Métodos diagnósticos de la tuberculosis / Diagnostic methods of tuberculosis

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Análisis de degradación de stents metálicos en modelo de cultivo "in vitro" con células epiteliales respiratorias y fibroblastos / Degradation analysis for metal stents in an in vitro cell culture model with respiratory epithelial cells and fibroblasts

Objetivo: investigar la posible degradación de stents metálicos tras co-cultivo con células respiratorias in vitro. Método: durante 21 días se han co-cultivado con la línea CRL-4011 (epitelial) y MRC-5 (fibroblastos) tres tipos de stents: Wallstent(R) (aleación de cobalto-cromo-níquel y molibdeno), Zilver PTX(R) y Zilver Flex(R) (nitinol, aleación de níquel-titanio, con y sin liberación de paclitaxel, respectivamente). Las mismas células sin stent sirvieron como control. Los sobrenadantes de los cultivos se recogieron los días 3, 9, 15 y 21, se alicuotaron y almacenaron a -800 C. Mediante espectrometría de masas (ICP/ MS) se investigaron los niveles de titanio, cromo, níquel, cobalto y molibdeno en los sobrenadantes, y también se han analizado los niveles de esos mismos elementos en el medio de cultivo original (antes de añadirlo a los cultivos celulares). Resultados: en todos los experimentos se encontraron mayores niveles de elementos metálicos en los sobrenadantes recogidos en el tercer día de cultivo, tanto de células epiteliales como de fibroblastos, con diferencias estadísticamente significativas (p<0,002). Los sobrenadantes de los cultivos de células epiteliales con Wallstent mostraron los niveles más altos de níquel y cobalto respecto a los controles (p = 0,001), y los niveles de titanio fueron más altos en los cultivos de Zilver Flex y PTX, constituidos por una aleación de níquel y titanio (p <0,001). Conclusiones: hemos detectado una rápida liberación en el sobrenadante de todos los cultivos de los elementos constitutivos de los tres stents que incluimos en los experimentos, y con niveles muy superiores a los cultivos controles

Objective: To investigate the possible degradation of metal stents after co-culture with respiratory cells in vitro. Methods: Three types of stents were co-cultured with the CRL-4011 line (epithelial) and the MRC-5 line (fibroblasts): Wallstent(R) (cobalt-chromium-nickelmolybdenum alloy), Zilver PTX(R) and Zilver Flex(R) (nitinol, nickel-titanium alloy, with and without paclitaxel release, respectively). The same stentless cells served as the control group. Culture supernatants were collected on days 3, 9, 15 and 21, aliquoted and stored at -80 ºC. The levels of titanium, chromium, nickel, cobalt and molybdenum in the supernatants were studied using inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS), and the levels of the same elements were also analyzed in the original culture medium (before adding them to the cell cultures). Results: In all experiments, higher levels of metal elements were found in the supernatants collected on the third day of culture, for both epithelial cells and fibroblasts, with statistically significant differences (p < 0.002). The supernatants of epithelial cell cultures with Wallstent showed the highest levels of nickel and cobalt in comparison to controls (p = 0.001), and titanium levels were higher in Zilver Flex and Zilver PTX cultures, consisting of a nickeltitanium alloy (p < 0.001). Conclusion: We have detected a rapid release in the supernatant of all the cultures of the constituent elements of the three stents that we included in the experiments, and with levels much higher than those of the control cultures

Proyecto URISCAM: Evaluación multicéntrica del citómetro UF-Series en el despistaje de infecciones urinarias / URISCAM project: multicenter evaluation of the UF-Series cytometer in the urinary tract infections screening

Introducción. El urocultivo, prueba de referencia para confirmar la existencia de Infección del tracto urinario (ITU), es la solicitud más demandada a Microbiología. Nuestro objetivo fue determinar la rentabilidad diagnóstica del citómetro UF-Series como método de cribado en la detección de ITU. Material y métodos. Se analizaron las orinas remitidas a los seis laboratorios de Microbiología participantes en un periodo de 5 días laborables. Se recogieron variables demográficas y de origen de la muestra, tipo de muestra (orina de media micción, sondaje, nefrostomía), recogida con/sin ácido bórico, lectura del citómetro (leucocituria, bacteriuria, morfología bacteriana y células epiteliales) y resultado del urocultivo. Para determinar la capacidad predictiva del citómetro se representaron las curvas ROC. Resultados. Se procesaron 2.468 muestras de pacientes con edad media de 53 años (ratio mujeres:hombres 2:1). El urocultivo detectó un 23% de orinas positivas. Las variables predictoras de ITU fueron: lectura morfológica de bacilos, bacteriuria ≥ 21 bacterias/μL, edad ≥ 65 años, procedencia de las muestras recogidas en urgencias y hospitalización, y presencia de conservante. Con el punto de corte de 21 bacterias, obtuvimos una sensibilidad del 93,3% y un VPN del 94,5%, lo que permitiría dejar de sembrar el 28,9% de las orinas recibidas con 1,6% de falsos negativos. Conclusiones. Consideramos que el UF-Series es una herramienta válida y precisa para la detección de ITU, por lo que podría utilizarse como cribado previo al urocultivo en la práctica clínica, reduciendo el número de orinas a sembrar en aproximadamente un 30% con una tasa baja de falsos negativos (AU)

