Bajos niveles de inhibidores de la coagulación: un factor de alto riesgo trombogénico en pacientes talasémicos / Low levels of coagulation inhibitors: a high-risk thrombotic factor in thalassemic patients

ANTECEDENTES Y OBJETIVO: La β-talasemia mayor (β-TM) se define como una enfermedad hereditaria relacionada con las células rojas sanguíneas. En los pacientes adultos, los eventos trombóticos se asocian con la talasemia. Así, el objetivo de esta investigación fue examinar algunos de los parámetros hemostáticos, incluyendo la antitrombina III (AT-III), la proteína C (PRC) y la proteína S (PRS), en pacientes β-TM. MÉTODOS: Se seleccionó a 30pacientes β-TM remitidos para un ingreso de seguimiento de rutina en la clínica de talasemia del Centro Especial de Enfermedades Kerman, junto con otros 30 sujetos sanos. Tras el registro y 3 semanas después de la última transfusión, se recogieron especímenes de sangre periférica, y se midió la concentración plasmática de AT-III, PRC y PRS. RESULTADOS: Hemos observado que la concentración de inhibidores naturales de la coagulación (PRC y PRS) estaba ligeramente disminuida en los pacientes β-TM (p < 0,05), mientras que el nivel plasmático de AT-III no era muy diferente en los pacientes β-TM cuando se los comparaba con los sujetos sanos. CONCLUSIÓN: Conforme a los hallazgos obtenidos en el presente trabajo, podríamos considerar los cambios significativos en las PRC, PRS y AT-III, que se observan en pacientes β-TM multitransfundidos, como factores de riesgo críticos para el desarrollo de eventos tromboembólicos futuros a lo largo de su vida

BACKGROUND AND AIM: The β-thalassemia major (β-TM) is defined as a hereditary red blood cell-related disease. Thrombotic events are associated with thalassemia in adult patients. Thus, the present investigation was aimed to examine some hemostatic parameters, including anti thrombin-III (AT-III), protein-C (PRC) and protein-S (PRS) in β-TM patients. METHODS: Thirty B-TM patients who referred for routine follow-up admission to the thalassemia clinic of Kerman Special Disease Center alongside with 30 healthy subjects were selected and enrolled in the present study. Further registration, the peripheral blood specimens were collected after 3 weeks of last transfusion and then the plasma concentrations of AT-III, PRC and PRS were measured in them. RESULTS: We have observed that the concentrations of natural coagulation inhibitors (PRC and PRS) were significantly attenuated in β-TM patients (P<0.05), while the plasma level of AT-III was not remarkably differed in β-TM patients in compare to healthy subjects. CONCLUSION: According to the findings of present work, significant changes in the PRC, PRS and AT-III which could be observed in multi transfused β-TM patients may attribute as critical risk factors for the development of upcoming thromboembolic events in their future life

Tromboelastometría: ¿determinación centralizada en el laboratorio o prueba a la cabecera del paciente? Experiencia en nuestro hospital como test centralizado / Thromboelastometry: centralized test in the laboratory or point of care testing? Experience in our hospital as centralized test

Introducción. La tromboelastografía es la herramienta que permite medir in vitro las propiedades viscoelásticas de la sangre de una manera dinámica y global, integrando las diferentes fases de la coagulación y fibrinólisis. Existen en el mercado dos dispositivos semiautomatizados: el tromboelastograma y el tromboelastómetro rotacional. Material y métodos. Se ha realizado un estudio observacional descriptivo retrospectivo de las solicitudes de tromboelastometría en nuestro hospital desde la implementación del protocolo con la técnica centralizada desde el laboratorio. Se ha evaluado el número de solicitudes, los servicios peticionarios y el grado de cumplimentación de la petición al laboratorio. Así mismo, hemos realizado una encuesta de satisfacción dirigida al personal facultativo del Servicio de Anestesia y Reanimación. El periodo estudiado fue de julio del 2012 a enero del 2016. Resultados. Desde el establecimiento del protocolo hasta la actualidad se ha producido un incremento y una consolidación de la técnica de tromboelastometría en nuestro hospital. La mayor parte de las solicitudes proceden de los Servicios de Anestesia y Reanimación (36,5%) y Angiología y Cirugía Cardiovascular (30,1%). En cuanto a la encuesta de satisfacción, los resultados obtenidos muestran una aceptación positiva por parte de los facultativos tanto con el protocolo como con los tiempos de respuesta obtenidos. Conclusiones. Estableciendo un protocolo elaborado y consensuado entre el laboratorio y los servicios solicitantes, podemos garantizar el estricto cumplimiento del mismo y que los tiempos de respuesta difieran poco de los obtenidos cuando esta técnica se realiza en la cabecera del paciente, permitiendo así dar un servicio global a todo el hospital (AU)

