Chimeric antigen receptor T cells therapy in solid tumors

Chimeric antigen receptor T cells therapy (CAR-T therapy) is a class of ACT therapy. Chimeric antigen receptor (CAR) is an engineered synthetic receptor of CAR-T, which give T cells the ability to recognize tumor antigens in a human leukocyte antigen-independent (HLA-independent) manner and enables them to recognize more extensive target antigens than natural T cell surface receptor (TCR), resulting in tumor destruction. CAR-T is composed of an extracellular single-chain variable fragment (scFv) of antibody, which serves as the targeting moiety, hinge region, transmembrane spacer, and intracellular signaling domain(s). CAR-T has been developing in many generations, which differ according to costimulatory domains. CAR-T therapy has several limitations that reduce its wide availability in immunotherapy which we can summarize in antigen escape that shows either partial or complete loss of target antigen expression, so multiplexing CAR-T cells are promoted to enhance targeting of tumor profiles. In addition, the large diversity in the tumor microenvironment also plays a major role in limiting this kind of treatment. Therefore, engineered CAR-T cells can evoke immunostimulatory signals that rebalance the tumor microenvironment. Using CAR-T therapy in treating the solid tumor is mainly restricted by the difficulty of CAR-T cells infiltrating the tumor site, so local administration was developed to improve the quality of treatment. The most severe toxicity after CAR-T therapy is on-target/on-tumor toxicity, such as cytokine release syndrome (CRS). Another type of toxicity is on-target/off-tumor toxicity which originates from the binding of CAR-T cells to target antigen that has shared expression on normal cells leading to damage in healthy cells and organs. Toxicity management should become a focus of implementation to permit management beyond specialized centers (AU)

Immunologic Heterogeneity in 2 Cartilage-Hair Hypoplasia Patients With a Distinct Clinical Course

Introduction: Cartilage-hair hypoplasia (CHH) syndrome is a rare autosomal recessive syndrome associated with skeletal dysplasia, varying degrees of combined immunodeficiency (CID), short stature, hair hypoplasia, macrocytic anemia, increased risk of malignancies, and Hirschsprung disease. Purpose: To provide clinical and immunological insights obtained from 2 unrelated patients who displayed clinical characteristics of CHH. Methods: Two patients with suspected CHH syndrome due to skeletal dysplasia and immunodeficiency underwent an immunological and genetic work-up using flow cytometry, next-generation sequencing (NGS) of the immune repertoire, and Sanger sequencing to identify the underlying defects. Results: Patient 1 presented with low birth weight and skeletal dysplasia. Newborn screening was suggestive of T-cell immunodeficiency, as T-cell receptor excision circle levels were undetectable. Both the T-cell receptor (TCR) Vß and TCR-g (TRG) repertoires were restricted, with evidence of clonal expansion. Genetic analysis identified compound heterozygous RMRP variants inherited from both parents. Patient 2 presented with recurrent lung and gastrointestinal infections, skeletal dysplasia, failure to thrive, and hepatomegaly. The polyclonal pattern of the TCRß repertoire was normal, with only slight overexpression of TCR-ßV20 and restricted expression of Vßs. TRG expressed a normal diverse repertoire, similar to that of the healthy control sample. Genetic analysis identified biallelic novel regulatory variants in RMRP. Both parents are carriers of this mutation. Conclusion: Our findings demonstrate how the immunological work-up, supported by genetic findings, can dramatically change treatment and future outcome in patients with the same clinical syndrome (AU)

Peripheral blood T-cell receptor repertoire as a predictor of clinical outcomes in gastrointestinal cancer patients treated with PD-1 inhibitor

