The effect of in vitro ã-irradiation on mitogenic responsiveness of murine lymphocytes

The objective of this study was to analyze the proliferative response of BALB/cmice lymphocytes after in vitro irradiation (0.05 to 6 Gy). The capability of irradiatedlymphocytes for proliferating without any stimulation and after activation withspecific T and B cell mitogens has been evaluated. The results show that ionizingradiation significantly inhibits spontaneous cellular proliferation and that induced bymitogens and that variations in the degree of inhibition are found depending on theinducing proliferation mitogens and the dosage applied. The conclusion drawn is thatdifferent lymphocyte populations have different radiosensitivities, being B cells moresensitive to ionizing irradiation than T cells. Besides, the effects of gamma-irradiationvary according to the different subpopulations of T cells or, alternatively, to differentT-dependent activation mechanisms (AU)

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Papel de la proteína S6K1 en el balance supervivencia/muerte celular en el hígado / Role of S6K1 in the balance between survival and cell death in the liver

La ruta mTOR/S6K1 controla diferentes funciones celulares entre las quese encuentran la proliferación y el crecimiento de la masa celular. La insulina,IGF-I y EGF son factores de supervivencia de los hepatocitos. En las rutas deseñalización mediadas por sus receptores, todos ellos de la superfamilia tirosinaquinasa, la proteína S6K1 resulta activada. El objetivo de este trabajo ha sidoinvestigar si la deficiencia en S6K1 tiene consecuencias en el equilibrio entre lasupervivencia y la muerte celular en el hígado. Para ello, hemos generado líneas celulares de hepatocitos inmortalizados a partir de hígados de ratones neonatos degenotipo salvaje (S6K1+/+) y deficientes en S6K1 (S6K1–/–). Dichas células se hansometido a dos protocolos de inducción de muerte celular por apoptosis: activaciónde receptores de muerte (TNFR y Fas) y retirada de factores tróficos delmedio de cultivo. Nuestros resultados indican que la falta de S6K1 confiere protecciónfrente a la apoptosis inducida por activación de receptores de muerte. Estefenómeno se debe a que la expresión de la proteína pro-apoptótica Bid está disminuida,la caspasa-8 no se activa y no se produce la degradación de FLIP ni truncamientode Bid en respuesta a TNF y Jo2. De hecho, la falta de S6K1 protege deldaño hepático fulminante producido por la inyección de concanavalina A. Asimismo,la pérdida de S6K1 en los hepatocitos evita la apoptosis inducida por la retiradade factores tróficos. Esto es debido a que en ausencia de S6K1 no se iniciala retroalimentación negativa mediada por la actividad serina quinasa de esta proteínay, en consecuencia, los hepatocitos S6K1–/– mantienen activada la ruta IRS-1/PI3-quinasa que conduce a la activación de las quinasas Akt y ERK que mantienenla supervivencia celular. Nuestros resultados sugieren que la resistencia de loshepatocitos deficientes en S6K1 a la muerte celular por apoptosis podría explicarla resistencia a los compuestos inhibidores de mTOR en el tratamiento de diferentestipos de cáncer, como el hepatocarcinoma

The mTOR/S6K1 signaling pathway controls proliferation and cell growth.Insulin, IGF-I, EGF are trophic factors that elicit survival effects in hepatocytes.These molecules activate mTOR/S6K1 by acting through tyrosine kinase receptors.The aim of this study was to investigate whether S6K1 deficiency alters the balancesurvival/cell death in hepatocytes. For this goal, we have generated immortalizedhepatocyte cell lines from neonatal wild-type and S6K1–/– deficient mice. Apoptosishas been induced in these cells by activating the death receptor pathway or,alternatively, by growth factors deprivation. Our results indicate that the lack ofS6K1 in hepatocytes protects from apoptosis induced by the activation of deathreceptors (TNFR and Fas). In fact, in S6K1–/– hepatocytes the pro-apoptotic proteinBid is down-regulated and its active proteolitic fragment is absent in responseto TNF or Jo2. Moreover, neither caspase-8 is activated nor FLIP is degradedupon TNF or Jo2 treatment. In vivo, S6K1-deficient mice are protected againstConcanavalin A-induced hepatic failure. Deprivation of growth factors inducesapoptosis in wild-type, but not in S6K1–/– hepatocytes. This is due to the lack ofthe negative feed-back that increases IRS-1 serine phosphorylation and inhibitsPI3-kinase/Akt and MAPK survival molecular pathways. Consequently, there is asustained activation of Akt and MAPK in the absence of trophic factors and S6K1-deficient hepatocytes are protected from apoptosis. The molecular mechanisms bywhich S6K1 deficiency protects hepatocytes from apoptosis could be related withthe resistance of some mTOR inhibitors in cancer therapies