Introduction. Thromboelastography is the tool that allows in vitro measurement of the viscoelastic properties of the blood in a dynamic and comprehensive way, integrating the different phases of coagulation and fibrinolysis. There are two semi-automated devices on the market: the thromboelastogram and the rotational thromboelastometry analyzer. Material and methods. We have conducted a descriptive observatory retrospective study of the thromboelastography requests in our hospital after the implementation of the protocol. It has been evaluated the number of petitions, the petitioners services and the degree of filling of the application laboratory. Likewise, we have performed a satisfaction survey aimed at the medical staff of the Anesthesia and Resuscitation Service. The studied period was from July 2012 until January 2016. Results. From the protocol introduction in our hospital has been produced an increase and a consolidation of the thromboelastography. Most of the requests came from the Anesthesia and Resuscitation Service (36.5%) and Angiology and Cardiovascular Surgery Service (30.1%). As for the satisfaction survey, the results show a positive acceptance by the medical staff both of the protocol as of the response times obtained. Conclusions. By establishing a protocol elaborated and agreed between the laboratory and the requesting departments, we can guarantee the strict compliance of the same and that the response times only differ a little from the obtained ones when this technique is realized as point of care testing, providing a global service to the whole hospital (AU)

Morphological studies on platelet function using a microfluidic chip. A proof of concept study

Platelets are blood cellular components involved in hemostatic processes and thrombus formation. Activation and inhibition of platelets result in an increase in morphological changes and a significant reduction in adhesion. There are several approaches towards the determination of the functional status of platelets, based on criteria such as cell adhesion, molecular changes at the cell surface, etc. In recent years, microfluidic devices have been introduced to mimic conditions proper to the vascular system, and so emulate thrombus formation in vivo. This study presents a microchip, the Thrombi Chip® , which is partially fitted with fluidic properties. This microchip has various types of micro-channels into which the platelets are inserted and, after drug treatment, the investigation is completed with the examination of the chip under an invert light microscope. For microscopy, cells were labeled with FCDA (human platelets) and Rho6G (mouse platelets). Counts and morphometric measurements of the adhered cells were carried out using digital images. To validate the results obtained with the microchip, the fractions of mice platelets were investigated with flow cytometry as well. Scanning electron microscopy was used to examine the morphological changes related to activation and inhibition in human platelets. The results show that, with this microchip, activation and inhibition of platelets can be detected. Flow cytometry studies largely confirm the microchip results. Certain variability in the results observed in human platelets is considered normal, as donors were randomized. In this respect the mouse platelets were much more uniform. Measurements with the microchip require that the sample be divided into three groups: control, activated and inhibited, resulting in a set of data, which, after respective evaluation, provides activity profiles, giving information on the status and response capacity of a sample. Such profiles could have diagnostic relevance and therefore be useful in a clinical context, for example in the monitoring of the effects of short- and long-term treatment of patients, as well as to test new drugs

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La selectina P soluble, nuevo biomarcador para el diagnóstico de la enfermedad tromboembólica venosa / Soluble P-selectin: A new biomarker for the diagnosis of venous thromboembolic disease

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Coloración anormal del suero asociado al tratamiento con eltrombopag, en paciente con trombopenia inmune / Abnormal coloring of serum associated to treatment with eltrombopag, in patients with immune thrombocytopenia

Se presenta un caso de trombopenia inmune tratado con eltrombopag en el que a las seis semanas se presentó una coloración rojiza en el suero del paciente que impedía la valoración analítica de su función hepática. Dicha coloración persistió hasta la supresión total del fármaco por falta de respuesta terapéutica Se describen experiencias similares en la literatura (AU)

A case of immune thrombocytopenia treated with eltrombopag is presented. At six weeks, the patient had reddish coloring in the serum that prevented analytic evaluation of the hepatic function. This coloring persisted until the total suppression of the drug due to lack of therapeutic response. Similar experiences have been described in the literature (AU)

Impacto de CYP2C19*2 en la reactividad plaquetar en pacientes con síndrome coronario agudo tratados con clopidogrel / Relevance of CYP2C19*2 regarding platelet reactivity in patients with acute coronary syndrome treated with clopidogrel

Fundamento y objetivo: El valor de los polimorfismos PON1-Q192R, CYP2C19*2 y *17 en la identificación del paciente pobre respondedor a clopidogrel es controvertido. Evaluamos la relación de los polimorfismos señalados con la reactividad plaquetar y el pronóstico a medio plazo en pacientes con síndrome coronario agudo remitidos para cateterismo cardíaco. Pacientes y método: Se incluyeron prospectivamente 247 pacientes con síndrome coronario agudo. En todos se dispuso del genotipo (CYP2C19*2, CYP2C19*17, PON1-Q192R). Medimos la reactividad plaquetar con VerifyNow®. Se registraron episodios adversos intrahospitalarios (muerte, infarto periprocedimiento) y durante el seguimiento (muerte, infarto de miocardio, angina, accidente cerebrovascular, trombosis del stent). Resultados: Los portadores de alelos *2 de CYP2C19 presentaron una mayor reactividad plaquetar residual (PRU, media [DE] de 252 [76] frente a 287 [74], p = 0,002). Los portadores de alelos *17 de CYP2C19*17 o de alelos T(Q) de PON1-Q192R no presentaron una reactividad distinta (p > 0,05). En un modelo multivariado para la predicción de pobre respuesta a clopidogrel, la contribución de CYP2C19*2 fue modesta (Wald = 7,5; odds ratio [OR] para ≥ 1 alelo *2 = 2.786, intervalo de confianza del 95% [IC 95%] 1.337-5.808). Fueron factores protectores independientes la hemoglobina basal (OR 0,666, IC 95% 0,555-0,801) y el uso concomitante de estatinas (OR 0,376, IC 95% 0,162-0,873). El índice de masa corporal fue un factor de riesgo (OR 1.074, IC 95% 1.005-1.148). Los polimorfismos estudiados no predijeron episodios adversos. Conclusiones: El polimorfismo de CYP2C19*2 influyó en la respuesta a clopidogrel de forma modesta, pero no condicionó un pronóstico distinto en pacientes con síndrome coronario agudo. Los polimorfismos de PON1-Q192R y CYP2C19*17 no influyeron en la reactividad plaquetar ni el pronóstico (AU)

