Reunión del Grupo de inmunoquímica (GiQ) y taller sobre igA Hevylite(R) / No disponible

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Hemoglobina Yuda: primer caso descrito en España / Hemoglobin Yuda: First case reported in Spain

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Development and validation of an HPLC-MS method for a simultaneous measurement of oxalate and citrate in urine / Desarrollo y validación de un método de HPLC-MS para la medida simultánea de oxalato y citrato en orina

Objectives. An increased urinary oxalate and reduced urinary citrate are considered major risk factors in the formation of calcium oxalate kidney stones. In this work, an HPLC-MS method is presented for the simultaneous measurement of oxalate and citrate in urine. Methods. Sample preparation was carried out using a liquid-liquid extraction with ethyl acetate. Chromatographic separation was performed in a C18 column by gradient elution with methanol and 1 M formate buffer at 35 °C. Citrate and oxalate were monitored on a single-quadrupole MS system. Results. The method was linear in the concentration range of 0.5 mg/L to 450 mg/L for oxalate and from 2.5 mg/L to 950 mg/L for citrate. The Lower Limit of Measurement was 0.56 mg/L for oxalate and 2.5 mg/L for citrate. The within-day imprecision was 6% for oxalate and 3% for citrate, and the between day imprecision was lower than 15% for both analytes. LC-MS method was compared with capillary electrophoresis and it was shown that both methods were interchangeable to measure oxalate, but not citrate. Conclusions. HPLC-MS method is a good approach to measure oxalate and citrate in 24-hour urine, and it is applicable in clinical routine for patients with recurrent stone formation (AU)

Objetivos. La hiperoxaluria e hipocitraturia están consideradas el principal factor de riesgo en la formación de cálculos renales de oxalato cálcico. En este trabajo se ha desarrollado un método de HPLC-MS para la medida simultánea de oxalato y citrato en orina. Métodos. La preparación de muestras se realizó por una extracción líquido-líquido con etilacetato. La separación cromatográfica se llevó a cabo en una columna C-18 a 35 °C con un gradiente de elución con metanol y ácido fórmico 1 M. El citrato y el oxalato se monitorizaron mediante espectrometría de masas con un cuadrupolo simple. Resultados. El método fue lineal para el oxalato en el rango de concentración de 0,5 a 450 mg/l y para el citrato de 2,5 a 950 mg/l. El límite menor de intervalo de medida fue de 0,56 mg/l para el oxalato y de 2,5 mg/l para el citrato. La imprecisión intradía fue del 6% para el oxalato y del 3% para el citrato, y la interdía fue inferior al 15% para ambos analitos. El método de LC-MS desarrollado se comparó con un método de electroforesis capilar y se demostró que ambos eran intercambiables para el oxalato, pero no para el citrato. Conclusiones. El método de HPLC-MS desarrollado constituye una buena aproximación para medir oxalato y citrato en orina de 24 horas y es aplicable en la rutina clínica para pacientes con riesgo de formación de cálculos renales (AU)

Crioglobulinemia de filiación incierta / Cryoglobulinemia uncertain affilation

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Interferencia en electroforesis capilar debida a contraste yodado / Iodinated contrast interference in capillary electrophoresis

La electroforesis capilar de proteínas séricas es la técnica más utilizada actualmente por los laboratorios clínicos para la detección de componentes monoclonales en suero por su elevada sensibilidad, rapidez y alto nivel de automatización, mejorando notablemente los resultados frente a los métodos basados en la utilización de geles. Sin embargo, se han descrito interferencias por sustancias exógenas no proteicas que absorben a la misma longitud de onda y provocan la aparición de falsos positivos. Se describen dos pacientes a los que se les realiza una extracción de sangre para una analítica programada que incluye la determinación del proteinograma. En ambos casos, justo antes de la extracción, se realizó una tomografía axial computarizada (TAC) de tórax con contraste yodado. En el proteinograma se observa un pico monoclonal en la fracción beta. La inmunofijación e inmunosustracción de ambos sueros no confirma la presencia del pico, por lo que se sospecha la existencia de una interferencia por el contraste yodado. Posteriormente, se solicita una nueva extracción a ambos pacientes para repetir el proteinograma y en ambos casos se observa la desaparición del pico obteniéndose un perfil electroforético totalmente normal (AU)