Introduction. Urine culture, the gold standard to confirm the presence of urinary tract infection (UTI), is the most requested assay in the microbiology department. Our objective was to determine the diagnostic yield of the UF-Series cytometer as a screening method for UTI. Material and methods. All the urine samples sent to the six Microbiology Laboratories participating in a period of 5 working days were analyzed. We collected demographic variables, apart from those variables related to urine samples: source and sample type (midstream, catheterized or nephrostomy urines), collection with/without boric acid, cytometer parameters (leukocyturia, bacteriuria, bacteria morphology and epithelial cells) and urine culture results. ROC curves were plotted to determine predictive capacity of the cytometer. Results. A sample of 2,468 patients with average age of 53 years were processed (ratio women:men 2:1). Urine culture detected 23% of positive urine samples. The predictor variables of UTI were: morphology of bacilli, bacteriuria ≥21 bacteria/μL, age ≥65 years, samples collected in the emergency service and hospitalization and preserving conditions. With 21 bacteria/ μL as a cut-off point, we obtained a sensitivity of 93.3% and 94.5% negative predictive value, then reducing the samples to be cultured by 28.9% with 1.6% false negatives. Conclusions. We consider that the UF-Series is a valid and accurate tool for the detection of UTI. Therefore, it could be used as screening method in the clinical practice prior to the urine culture, reducing culture requirement by approximately 30%, with a low false negative rate (AU)

Time-to-positivity, type of culture media and oxidase test performed on positive blood culture vials to predict Pseudomonas aeruginosa in patients with Gram-negative bacilli bacteraemia / Tiempo de positividad, tipo de medio de cultivo y prueba de oxidasa realizada en viales de hemocultivo positivos para predecir Pseudomonas aeruginosa en pacientes con bacteriemia por bacilos gramnegativos

Introduction. The aim of this study was to determine the usefulness of oxidase test and time-to-positivity (TTP) in aerobic and anaerobic blood culture vials to detect the presence of Pseudomonas aeruginosa in patients with Gram-negative bacilli (GNB) bacteraemia. Material and methods. TTP was recorded for each aerobic and anaerobic blood culture vial of monomicrobial bacteraemia due to GNB. Oxidase test was performed in a pellet of the centrifuged content of the positive blood culture. An algorithm was developed in order to perform the oxidase test efficiently taking into account TTP and type of vial. Results. A total of 341 episodes of GNB bacteraemia were analysed. Sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of the oxidase test performed on positive vials with GNB to predict P. aeruginosa were 95%, 99%, 91%, and 99%, respectively. When growth was first or exclusively detected in anaerobic vials, P. aeruginosa was never identified hence the performance of the oxidase test could be avoided. When growth was only or first detected in aerobic vials, a TTP≥8h predicted P. aeruginosa in 37% or cases (63 of 169), therefore oxidase test is highly recommended. Conclusions. Oxidase test performed onto positive blood culture vials previously selected by TTP and type of vials is an easy and inexpensive way to predict P. aeruginosa. In most cases, this can lead to optimization of treatment in less than 24 hours (AU)

Introducción. El objetivo del estudio fue determinar la utilidad de la prueba de oxidasa y del tiempo de positividad del hemocultivo (TPH) para detectar la presencia de Pseudomonas aeruginosa en pacientes con bacteriemia por bacilos gramnegativos (BGN). Material y métodos. Se registró el TPH de cada vial aerobio y anaerobio en todos los episodios de bacteriemia monomicrobiana por BGN. La prueba de oxidasa se realizó sobre el contenido centrifugado del hemocultivo positivo. Se diseñó un algoritmo para optimizar la realización de la prueba de oxidasa según el TPH y el tipo de vial. Resultados. Se analizaron 341 episodios de bacteriemia por BGN. La sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo de la prueba de oxidasa para predecir P. aeruginosa fueron del 95%, 99%, 91% y 99%, respectivamente. Cuando el crecimiento se detectó primero o exclusivamente en viales anaerobios, nunca se identificó P. aeruginosa pudiendo evitar la realización de la prueba de oxidasa. Cuando el crecimiento se detectó antes o exclusivamente en viales aerobios un TPH ≥8h predijo la presencia de P. aeruginosa en el 37% de los casos (63 de 169), por lo que es recomendable la realización de la prueba de oxidasa. Conclusiones. La prueba de oxidasa realizada a viales de hemocultivos positivos previamente seleccionados por el TPH y el tipo de medio es una forma fácil y económica de predecir P. aeruginosa. En la mayoría de los casos, esto puede contribuir a la optimización del tratamiento antibiótico en menos de 24h (AU)

Comparison of the detection of periodontal pathogens in bacteraemia after tooth brushing by culture and molecular techniques

BACKGROUND: The prevalence and amounts of periodontal pathogens detected in bacteraemia samples after tooth brushing-induced by means of four diagnostic technique, three based on culture and one in a molecular-based technique, have been compared in this study. MATERIAL AND METHODS: Blood samples were collected from thirty-six subjects with different periodontal status (17 were healthy, 10 with gingivitis and 9 with periodontitis) at baseline and 2 minutes after tooth brushing. Each sample was analyzed by three culture-based methods [direct anaerobic culturing (DAC), hemo-culture (BACTEC), and lysis-centrifugation (LC)] and one molecular-based technique [quantitative polymerase chain reaction (qPCR)]. With culture any bacterial isolate was detected and quantified, while with qPCR only Porphyromonas gingivalis and Aggregatibacter actinomycetemcomitans were detected and quantified. Descriptive analyses, ANOVA and Chi-squared tests, were performed. RESULTS: Neither BACTEC nor qPCR detected any type of bacteria in the blood samples. Only LC (2.7%) and DAC (8.3%) detected bacteraemia, although not in the same patients. Fusobacterium nucleatum was the most frequently detected bacterial species. CONCLUSIONS: The disparity in the results when the same samples were analyzed with four different microbiological detection methods highlights the need for a proper validation of the methodology to detect periodontal pathogens in bacteraemia samples, mainly when the presence of periodontal pathogens in blood samples after tooth brushing was very seldom

¿Cuál es el valor real de los cultivos como herramienta diagnóstica en las onicomicosis? / Which is the role of cultures in the diagnosis of onychomycosis?