Background Identifying valid biomarkers for patient selection impressively promotes the success of anti-PD-1 therapy. However, the unmet need for biomarkers in gastrointestinal (GI) cancers remains significant. We aimed to explore the predictive value of the circulating T-cell receptor (TCR) repertoire for clinical outcomes in GI cancers who received anti-PD-1 therapy. Methods 137 pre- and 79 post-treated peripheral blood samples were included. The TCR repertoire was evaluated by sequencing of complementarity-determining region 3 (CDR3) in the TRB gene. The Shannon index was used to measure the diversity of the TCR repertoire, and Morisita’s overlap index was used to determine TCR repertoire similarities between pre- and post-treated samples. Results Among all enrolled patients, 76 received anti-PD-1 monotherapy and 61 received anti-PD-1 combination therapy. In the anti-PD-1 monotherapy cohort, patients with higher baseline TCR diversity exhibited a significantly higher disease control rate (77.8% vs. 47.2%; hazard ratio [HR] 3.92; 95% confidence interval [CI] 1.14–13.48; P = 0.030) and a longer progression-free survival (PFS) (median: 6.47 months vs. 2.77 months; HR 2.10; 95% CI 1.16–3.79; P = 0.014) and overall survival (OS) (median: NA vs. 8.97 months; HR 3.53; 95% CI 1.49–8.38; P = 0.004) than those with lower diversity. Moreover, patients with a higher TCR repertoire similarity still showed a superior PFS (4.43 months vs. 1.84 months; HR 13.98; 95% CI 4.37–44.68; P < 0.001) and OS (13.40 months vs. 6.12 months; HR 2.93; 95% CI 1.22–7.03; P = 0.016) even in the cohort with lower baseline diversity. However, neither biomarker showed predictive value in the anti-PD-1 combination therapy cohort. Interestingly, the combination of TCR diversity and PD-L1 expression can facilitate patient stratification in a pooled cohort. Conclusion The circulating TCR repertoire can serve as a predictor of clinical outcomes in anti-PD-1 therapy in GI cancers (AU)

Inmunoterapia con células CAR-T en hematooncología pediátrica / Immunotherapy with CAR-T cells in paediatric haematology-oncology

A pesar de ser una enfermedad rara, el cáncer es la primera causa de mortalidad por enfermedad durante la edad pediátrica en los países desarrollados. En este momento, la irrupción de nuevos tratamientos como la inmunoterapia constituye un nuevo paradigma clínico y regulatorio. Uno de estos tipos de inmunoterapia es la inmunoterapia celular. En particular, los medicamentos de terapia avanzada con receptores antigénicos quiméricos en los linfocitos T (CAR-T), y en concreto las células CAR-T19, han supuesto un nuevo escenario en el abordaje de los tumores hematológicos, como la leucemia aguda linfoblástica y los linfomas de células tipo B. La aprobación por las autoridades regulatorias de tisagenlecleucel y axicabtagene ciloleucel, ha impulsado la puesta en marcha del Plan Nacional de Terapias Avanzadas-Medicamentos CAR-T en España, evidenciándose no solo la conveniencia de identificar los centros más adecuados para su administración, sino la necesidad de que estos sufran una profunda transformación para que su actividad asistencial se extienda en algunos casos a la capacidad de fabricación propia de este tipo de terapias. Los hospitales especializados en hematooncología pediátrica tienen por tanto el reto de evolucionar hacia un modelo asistencial que integre la inmunoterapia celular, dotándose de capacidad propia para gestionar todos los aspectos relativos al uso, fabricación y administración de estos nuevos tratamientos

Despite being a rare disease, cancer is the first cause of mortality due to disease during the paediatric age in the developed countries. The current, great increase in new treatments, such as immunotherapy, constitutes a new clinical and regulatory paradigm. Cellular immunotherapy is one of these types of immunotherapy. In particular, the advanced therapy drugs with chimeric antigen receptors in the T-lymphocytes (CAR-T), and particularly the CAR-T19 cells, has opened up a new scenario in the approach to haematology tumours like acute lymphoblastic leukaemia and the B-Cell lymphomas. The approval of tisagenlecleucel and axicabtagene ciloleucel by the regulatory authorities has led to the setting up of the National Plan for Advanced Therapies-CAR-T drugs in Spain. There is evidence of, not only the advantage of identifying the centres most suitable for their administration, but also the need for these to undergo a profound change in order that their healthcare activity is extended, in some cases, to the ability for the in-house manufacture of these types of therapies. The hospitals specialised in paediatric haematology-oncology thus have the challenge of progressing towards a healthcare model that integrates cellular immunotherapy, having the appropriate capacity to manage all aspects relative to their use, manufacture, and administration of these new treatments

Leucemia aguda linfoblástica: de la aminopterina a las células CAR T / Acute lymphoblastic leukemia: From aminopterin to CAR T cells

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Primer programa europeo de cribado neonatal para la inmunodeficiencia combinada grave: experiencia de tres años en Cataluña / First universal newborn screening program for severe combined immunodeficiency in Europe. Three-years' experience in Catalonia