Capillary electrophoresis of serum proteins is the method most currently used by clinical laboratories for the detection of monoclonal components in serum due to it being highly automated and rapid, with a high sensitivity, significantly improving the results compared to methods based on the use of gel techniques. However, there have been reports of interference by exogenous, non-protein substances that absorb at the same wavelength and cause false positives. Blood samples for laboratory analysis, including protein electrophoresis, were taken from two patients just after they had been subjected to a computed tomography (CT) scan with iodinated contrast. A monoclonal peak was observed in the beta fraction of the electrophoresis pattern, which was unable to be confirmed by immunofixation or immunosubtraction, leading to the suspicion of interference by iodinated contrast. A second sample was requested in bothcases to repeat the analysis, which showed the disappearance of the peak, with a totally normal electrophoretic profile being obtained (AU)

Un método de detección de gammapatías monoclonales de IgM en un analizador / A method for detect Ig M monoclonal gammopathies in an autoanalyzer

Introducción. Frecuentemente el mieloma múltiple es precedido de una gammapatía monoclonal de significado incierto. Este estudio analiza la utilidad de una lipidemia falsamente positiva como un método rutinario y barato de detección de gammapatías monoclonales de IgM. Material y métodos. Se examinaron los sueros de 244 pacientes consecutivos con un índice lipidémico falso positivo (n=34) o negativo (n=210) y triglicéridos < 1,7mmol/L. Las concentraciones de inmunoglobulinas se estudiaron mediante un autoanalizador AU-5430. Los test de lipidemia fueron realizados con una concentración salina de 0,038M y los proteinogramas mediante una electroforesis capilar de la zona. Resultados. Con el diagnóstico de banda monoclonal la lipidemia falsa positiva tuvo una sensibilidad del 97% (95% CI: 91-100) y especificidad del 94% (95% CI: 91-97). El valor predictivo positivo y negativo fue de 72% (95% CI: 59-85) y 99% (95% CI: 99-100), respectivamente. Para el diagnóstico de IgM elevada la sensibilidad fue del 71% (95% CI: 55-86), la especificidad del 99% (95% CI: 98-100) y el valor predictivo positivo y negativo del 92% (95% CI: 82-103) y 95% (95% CI: 93-98), respectivamente. El OR ajustado por edad y sexo de la lipidemia falso positivo fue de 768,0 (95% CI: 75,8-7.799,3) para la IgM elevada y de 219,4 (95% CI: 42,9-1.120,5) para la banda monoclonal. Conclusiones. La lipidemia falsamente positiva se asoció a la IgM elevada y particularmente a la gammapatía monoclonal. Es una herramienta barata, sensible y específica para detectar una gammapatía monoclonal de IgM en los índices de interferencia rutinarios en analizadores (AU)

Introduction. Most patients with multiple myeloma have a previous monoclonal gammopathy of undetermined significance. This study analyzes the possible clinical usefulness of a false positive lipemia as a routine, inexpensive screening tool for IgM monoclonal gammopathies. Material and methods. Serum samples from 244 consecutive patients with a false positive (n=34) or negative lipemia test (n=210), with triglycerides <1.7mmol/L were studied. Immunoglobulin levels were quantified in an AU-5430 autoanalyzer. Lipemia tests were performed in a final saline concentration of 0,038M, and proteins by capillary-zone electrophoresis. Results. Sensitivity for monoclonal band detection was 97% (95% CI 91-100) for false lipemia, with 94% (95% CI: 91-97) specificity. The positive and negative predictive values were 72% (95% CI: 59-85) and 99% (95% CI: 99-100), respectively. Its sensitivity for elevated IgM detection was 71% (95% CI: 55-86) and 99% (95% CI: 98-100) specificity, positive and negative predictive values of 92% (95% CI: 82-100) and 95% (95% CI: 93-98), respectively. Age and sex-adjusted odds ratio of elevated IgM for false lipemic serum patients was 768.0 (95% CI: 75.8-7799.3), and 219.4 (95% CI: 42.9-1120.5) for the monoclonal band. Conclusions. A false positive lipemic test was associated with elevated IgM, and particularly with monoclonal gammopathy. This finding offers an inexpensive, sensitive and specific screening tool to detect IgM monoclonal gammopathy processes in routine autoanalyzer interference tests (AU)