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Hemocultivos... ¿Qué te han contado y qué haces? / Blood cultures... What they tell you and what you do

Objetivo: Objetivo principal: Conocer la variabilidad práctica de los enfermeros/as (DUE's) del Hospital General Nuestra Señora del Prado, sobre la técnica para la extracción de hemocultivo. Objetivos específicos: Determinar las condiciones de asepsia/ esterilidad de la técnica. Establecer la utilización (desinfección, orden de llenado, volumen, cambio de aguja) de los frascos de hemocultivos. Método: Estudio descriptivo transversal realizado en el Hospital General Nuestra Señora del Prado. Ha consistido en la entrega de un cuestionario para autocumplimentación a los profesionales de enfermería, donde se han incluido variantes tanto cuantitativas como cualitativas. Resultados: Se han recogido 52,9% encuestas de los 363 DUE's del centro hospitalario, con una experiencia profesional media de 12,9 años [DE±7,9]. El 57,8% cree que no es necesario técnica estéril para el procedimiento. 94,7% utiliza un único antiséptico. 78,6% afirman que en la extracción de acceso venoso central desecha los primeros 10cc que extrae. Conclusiones: Consideramos un alto índice de respuesta, ya que es superior al 40% para cuestionarios autocumplimentados. Hemos observado que la mayoría de DUE's utilizan técnica aséptica y en los protocolos estudiados no existe un consenso entre la utilización de técnica estéril y aséptica. Este estudio nos revela que la mayoría de los DUE's utilizan un único antiséptico, sin embargo la mayoría de los protocolos recomiendan la utilización primero de alcohol y luego povidona yodada para la desinfección de la piel (AU)

Aims: Main aim: To ascertain differences in nurses at the Hospital General Nuestra Señora del Prado, in blood extraction and blood culture techniques. Specific aims: To determine the asepsis/sterility conditions of the technique; to establish the use (disinfection, filling order, volume, needle change) of the blood culture vials. Method: Transversal descriptive study made at the Hospital General Nuestra Señora del Prado. A self-completion questionnaire including quantitative and qualitative variants was delivered to nursing professionals. Results: 52.9% of the questionnaires were collected from the 363 DUE's at the hospital. Mena working experience was 12.9 years [DE±7,9]. 57,8% believe sterile technique for the procedure was not necessary. 94.7% use a single antiseptic. 78.6% stated that they discard the first 10 cc extracted from the central vein. Conclusions: We consider that the response is high, with over 40% of the questionnaires being completed. We observed that most DUE's use aseptic techniques and in the protocols studied there was no consensus about the use of sterilization and septic techniques. The study reveals that the majority of the DUE's use a single antiseptic, even though most protocols recommend the use of alcohol, followed by povidone.iodine to disinfect the skin (AU)

Micobacterias atípicas y su implicación en patología infecciosa pulmonar / Atypical mycobacteria and pulmonary involvement in infectious diseases

La incidencia de enfermedad infecciosa pulmonar (EIP) por micobacterias no tuberculosas (MNT) está aumentando de manera significativa en los últimos años. Las MNT son patógenos oportunistas ambientales y su creciente asociación con EIP se debe a factores como mayor exposición a estos microorganismos, aumento de sensibilidad de las técnicas diagnósticas e incremento de pacientes con factores predisponentes. En ocasiones resulta difícil diferenciar si un aislamiento de muestra respiratoria corresponde a una contaminación o está implicado en la patogenia de la enfermedad. Las guías de la American Thoracic Society/Infectious Diseases Society of America combinan criterios clínicos y microbiológicos para un correcto diagnóstico de EIP por MNT. Aunque no validados para todas, sí resaltan la importancia del diagnóstico de especie. La identificación mediante métodos convencionales es la pauta habitual en los laboratorios de microbiología clínica, si bien no siempre permite la diferenciación de especie, debiendo utilizarse en la actualidad nuevos métodos moleculares de hibridación con sondas, amplificación genómica y técnicas de secuenciación. La comunicación clínico-microbiólogo es conveniente para establecer la pauta diagnóstica más adecuada y poder decidir cuándo remitir el aislado al laboratorio de referencia. Aunque el CLSI ha publicado una actualización en las pautas de estudio de sensibilidad in vitro, persiste el debate acerca de su utilidad en el manejo de la EIP por MNT. El objetivo de esta revisión es describir las MNT más relevantes en patología pulmonar, los factores predisponentes a esta infección, su diagnóstico mediante nuevas alternativas y la correlación in vitro con la respuesta del paciente al tratamiento (AU)

Nontuberculous mycobacteria (NTM) are increasingly associated with infectious pulmonary disease. NTM are ubiquitous environmental pathogens with high isolation rates worldwide. The greater frequency of NTM associated with pulmonary diseases is probably due to a combination of increased exposure, improved diagnostic methods and an increase in the prevalence of risk factors predisposing individuals to infection. Difficulty may arise in determining whether an isolate from a respiratory sample is in fact a contaminant or a pathogenic organism. The ATS/IDSA guidelines highlight the importance of following microbiological and clinical criteria in making a diagnosis of NTM lung infection. These criteria may not be useful for all NTM and species-level identification is strongly recommended. Mycobacteria identification by conventional methods has been the standard in most clinical microbiology laboratories. However, conventional testing alone does not allow identification of many NTM. Newer, rapid molecular methods such as commercially available nucleic acid probes, genomic amplification and DNA sequence analysis should be used. Communication between the clinician and the laboratorian is essential to decide whether an isolate could be sent to a reference laboratory to determine the best method for species identification. Although the CLSI has recently published an approved standard for NTM susceptibility testing, there is ongoing debate about the role of in vitro susceptibility for managing patients with NTM disease. The goal of this review is to describe the mycobacteria involved in lung disease, the factors that predispose to this infection, its diagnosis with alternative procedures and the correlation between in vitro and in vivo treatment response (AU)