La inmunodeficiencia combinada grave (IDCG) es la forma más grave de inmunodeficiencia primaria, que afecta sobre todo a los linfocitos T, y puede ser detectada al nacer mediante la cuantificación de los círculos de escisión del receptor de linfocitos T (TREC) en una muestra de sangre impregnada en papel (DBS). La detección precoz de esta enfermedad permite establecer de forma temprana un tratamiento adecuado en el paciente, permitiendo así su curación. El cribado neonatal de IDCG comenzó en Cataluña en enero de 2017, siendo la primera región española y europea en incluirla oficial y universalmente en su programa. En el presente trabajo se presentan los resultados obtenidos durante los tres primeros años y medio de experiencia (enero 2017 - junio 2020) empleando el kit EnLite Neonatal TREC (Perkin Elmer), con un cutoff de detección de TREC de 20 copias/miL. De 222.857 recién nacidos analizados, cuarenta y ocho fueron detecciones positivas: tres casos de IDCG (incidencia de 1:74.285); diecisiete casos de linfopenia T no IDCG (incidencia de 1:13.109); veintidós casos falsos positivos (recuento de linfocitos inicialmente normal, con normalización de TREC entre los tres y seis meses de vida); un caso con linfopenia transitoria (con un recuento de linfocitos inicialmente bajo, que se normaliza en los meses siguientes); y cinco pacientes se encuentran todavía en estudio. Los resultados obtenidos aportan evidencias de los beneficios que supone incluir esta enfermedad en los programas de cribado neonatal. Podría ser necesario un seguimiento todavía más prolongado para acabar de definir la incidencia exacta de IDCG en Cataluña

Severe combined immunodeficiency (SCID), the most severe form of T-cell immunodeficiency, can be screened at birth by quantifying T-cell receptor excision circles (TREC) in dried blood spot (DBS) samples. Early detection of this condition speeds up the establishment of appropriate treatment and increases the patient's life expectancy. Newborn screening for SCID started in January 2017 in Catalonia, the first Spanish and European region to universally include this testing. The results obtained in the first three years and a half of experience (January 2017 - June 2020) are shown here, using EnLite Neonatal TREC kit (Perkin Elmer) with 20 copies/miL as TREC detection cutoff. Of 222,857 newborns screened, 48 tested positive: three patients were diagnosed with SCID (incidence 1:74,285); 17 patients had clinically significant T-cell lymphopenia (non-SCID) with an incidence of 1 in 13,109 newborns; twenty two patients were considered false-positive cases because of an initially normal lymphocyte count with normalization of TREC between 3 and 6 months of life; one case had transient lymphopenia due to an initially low lymphocyte count with recovery in the following months; and five patients are still under study. The results obtained provide further evidence of the benefits of including this disease in newborn screening programs. Even longer follow-up could be necessary to define the exact incidence of SCID in Catalonia

CAR-T: luces y sombras / CAR-T: lights and shades

La terapia celular adoptiva está revolucionando el panorama de la terapéutica actual. La gestión de los medicamentos CAR-T supone un reto para el sistema nacional de salud (SNS), pues se trata de medicamentos complejos de un elevado impacto sanitario. En esta línea, la elaboración de protocolos fármaco-clínicos con criterios claramente definidos ayudará a un correcto posicionamiento y selección de los pacientes candidatos a estas terapias. Así mismo, la administración de estos fármacos debe realizarse en centros previamente seleccionados y cualificados para tal fin, garantizando la equidad en el acceso. Por otro lado, es prioritario un abordaje multidisciplinar de todos los pacientes que sean tratados con las terapias CAR-T. Finalmente es fundamental la evaluación y el registro constante de resultados, los cuales contribuirán a determinar el beneficio real de la terapia, reclamando la necesidad de precios equitativos para garantizar la sostenibilidad del SNS y el acceso a los pacientes previamente seleccionados

Adoptive cell therapy is revolutionizing the current therapeutic landscape. The management of CAR-T drugs is a challenge for The National Health System (NHS), as they are complex drugs with high impact on health. This way, the development of clinical pharmaceutical protocols with clearly defined criteria, will help in correct positioning and selection of patients candidates for these therapies. Likewise, administration of these drugs must be carried out in centers previously selected and qualified for this purpose, guaranteeing equity of access. On the other hand, a multidisciplinary approach of all patients treated with CAR-T therapies is a priority. Finally, the assessment and the constant result recording are essencial, since they will contribute to determining the real benefit of these therapies, claiming the need for equitable prices, guaranteeing the sustainability of the NHS and the access of previously selected patients to them

Microdeletion 22q11.2 syndrome: Does thymus incidental surgical resection affect its immunological profile?