Background and objective: Previous studies have shown that the metabolism of P2Y12 receptor blockers is influenced not only by CYP2C19*2 but also by PON1-Q192R alelles. We aimed to evaluate the impact of CYP2C19*2 and PON1-Q192R polymorphisms carriage in platelet reactivity and clinical outcome in patients with ischemic heart disease undergoing cardiac catheterization. Patients and method: We recruited prospectively patients with acute coronary syndrome undergoing cardiac catheterization (n = 247). We evaluated the genotype (CYP2C19*2, CYP2C19*17, PON1-Q192R) with TaqMan1 assay and platelet aggregometry in all patients. We assessed both in and out-of-hospital events (unstable angina, periprocedural and spontaneous myocardial infarction, myocardial infarction, all-cause death, stent thrombosis and stroke) during follow-up. Results: Carriers of CYP2C19*2 alleles showed a significant higher residual platelet reactivity (PRU, mean [SD], 252 [76] vs. 287 [74], P = .002). Carriers of PON1-Q192R CT(RQ) and TT(QQ) alleles and CYP2C19*17 did not present a different response to clopidogrel. In a multivariable setting for the prediction of platelet reactivity, the contribution of CYP2C19*2 was modest (Wald = 7.5; odds ratio [OR] for 1 alelle *2 = 2,786, 95% confidence interval [95% CI] 1,337-5,808). Independent predictors were baseline hemoglobin levels (g/dL, OR .666, 95% CI .555-.801) and the use of statins (OR .376, 95% CI .162-.873). Body mass index was a risk factor (OR 1,074, CI 95% 1,005-1,148). Studied polymorphisms did not predict an adverse outcome (AU)

Biomarcadores no troponínicos, complementarios, alternativos y presuntos, para el síndrome coronario agudo: nuevos recursos para los futuros instrumentos de cálculo del riesgo / Complementary, Alternative, and Putative Nontroponin Biomarkers of Acute Coronary Syndrome: New Resources for Future Risk Assessment Calculators

En este artículo se revisan los biomarcadores no troponínicos con posibles sensibilidad y selectividad, que aportan una perspectiva diagnóstica en el síndrome coronario agudo, y su posible uso en los algoritmos de estratificación del riesgo. Dichos biomarcadores pueden ser útiles como análisis complementarios o alternativos a los de troponina cardiaca ( I o T) en el diagnóstico precoz del síndrome coronario agudo, así como para monitorizar su progresión y evaluar el pronóstico. La información presentada en este artículo se basa en un análisis crítico de una selección de la literatura biomédica disponible a través de los motores de búsqueda Scopus y MEDLINE-PubMed de la National Library of Medicine de Estados Unidos. La mayor parte de los artículos citados en este trabajo de revisión y perspectiva, excepto unas pocas publicaciones históricas de referencia, se publicó entre enero de 2000 y diciembre de 2013 (AU)

Biomarkers, other than cardiac troponin, with potential sensitivity and selectivity that provide diagnostic and prognostic insights into the tissue-specific injury processes underlying acute coronary syndrome and their possible use in risk stratification algorithms are discussed. Such biomarkers may be useful as complementary or alternative to cardiac troponin (I or T) assays in early diagnosis of acute coronary syndrome, as well as for monitoring acute coronary syndrome progression and prognosis assessment. The information included in this article is based on a critical analysis of selected published biomedical literature accessible through the United States National Library of Medicine's MEDLINE-PubMed and Scopus search engines. The majority of articles cited in this review and perspective, except for a few historical publications as background, were published between January 2000 and December 2013 (AU)

Incremento en las concentraciones de ligando CD40 soluble plaquetario en pacientes con síndrome antifosfolipídico primario / Increased concentrations of soluble CD40 ligand platelet in patients with primary antiphospholipidic syndrome