Optimización del cultivo de líquido ascítico en el contexto clínico de la peritonitis bacteriana espontánea / Optimization of ascitic fluid culture in spontaneous bacterial peritonitis

Introducción y objetivosLa peritonitis bacteriana espontánea (PBE) es la infección del líquido ascítico (LA) en ausencia de foco infeccioso intraperitoneal en pacientes con enfermedad hepática e hipertensión portal. El objetivo del estudio fue la evaluación de la rentabilidad de los cultivos microbiológicos tras la optimización de la sistemática en su recogida en la práctica clínica habitual.MétodosSe analizaron 2 series, la primera retrospectiva con datos de 156 episodios de PBE consecutivos de enero de 2003 a diciembre de 2005 (grupo R), y la segunda con un grupo prospectivo desde octubre de 2007 a octubre de 2008, constituido por 79 episodios, en los que se optimizó el protocolo diagnóstico de PBE (grupo P), con la recogida sistemática de 10ml de LA por bote de hemocultivo.ResultadosLas características basales epidemiológicas y clínicas entre los episodios fueron similares, salvo mayor incidencia de insuficiencia renal, ascitis a tensión e íleo adinámico, y en la etiología de la hepatopatía, más frecuente de origen etílico, en el grupo P. Se consiguió aislamiento microbiológico en LA en el 12,2% de los episodios del grupo R, frente al 53,2% del grupo P (p=0,001) y en hemocultivos en el 8,5 y 26,6% (p=0,001), respectivamente. Se obtuvo aislamiento microbiológico en el 65,8% de los episodios del grupo P frente al 19,2% del grupo R (OR 8; IC 95%: 4,4-14,9; p=0,001). El microorganismo más frecuentemente aislado en la en el grupo P fue Escherichia coli (42,9%).ConclusionesLa optimización en la realización de la sistemática diagnóstica en la práctica asistencial del paciente cirrótico con ascitis aumenta su rendimiento microbiológico diagnóstico (AU)

Introduction and aimsSpontaneous bacterial peritonitis (SBP) is ascitic fluid (AF) infection in the absence of an intraperitoneal source of infection in patients with liver disease and portal hypertension. The aim of this study was to evaluate the yield of microbiological cultures to optimize their collection and systematic implementation in routine clinical practice.MethodsWe analyzed two cohorts: the first consisted of retrospective data from the clinical records of 156 consecutive episodes of SBP from January 2003 to December 2005 (group R), and the second was composed of data collected prospectively from October 2007 to October 2008, consisting of 79 episodes (group P), with systematic inoculation of 10 cc of AF in each blood culture bottle.ResultsNo significant differences were demonstrated in baseline epidemiological or clinical characteristics among episodes, except the more frequent presence of alcoholic liver disease and the incidence of tense ascites, paralytic ileus and kidney failure at diagnosis in group P. Microbiological isolation in AF was achieved in 12.2% of the episodes in group R compared with 53.2% in group P (p=0.001) and 8.5 and 26.6% (p=0.001) in blood culture, respectively. Microbiological isolation was achieved in 65.8% of episodes in group P versus 19.2% in group R (OR 8; 95% CI: 4.4-14.9; p=0.001). The most frequently isolated organism in AF in group P was Escherichia coli (42.9%).ConclusionsOptimizing the diagnostic procedure in cirrhotic patients with ascites significantly increases diagnostic microbiologic performance(AU)

Estudio comparativo de inmunofluorescencia directa, enzimoinmunoanálisis y cultivo para el diagnóstico de las infecciones por metapneumovirus humano / A comparative study of direct immunofluorescence, enzyme immunoassay, and culture for diagnosing metapneumovirus infection

Introducción: El metapneumovirus humano (hMPV) es el causante de un número importante de infecciones en pediatría, entre un 14 y un 22% de las infecciones respiratorias víricas con diagnóstico etiológico establecido. Se presenta un estudio comparativo entre una técnica de inmunofluorescencia directa (IFD), una de enzimoinmunoanálisis (EIA) y el cultivo según la técnica de shell vial. Métodos: Se procesaron 124 aspirados nasofaríngeos pertenecientes a 108 lactantes con infecciones respiratorias de vías bajas. Durante su recepción se los procesó para la IFD, para lo que se utilizó un anticuerpo anti-hMPV comercial (Diagnostic Hybrids Inc.) y se sembró en la línea celular LLC-MK2 (sólo 76 muestras) para fijarse y teñirse a las 48h con el mismo suero citado. El resto de la muestra se procesó según la rutina diagnóstica habitual y se congeló en alícuotas para posterior estudio con EIA (Biotrin®).Resultados: Veinte muestras (16,12%) fueron positivas al hMPV mediante la IFD, 27 muestras (21,77%) fueron positivas mediante el EIA y 15 muestras (19,73%) fueron positivas mediante cultivo. La IFD y el EIA coincidieron en un 92,73% de las 124 muestras. Al considerar las 3 pruebas (76 muestras) se consiguió una concordancia del 90,78%. Al considerar sólo las primeras muestras de cada enfermo (fase aguda), la sensibilidad, los valores predictivos y el índice Kappa de la IFD mejoraron y se acercaron a los obtenidos con el EIA. Conclusión: Ambas pruebas de detección de antígeno son útiles en el diagnóstico de la infección aguda por hMPV en aquellos hospitales pediátricos que no dispongan de las técnicas de amplificación para este virus y necesiten un diagnóstico etiológico con urgencia, con la salvedad de que la IFD está indicada sólo en la fase inicial de la infección (AU)