Background: The del22q11 syndrome patients present immunological abnormalities associated to thymus alterations. Up to 75% of them present cardiopathies and thymus is frequently removed during surgery. The thymectomy per se has a deleterious effect concerning lymphocyte subpopulations, and T cell function. When compared to healthy controls, these patients have higher infections propensity of variable severity. The factors behind these variations are unknown. We compared immunological profiles of del22q11.2 Syndrome patients with and without thymectomy to establish its effect in the immune profile. Methods: Forty-six del22q11.2 syndrome patients from 1 to 16 years old, 19 of them with partial or total thymectomy were included. Heart disease type, heart surgery, infections events and thymus resection were identified. Immunoglobulin levels, flow cytometry for lymphocytes subpopulations and TREC levels were determined, and statistical analyses were performed. Results: The thymectomy group had a lower lymphocyte index, both regarding total cell count and when comparing age-adjusted Z scores. Also, CD3+, CD4+ and CD8+ lower levels were observed in this group, the lowest count in those patients who had undergone thymus resection during the first year of life. Their TREC level median was 23.6/μL vs 16.1 miL in the non-thymus group (p = 0.22). No differences were identified regarding immunoglobulin levels or infection events frequencies over the previous year. Conclusion: Patients with del22q11.2 syndrome subjected to thymus resection present lower lymphocyte and TREC indexes when compared to patients without thymectomy. This situation may be influenced by the age at the surgery and the time elapsed since the procedure

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Novedades en inmunología del melanoma / Novel Immunologic Approaches to Melanoma Treatment

Desde la introducción de la inmunoterapia el tratamiento del melanoma ha sufrido una revolución, consiguiéndose cifras de supervivencia superiores a las que se alcanzaban con los tratamientos previos. Los fármacos inmunomoduladores disponibles actualmente van dirigidos principalmente frente a las moléculas de superficie CTLA-4 y PD-1, que ejercen un efecto inhibidor sobre la respuesta inmune antitumoral. Se trata de un tratamiento en pleno proceso de expansión, y la investigación se dirige hacia el descubrimiento de nuevas moléculas, las combinaciones de los fármacos disponibles o la identificación de biomarcadores que permitan seleccionar a los pacientes idóneos para cada terapia (AU)

Approaches to treating melanoma have changed radically since the introduction of immunotherapy, and survival figures are now higher than possible with earlier therapies. The immunomodulators currently available mainly block CTLA-4 (cytotoxicT lymphocyte-associated molecule-4) and PD-1 (programed cell death protein 1) translocated to the cell surface, where they inhibit the antitumor immune response. Treatments blocking these molecules are being more widely used. Research now seeks new molecular targets, the best combinations of available drugs, and biomarkers that can identify ideal candidates for each one (AU)

Inmunodeficiencias congénitas del receptor de antígeno de los linfocitos T / Congenital T-cell receptor immunodeficiencies

Las inmunodeficiencias humanas del TCR son enfermedades autosómicas recesivas con baja prevalencia, caracterizadas por un defecto de expresión del TCR asociado a una linfopenia T selectiva (más leve en el caso de CD3γ, TCRα o CD247, o grave en el caso de CD3δ o CD3¿). La ausencia congénita de componentes del TCR tiene un impacto diferencial en el desarrollo y función de los linfocitos T, que depende de la cadena del TCR afectada y de la especie, siendo en algunos casos diferente en los pacientes humanos en comparación con los modelos en ratones. El estudio del inmunofenotipo mediante citometría de flujo, junto con los estudios moleculares, proporciona información esencial para el diagnóstico y el tratamiento, que continúa siendo a día de hoy el trasplante de progenitores hematopoyéticos en los casos asociados a inmunodeficiencia grave (AU)

T-cell receptor (TCR) immunodeficiencies of humans are low-prevalence autosomal recessive diseases characterized by impaired surface TCR expression and selective T lymphopenia (milder in CD3γ, TCRα or CD247 deficiency, and severe in individuals lacking CD3δ or CD3¿). The congenital absence of TCR components has a differential impact on T-cell development and function depending on the affected TCR chain and on the species, with human patients being, in some cases, rather different from mouse counterparts. The study of the immunophenotype by flow cytometry, along with molecular analyses, provides essential information for diagnosis and treatment, which is still to date the transplant of hematopoietic progenitors in severe immunodeficiency associated cases(AU)