Objetivo. Determinar las concentraciones de sCD40L en pacientes con SAFP, y su asociación con el número de trombosis. Pacientes y métodos. Se incluyó a pacientes con SAFP y controles sanos de la misma edad y sexo. Para su análisis, los pacientes con SAFP se dividieron en 2 grupos: a) pacientes con 1 trombosis, y b) pacientes > 1 trombosis. Se determinaron las concentraciones de sCD40L por método de ELISA en cada uno de ellos. Resultados. Las concentraciones de sCD40L fueron significativamente mayores en los pacientes con SAFP en comparación con el grupo control: 9,72 ± 11,23 ng/ml vs. 4,69 ± 40,04 ng/ml (p = 0,04). No hubo asociación entre las concentraciones séricas de sCD40L y el número de trombosis (9,81 ± 9,67 ng/ml en pacientes con una trombosis vs. 9,6 ± 12,75 ng/ml en ≥ 1 trombosis) (p = 0,13) En mujeres con embarazo y aborto del primer trimestre (13 pacientes), las concentraciones de sCD40L fueron mayores que en aquellas pacientes sin antecedente de aborto (26 pacientes), pero sin una diferencia estadística significativa (12,11 ± 16,46 ng/ml vs. 8,80 ± 8,61 ng/ml; p = 0,33). No se encontró correlación entre las concentraciones de sCD40L y el número total de trombosis. Conclusiones. Los pacientes con SAFP tienen concentraciones mayores de sCD40L en comparación con sujetos sanos, sin que esto se asocie a un mayor número de trombosis. Entre las pacientes con SAFP, existe una tendencia a mayores concentraciones de sCD40L en aquellas con embarazo e historia de aborto. Al ser la plaqueta la principal fuente celular de sCD40L, es posible que esta vía desempeñe un papel patogénico en la enfermedad (AU)

Objective. To determine the concentrations of sCD40L in patients with PAPS, and establish its association with the number of thrombosis. Patients and methods. We included patients with PAPS and healthy controls of the same age and sex. For analysis, patients with PAPS were divided into 2 groups: (1) patients with 1 thrombosis, and (2) patients with >1 thrombosis. Soluble CD40L concentrations were determined by ELISA method. Results. sCD40L concentrations were significantly higher in patients with PAPS compared with the controls (9.72±11.23 ng/ml vs 4.69±4.04 ng/ml) (P=.04) There was no association between serum levels of sCD40L and the number of thrombosis (1 thrombosis: 9.81±9.87 ng/ml vs 9.63±12.75 ng/ml in ≥1 thrombosis (P=.13). In women with pregnancy and abortions (13 patients), concentrations of sCD40L were higher than in those patients without a history of abortion (26 patients) but without statically significant difference (12.11±16.46 ng/ml vs 8.80±8.61 ng/ml) (P=.33). There was no correlation between levels of sCD40L and the total number of thrombosis. Conclusions. Patients with PAPS have higher concentrations of sCD40L compared with healthy subjects, although this is not associated with a greater number of thrombosis. Among patients with PAPS, there is a tendency to higher concentrations of sCD40L in women with pregnancy and history of abortion. Since the platelet is the main cellular source of sCD40L, is possible that this pathway plays a pathogenic role in patients with PAPS (AU)

Estudio clínico del impacto de la utilización intensiva de estatinas sobre los niveles de inflamación y activación plaquetaria en la angina estable después de intervención coronaria percutánea / Impact of intensive statin use on the level of inflammation and platelet activation in stable angina after percutaneous coronary intervention: A clinical study

Fundamento y objetivo: El objetivo de este estudio fue diseñado para investigar si dosis altas de atorvastatina antes de la intervención coronaria percutánea (PCI) pueden reducir la inflamación, la activación plaquetaria y episodios cardíacos adversos mayores (MACE) en pacientes con angina estable que se someten a terapia con estatinas a largo plazo. Métodos: En total, 215 pacientes con angina estable crónica fueron asignados aleatoriamente a un tratamiento previo con 80mg de atorvastatina (12h antes de la PCI, n=106) o con 20mg de atorvastatina (12h antes de la PCI, n=109). Todos los pacientes fueron sometidos a PCI. Los niveles séricos de interleucina-6, proteína C reactiva de alta sensibilidad y factor de necrosis tumoral alfa, GMP-140 y P-selectina se midieron 24h antes y después de la PCI. Se determinó la incidencia a 30 días de MACE. Resultados: No se observaron diferencias en las características basales entre los grupos. Los niveles de inflamación y activación de las plaquetas fueron significativamente menores a las 24h en el grupo que recibió terapia intensiva con estatinas (p<0,05). Los niveles de inflamación y activación de las plaquetas aumentaron considerablemente 24h después de la PCI en el grupo que recibió la dosis más baja de atorvastatina (p>0,05). En otras palabras, el tratamiento previo con una dosis alta de atorvastatina disminuyó notablemente la incidencia de MACE durante 30 días (p<0,05). Conclusiones: El tratamiento previo con una dosis alta de atorvastatina redujo significativamente la inflamación, la activación de las plaquetas y la incidencia de ECV en pacientes con angina estable (AU)

Background and objective: This study was designed to investigate whether high-dose atorvastatin before percutaneous coronary intervention (PCI) can reduce inflammation, platelet activation, and major adverse cardiac events (MACE) in patients with stable angina who are undergoing long-term statin therapy. Methods: In total, 215 patients with chronic stable angina were randomized to pretreatment with 80mg of atorvastatin (12h before PCI; n=106) or with 20mg of atorvastatin (12h before PCI; n=109). All patients underwent PCI. Serum levels of interleukin-6, high-sensitivity C-reactive protein, tumor necrosis factor-Alpha, GMP-140, and p-selectin were measured 24h before and after PCI. The 30-day incidence of MACE was determined. Results: No differences in baseline characteristics were observed between the groups. The levels of inflammation and platelet activation were significantly lower after 24h in the group that received intensive statin therapy (P<0.05). The levels of inflammation and platelet activation increased sharply 24h after PCI in the group that received the lower dose of atorvastatin (P>0.05). In other words, pretreatment with a high dose of atorvastatin decreased the incidence of MACE sharply within 30 days (P<0.05). Conclusions: Pretreatment with a high dose of atorvastatin significantly reduced inflammation, platelet activation, and the incidence of MACE in patients with stable angina (AU)