Evaluación de la electroforesis capilar como método de detección y medida de proteína de Bence Jones / Evaluation of capillary electrophoresis as a method for detecting and measuring Bence-Jones proteins

Introducción. Las proteínas de Bence Jones (PBJ) son cadenas ligeras libres monoclonales de inmunoglobulinas que aparecen en orina por producción excesiva de un clon de linfocitos B. Se han asociado a distintas enfermedades y tienen importante significado clínico. En este trabajo se ha evaluado la electroforesis capilar (EC) como método para su detección y medida. Material y métodos. Se analizaron 74 muestras de orina de 24h, para estudiar la PBJ mediante EC (previa desalinización de la muestra por ultrafiltración), inmunofijación y electroforesis de alta resolución en gel agarosa. Asimismo, se realizó un estudio de la imprecisión y del límite de detección de la EC. Resultados. La sensibilidad de la EC fue del 97,8% y la especificidad del 75,9%, sin diferencias entre muestras con baja o alta concentración de proteínas totales en orina. La agarosa presentó una sensibilidad y especificidad globales del 64,4% y 96,6%, respectivamente, siendo estos valores más altos en las muestras con concentraciones de proteínas totales en orina superiores a 150mg/L. La imprecisión de la EC para la medida de la PBJ osciló entre el 1,1% y el 4,5%. El límite de detección fue de 3mg/L para PBJ de clase kappa y de 1mg/L para PBJ de clase lambda. Conclusiones. En la detección de la PBJ, la EC presentó valores altos de sensibilidad, especificidad y reproducibilidad, y un límite de detección muy bajo. La EC requiere un pretratamiento de las muestras, pero permite la detección y medida de las PBJ de manera automatizada y reproducible, con una sensibilidad cercana a la inmunofijación (AU)

Introduction. Bence-Jones proteins (BJP) are monoclonal immunoglobulin free light chains that are detected in urine due to an over-production by a B-lymphocyte clone. BJP have been linked to various diseases, with significant clinical signance. In this work, capillary electrophoresis (CE) has been evaluated as a technique for the detection and quantification of BJP. Material and methods. Twenty four-hour urine samples from 74 patients were analyzed for BJP by CE (with a previous ultrafiltration step), immunofixation, and high resolution electrophoresis on agarose gel. Imprecision and the detection limit of CE were also studied. Results. Sensitivity and specificity of CE was 97.8% and 75.9%, respectively. No differences were found between samples with a high or low urinary total protein concentration. Sensitivity and specificity of agarose were 64.4% and 96.6%, respectively, but these values were higher in samples with a urinary total protein concentration above 150mg/L. Imprecision of CE in the quantification of BJP was 1.1-4.5%. Detection limit for kappa and lambda BJP were 3mg/L and 1mg/L, respectively. Conclusions. In the detection of BJP by CE, sensitivity, specificity and reproducibility were very high, whereas the detection limit was very low. CE requires the prior treatment of samples, but it provides an automated and reproducible method for detecting and measuring BJP, with a sensitivity very close to that of immunofixation (AU)

Falsos negativos en la detección de componentes monoclonales por electroforesis capilar / False negatives in the analysis of monoclonal components by capillary electrophoresis

