the 30 samples collected from periodontal pockets, 13 showed a positive culture for C. albicans, with 77% belonging to G1 and 23% to G2. Of the 11 positive samples from root canals, 82% were from G1 and 18% from G2. Production of proteinase presented a precipitation zone Pz<0.63 of 100% in G1 and 72% in G2, in redox and negative (Pz=1), under anaerobic conditions in both groups. Hydrophobicity of the strains from G1 indicated 16.4% with low, 19.3% with moderate, and 64.3% with high hydrophobicity in redox. In G2, 42.2% had low, 39.8% had moderate, 18% had high hydrophobicity in redox. In anaerobic conditions, G1 showed 15.2% with low, 12.8% with moderate, and 72% with high hydrophobicity; in G2, 33.6% had low, 28.8% had moderate, and 37.6% had high hydrophobicity. There was statistical difference in the number of positive cultures between G1 and G2 (p<0.05) with predominance in G1. There was statistical difference for all virulence factors, except hemolysis (p=0.001). Conclusions Candida albicans was isolated more frequently and had higher virulence in diabetic patients.

Role of Candida species from HIV infected children in enamel caries lesions: an in vitro study

Abstract Objectives This study analyzed the capacity of Candida spp. from dental biofilm of HIV infected (HIV+) children to demineralize primary molar enamel in vitro by Transversal Microhardness (TMH), Polarized Light Microscopy (PLM) and the quantity of calcium ions (Ca2+) released from the enamel. Material and Methods Candida spp. samples were isolated from the supragingival biofilm of HIV+ children. A hundred and forty (140) enamel blocks were randomly assigned to six groups: biofilm formed by C. albicans (Group 1); mixed biofilm formed by C. albicans and C. tropicalis (Group 2); mixed biofilm formed by C. albicans and C. parapsilosis (Group 3); mixed biofilm formed by C. albicans, C. parapsilosis and C. glabrata (Group 4); biofilm formed by C. albicans ATCC (Group 5) and medium without Candida (Group 6). Enamel blocks from each group were removed on days 3, 5, 8 and 15 after biofilm formation to evaluate the TMH and images of enamel were analyzed by PLM. The quantity of Ca2+ released, from Groups 1 and 6, was determined using an Atomic Absorption Spectrophotometer. The SPSS program was used for statistical analysis and the significance level was 5%. Results TMH showed a gradual reduction in enamel hardness (p<0.05) from the 1st to 15th day, but mainly five days after biofilm formation in all groups. The PLM showed superficial lesions indicating an increase in porosity. C. albicans caused the release of Ca2+ into suspension during biofilm formation. Conclusion Candida species from dental biofilm of HIV+ children can cause demineralization of primary enamel in vitro.

Estudo de genes de Candida albicans com função desconhecida quanto à formação de biofilme, características biológicas e interação patógeno- hospedeiro / Study of unknown function genes of Candida albicans as to biofilm formation, biological characteristics, and host-pathogen interaction

Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois não foi observado fenótipo significativo para a cepa mutante quanto aos testes realizados. A cepa mutante para ORF19.7170 ...

Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable for biofilm formation. ...

Estudo de genes de Candida albicans com função desconhecida quanto à formação de biofilme, características biológicas e interação patógeno- hospedeiro / Study of unknown function genes of Candida albicans as to biofilm formation, biological characteristics, and host-pathogen interaction

Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois não foi observado fenótipo significativo para a cepa mutante quanto aos testes realizados. A cepa mutante para ORF19.7170...

Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable for biofilm formation...

Evaluation of caries-associated virulence of biofilms from Candida albicans isolated from saliva of pediatric patients with sickle-cell anemia