Introducción / Introduction

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Plaqueta: fisiología de la activación y la inhibición / Platelets: the physiology of activation and inhibition

Las plaquetas tienen un papel fundamental tanto en la hemostasia como en la patogenia de la aterotrombosis. Después de producirse la rotura de la placa de ateroma, diferentes proteínas se expresan en la plaqueta que interviene tanto en la unión de la plaqueta a la pared vascular dañada como en la interacción con nuevas plaquetas y otras células sanguíneas para formar el trombo final. Diferentes agonistas, entre ellos el difosfato de adenosina, el tromboxano A2 y la trombina, se sintetizan y se liberan para llamar a más plaquetas a formar parte del trombo. Además, diferentes inhibidores endógenos de las plaquetas tratan de formar los agonistas plaquetarios anteriormente mencionados. Las plaquetas jóvenes y las micropartículas derivadas de las plaquetas también participan en la formación del trombo. Este artículo trata de revisar los mecanismos fisiológicos implicados en la activación y la inactivación plaquetarias (AU)

Platelets play a fundamental role in both hemostasis and the pathogenesis of atherothrombosis. After rupture of an atheromatous plaque, platelets express a number of adhesive proteins that influence both platelet adhesion at the damaged vessel wall and interactions with new platelets and other blood cells, all of which eventually result in clot formation. Several agonist, including adenosine diphosphate, thromboxane A2 and thrombin, are then synthesized and released to attract additional platelets to form part of the clot. Moreover, various endogenous platelet inhibitors act against the above-mentioned platelet agonists. In addition, young platelets and platelet-derived microparticles also participate in clot formation. This article provides an overview of the physiological mechanisms involved in platelet activation and antiplatelet processes (AU)

Mecanismos de acción de los diferentes agentes antiplaquetarios / Mechanisms of action of antiplatelet agents

Las manifestaciones clínicas de la aterosclerosis, tales como los síndromes coronarios agudos, los eventos cerebrovasculares y la enfermedad arterial periférica, son las principales causas de morbimortalidad en el mundo. La activación y la agregación plaquetarias son, en última instancia, la causa de la progresión y las presentaciones clínicas de la enfermedad. Por ello, los antiagregantes plaquetarios son un pilar fundamental del tratamiento farmacológico de estos pacientes. Una amplia variedad de receptores de superficie tipo integrinas, familia rica en leucina, receptores acoplados a proteínas G y receptores de tirosincinasa, así como moléculas intraplaquetarias, desencadenan y regulan el proceso de activación/agregación plaquetaria. Todas estas moléculas son dianas potenciales de fármacos antiplaquetarios destinados a prevenir y tratar la trombosis arterial. A pesar del beneficio clínico obtenido con el ácido acetilsalicílico (inhibidor de la ciclooxigenasa), el clopidogrel (antagonista del receptor del ADP P2Y12) y los antagonistas de la glucoproteína IIb/IIIa (abciximab, eptifibatida, tirofibán, lamifibán) al disminuir significativamente el riesgo de episodios aterotrombóticos, la morbimortalidad residual sigue elevada. Por ello los esfuerzos se centran en la búsqueda de nuevos tratamientos antiplaquetarios a fin de mejorar su efectividad y su seguridad. De hecho, nuevos fármacos están en fase de desarrollo y varios han llegado ya a uso clínico. Entre ellos están los nuevos inhibidores de los receptores P2Y12 (prasugrel, ticagrelor, cangrelor y elinogrel), antagonistas del receptor PAR1 de la trombina (vorapaxar, atopaxar) y moléculas de señalización intraplaquetaria. Esta revisión profundiza en los mecanismos de acción del arsenal antiplaquetario actualmente en uso y las nuevas aproximaciones terapéuticas (AU)

The clinical manifestations of atherosclerotic diseases such as acute coronary syndromes, cerebrovascular events and peripheral arterial disease are major causes of mortality and morbidity worldwide. Platelet activation and aggregation are ultimately responsible for the progression and clinical presentation of the disease and, therefore, antiplatelet agents have become one of the mainstays of pharmacological treatment of these patients. A wide variety of surface receptors such as integrin family receptors, receptors rich in Leucine, protein G linked transmembrane receptor, tyrosine kinase receptors as well as intraplatelet molecules, trigger and regulate platelet activation/aggregation. All these molecules are potential targets for antiplatelet drugs to prevent and treat arterial thrombosis. Despite the overall clinical benefit obtained with aspirin (cyclooxygenase inhibitor), clopidogrel (ADP receptor antagonist P2Y12) and antagonists of the glycoprotein IIb/IIIa (abciximab, eptifibatide, tirofiban, lamifiban) to significantly reduce the risk of atherothrombotic events, residual morbidity and mortality remain high. Therefore efforts have focused on the search for new antiplatelet treatments to improve their effectiveness and safety. In fact, new drugs are in development and various drugs have already reached clinical use. Among them, new P2Y12 receptor blockers (prasugrel, ticagrelor, cangrelor and elinogrel), antagonists of the PAR1 thrombin receptor (vorapaxar and atopaxar) as well as intraplatelet signaling molecules. This review explores the mechanisms of action of the currently used antiplatelet armamentarium as well as new therapeutic approaches (AU)