Introduction: Human metapneumovirus (hMPV) is an important cause of lower respiratory tract infections in children, accounting for 14% to 24% of all viral respiratory infections with an etiological diagnosis. This study compares a direct fluorescent antibody (DFA) test, enzyme immunoassay (EIA), and shell-vial culture for diagnosing acute bronchiolitis in infants.Methods: A total of 124 nasopharyngeal aspirates from 108 infants with lower respiratory tract infection were analyzed. Incoming samples were processed for DFA using a commercial anti-hMPV antibody (Diagnostic Hybrids Inc.®); 76 were inoculated in an LLC-MK2 cell line, and after an incubation period of 48h, were stained and fixed with the aforementioned serum. The remaining sample was processed according to the routine diagnostic procedure and aliquots were frozen for EIA analysis (Biotrin®).Results: Twenty (16.12%) samples were positive for hMPV by DFA, 27 (21.77%) by EIA, and 15 (19.73%) by culture. DFA and EIA results were consistent in 92.73% of the 124 samples. Considering the 3 techniques, the same results were obtained in 90.78% of the 76 specimens. Considering only the first specimen from each patient (acute phase), the sensitivity, predictive values, and Kappa index for DFA improved and were very close to the EIA values.Conclusion: DFA and EIA are useful for antigen detection in the diagnosis of acute hMPV infection, particularly in pediatric hospitals that do not have amplification techniques for this virus, and when a rapid diagnosis is required. It should be kept in mind that DFA analysis is a suitable test for this purpose only in the acute phase of the infection (AU)

Modelos animales de enfermedad cardiovascular / Animal models of cardiovascular disease

La utilización de modelos animales para el estudio de enfermedades cardiovasculares ha contribuido sustancialmente al progreso en el conocimiento de su patogenia y ha permitido el desarrollo de técnicas diagnósticas y la validación de procedimientos preventivos y terapéuticos, tanto farmacológicos como intervencionistas. Las diferencias existentes entre la enfermedad humana y la inducida experimentalmente, tanto en los mecanismos de regulación genética como en los factores que determinan la función cardiaca y vascular, son sus principales limitaciones. Entre los modelos y las preparaciones empleados en la investigación cardiovascular, se encuentran los basados en la utilización de células aisladas y tejidos y estructuras en baños de órganos. El sistema de Langendorff permite el estudio directo del corazón aislado y perfundido aplicando diversas técnicas tanto sin someter al corazón a un trabajo como con una carga controlada. En mamíferos pequeños existen varios tipos de modelos de alteraciones cardiovasculares que ocurren por mutaciones genéticas espontáneas o son inducidos mediante modificaciones específicas del genoma. Entre los procedimientos utilizados se encuentran los basados en la transferencia genética con provocación controlada de mutaciones que dan lugar a la expresión de alteraciones asociadas al desarrollo de gran número de enfermedades cardiovasculares. Animales de mayor tamaño se emplean en modelos en los que se considera relevante que estén presentes los mecanismos de regulación y homeostasis del organismo (AU)

The use of animal models to study cardiovascular disease has made a substantial contribution to increasing our understanding of disease pathogenesis, has led to the development of diagnostic techniques, and has made it possible to verify the effectiveness of different preventative and therapeutic approaches, whether pharmacological or interventional. The main limitations stem from differences between human and experimentally induced pathology, in terms of both genetic regulatory mechanisms and factors that influence cardiovascular function. The experimental models and preparations used in cardiovascular research include those based on isolated cells or tissues or structures immersed in organ baths. The Langendorff system enables isolated perfused hearts to be studied directly under conditions of either no load or controlled loading. In small mammals, a number of models have been developed of cardiovascular conditions that result from spontaneous genetic mutations or, alternatively, that may be induced by specific genomic modification. One of the techniques employed is gene transfer, which can involve the controlled induction of mutations that result in the expression of abnormalities associated with the development of a broad range of different types of cardiovascular disease. Larger animals are used in experimental models in which it is important that physiological regulatory and homeostatic mechanisms are present (AU)

Diagn¨®stico de las faringitis estreptoc¨®cicas / Diagnosis of streptococcal pharyngitides

La faringoamigdalitis es una infecci¨®n muy frecuente ennuestro medio. Su etiolog¨ªa es m¨²ltiple, especialmenteviral. El diagn¨®stico etiol¨®gico ¨²nicamente tiene inter¨¦s enlas faringoamigadalitis causadas por Streptococcuspyogenes o estreptococo betahemol¨ªtico del grupo A,puesto que se deben tratar con antibi¨®ticos para evitar lascomplicaciones, especialmente la fiebre reum¨¢tica.El diagn¨®stico se ha basado cl¨¢sicamente en el aislamientode la bacteria a partir del exudado far¨ªngeo. No hay unm¨¦todo estandarizado para la realizaci¨®n de estos cultivosen cuanto al medio de aislamiento, la atm¨®sfera deincubaci¨®n o las pruebas m¨ªnimas de identificaci¨®n que sedeben realizar. Actualmente, en el mercado se dispone dem¨²ltiples reactivos que, por diferentes t¨¦cnicasinmunol¨®gicas, permiten la detecci¨®n del ant¨ªgenodirectamente en la muestra cl¨ªnica. La mayor¨ªa de ¨¦staspresenta buenos valores de sensibilidad y de especificidad,aportando la ventaja de un resultado r¨¢pido,especialmente si se realiza en la misma consulta m¨¦dica.Hay diferentes protocolos o estrategias para la atenci¨®n delos pacientes con faringoamigadalitis. En cualquier caso,cada centro debe valorar el rendimiento de la t¨¦cnica dedetecci¨®n de ant¨ªgeno que se decida implementar, puestoque los resultados var¨ªan en funci¨®n de las indicaciones yel cuidado en la obtenci¨®n de la muestra(AU)

