RESUMO
The aim of the study is to validate a cell culture model appropriate for assessing the effects of standard nutritional formulas on neutrophil functionality in vitro. The model consists of aged cells exposed to a commercial nutritional formula containing solely LCT as lipid component. Preliminary experiments determined dosage of formula and culture interval. Neutrophils were isolated from a pool of whole blood in healthy volunteers (18-55 years old) and cultured with and without addition of a commercial enteral diet with 3.5% lipids (equivalent to 0.04, 0.08, 0.2 and 0.4 mM of intraassay LCT) for 18, 42 or 76 hours. Based on cell viability results, doses of 0.2 and 0.4 mM LCT and culture time of 18 hours were established for subsequent experiments. Neutrophil functionality was evaluated by phagocytosis (NBT test), MDA production (lipoperoxidation index) and DNA fragmentation. Optic microscopy showed higher percentages of pre-apoptotic cells and a significant increase in DNA fragmentation as compared to controls only with an LCT concentration of 0.4 mM (p < 0.05). Interestingly, cell cultures with both 0.2 and 0.4 mM of added LCT showed significant decreases in malonyldialdehyde (MDA) release as a lipoperoxidation marker. This nutrition model of neutrophils and in vitro complete enteral commercial diet is relatively simply to execute and can be applied to different pathological conditions in which the aim is to study changes in neutrophil functionality (AU)
El objetivo del estudio ha sido validar un modelo en cultivo celular, apropiado para valorar los efectos in vitro de las fórmulas estándar y completas de nutrición enteral en la funcionalidad de los neutrófilos. El modelo consiste en células envejecidas a las que se añade una fórmula comercial de nutrición enteral que contiene LCT como fuente de lípidos. En experimentos preliminares se determinó la dosis de la fórmula y el intervalo de tiempo del cultivo. Los neutrófilos se aislaron a partir de un pool de sangre procedente de sujetos voluntarios sanos (18 a 55 años) y fueron cultivados sin y con la adición de la fórmula comercial enteral que contiene un 3,5 por ciento de lípidos con una concentración intraensayo equivalente a 0,04, 0,08, 0,2 y 0,4 mM de LCT durante 18, 42 o 76 horas. En base a los resultados de viabilidad celular obtenidos se establecieron como adecuados unas concentraciones de 0,2, 0,4 mM y un tiempo de cultivo de 18 horas en posteriores experimentos. La funcionalidad de los neutrófilos se evaluó mediante la fagocitosis (test del NBT), producción de malonildialdehído (MDA) como índice de lipoperoxidación y la fragmentación del ADN.Por microscopia óptica se observó que la adición de una dosis 0,4 mM de LCT (p < 0,05) producía porcentajes elevados de células preapoptóticas y un incremento significativo en la fragmentación del ADN al comparar con los controles sin adición. En cambio, cultivos con adición de 0,2 y 0,4 mM de LCT mostraron un descenso significativo en la producción de malonildialdehído. Este modelo de nutrición in vitro en neutrófilos y con una dieta comercial enteral completa es de relativamente fácil ejecución y puede aplicarse a diferentes condiciones patológicas en las que se estudien los cambios en la funcionalidad de los neutrófilos (AU)