Citometría de flujo de plaquetas en la diabetes mellitus y otras patologías metabólico-vasculares / Platelet flow cytometry in diabetes mellitus and in other metabolic-vascular pathologies

En los últimos años, la citometría de fl ujo ha experimentado un gran desarrolloque la confi rma como una importante herramienta de trabajocon gran potencial clínico y analítico. Sus principales ventajas derivan delhecho de utilizar directamente sangre entera –sin el riesgo de activaciónartefactual que frecuentemente se produce por la manipulación de lamuestra cuando se trabaja con plaquetas lavadas– y de poder detectarsimultáneamente diversos antígenos en distintas subpoblaciones celularesbien identifi cadas. Esta metodología permite estudiar plaquetas circulantesactivadas espontáneamente y valorar el efecto in vitro y ex vivode diversos fármacos sobre la función plaquetaria en numerosas patologías.A pesar de sus ventajas, actualmente la aplicación de la citometríade flujo en el estudio de la diabetes y otras patologías metabólicovascularesestá lejos de ser un hecho habitual(AU)

In recent years flow cytometry has experienced a great development,which confirms it as an important tool to work with a greatclinical and analytical potential. Its major advantages derive from thefact that we work directly with whole blood, without the risk of artefactualactivation that often occurs by the manipulation of the samplewhen working with washed platelets. In addition, flow cytometry isable to detect simultaneously different antigens on well-defined cellsubpopulations. This methodology permit the study of circulatingspontaneously activated platelets and evaluate the effect of severaldrugs, in vitro and ex vivo, on platelet function in numerous pathologies.Despite its advantages, flow cytometry is currently not usedusually in the study of diabetes and other metabolic-vascular pathologies(AU)

La reactividad plaquetaria post-tratamiento predice los eventos adversos a largo plazo mejor que la respuesta al clopidogrel en pacientes con síndrome coronario agudo sin elevación del ST / No disponible

Introducción y objetivos. Una peor respuesta al tratamiento antiagregante está relacionada con la recurrencia de eventos clínicos. El objetivo de este estudio es valorar la relación entre la respuesta al clopidogrel y la reactividad plaquetaria post-tratamiento (RPP) con la recurrencia de eventos adversos cardiovasculares a 1 año en pacientes con síndrome coronario agudo sin elevación del ST (SCASEST). Métodos. Estudio observacional, prospectivo de la respuesta al clopidogrel y RPP (analizador VerifyNow®) inmediatamente antes de la coronariografía diagnóstica. Resultados. De 179 pacientes incluidos (97 con intervencionismo coronario y 21 con cirugía coronaria), 161 (90%) completaron seguimiento a 1 año y 18 (11%) sufrieron eventos: 10 muertes, 6 infartos agudos de miocardio no fatales, 2 accidentes cerebrovasculares y 5 nuevas revascularizaciones. Una peor respuesta al clopidogrel (31% ± 21% frente a 43% ± 21%; p = 0,049) y una mayor RPP (204 ± 60 frente a 155 ± 67 unidades de reactividad plaquetaria [URP]; p = 0,006) se asociaron significativamente con la aparición de eventos. El análisis multivariable confirmó la RPP (odds ratio [OR] por incremento de 10 URP = 1,12; intervalo de confianza [IC] del 95%, 1,01-1,24; p = 0,020) como predictor independiente de eventos adversos cardiovasculares mayores. Un punto de corte de RRP de 175 URP se asoció con OR ajustada = 3,9 (IC del 95%, 1,2-15,4; p = 0,024) para la aparición de eventos. Conclusiones. La RPP predice la aparición de eventos adversos a largo plazo mejor que la respuesta al clopidogrel en pacientes con SCASEST. Los pacientes con valores de RPP > 175 URP presentan mayor riesgo de sufrir eventos adversos

Introduction and objectives: Poor response to antiplatelet therapy has been associated with adverse long-term outcomes. The objective of this study is to assess the relationship between response to clopidogrel and post-treatment platelet reactivity (PPR) and 1-year major adverse cardiovascular events (MACE) in patients with non-ST segment elevation acute coronary syndrome (NSTEACS). Methods: Patients with NSTEACS undergoing early coronary angiography were enrolled in this prospective, observational study. The VerifyNow® analyzer was used to measure clopidogrel response and PPR immediately before coronary angiography. Results: Of the 179 patients included (97 percutaneous coronary intervention, 21 coronary artery bypass graft), 161 (90%) completed 1-year follow-up and 18 (11%) incurred MACE: 10 deaths, 6 myocardial infarctions, 2 strokes, 5 revascularizations. Lower response to clopidogrel (31 ± 21% vs. 43 ± 21%; P.049) and higher PPR (204 ± 60 vs. 155 ± 67 platelet reaction units [PRU]; p= 0.006) were significantly associated with MACE occurrence. Multivariate analysis confirmed PPR (OR per 10-unit increase: 1.12, 95%CI: 1.01-1.24; P.020) as an independent predictor of MACE. A PPR cut-off value of 175 PRU was associated with an adjusted OR for 1-year MACE occurrence of 3.9 (95%CI: 1.2-15.4; P.024). Conclusions: PPR predicts adverse long-term outcomes better than response to clopidogrel in patients with NSTEACS. Patients with PPR values above 175 PRU were identified as being at higher risk for adverse long-term events

