Rapid detection of clarithromycin resistant Helicobacter pylori strains in Spanish patients by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism

Objetivo. Determinar la presencia de mutaciones en el gen 23S rRNA que dan lugar a resistencia a claritromicina en aislamientos clínicos de Helicobacter pylori y evaluar un método nuevo de PCR-RFLP para detectar la mutación más frecuente en nuestra población. Métodos. A partir de biopsias gástricas obtenidas de pacientes sintomáticos, H. pylori fue cultivado acorde con los procedimientos microbiológicos establecidos. La resistencia a claritromicina fue determinada fenotípicamente mediante E-test. La extracción de DNA fue realizada con la plataforma NucliSens, que se basa en la extracción de DNA mediante partículas de sílice magnética siguiendo las instrucciones del fabricante. Para detectar las mutaciones puntuales en el gen 23S rRNA se analizó la secuencia de los productos amplificados por PCR. La PCRRFLP fue realizada usando la enzima BsaI para detectar la mutación en la posición 2143 que da lugar a resistencia a claritromicina. Resultados. Un total de 42 cepas fueron resistentes a claritromicina. Los resultados de E-test fueron confirmados por PCR en 34 (88.1%) de las cepas. Hubo 8 cepas de H. pylori resistentes a claritromicina por E-test donde no se encontró ningún punto de mutación en la secuencia del gen 23S rRNA. La mutación A2143G fue encontrada en el 85.3%. La enzima BsaI fue capaz de detectar esta mutación en todas las cepas que la tenían. Conclusiones. PCR-RFLP es un método fiable para detectar la resistencia a claritromicina en cepas de H. pylori, en especial en países con alta prevalencia como España. Este estudio sugiere que esta prueba puede ser útil antes de elegir el tratamiento erradicador(AU)

Introduction. The aim of this study was to characterize the mutations types present in the 23S rRNA gene related to H. pylori clarithromycin-resistance strains in Spain and evaluate a novel PCR-RFLP method for detection of the most frequent point mutation in our population. Methods. Gastric biopsies were obtained by endoscopy from patients with gastric symptoms. H. pylori was cultured according to standard microbiological procedures and clarithromycin resistance was determined by E-test. DNA extraction was performed by NucliSens platform with the NucliSens magnetic extraction reagents (bioMérieux) according to the manufacturer instructions. Analyses for point mutations in 23S rRNA gene strains were performed by sequence analysis of amplified polymerase chain reaction products. Restriction fragment length polymorphism was performed using BsaI enzyme to detect restriction sites that correspond to the mutation (A2143G). Results. We found 42 out of 118 (35.6%) strains resistant to clarithromycin by E-test. E-test results were confirmed for the presence of point mutation in 34 (88.1%) of these strains. Mutation A2143G was found in 85.3% of the strains. Analyses with the restriction enzyme BsaI was able to confirm the presence of A2143G mutation. There were 8 H. pylori strains resistant to clarithromycin by E-test but without any point mutation in the 23 rRNA gene. Conclusions. We conclude that PCR-RFLP is a reliable method to detect clarithromycin-resistance H. pylori strains in countries with a high prevalence of clarithromycin-resistance as Spain It may be useful before choosing regimens of H. pylori eradication(AU)

Toll-like receptor 4 Asp299Gly polymorphism and rheumatoid arthritis: a replicative study in three different populations

Los polimorfismos de los receptores tipo toll (TLRs) han sidoextensamente estudiados con respecto a la predisposición genéticaa varias enfermedades complejas humanas. En este contexto,el papel del polimorfismo Asp299Gly de TLR4 en la patogénesisde la artritis reumatoide (AR) no está claro. El objetivo del presenteestudio fue comprobar la posible implicación de este polimorfismoen la susceptibilidad a la AR. Genotipamos el polimorfismomediante reacción en cadena de la polimerasa y posterioranálisis de la longitud de fragmentos generados por endonucleasade restricción específica (PCR-RFLP) en tres poblacionesdiferentes de Granada (sur de España), Lugo (norte de España)y Colombia. No encontramos diferencias estadísticamente significativasen la distribución de alelos y genotipos en ninguna delas cohortes a estudio. Nuestros datos, junto a los de otros gruposde investigación, no apoyan un papel relevante del polimorfismoAsp299Gly de TLR4 en la susceptibilidad a la AR

Toll-like receptors (TLRs) polymorphisms have been extensivelystudied with regard to genetic predisposition to severalhuman complex diseases. In this context, the role of TLR4Asp299Gly in the pathogenesis of rheumatoid arthritis (RA) is notclear. The aim of this study was to test the possible implication ofthis polymorphism in the susceptibility to RA. We genotyped bypolymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP) in three different populations from Granada(Southern Spain), Lugo (Northern Spain), and Colombia.We did not find statistically significant differences in the distributionof alleles and genotypes in any of the cohorts under study.Our data, together with those from other groups, do not supporta relevant role of TLR4 Asp299Gly polymorphism in the susceptibilityto RA