A previous study demonstrated that the amount of Candida spp. in saliva is higher in children with sickle-cell disease. The results from a recent study demonstrate its participation in the etiology of dental caries. Objective This study assessed caries-associated virulence (production of acid, extracellular polysaccharides, proteins and metabolic activity) of biofilms from Candida albicans isolated from saliva of patients with sickle-cell anemia in comparison to isolates obtained from matched healthy children. Material and Methods The isolates were previously obtained from 25 children (4-6 years) and their matched controls (healthy children). One isolate of C. albicans per children was used, totaling 25 isolates per group. The C. albicans biofilms were grown for five days and analyzed regarding the production of lactic acid, extracellular polysaccharides, proteins and metabolic activity. The production of lactic acid was determined by the enzymatic method. The concentration of extracellular polysaccharides was determined by the phenol-sulphuric acid method, and the concentration of the protein was analyzed using the QuantiPro BCA kit. The XTT reduction was used to verify the metabolic activity. The data were analyzed with GraphPad Prism at 5%. Results The Mean±standard deviation for acid production, extracellular polysaccharides, proteins and metabolic activity of isolates from sickle-cell group was, respectively: 7.1±5.0 mmol/L; 15.6±2.5 μg glucose/mg biofilm; 7,503±3,097 μg/mL; A490 3.5±0.7. For isolates from control group the values obtained were: 3.5±3.3 mmol/L; 12.8±3.4 μg glucose/mg biofilm; 4,995±682 μg/mL; A490 3.4±0.5. The C. albicans isolates from patients with sickle-cell anemia produced a significantly greater quantity of acids (p=0.025), polysaccharides (p=0.025) and proteins (p=0.047) compared with the isolates from control group. However, there was ...

Fatores de virulência de Streptococcus mutans e sua relação com a persistência e transmissão de genótipos entre membros de famílias brasileiras / Virulence factors of Streptococcus mutans and its relation to the persistence and transmission of genotypes among Brazilian family members

Streptococcus mutans (S. mutans) é considerado o principal agente etiológico da cárie dentária e estudos acerca de sua virulência têm sido realizados com o intuito de compreender melhor os mecanismos de patogenia da doença. Dentre outros fatores, a virulência dessa espécie bacteriana está relacionada a sua habilidade em produzir proteína ligante de glucano tipo A (GbpA) e mutacinas, proteínas que desempenham importante papel na adesão celular e colonização da superfície dentária. Desta forma, o objetivo da presente pesquisa foi analisar, geneticamente, esses fatores de virulência de S. mutans e verificar sua relação com a persistência e transmissão de genótipos entre os membros de oito famílias brasileiras. Foram utilizados 392 isolados clínicos de S. mutans obtidos a partir da saliva de 20 indivíduos adultos cárie-ativos. Os microrganismos foram previamente identificados e genotipados em um estudo anterior que avaliou sua transmissibilidade e estabilidade ao longo do tempo. As amostras estocadas a -86°C foram reativadas por semeadura em diferentes meios de cultura (ágar sangue e ágar Mitis Salivarius Bacitracina Sacarose) e repicadas em caldo de Infusão de Cérebro e Coração. Após extração do DNA cromossômico bacteriano foram realizadas análises genético-moleculares, por meio da reação em cadeia da polimerase, visando a detecção nas amostras dos genes envolvidos na produção de GbpA (gbpA) e codificadores dos tipos I, II, III e IV de mutacinas (mutAI, mutAII, mutAIII e mutAIV). Os dados obtidos foram analisados por meio das estatísticas descritiva e inferencial, utilizando-se os testes de Qui Quadrado, Odds Ratio (OR) e exato de Fisher, a um intervalo de confiança de 95% (IC95%) e nível de significância de 5%. Os genes gbpa, mutAI, mutAII, mutAIII e mutAIV foram detectados, respectivamente, em 77,3%, 12,5%, 51%, 16,6% e 89,8% dos isolados de S. mutans considerados viáveis (N=392). A virulência do S. mutans apresentou associação com sua...

Streptococcus mutans (S. mutans) is the main etiologic agent in the development of dental caries and several studies about its virulence have been conducted to understand the mechanisms of disease pathogenesis. Among other factors, the virulence of this bacterial species is based on their ability to produce glucan-binding protein-A (GbpA) and mutacins, proteins that play an important role in cell adhesion and colonization of the dental surface. Thus, the aim of the present study was to analyze, genetically, these virulence factors of S. mutans and to investigate their relation with the persistence and transmission of genotypes among the members from eight Brazilian families. A total of 392 clinical isolates of S. mutans, collected from 20 caries-active adults, were utilized. These microorganisms were previously identified and genotyped in a study that evaluated their transmissibility and stability over time. The samples stored at -86°C were plated on different culture media (blood agar and Mitis Salivarius Sucrose Bacitracin agar) and grown in Brain Heart Infusion broth. After extraction of bacterial chromosomal DNA, the samples were amplified, by the technique of polymerase chain reaction, for the presence of genes coding for GbpA (gbpA) and for mutacins types I, II, III and IV (mutAI, mutAII, mutAIII and mutAIV). Data obtained were analyzed through descriptive and inferential statistics, using the Chi-Square, Odds Ratio (OR) and Fisher's exact tests, with a 95% confidence interval (95%CI) and a significance level of 5%. The gbpa, mutAI, mutAII, mutAIII and mutAIV genes were detected, respectively, in 77.3%, 12.5%, 51%, 16.6% and 89.8% of viable clinical isolates (N=392). The virulence of S. mutans was associated with the transmission (P<0,001) and stability of colonization (P=0.011). The most virulent genotypes showed approximately three times more likely to be transmitted (OR=3.07; 95%CI 2.02 - 4.66) and approximately two times more likely to...