Protein complex immunological separation assay (ProCISA): a technique for investigating single protein properties

Analysis of the posttranslational modification of proteins, such as phosphorylation,might yield misleading results due to the presence of other proteins with similar electrophoreticproperties that coimmunoprecipitate with the target protein. The aim ofthe present work was to develop a reliable, easy and economical technique to completelyisolate a protein from its complex. Here we present a new assay developed tofully isolate proteins from macromolecular complexes that consists of an initialSDS/PAGE (under reducing conditions), which isolates the target protein, followedby transfer of the proteins to a buffer, from which the target protein is recaptured byconventional immunoprecipitation. This technique, that we have termed “ProteinComplex Immunological Separation Assay” (ProCISA), successfully separated proteinsof different sizes, such as pp60Src and the IP3 receptor (IP3R), from their complexes.We show that ProCISA allows the investigation of the tyrosine phosphorylationstate of isolated proteins. This technique could also be used to study other posttranslationalmodifications without risk of misleading results resulting from contaminationwith other proteins of similar electrophoretic mobility which complex with theprotein of interest (AU)

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Calidad del plasma rico en plaquetas: estudio de la activación plaquetaria / Platelet-rich plasma quality: a study on platelet activation

Objetivo. El plasma rico en plaquetas (PRP) es utilizado de formacada vez más frecuente en técnicas quirúrgicas de regeneración tisular. Noobstante, el procesamiento de la sangre hasta obtener PRP puede desencadenarla activación prematura de las plaquetas y la pérdida de los factoresbioactivos. En este trabajo estudiamos la calidad de los concentradosde plaquetas obtenidos siguiendo la técnica de doble centrifugación entubo. Método. Se someten 50 ml de sangre a una primera centrifugacióna 200g 10 minutos, se recoge el sobrenadante y se centrifuga a 700g 15minutos. Posteriormente, tras eliminar las 2/3 partes del plasma, se resuspendenlas plaquetas y se analiza el grado de enriquecimiento, el estadode activación y la reserva funcional de las plaquetas. Resultados. El enriquecimientoen plaquetas del PRP fue de 364±177% (n=45) respecto delos niveles presentes en sangre total. Mediante el estudio de la expresiónde CD62 por citometría de flujo se determinó el porcentaje de plaquetasactivadas en las muestras de 8 donantes. Mientras que en la sangre no procesadase detectó un 2,7% de plaquetas activadas, tras la preparacióndel PRP éste era sólo de 3,6%, aumentando hasta el 16% en el concentradoalmacenado toda la noche a 22º C. Tras la estimulación con trombinael porcentaje de plaquetas activadas fue de 96,2%. Conclusión. Esteprotocolo de preparación de PRP no produce una activación significativade las plaquetas. La respuesta a la estimulación con trombina de los concentradosindica un buen estado de reserva plaquetaria(AU)

Objective. Platelet Rich Plasma (PRP) is an autologouspreparation currently used in oral and maxillofacial reconstructivesurgery. Blood collection and preparation of platelet concentratesmay lead to platelet activation and the premature loss of theirgranular load. In this study, we have analyzed the quality of thePRP obtained from a small volume of whole blood through a doublecentrifugation technique, so called “tube method”. Design. Weobtained 50 ml of whole blood from 45 patients and centrifugedat 200 g for 10 minutes. The plasma and buffy-coat were collectedand we then centrifuged at 700g for 15 minutes. The pellet wasresuspended after discarding 2/3 of the plasma. The plateletconcentration, platelet activation and the functional response tothrombin were analyzed in these samples. Results. By using thismethod of PRP preparation, we obtained a 364 ± 177% increasein platelet concentration in comparison with whole blood levels.Platelet activation, measured by flow cytometry analysis of CD62expression, was of 2.7% in unprocessed blood and 3.6% in freshPRP. This figure increased to 16% in PRP samples after overnightstorage at room temperature. A percentage of 96% of plateletsshowed activation in PRP samples after thrombin stimulation.Conclusion. Our results show that platelets contained in PRPconcentrates obtained by this method are not significantly activated.A good functional platelet reserve is preserved through the procedure,since platelets maintained a satisfactory response to thrombin afterPRP preparation(AU)

¿Está justificado el uso de estatinas en todo paciente con diabetes? / Is the use of statins justified in all diabetic patients?