Generación de diversidad de los receptores de antígeno en linfocitos: validación del «modelo de accesibilidad» en el control de la recombinación V(D)J / Generation of lymphocyte antigen receptor diversity: Validation of the “accessibility model” in controlling V(D)J recombination

La recombinación V(D)J consiste en el ensamblaje de los segmentos génicos presentes en los genes de las cadenas variables de los receptores de antígeno para generar la diversidad del reconocimiento antigénico en linfocitos. El conocimiento de su regulación en condiciones normales es esencial para entender los casos en que este proceso se desregula, dando lugar a transformaciones leucémicas. La recombinación V(D)J se inicia por acción de una endonucleasa específica presente exclusivamente en linfocitos inmaduros. Según el «modelo de accesibilidad» propuesto hace más de 25 años, la recombinación V(D)J está regulada a través del control de la accesibilidad de esta endonucleasa a sus sitios de corte en el ADN, de acuerdo con unos programas de diferenciación celular muy definidos. En esta revisión se resumen los hallazgos descubiertos en este campo en los últimos años, tales como el importante papel que tiene la conformación génica y la posición de estos genes en el núcleo celular, así como aquellos que muy recientemente han permitido la validación definitiva del «modelo de accesibilidad» (AU)

V(D)J recombination is the assembly of gene segments at the antigen receptor loci in order to generate antigen receptor diversity in T and B lymphocytes. Detailed knowledge of how V(D)J recombination is normally regulated during lymphocyte development is essential to understand the cases of dysregulation of this process that result in leukemic transformation. V(D)J recombination is triggered by action of a specific endonuclease which is exclusively expressed in immature lymphocytes. According to the “accessibility model” proposed more than 25 years ago, DNA cleavage by this endonuclease is very strictly controlled during cell differentiation by regulating its accessibility to chromatin. This review summarizes the advances in the field over the last few years, including the important role of the genomic conformation and position of the antigen receptor loci within the nucleus, as well as those that have recently culminated with the validation of the “accessibility model” to control this process (AU)

The role of the adapter LAT in T cell activation and maturation

El receptor de células T (TCR) reconoce péptidos unidos alcomplejo mayor de histocompatibilidad (MHC) y transmite estainformación a la célula T a través de proteínas adaptadoras. Eladaptador LAT (de «Linker for Activation of T cells») es una proteínatransmembrana que, una vez fosforilada en sus residuos detirosina, coordina la unión de muchas proteínas implicadas enseñalización intracelular, de modo que promueve la formaciónde complejos multi-moleculares que regulan la activación y maduraciónde las células T. Estudios funcionales y estructurales, tantoin vitro como in vivo, han revelado un papel central de LAT comoplataforma de distribución de señales procedentes del TCR y pre-TCR, así como una inesperada función en la regulación del desarrolloy homeostasis de las células T. En esta revisión se discutenalgunos de los más recientes avances acerca de las funciones deeste adaptador en la maduración y activación de los linfocitos T

The T Cell Receptor (TCR) recognizes peptides bound to majorhistocompatibility complex (MHC) molecules and relays this informationto the T cell through adapter proteins. The adapter LAT(Linker for Activation of T cells) is a transmembrane protein that,once phosphorylated in its tyrosine residues, coordinates the bindingof many signaling proteins in order to assemble multi-molecularcomplexes that regulate T cell activation and maturation.Structure/function studies, both in vitro and in vivo, have revealeda central role of LAT as a platform for the distribution of signalscoming from the TCR and the pre-TCR, and also an unexpectedfunction in the regulation of T cell development and homeostasis.Thus, in the present review we discuss some of the recentadvances on the role of this adaptor in T lymphocyte developmentand activation

The role of the adapter LAT in T cell activation and maturation

El receptor de células T (TCR) reconoce péptidos unidos al complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) y transmite esta información a la célula T a través de proteínas adaptadoras. Eladaptador LAT (de «Linker for Activation of T cells») es una proteína transmembrana que, una vez fosforilada en sus residuos detirosina, coordina la unión de muchas proteínas implicadas en señalización intracelular, de modo que promueve la formación de complejos multi-moleculares que regulan la activación y maduraciónde las células T. Estudios funcionales y estructurales, tanto in vitro como in vivo, han revelado un papel central de LAT como plataforma de distribución de señales procedentes del TCR y pre-TCR, así como una inesperada función en la regulación del desarrollo y homeostasis de las células T. En esta revisión se discuten algunos de los más recientes avances acerca de las funciones de este adaptador en la maduración y activación de los linfocitos T (AU)