Fatores de virulência de Streptococcus mutans e sua relação com a persistência e transmissão de genótipos entre membros de famílias brasileiras / Virulence factors of Streptococcus mutans and its relation to the persistence and transmission of genotypes among Brazilian family members

Streptococcus mutans (S. mutans) é considerado o principal agente etiológico da cárie dentária e estudos acerca de sua virulência têm sido realizados com o intuito de compreender melhor os mecanismos de patogenia da doença. Dentre outros fatores, a virulência dessa espécie bacteriana está relacionada a sua habilidade em produzir proteína ligante de glucano tipo A (GbpA) e mutacinas, proteínas que desempenham importante papel na adesão celular e colonização da superfície dentária. Desta forma, o objetivo da presente pesquisa foi analisar, geneticamente, esses fatores de virulência de S. mutans e verificar sua relação com a persistência e transmissão de genótipos entre os membros de oito famílias brasileiras. Foram utilizados 392 isolados clínicos de S. mutans obtidos a partir da saliva de 20 indivíduos adultos cárie-ativos. Os microrganismos foram previamente identificados e genotipados em um estudo anterior que avaliou sua transmissibilidade e estabilidade ao longo do tempo. As amostras estocadas a -86°C foram reativadas por semeadura em diferentes meios de cultura (ágar sangue e ágar Mitis Salivarius Bacitracina Sacarose) e repicadas em caldo de Infusão de Cérebro e Coração. Após extração do DNA cromossômico bacteriano foram realizadas análises genético-moleculares, por meio da reação em cadeia da polimerase, visando a detecção nas amostras dos genes envolvidos na produção de GbpA (gbpA) e codificadores dos tipos I, II, III e IV de mutacinas (mutAI, mutAII, mutAIII e mutAIV). Os dados obtidos foram analisados por meio das estatísticas descritiva e inferencial, utilizando-se os testes de Qui Quadrado, Odds Ratio (OR) e exato de Fisher, a um intervalo de confiança de 95% (IC95%) e nível de significância de 5%. Os genes gbpa, mutAI, mutAII, mutAIII e mutAIV foram detectados, respectivamente, em 77,3%, 12,5%, 51%, 16,6% e 89,8% dos isolados de S. mutans considerados viáveis (N=392). A virulência do S. mutans apresentou associação com sua...

Streptococcus mutans (S. mutans) is the main etiologic agent in the development of dental caries and several studies about its virulence have been conducted to understand the mechanisms of disease pathogenesis. Among other factors, the virulence of this bacterial species is based on their ability to produce glucan-binding protein-A (GbpA) and mutacins, proteins that play an important role in cell adhesion and colonization of the dental surface. Thus, the aim of the present study was to analyze, genetically, these virulence factors of S. mutans and to investigate their relation with the persistence and transmission of genotypes among the members from eight Brazilian families. A total of 392 clinical isolates of S. mutans, collected from 20 caries-active adults, were utilized. These microorganisms were previously identified and genotyped in a study that evaluated their transmissibility and stability over time. The samples stored at -86°C were plated on different culture media (blood agar and Mitis Salivarius Sucrose Bacitracin agar) and grown in Brain Heart Infusion broth. After extraction of bacterial chromosomal DNA, the samples were amplified, by the technique of polymerase chain reaction, for the presence of genes coding for GbpA (gbpA) and for mutacins types I, II, III and IV (mutAI, mutAII, mutAIII and mutAIV). Data obtained were analyzed through descriptive and inferential statistics, using the Chi-Square, Odds Ratio (OR) and Fisher's exact tests, with a 95% confidence interval (95%CI) and a significance level of 5%. The gbpa, mutAI, mutAII, mutAIII and mutAIV genes were detected, respectively, in 77.3%, 12.5%, 51%, 16.6% and 89.8% of viable clinical isolates (N=392). The virulence of S. mutans was associated with the transmission (P<0,001) and stability of colonization (P=0.011). The most virulent genotypes showed approximately three times more likely to be transmitted (OR=3.07; 95%CI 2.02 - 4.66) and approximately two times more likely to...