Actualmente se considera la diabetes mellitus como uno de los más importantes problemas sociosanitarios en todo el mundo. Está bien establecida la correlación entre la hiperglucemia y los episodios cardiovasculares. Entre los factores de riesgo de tales episodios, cabe destacar la dislipemia y la hiperactivación plaquetaria, ambos asociados a la diabetes, cuyo conocimiento intenta poner al día la presente revisión. Dado que se ha descrito que las estatinas, además de su conocido efecto sobre los lípidos plasmáticos, también ejercen una cierta acción sobre la activación plaquetaria, puede plantearse la pregunta de si resultaría efectiva su administración, incluso a los pacientes diabéticos con una mínima dislipemia. La bibliografía revisada pone de manifiesto la falta de acuerdo entre los diversos autores respecto a qué estatinas, en qué dosis, durante cuánto tiempo y a qué tipo de pacientes deben administrarse para alcanzar una mejor protección contra los episodios trombóticos más frecuentes en la diabetes

Today, diabetes mellitus is considered to be one of the most important public health problems around the world. The correlation between hyperglycemia and cardiovascular events has been well established. Among the risk factors for these events, dyslipidemia and platelet hyperactivity are of special importance because both are associated with diabetes. The objective of the present review is to provide an update on these risk factors. In addition to the well-known effect of statins on plasma lipid levels, they have also been reported to exert a certain action on platelet activation. For this reason, we considered the question as to whether it would be of interest to administer statins even to diabetic patients with minimum dyslipidemia. The literature reviewed demonstrates the lack of agreement among the different authors in relation to which statin should be administered and at what dose, for how long and to what type of patients in order to achieve better protection against thrombotic events, which occur more frequently in diabetic patients

Papel de la atorvastatina en la prevención del ictus. ¿Puede estar relacionado con su acción sobre la activación plaquetaria? Consideraciones basadas en nuestra propia experiencia / Role of atorvastatin in the prevention of stroke. Can it be related with its action on platelets activation? Considerations based on our own experience

Está bien establecido que la hipertensión arterial es el principal factor de riesgo de ictus y que los pacientes hipertensos presentan frecuentemente otros factores asociados de riesgo vascular, como una mayor activación plaquetaria. Nuestro grupo de trabajo ha comunicado que determinados fármacos hipotensores, además de normalizar las cifras tensionales, disminuyen dicha hiperactivación plaquetaria, lo que supone un beneficioso efecto añadido, dado el papel que las plaquetas juegan en el proceso aterotrombótico. Actualmente no se ha establecido claramente si la hipercolesterolemia tiene algún papel en el ictus, pero, sin embargo, numerosos autores han demostrado que la administración de estatinas, que son potentes fármacos utilizados en el tratamiento de la hipercolesterolemia, produce una reducción significativa en la incidencia de ictus. Esta observación se ha atribuido a diversos efectos pleiotrópicos de las estatinas. Dado que nuestro grupo de trabajo ha descrito el efecto normalizador de la atorvastatina sobre la activación de las plaquetas, parece razonable especular que las estatinas reducen la incidencia de ictus a través de su efecto sobre la hiperactivación plaquetaria. Sin embargo, la confirmación de este probable mecanismo de acción requiere la realización de estudios clínicos más amplios

It is well known that arterial hypertension is the main stroke risk factor and hypertensive patients frequently have other vascular risk factors, such as high platelet activation. Our work group has reported that some hypotensive drugs not only normalize blood pressure values but decrease platelet hyperactivity, which is supposed to be an added beneficial factor as the platelets play an important role in atherothrombotic process. Currently, it has not been clearly established if hypercholesterolemia plays a role in stroke. However, many authors have demonstrated that administration of statins, a potent drug used in the hypercholesterolemia treatment, produces a significant reduction in the stroke incidents. This observation is attributed to different statin pleiotropic effects. Since our group has described the normalization of the platelet activation with atorvastatin, it seems reasonable to think that statins decrease stroke incidents due to their effect on platelet hyperactivation. However, the confirmation of the possible mechanism action requires a more extensive clinical study

Activación plaquetaria e hipercolesterolemia en la patogenia de la trombosis venosa profunda / Platelet activation and hypercholesterolemia in the pathogenesis of deep vein thrombosis

Actualmente se acepta que la trombosis venosa profunda es un acontecimiento multifactorial en el que la presencia de plaquetas activadas, así como los lípidos plasmáticos, debe desempeñar algún papel que, según la bibliografía consultada, no parece estar bien establecido. Dada la falta de consenso entre los diversos grupos de trabajo, el tema relacionado con la trombosis venosa profunda-plaquetas-lípidos, así como sus posibles interacciones, continúa siendo un área sugestiva de investigación en la que realizar estudios más amplios con la finalidad de establecer factores de riesgo, métodos diagnósticos tempranos y ensayos clínicos que permitan comprobar la eficacia de nuevos fármacos

Currently it is accepted that deep vein thrombosis is a multifactorial event in which the presence of activated platelets and also plasmatic lipids seems to play a pivotal role that it is not well established in the scientific bibliography. Due to the non consensus state about these topics between the different groups working in these aspects, the topic involving deep vein thrombosis-platelets-lipids, and also their interactions, still is an interesting area of investigation, in which it is necessary to carry out studies with the aim of establishing risk factors, initial diagnostic methods and clinical assays to probe the efficacy of new therapies