La electroforesis capilar es una técnica rápida y automatizada que permite la detección de componentes monoclonales en suero con alta sensibilidad, estando ampliamente instaurada en los laboratorios clínicos. Se han descrito sin embargo, falsos positivos y negativos que plantean problemas a la hora de interpretar el trazado electroforético. Los falsos positivos son debidos fundamentalmente a sustancias exógenas no proteicas presentes en la muestra que absorben radiación en la región ultravioleta dando lugar a picos anómalos en el proteinograma. Los falsos negativos se deben en su mayoría a la baja concentración del componente monoclonal, aunque se han descrito también cuando se encuentran en alta concentración, debidos principalmente a las propiedades físico-químicas de la paraproteína que provocan una separación incorrecta de la misma. Presentamos una serie de casos con componentes monoclonales de tipo IgA e IgM, detectados inicialmente por electroforesis de acetato de celulosa y presentes en la muestra en alta concentración, en los que la electroforesis capilar tuvo problemas para su detección (AU)

Capillary electrophoresis is a fast, automated and highly sensitive technique for the detection of monoclonal components in serum that is being increasingly introduced in clinical laboratories. Nevertheless, false negative and positive results have been reported, and thus the electrophoretic pattern may be difficult to interpret. False positive results are chiefly due to exogenous substances other than proteins present in serum, which absorb at UV wavelengths and can produce an abnormal spike. False negative results are mainly due to very low concentrations of monoclonal components. However, high concentration monoclonal components may not be correctly detected due to the physicochemical properties of the paraproteins, which may cause anomalous separation. In this work, we study three cases with high concentration monoclonal components of the IgA and IgM classes. They were initially detected on cellulose acetate electrophoresis, but the capillary electrophoresis was not able to correctly detect them (AU)

Interferencias por contrastes yodados en la electroforesis capilar / Interference due to iodinated contrast media in capillary electrophoresis

Introducción. La administración de contrastes yodados puede interferir en la electroforesis capilar (EFC) de proteínas séricas. El objetivo fue realizar un estudio in vitro para confirmar la presencia de interferencias por Iomeron® en la EFC y otro in vivo en pacientes sometidos a coronariografías, estudiando la cinética de eliminación del contraste yodado. Material y métodos. Se preparó un pool de sueros libres de componente monoclonal (CM), con patrón electroforético anodino, añadiéndose Iomeron® hasta alcanzar una concentración de 5,4g/100ml. Partiendo de esta solución (A) se realizaron cuatro diluciones decrecientes (2,70g/100ml, 1,35g/100ml, 0,67g/100ml y 0,33g/100ml); y se procesaron por EFC para confirmar la interferencia y observar que disminuye proporcionalmente a su concentración. Material y métodos. Se extrajo sangre, pautadamente (5–10min, 1, 3, 5 y 8h postadministración del contraste) a pacientes sometidos a coronariografías. Se procesaron las muestras de plasma por EFC, y se realizó la inmunofijación (IF) de la obtenida entre los 5–10min para demostrar que la imagen electroforética no se correspondía con un CM. Resultados. La EFC reveló picos similares a los observados ante un CM en la fracción β, que desaparecieron en la dilución 0,33g/100ml en el estudio in vitro, y a las 8h postadministración del Iomeron® en el estudio in vivo (una paciente). Por otra parte, en la electroforesis de referencia del gel de agarosa empleado en la IF no se detectó imagen sugerente de CM. Conclusiones. Se demuestra que los picos observados correspondían a una interferencia producida por el Iomeron® en la fracción β de la EFC, no observada en la electroforesis en gel de agarosa (AU)