Avaliação comparativa entre bruxômanos e não bruxômanos quanto à qualidade de vida e a presença de desarmonias orofaciais / Comparative evaluation between bruxists and non bruxists regarding life quality and the presence of orofacial disharmonies

O bruxismo, uma desordem funcional dentária complexa e destrutiva, é representado por duas entidades que possuem diferentes patogêneses, o Bruxismo diurno ou de vigília (BD), e o Bruxismo do Sono (BS). Este estudo objetivou avaliar as características clínicas apresentadas por indivíduos bruxômanos, comparando-os a não bruxômanos. De um universo de 85 indivíduos foram formados um grupo de bruxômanos, e outro de não bruxômanos (grupo controle), utilizando um questionário de auto-relato para o diagnóstico do bruxismo. Ao exame clínico foram observaddas a ocorrência de diferentes fatores referidos na literatura. Nos resultados, após Análise de Variância com medidas repetidas (ANOVA), foi observado que entre o grupo controle e o grupo de bruxômanos, não houve diferenças estatisticamente significantes para a presença de interferência oclusal em protrusiva; lateralidade direita/esquerda; presença de guia de incisivos; presença de guia de caninos bilateral; desvio de linha média; mobilidade dental; recessão gengival; mordida aberta anterior; mordida cruzada anterior; mordida cruzada posterior unilateral; sobremordida; sobressaliência; salto condilar; clicks/estalos na ATM (nos questionários de auto-relato e no exame clínico); ruídos na ATM; limitação da abertura bucal; assimetria facial e para outros hábitos bucais (onicofagia, morder lábios, morder objetos).

Entre o grupo controle e o grupo de bruxômanos, houve diferenças estatisticamente significantes para a dor musculatura face; estresse funcional dental; guia de canino unilateral; ausência de guias de caninos; presença de facetas de desgaste; fratura de dentes e/ou restaurações; presença de abfração; hipertonia do músculo masseter. No questionário de qualidade de vida, proposto pela OMS, The WHOQOL Group (1998), Oral Health Impact Profile (OHIP-14) versão simplificada em português, o cansaço foi o único quesito que apresentou diferença estatisticamente significante, no que diferenciou o grupo de bruxômanos do de não bruxômanos.

Bruxism, a functional disorder and destructive dental complex, is represented by two entities that have different pathogenesis, as the Diurnal Bruxism (DB), and Sleep Bruxism (SB). This study aimed to evaluate the clinical characteristics displayed by bruxists, comparing them to non bruxists. From a universe of 85 individuals were selected a group of bruxists, and other non bruxists (control group), using a self-report questionnaire for the diagnosis of bruxism. On clinical examination were observaddas the occurrence of different factors reported in the literature. In the results, after Analysis of Variance with repeated measures (ANOVA), was observed between the control group and the bruxists group, there were no statistically significant differences in occlusal interference in protrusive; laterality right / left; guide incisors; canines bilateral guide; midline deviation; tooth mobility; gingival recession; anterior open bite; anterior crossbite; unilateral crossbite; overbite; overjet; jump condylar; clicks / TMJ clicking (on self-report questionnaires and clinical examination); TMJ sounds; limited mouth opening; facial asymmetry and other oral habits (onychophagia, biting lips, biting objects). Between the control group and the group of bruxists, statistically significant differences were observed for pain face muscles; functional dental stress; guide unilateral canine; absence of canine guides; presence of wear facets; broken teeth and / or restorations; presence of abfraction; masseter hypertony; lingual indentations and line Alba. In quality of life questionnaire, proposed by OMS, The WHOQOL Group, 1998, Oral Health Impact Profile (OHIP-14) simplified version in Portuguese, the factor fatigue was the only that showed statistically significant difference distinguishing the bruxists group of the group of non bruxists.