Identificación del polimorfismo P1 en el gen GH1 en 2 hermanos con déficit de hormona del crecimiento / Identification of the P1 polymorphism in the GH1 gene in two siblings with growth hormone deficiency

El déficit de hormona del crecimiento (GH) tiene una prevalencia de 1/4.000-15.000 habitantes y en la mayoría de los casos se trata de un déficit idiopático. En los últimos años se han identificado alteraciones moleculares en los genes que regulan el eje somatotropo, algunas de las cuales se han relacionado con el estado secretorio de GH y con la talla. Ese es el caso del polimorfismo en el intrón 4 del gen GH1 llamado P-1 (A o T en la base 1663). Recientes estudios demuestran que la frecuencia del alelo A es significativamente superior en los pacientes con déficit de GH. Además, los pacientes con genotipo A/A muestran un pico máximo de GH tras estímulos, valores de factor de crecimiento similar a la insulina (IGF-I) y talla significativamente inferiores a los de los pacientes con genotipo T/T. Presentamos el caso de 2 hermanos diagnosticados de déficit aislado de GH tanto por criterios auxológicos como por la escasa respuesta de GH a estímulos farmacológicos. En ambos se identificó por estudio genético el polimorfismo P1 del intrón 4 del gen GH1, en uno en homocigosis y en otro en heterocigosis. También se identificó en ambos el polimorfismo 4 en homocigosis (SNP rs6173) y en uno de ellos el polimorfismo 68 (SNP rs6171, elemento Chi-like) en heterocigosis, si bien éstos no se asocian a ninguna anormalidad en la secreción de GH. Ninguno de ellos presentó la deleción de 6,7 kb, que engloba el gen GH1, que es la deleción más frecuente en los déficit familiares de GH con fenotipo IA. En ambos casos se instauró un tratamiento sustitutivo con GH con buena respuesta al tratamiento (AU)

Detección y tipado del papilomavirus humano en verrugas cutáneas mediante reacción en cadena de la polímerasa / Detection and typing of human papillomavirus in skin verrucas by polymerase chain reaction

Antecedentes y objetivos: Las verrugas son una patología muy frecuente en las consultas externas de dermatología. Gracias a las nuevas técnicas moleculares pueden detectarse con mayor certeza la presencia del papilomavirus humano en su etiología. Objetivo: Diagnosticar la detección del papilomavirus humano mediante la reacción en cadena de la polimerasa y tipado con enzimas de restricción en verrugas vulgares y plantares utilizando un método no invasivo de la obtención de muestras. Lugar de realización: Servicio Dermatología del Hospital Militar Gómez Ulla de Madrid. Diseño: Estudio prospectivo. Material y método: Material: De 341 pacientes diagnosticados clínicamente de verrugas cutáneas se seleccionaron un total de 67 según los siguientes criterios: verruga vulgar o plantar en forma de lesión única y sin tratamiento previo. Método: Raspado intenso con torunda seca y estéril sobre la superficie de las verrugas y zona limítrofe con piel sana, posteriormente, detección y tipado del papilomavirus humano mediante reacción en cadena de la polimerasa. Resultados: 15 por ciento de positivos (70 por ciento PVH 8/9). Conclusión: Se demuestra la posibilidad del tipado del PVH mediante esta técnica no invasiva (AU)

Técnicas diagnósticas descritas en el estudio de la distrofia muscular de Duchenne/Becker / Diagnostic techniques described in the study of Duchenne/Becker muscular dystrophy

Introducción. La distrofia muscular de Duchenne/Becker (DMD/ B) es una de las miopatías mas frecuentes, con un intervalo de incidencia de 1/3.500 varones nacidos vivos. Se caracteriza por una degeneración lenta de las fibras musculares, que provoca la invalidez en la primera década de vida de estos pacientes y luego la muerte por fallos respiratorios o cardíacos. Presenta un patrón de herencia recesivo ligado al sexo. Desarrollo. El gen responsable de esta enfermedad se conoce como gen DMD y se localiza en el brazo corto del cromosoma X. Las mutaciones más frecuentes encontradas en este gen son las deleciones. Existen numerosas técnicas moleculares para el estudio de esta enfermedad, que se han desarrollado durante años, entre las que podemos destacar el Southern Blot, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), utilización de short tandem repeat (STR), los fragmentos de restricción de longitud polimórficos (RFLP) y el Western Blot para el estudio de la proteína. Conclusiones. En este trabajo analizamos los estudios diagnósticos más utilizados en esta enfermedad, que han permitido realizar un mejor estudio de las diversas familias afectadas y mejorar así la calidad de vida de las familias con riesgo (AU)