Introduction. The administration of iodinated contrast media may interfere with the capillary electrophoresis (CE) of serum proteins. The aim of the study was to perform an in vitro study to confirm the interference caused by lomeron® administration followed by an in vivo study in patients undergoing coronary angiographies, evaluating the kinetics of iodinated contrast elimination. Material and methods. A serum pool free from monoclonal component (MC) and with an anodyne electrophoretic pattern was prepared. lomeron® up to a concentration of 5.4g/100mL was added to this pool and afterwards, four decreasing dilutions were prepared (2.70g/100mL, 1.35g/100mL, 0.67g/100mL and 0.33g/100mL); all of them were processed by CE to confirm the interference and its decreasing effect as the concentration diminishes. Material and methods. Blood was drawn from patients undergoing coronary angiographies, at several time intervals (5–10min, 1, 3, 5 and 8h post-administration of contrast). Plasma samples were processed by CE, and immunofixation (IFx) of the first sample (5–10min) was performed in order to show that the electrophoretic image did not correspond to a MC. Results. In the in vitro study, CE revealed β fraction-MC peaks, which disappeared at the 0.33g/100mL dilution, and 8h after lomeron® administration in the in vivo study (one patient). On the other hand, no image suggestive of MC was detected on the reference agarose gel electrophoresis (AGE) used for the IFx. Conclusions. Peaks were observed that corresponded to an interference produced by lomeron® in the β fraction of CE, which was not found in AGE (AU)

Inmunosustracción en Fase Homogénea: un nuevo procedimiento para la tipificación de componentes monoclonales en suero / Homogeneous Phase Immunosubtraction: a new procedure for serum monoclonal proteins typing

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Revisión de los métodos de determinación de residuos de plaguicidas organofosforados en alimentos / Determination of organophosphorus pesticide residues in food. A review

Los plaguicidas organofosforados han sido ampliamente utilizados en la agricultura desde hace más de 50 años, proporcionado tratamientos económicos y efectivos para un gran número de cultivos. Sin embargo, algunos residuos de estos plaguicidas persisten en los alimentos y constituyen un riesgo importante para la salud humana. Los métodos de análisis de residuos deberán proporcionar una precisión y exactitud adecuadas siendo a la vez rápidos y simples de manera que proporcionen resultados fiables para el análisis de alimentos complejos en un tiempo razonable. Se presenta una revisión relativa a la determinación de plaguicidas organofosforados en alimentos donde se discuten las ventajas e inconvenientes de los métodos de extracción y determinación junto con los desarrollos más recientes en estos campos. Actualmente, la extracción con disolventes orgánicos y la extracción en fase sólida, como partes fundamentales de las tecnologías de preparación de la muestra, están en continua evolución. La cromatografia de gases utilizando detectores selectivos es la técnica más utilizada para la determinación de plaguicidas organofosforados debido a sus cualidades sobre otras técnicas-analíticas (AU)

Exclusión de paternidad con 14 STR en provincia de Buenos Aires. Argentina / Paternity eclusions with 14 STRs in Buenos Aires province

Sobre un total de 546 estudios de filiación analizados por electroforesis capilar utilizando los kits PowerPlex 16 o Identifiler, se registraron exclusiones en 103 casos (18,9 por ciento). De estos, se analizaron en forma detallada 69 informes. El número promedio de marcadores que excluyeron el vínculo fue de 8. En el 50 por ciento de los casos se detectaron de 6 a 8 exclusiones. En un único análisis el número de exclusiones fue de 3. El marcador que puso en evidencia el mayor número de incompatibilidades fue el FGA y el locus que resultó menos informativo el TPOX (AU)

Inclusión de paternidad con 14 STR en provincia de Buenos Aires, Argentina / Paternity inclusions with 14 STRs in Buenos Aires province

Se realizaron 546 estudios de filiación por electroforesis capilar utilizando los kits PowerPlex e Identifiler; con un promedio de 14 marcadores STR analizados. El 75,5 por ciento de los casos fueron inclusiones, el 18,9 por ciento fueron exclusiones y el 1,6 por ciento resultó no informativo. El 4 por ciento restante correspondió a impugnaciones y reconocimiento de paternidad (dos padres alegados).Sobre 211 inclusiones (madre, hijo, padre alegado) el 95,3 por ciento resultó con índice de paternidad superiores a 104. En 40 inclusiones hijo/padre o madre alegados el 80 por ciento de los índices estimados resultó mayor de 104. En 9 casos se consideró la presencia de una mutación en el hijo (AU)

Aplicaciones clínicas actuales de la electroforesis capilar / Clinical usefullness of capillary electrophoresis

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