Candida dubliniensis: prevalência na cavidade bucal de pacientes diabéticos, com câncer de mana e hansenianos e patogenicidade experimental / Candida dubliniensis: prevalence in the oral cavity of diabetes, breast cancer and leprosy patients

O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de C. dubliniensis dentre isolados bucais de pacientes com diabetes mellitus do tipo I (n=39) e II (n=36), hansenianos (n=38) e sob quimioterapia para o câncer de mama (n=30) e de respectivos indivíduos controle pareados quanto à idade, gênero e condições bucais. Um total de 478 isolados previamente identificados por testes fenotípicos (formação de tubo germinativo, produção de hifas/pseudohifas/clamidoconídeos, fermentação e assimilação de carboidratos) e identificadas como C. Albicans/C.dubliniensis foram incluídos no estudo. A existência de C. dubliniensis dentre os isolados foi analisada usando protocolo validado de PCR multiplex. Foi também realizado de patogenicidade experimental utilizando camundongos em modelo de infecção sistêmica, objetivando comparar a virulência e cinética de infecção de C. dubliniensis com outras espécies do gênero Candida. Um isolado (0,002%) de C. dubliniensis foi detectado entre os isolados do grupo controle. Esta espécie nÃo foi encontrada entre os isolados dos outros grupos de pacientes. C. dubliniensis foi menos virulenta para camundongos em relação a C. albicans e C. tropicalis e mais virulenta do que C. Krusei. O estudo da cinética de infecção mostrou infecção persistente no rim e no fígado mesmo após 21 dias da inoculação de C. dubliniensis. Conclui-se que a detecção de C. dubliniensis dentre os isolados clínicos foi baixa e observada apenas no grupo controle. C. dubliniensis foi menos virulenta para camundongos que C. albicans e C. tropicalis e causou infecção prolongada no rim e no fígado.

Espiroquetas em infecções endodônticas / Spirochetes in endodontic infections

As espiroquetas são consideradas importantes patógenos orais e apenas recentemente têm sido identificadas em infecções endodônticas. Todas as espiroquetas orais são classificadas no gênero Treponema. Estudos recentes demonstraram que algumas espécies de Treponema são encontradas em alta prevalência em infecções endodônticas. Por causa disso, e levando-se em consideração que essas bactérias estão envolvidas em outras infecções orais e possuem reconhecida patogenicidade, pode-se inferir que espiroquetas, principalmente as espécies T. denticola, T. socranskii e T. maltophilum, são importantes patógenos endodônticos, que participam na etiologia de diferentes formas de lesões perirradiculares

Candidose, qual o melhor tratamento? / Candidosis, what is the best treatment?

A candidose é uma infecção fúngica bastante comum que acomete os seres humanos, podendo afetar também a boca. Esta infecção é causada principalmente pela "Candida albicans", porém, hoje já se sabe que outras espécies de "Candida" também são capazes de causar esta enfermidade. Os pacientes mais acometidos são os imunossuprimidos ou imunocomprometidos, sendo que esta doença afeta, principalmente, pessoas em extremos de idade (crianças e idosos). Clinicamente, a candidose pode apresentar-se de maneira bastante variada, como as formas: pseudomembranosa, eritematosa, hiperplásica, associada a próteses, queilite angular e glossite romboidal mediana. Uma vez diagnosticada a infecção, esta deverá ser tratada com o uso de agentes antifúngicos. Estes fármacos são classificados em agentes poliênicos (nistatina e anfotericina B) e derivados azólicos (miconazol, cetoconazol, fluconazol e itraconazol). Além disso, existem novos medicamentos que estão sendo estudados, como é o caso dos derivados do DNA e terapias alternativas (laser). O objetivo deste artigo é revisar as diferentes condutas frente à candidose

Estudo da microbiota anfibiôntica presente no interior de canais radiculares de dentes com polpa necrótica: susceptibilidade ao hidróxido de cálcio e fatores de virulência / Study of microbiota anfibiôntica gift in the interior of canals radiculares of teeth with necrótica pulp: susceptibilidade to hidróxido of calcium and the factors of virulence