Tonsillitis and pharyngitis are highly frequent infections inSpain with multiple causes, especially viruses. Etiologic diagnosis of pharyngitis is only important in Streptococcuspyogenes or group A ¦Â-hemolytic streptococcal infectionsbecause antibiotic therapy is mandatory to prevent furthercomplications, especially acute rheumatic fever.Diagnosis has classically been based on bacterial isolationfrom throat swabs. There are no standardized methods forthis culture in terms of culture medium, incubationatmosphere or the identification tests to be performed.Currently, a large number of commercial reagents areavailable, which, through different immunologicaltechniques, allow direct antigen detection in the clinicalsample. Most of these products show good sensitivity andspecificity values, with the added advantage of providing arapid result, especially if they are performed at points ofcare. Many guidelines for the management of patientswith pharyngitis and tonsillitis are available. Nevertheless,as antigen detection results can vary in each centeraccording to the indications and the care taken in sampleextraction, the method chosen should be evaluated before implementation(AU)

Celulitis de pene tras sexo oral / Penile cellulitis after oral sex

Objetivo: En la actualidad la prevalencia de relaciones sexuales en las que se incluye sexo oral es elevada, esto conlleva una serie de peculiaridades en las infecciones, balanopostitis y celulitis, que pueden producirse en relación con estas prácticas. Métodos: Aportamos 2 nuevos casos de celulitis peneana tratados en el Servicio de Urología de nuestro hospital. Discusión: Revisamos las indicaciones de profilaxis, tratamiento médico y quirúrgico referidas en la literatura y practicadas en nuestros pacientes. Conclusiones: La anamnesis ante balanopostitis y celulitis peneanas, debe incluir referencias explícitas a la práctica de sexo oral. La precocidad en el tratamiento, tanto médico como quirúrgico, influye favorablemente en la evolución de las lesiones (AU)

Objective: Nowadays, there is the high prevalence of sexual intercourse including oral sex, which implies some peculiarities in the infections, balanitis and cellulitis they may produce. Methods: We report two new cases of penile cellulitis treated in the urology department in our hospital. Discussion: We review the indications of prophylaxis, and the medical and surgical treatment both referred in the literature and carried out in our patients. Conclusions: When dealing with balanitis and penile cellulitis, the history should include explicit references to the practice of oral sex. Early medical or surgical treatment has a favourable influence on the evolution of the lesions (AU)

Protocols to differentiate embryonic stem cells into insulin-producing cells

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Embryonic stem cells represent an interesting alternative to treat diabetesdue to their two main properties: self-renewal by symmetricdivisions, and the potential for cell differentiation into insulin-expressingcells under certain culture conditions. Achieving the latter impliesthe modification of the culture medium adding specific growth factorsand/or reprogramming the cells by transfecting specific DNAconstructs. Several laboratories have used one or a combination ofsuch strategies in order to obtain insulin-positive cells with differentdegrees of success. The main obstacles posed in the different protocolsconcern the amounts of intracellular insulin stored and secretedin response to different stimuli, the correct processing of thehormone, the risk of forming teratomas and the immune rejectiononce cells are transplanted. Promising results have been obtainedfrom protocols which try to recapitulate the pancreas ontogeny in theculture dish. To this end, it is instrumental to understand the embryonicdevelopment process of the human pancreas from definitiveendoderm to the adult, as well as its molecular markers and thefunctional traits of the obtained cells in order to achieve a transplantableproduct to cure diabetes. This manuscript explores publishedprotocols following this objective, analyzing the main features thatcould contribute to elaborate a more definitive strategy. The finalprotocol must be universal, easily transferable to the clinical practiceand, most importantly, liberate patients from the insulin injectionswithout the development of secondary complications

Técnica de cultivo de mioblastos autólogos humanos para transplante clínico / Technique of culture of human autologous mioblasts for clinic transplant

Introducción: El trasplante celular para reparar o regenerar el miocardio dañado es un nuevo objetivo en la enfermedad cardiovascular. Los mioblastos esqueléticos autólogos son las células más estudiadas y constituyen la primera elección para la reparación cardíaca. Objetivos: Puesta a punto de la técnica de cardiomioplastia celular en muestras obtenidas de donantes multiorgánicos y llevar a cabo esta técnica junto con la revascularización en dos pacientes. Material y métodos: Se han obtenido 15 biopsias de músculo vasto lateral de donantes multiorgánicos y de dos pacientes con infarto de miocardio no reciente. Después de tres semanas de cultivo, se evaluó en todas las muestras el porcentaje de mioblastos con los anticuerpos CD56, desmin y miogenin. Los dos pacientes fueron sometidos a cirugía de revascularización e inyección intramiocárdica de mioblastos esqueléticos autólogos obtenidos tras cultivo con suero autólogo. Resultados: Se demostró la presencia de un gran número de células positivas con los marcadores desmina y miogenin. El implante de mioblastos esqueléticos autólogos no se asoció con el desarrollo de efectos adversos. Conclusiones: En pacientes con un infarto de miocardio no reciente, el tratamiento con mioblastos en conjunción con bypass arteria coronaria es seguro y fácil y es relativamente fácil obtener mioblastos de tejido muscular para trasplantar (AU)