Produccion de Beta-endorfinas por poblaciones leucocitarias estimuladas con diferentes mitógenos / Production of beta-endorphins by hamatic leucocyte population stimulated by different mitogens

Se acepta generalmente que los péptidos opioides endógenos juegan un papel fundamental en la modulación de la respuesta inmune en procesos dolorosos. Durante tres años, nuestro Departamento ha investigado una técnica capaz de realizar estudios semi-cuantitativos de las Beta-endorfinas presentes en fa superficie de células leucocitarias hemáticas. Los trabajos previos, indican que la cantidad de Beta-endorfina presente en la superficie de estas células leucocitarias no depende exclusivamente de fa cantidad de Beta-endorfina existente en el plasma de los pacientes. Existiría una tracción de la misma que sería sintetizada por las propias células inmunocompetentes. El objetivo es conocer la capacidad de producción de Beta-endorfinas por células leucocitarias hemáticas cultivadas in vitro y estimuladas con diferentes mitógenos ( Fitohematoglutinina y Concanavalina A). La población de estudio estuvo formada por 16 sujetos sanos. A todos, se les extrajo una muestra de sangre, en la que se separaron fas células de fa serie blanca mediante una técnica de gradiente de densidad. Con las células leucocitarias obtenidas de cada sujeto se hicieron tres alicuotas ajustándose fa suspensión a 2.5 millones de células/250 microlitros en medio de PBS. Una de las muestras quedó como muestra control, la segunda se estimuló con PHA y la tercera muestra con Con A. Todas las muestras se incubaron durante 24 horas y se determinó la cantidad de Beta-endorfina existente en el sobrenadante celular mediante la técnica comercial de Nichols Institute. Se observaron concentraciones de Beta-endorfinas significativamente superiores en las muestras estimuladas con PHA en relación a las muestras controles y a las muestras estimuladas con ConA (AU)

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Linfocitos de pacientes con sorderas autoinmunitarias presentan hiporreactividad a colágeno tipo II en presencia de la hormona pineal melatonina / Lymphocytes of patients with auto-immune deafness present type II collagen hyporeactivity in the presence of the pineal hormone melatonin

Linfocitos de sangre periférica obtenidos de controles sanos y de pacientes con diversas sorderas mediadas-por mecanismos autoinmunitarios han sido estudiados en presencia de colágeno tipo II y melatonina, activando previamente los linfocitos mediante concanavalina A. Los resultados muestran una hiporreactividad de los linfocitos frente a colágeno tipo II del total de pacientes con sorderas autoinmunes, únicamente cuando los linfocitos se encuentran en presencia de melatonina, con diferencias estadísticamente significativas. Por entidades nosológicas, hay la misma hiporreactividad en la sordera neurosensorial bilateral, enfermedad de Ménière y otoesclerosis. Concluimos que en linfocitos de pacientes con sorderas autoinmunes existe una hiporreactividad frente a colágeno tipo II cuando se compara con linfocitos de controles sanos y que esta hiporreactividad únicamente se pone de manifiesto en presencia de melatonina cuando los linfocitos están activados (AU)

A study was made of the behavior of peripheral blood lymphocytes in healthy controls and patients with various types of hearing loss. Hearing loss of auto-immune origin was studied in the presence and absence of melatonin, activated or not by concanavalin A. In patients with auto-immune hearing loss, lymphocytes showed hyporeactivity to type II collagen in terms of proliferative activity in the presence of concavalin A. Hyporeactivity was especially relevant in melatonin-incubated cells. In different nosologic entities, lymphocyte hyporeactivity to type II collagen was similar in bilateral sensorineural hearing loss, Ménière's disease and otosclerosis. We conclude that the lymphocytes of patients with autoimmune hearing loss showed hyporeactivity to type II collagen when compared to lymphocytes from control subjects. This hyporeactivity was revealed when lymphocytes were activated in the presence of melatonin (AU)