The T Cell Receptor (TCR) recognizes peptides bound to majorhistocompatibility complex (MHC) molecules and relays this information to the T cell through adapter proteins. The adapter LAT(Linker for Activation of T cells) is a transmembrane protein that,once phosphorylated in its tyrosine residues, coordinates the binding of many signaling proteins in order to assemble multi-molecular complexes that regulate T cell activation and maturation.Structure/function studies, both in vitro and in vivo, have revealeda central role of LAT as a platform for the distribution of signalscoming from the TCR and the pre-TCR, and also an unexpectedfunction in the regulation of T cell development and homeostasis.Thus, in the present review we discuss some of the recent advances on the role of this adaptor in T lymphocyte developmentand activation (AU)

Receptores de células asesinas naturales: relevancia funcional / Natural killer cell receptors: functional roles

El Sistema inmune adaptativo, con sus receptores inmunoglobulínicos y receptores de células T, ha cautivado el enfoque de la mayor parte de la investigación inmunológica y opacado la importancia de los receptores expresados por células del sistema inmune innato. Las células Asesinas Naturales (NK) han desarrollado dos sistemas de receptores principales para llevar a cabo su función, ambos sistemas emplean receptores tanto inhibitorios como activatorios, e incluyen a miembros de la Superfamilia Inmunoglobulina-similes al igual que Receptores Lectina tipo C-símiles. Los receptores Inmunoglobulina-símiles KIR son receptores polimórficos de superficie celular capaces de reconocer a molécluas clásicas de HLA de clase I y modular de manera alternativa la repsuesta inmune a células infectadas o tumorales. Los receptores Lectina-símiles recientemente han demostrado poseer la capacidad de reconocer a moléculas no-clásicas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC) tales como HLA-E y la cadena relacionada a clase I de MHC (MICA). La extensión de la diversidad y de la complejidad organisacional que estos receptores geneticamente pre-establecidos y no-rearreglantes poseen, ha sido recientmente demostrada. Los receptores de células NK se han visto implicados en una gran variedad de escenarios clínicos incluyendo a la resistencia/susceptibilidad a infecciones por patógenos, el reconocimiento, eliminación y vigilancia antitumoral, al igual que como elementos importantes para el desenlace del transplante de organos sólidos y de células hematopoyéticas. Las relaciones funcionales que existen entre el MHC y los receptores de células NK nos brindan una mejor comprension de la respuesta inmune a incursiones patogénicas, neoplasias asi como en la transplantación clínica (AU)

Modulación negativa del TCR por un mecanismo de todo-o-nada / All-or-none downregulation of the T cell antigen receptor

El contacto del TCR con MHC/antígeno resulta en su modulación y desaparición de la superficie celular. Recientemente hemos descrito que este proceso ocurre por al menos dos mecanismos: uno es dependiente de transmisión de señales, predomina a bajas concentraciones de antígeno y resulta en la modulación en trans de moléculas de TCR no contactadas. El otro requiere contacto directo y es independiente de transmisión de señales. En este artículo describimos que el TCR es modulado en una forma discontinua, es decir las células estimuladas oscilan de un estado no-modulado a otro completamente modulado sin transición aparente por estados intermedios, cuando las células T son estimuladas con altas dosis de antígeno o de anticuerpos anti-TCR. El fenómeno se reproduce cuando un receptor quimérico, que contiene la parte extracelular y transmembránica de CD8 y el tallo citoplásmico de CD3 , es entre cruzado con anticuerpos inmovilizados a un substrato. Este proceso de modulación de "todo-o-nada" no requiere de transmisión de señales o de polimerización del citoesqueleto de actina. El análisis por microscopía confocal muestra que el anticuerpo estimulante es tomado del substrato y concentrado junto con la quimera en un polo de la célula donde se constituye un sitio de nucleación para la formación de vesículas endocíticas. El efecto de "todo-o-nada" puede explicarse por la concentración lenta del TCR o de la quimera, seguido de la internalización rápida de los receptores agregados (AU)