Introduction: Cellular transplant to repair or regenerate damaged myocardium is a new objective in cardiovascular disease. The autologous skeletal myoblasts are the most studied cells and constitute the first election for cardiac repair. Objectives: fine adjustment of the cellular cardiomyoplasty technique with revascularization in two patients. Material and methods: 15 biopsies were obtained from multiorganic donors and from two patients with no recent infarct. After three weeks of culture, the percentage of myoblasts were evaluated using monoclonal antibodies CD56, desmin and myogenin. The two patients were subjected to revascularization surgery and intramyocardic injection of autologous skeletic myoblasts obtained after culture with autologous serum. Results: The presence of a great number of positive cells with desmin and myogenin markers was shown. The implantation of autologous skeletal myoblasts was not associated with the development of adverse effects. Conclusions: In patients without a recent myocardium infarct, the treatment with myoblasts together with coronary artery bypass is sure and easy and it is straightforward to obtain myoblasts from muscle tissue for transplant (AU)

Repigmentación del pelo canoso tras tratamiento con hormona tiroidea / Repigmentation of gray hair after thyroid hormone treatment

Introducción y objetivos. Basándonos en dos pacientes con oscurecimiento de sus canas que sufrieron una elevación exógena de T3, debida a un coma mixedematoso y a una descompensación de su enfermedad, sugerimos que la hormona tiroidea puede tener un efecto en la homeostasis del folículo piloso. Para ello se utilizan un modelo animal de ratón y un modelo de cultivo in vitro de unidades foliculares, con el objeto de valorar la influencia de la hormona tiroidea en el ciclo capilar. Métodos. Sobre un modelo de ratón estandarizado para el estudio del ciclo capilar (C57BL/6), aplicamos tópicamente T3 (0,5 g) disuelta en etanol una vez al día durante 10 días en el dorso de ratones depilados en fase de telogen. Cultivamos in vitro unidades foliculares, obtenidas de cirugía capilar, con diferentes concentraciones de T3. Resultados. In vivo, al quinto día del tratamiento el 100 % de los ratones estudiados entraron en anagen, mientras que en el grupo control se apreció un inicio del anagen el día 9, que no se completó en todos los ratones hasta el día 15. In vitro, las unidades foliculares tratadas con 100 nM de T3 crecieron de forma significativa respecto al grupo control. Conclusiones. Estos datos sugieren que los folículos en telogen pueden estimularse para entrar en anagen tras la aplicación tópica de T3. Esta hormona puede revertir el encanecimiento del pelo terminal. En cultivo, la administración de T3 estimula el crecimiento del tallo piloso. Los melanocitos foliculares podrían ser la célula diana para estas acciones

Background and objectives. Darkening of gray and white hairs occurred in 2 patients with increased exogenous triiodothyronine (T3) due to treatment of myxedema coma in one case and iatrogenic hyperthyroidism in the other. We hypothesized that thyroid hormone may affect the homeostasis of hair follicles. To test our hypothesis and investigate the influence of thyroid hormone on the hair cycle, we used an in vivo murine model and an in vitro model based on culture of follicular units. Methods.We used the standard C57BL/6 murine model of the hair cycle. T3 (0.5 g) dissolved in ethanol was applied topically once daily for 10 days to a depilated area in the telogen phase on the backs of the mice. Follicular units, obtained from hair transplant interventions, were cultured in vitro with different concentrations of T3. Results. On day 5, all T3-treated mice entered the anagen phase, whereas the anagen phase started spontaneously in control mice on day 9, and not until day 15 had all controls entered this phase. In the in vitro experiment, follicular units treated with 100 nmol/L T3 grew significantly larger compared to the control group. Conclusions. These data suggest that follicles in the telogen phase can be induced to enter the anagen phase by the topical application of T3. This thyroid hormone may reverse graying of the terminal hair. In the in vitro experiments, T3 stimulated hair shaft growth. Follicular melanocytes may be the target cell for these actions

Estudio del oligodendroglioma y sus variantes por medio del cultivo de tejidos / Oligodendroglioma and its variants study by tissue culture

Junto a las formas clasicas, el oligodendroglioma incluye formas inusuales con aumento de la actividad proliferativa, alteraciones vasculares, tumores mixtos (oligodendroastrocitoma) y tumores con celulas eosinófilas. El estudio con cultivo de tejidos nos ha permitido: a) confirmar el patron de crecimiento in vitro, b) la expresión de GFAP en todos los casos cultivados, c) el carácter primario de la transformación eosinófila citoplásmica. A la luz de este estudio, puede concluirse que: a) el patrón in vitro del oligodendroglioma es característico y permite identificar este tipo tumoral sea cual sea el subtipo, b) la expresión de GFAP es constante en todas las formas de oligodendroglioma, c) la tendencia a la maduración astrocítica parace ser una capacidad propia del oligodendrocito tumoral (AU)

¿Qué puede ofrecer actualmente el laboratorio de micobacterias en la formación profesional del microbiólogo clínico? / What can the microbiology laboratory currently offer in the professional training of clinical microbiologists?