O objetivo desse estudo foi avaliar a microbiota do sistema de canais radiculares de dentes com polpa necrótica, sua sensibilidade ao preparo biomecânico e curativo de demora de hidróxido de cálcio, bem como a influência desse curativo de demora, em concentrações subinibitórias, sobre a produção de cápsula, proteases, DNases, coagulase, sensibilidade ao soro, hemaglutinação, hidrofobicidade celular e hemólise pelos microrganismos testados, bem como sua susceptibilidade aos antimicrobianos. Os anaeróbios obrigatórios, Gram positivos e Gram negativos, foram os microrganismos mais freqüentemente isolados. O preparo biomecânico mostrou-se eficaz na redução da contaminação microbiana, sendo que os anaeróbios obrigatórios foram os microrganismos mais sensíveis a esses procedimentos. O hidróxido de cálcio mostrou-se extremamente efetivo como curativo de demora, mas não eliminou totalmente Enterococcus faecalis e, “in vitro”, foi inibitório para todos os microrganismos testados, incluindo-se esses cocos Gram positivos. A presença de concentrações subinibitórias desse curativo de demora reduziu significativamente a produção e/ou atividade de DNases, proteases e hemolisinas da microbiota e aumentou a susceptibilidade dos isolados ao metronidazol, eritromicina e penicilinas G e V, reduzindo a produção e/ou atividade de ß-lactamases. A hidrofobicidade celular, capacidade de hemaglutinação, produção de coagulase e cápsula, além da sensibilidade antimicrobiana ao soro não foram afetadas pela presença de hidróxido de cálcio em concentrações subinibitórias

Fatores de virulência do Actinobacillus actinomycetemcomitans: outros possíveis fatores / Virulence factors of Actinobacillus actinomycetemcomitans: other putative factors

Actinobacillus actinomycetemcomitans está implicado como o agente etiológico da periodontite juvenil localizada. Este organismo possui inúmeros fatores de virulência que podem interferir no reparo tissular. 50 isolados de A. actinomycetemcomitans de pacientes com periodontite foram examinados para avaliar outros possíveis fatores de virulência. Neste estudo, foi avaliada a produçäo de cápsula, DNase, coagulase, fibrinolisina, atividade proteolítica, hemolisina e bacteriocina, assim como hemaglutinaçäo, sensibilidade ao soro, aderência às células epiteliais, hidrofobicidade e virulência de A. actinomycetemcomitans. Todos os isolados foram resistentes para todos os tipos de soro utilizados. 70 por cento a 94 por cento dos isolados foram alfa-hemolíticos e aglutinaram todos os tipos sanguíneos. A maioria dos isolados produziu substâncias antagonistas e apresentaram baixa hidrofobicidade. Nenhum dos isolados foi patogênico para camundongos. Pouco se sabe, sobre a açäo e como esses fatores podem agir no desenvolvimento da doença periodontal, sendo necessários estudos adicionais para uma aplicaçäo em termos de sistemática e de patogênese

Estudo comparativo da atividade enzimática in vitro (proteinase e fosfolipase), de amostras de Candida albicans isoladas da mucosa bucal de indivíduos saudáveis, dentados e indivíduos desdentados com estomatite protética / Enzymatic activity of proteinase and phospholipase produced by Candida albicans isolated from the mouth of dentate healthy individuals and edentulous patients with denture stomatitis: in vitro comparative study

Candida albicans, habitante do tubo digestivo do ser humano, é bastante comum, também, na cavidade bucal. Apresenta atividade de produçäo de exoenzimas, dentre as quais proteinase e fosfolipase, em níveis variáveis, estudadas como fatores de virulência. A freqüênte observaçäo clínica de quadros da denominada estomatite protética, em cuja etiologia, Candida albicans tem sido discutida como importante componente, levaram o autor à indagaçäo da possível açäo das proteinases e fosfolipases. Para tanto, o propósito do presente trabalho foi estudo comparativo da atividade de produçäo de proteinase e fosfolipase, in vitro, de amostras de Candida albicans isoladas da cavidade bucal de indivíduos saudáveis, dentados, fumantes e näo fumantes (Grupo I) e de indivíduos desdentados, portadores de prótese total, acometidos de estomatite protética, fumantes e näo fumantes (Grupo II), estabelecendo e analisando os possíveis biotipos baseados nesses fatores, da levedura e dos portadores...