En el presente artículo se constata la escasa formación en micobacteriología clínica dentro del vigente programa de la especialidad y las razones que justifican la necesidad de una formación más prolongada, específica y reglada de los residentes en este campo. El laboratorio actual de micobacterias constituye un excelente modelo para estudiar el impacto y realizar un análisis crítico del valor y las limitaciones de las nuevas técnicas diagnósticas. Los laboratorios de microbiología pueden ofrecer hoy en día prestaciones muy diversas para el diagnóstico y control de las infecciones micobacterianas. El laboratorio actual de micobacterias es inconcebible sin una sólida colaboración de su personal con los clínicos y los epidemiólogos. Sólo en este escenario de colaboración donde la tecnología esté abierta y sea receptiva a la resolución de problemas clínicos pueden formarse nuestros especialistas en el futuro. Probablemente no hay ninguna otra área en los laboratorios clínicos actuales donde las competencias técnicas y profesionales de los microbiólogos estén tan bien definidas y delimitadas

In this chapter it is pointed out the scarce information on clinical mycobacteriology included in the current program of the Clinical Microbiology specialty and the needs of a more prolonged and specific formation in this field. The current Mycobacteriology laboratory is an excellent model to evaluate the impact, value and limitations of the new diagnostic techniques. The laboratory of Mycobacterology can currently offer excellent tools for the diagnosis and control of the infections caused by mycobacterias. The current laboratory is inconceivable without a close collaboration among microbiologists, clinicians and epidemiologists. Only in this collaborative scenario where the technology is open and receptive to resolution of xlinical problems we will be able to educate our spaecialists in the future. Probably there is not any other area in the clinical laboratory where the technical and professional competences of the microbiologists are so well defined and limited

¿Es el fibrosarcoma primitivo cerebralla fase final de la evolucióndel gliosarcoma? / Is primitive brain fibrosarcoma the end stage in the evolution of gliosarcoma?

El gliosarcoma es un tumor cerebral poco frecuente que viene definido por una proliferación bifásica en la que toman parte: a) una fase gliomatosa, habitualmente un glioblastoma, con expresión de GFAP y negatividad para la Vimentina; b) una fase conjuntiva con expresión de Vimentina y negatividad a la GFAP. Por su parte, el fibrosarcoma cerebral primitivo es un tumor muy infrecuente, que se define por una proliferación de células fusiformes, capaces de expresar Vimentina, incapaces de expresar GFAP y que producen abundantes fibras reticulares y, ocasionalmente, colágenas. En nuestro medio hemos estudiado dos casos de gliosarcoma por medio del cultivo de tejidos y por medio del cultivo orgánico. En ambos casos, el cultivo de tejidos demostró la población dual, en forma de colonias celulares diferentes, aun dentro del mismo cultivo. Por su parte, el cultivo orgánico demostró el crecimiento doble en las primeras fases del crecimiento, en tanto que el cabo del tiempo, la fase conjuntiva va predominando sobre la glial, hasta que esta última desaparece. En consecuencia, se plantea la posibilidad de que el fibrosarcoma primitivo cerebral represente la fase final de un gliosarcoma en el que el componente conjuntivo ha hecho desaparecer el componente glial inicial (AU)

Referencias anatómicas y límites quirúrgicos en el abordaje suboccipital transmeatal del neurinoma acústico / Anatomical landmarks and surgical limits in the suboccipital transmeatal approach to the acoustic neuroma

Introducción. En la extirpación completa del neurinoma acústico por vía suboccipital retrosigmoidea, es obligada la apertura de la pared posterior del conducto auditivo interno (CAI). Por lo tanto, uno de los pasos clave en el abordaje quirúrgico transmeatal es el fresado del CAL Sin embargo, no existen claras referencias anatómicas intraoperatorias para la identificación de estructuras tales como los canales semicirculares, el golfo de la vena yugular o las celdas aéreas. Las variaciones anatómicas individuales y las producidas por el propio tumor, obligan en cada caso a una correcta planificación preoperatoria, si queremos evitar complicaciones secundarias a su lesión yatrógena (cofosis, licuorrea, hemorragia y embolismo aéreo).Objetivo: Se expone la experiencia del primer autor firmante (EU) en el fresado del CAI con especial referencia a la topografía anatómica y límites quirúrgicos en el abordaje suboccipital retrosigmoideo a la porción intracanalicular del neurinoma acústico. Material y métodos. Este trabajo está basado en datos anatómicos obtenidos del fresado de huesos temporales normales extraídos de material autópsico junto a nuestra experiencia sobre 20 pacientes intervenidos de neurinoma acústico siguiendo la técnica y protocolo de Samii. Resultados. No hemos intervenido por esta vía ningún tumor puramente intracanalicular. 2 casos han sido de grado II (hasta 20mm de diámetro), 12 de grado III y 6 casos de grado IV En ningún caso se ha llegado a fresar tanto como para visualizar el fondo del CAI, lo que se confirmó con el TAC postoperatorio; a pesar de ello en 17 casos se ha considerado la extirpación como completa. No ha existido mortalidad y no hemos tenido complicaciones mayores atribuidas al fresado del CAI, como licuorrea o embolismo aéreo. No podemos asegurar que la hipoacusia o la cofosis postoperatoria, que han sido la regla excepto en un caso de grado II, haya sido causada por lesión nerviosa, laberíntica o isquémica. Conclusiones. En nuestro material no ha sido posible la exposición completa del fondo del CAI por vía retrosigmoidea sin lesionar alguna estructura laberíntica. Las zonas de mayor riesgo de complicaciones secundarias al fresado son la pared inferior y el fondo del CAL La extensión medial de la craniectomía suboccipital facilita al fresado y a la exposición tumoral intrameatal. No existen referencias intraoperatorias para localizar las estructuras petrosas durante el fresado del CAI excepto la propia experiencia del cirujano (AU)