Programa de donación de óvulos (2017) / Egg donation program (2017)

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La Ley de Reproducción Asistida vista por un ginecólogo / No disponible

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Selección de genes de referencia en semen equino criopreservado para su uso en estudios de expresión genética con la técnica de PCR cuantitativa / Reference genes selection in cryopreserved equine semen for its use in studies of gene expression with the quantitative PCR technique

INTRODUCCIÓN: La gestión de bancos de germoplasma implica la conservación y uso de dosis seminales, pero también pueden ser una fuente de estudio sobre la calidad de los sementales y las propiedades del semen para su empleo post descongelación. Un criterio para medir la calidad seminal puede basarse en las diferencias de expresión de algunos genes implicados en la espermatogénesis y la maduración espermática. OBJETIVO: Análisis de genes expresados en semen equino criopreservado que ofrezcan una adecuada amplificación, especificidad y estabilidad para su empleo como genes de referencia en futuros estudios de expresión genética. MATERIAL Y MÉTODOS: Purificación de espermatozoides vivos mediante un gradiente de concentración discontinua a partir de pajuelas de semen criopreservado correspondiente a cuatro sementales. Extracción orgánica de ácidos ribonucleicos con tratamiento con la enzima desoxiribonucleasa y la amplificación selectiva de siete genes candidatos mediante retrotranscripción y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real en un solo paso. RESULTADOS: Tres de los genes seleccionados, β-Actina, Ubiquitina B y proteína Ribosomal L32 se amplifican correctamente. β-Actina, Ubiquitina B manifiestan la mayor estabilidad. CONCLUSIÓN: En los espermatozoides procedentes de muestras de semen criopreservado equino se puede detectar la presencia de ARNm, siendo el gen de la β-Actina y de la Ubiquitina B los más indicados como genes de referencia de los siete candidatos analizados

INTRODUCTION: The germoplasm bank management involves the conservation and use of semen doses, but can also be a source of study on the quality of stallions and semen properties for use after thawing. A criterion for measuring the semen quality may be based on differences in expression of some genes involved in spermatogenesis and sperm maturation. OBJECTIVE: Analysis of genes expressed in equine cryopreserved sperm that can provide adequate amplification, specificity and stability for use as future reference genes in gene expression studies. MATERIAL AND METHODS: Purification of live sperm through a discontinuous concentration gradient from cryopreserved semen straws corresponding to four stallions. Organic extraction of ribonucleic acids with deoxyribonuclease treatment and the selective amplification of seven candidate genes using a retrotranscription and a real time chain reaction of the polymerase in one step mode. Specificity is tested by melting curves and agarose gel electrophoresis. Also the stability of the genes is calculated. RESULTS: Three of the selected genes, β-actin, Ubiquitin B and Ribosomal protein L32 were properly amplified. β-Actin and Ubiquitin B showed the best stability. CONCLUSION: mRNA was amplified from equine cryopreserved semen samples, being the β-Actin and the Ubiquitin B genes the most suitable reference genes of the seven candidates analyzed

Efecto de la adición de plasma seminal en el semen equino descongelado / Effect of seminal plasma addition on frozen-thawed equine semen

Antecedentes y objetivos: E l semen criopreservado ofrece beneficios adicionales no presentes en el semen refrigerado. S in embargo, varios factores afectan al éxito en la inseminación artificial con semen congelado de caballos. E l objetivo del trabajo es evaluar si la adición de plasma seminal a diferentes concentraciones, sobre espermatozoides equinos descongelados, afecta a la motilidad espermática, viabilidad y a nivel de membrana. Material y métodos: S e utilizaron diferentes razas, cuatro sementales de silla, y dos sementales de tiro. E n un primer experimento el semen descongelado se centrifugó, mientras en el segundo no se centrifugó. A continuación, se adicionó el plasma seminal al 10, 20, 30% suspendido en solución tampón fosfato y plasma seminal puro (100%). Resultados: En los caballos de silla el plasma seminal no afectó a los parámetros estudiados (p>0,05), pero se apreció un posible efecto tóxico del plasma seminal puro sobre las características espermáticas. E n las muestras con plasma seminal de los caballos de tiro, se observaron unos índices mejores en espermatozoides vivos con acrosoma intacto que en las muestras control. A simismo se obtuvo un porcentaje menor en espermatozoides reaccionados que en las muestras control, encontrando en esta categoría una diferencia significativa (p<0,05). Conclusiones: La incubación de los espermatozoides descongelados con plasma seminal puede frenar la reacción acrosómica, reflejado este hecho, en los bajos porcentajes de espermatozoides que han sufrido la verdadera reacción acrosómica (AU)

Background and objectives: S tallion sperm cryopreservation offers benefits not available in cooled semen. However various factors affect the success of artificial insemination with frozen-thawed equine semen. T his study aims to evaluate if adding different concentrations of seminal plasma on frozen-thawed equine spermatozoa affects sperm motility, viability and membrane status. Material and Methods: D ifferent breeds were used; four saddle stallions and two draft stallions. I n the first experiment thawed semen was centrifuged and in the second one it was not. Subsequent to that, the spermatozoa resuspended with 10, 20, 30% seminal plasma in phosphate buffered saline and pure seminal plasma (100%). Results: semen parameters of saddle stallions were not affected (p>0,05), but a possible toxic effect of pure seminal plasma was observed on sperm characteristics. S eminal plasma samples in draft breed got better rates in viable sperm with intact acrosome. A lower percentage was also found on spermatozoa with acrosome reaction than in control samples. T his category showed signif icant differences (p<0,05). Conclusions: Post-thawing spermatozoa incubation with seminal plasma can stop acrosome reaction, due to the low percentage of spermatozoa suffering true acrosome reaction (AU)

El banco de semen y la supervivencia espermática en un programa de reproducción asistida / The bank of semen and sperm survival in an assisted reproduction program

Objetivo: Analizar el efecto de las condiciones de almacenamiento de semen congelado sobre la fragmentación del ADN espermático, los parámetros seminales pre y post congelación, la recuperación espermática tras selección-capacitación de los donantes de semen (DS) utilizados en inseminación intrauterina y los resultados de gestación, teniendo en cuenta los efectos del tiempo de congelación y la ubicación de los viales en el contenedor criogénico. Material y Métodos: Se valoraron muestras de 17 (DS) criopreservadas entre el 2003-2008 y que fueron utilizadas en 77 procesos de inseminación intrauterina. El estudio de la fragmentación espermática se realizó mediante el método SCD (Sperm Cromatin Dispersion) (Halosperm ®, Indas). Se analizó la pérdida relativa de la motilidad progresiva post descongelación y post selección espermática (centrifugación de gradientes).También se evaluó la tasa de gestación/ciclo. Todos los parámetros se analizaron teniendo en cuenta el tiempo de almacenamiento al descongelar (≥ 3 o < 3 años) y la ubicación relativa de almacenamiento dentro del contenedor (1=más superficial, 11=más profundo). Resultados: El IFS (Indice de Fragmentación Espermático) fue en los 17 DS estudiados de 14,47±1,28. Cuando analizamos el IFS según el tiempo de almacenamiento ≥ 3 o < 3 años los resultados fueron similares (13,50±2,63 versus 15,85±2,66%) p < 0,39. Cuando el tiempo de almacenamiento fue superior a 3 años la motilidad progresiva (a+b) post descongelación fue menor que los almacenados menos de 3 años (3,7± 2,6 versus 41,9±2,4%) p<0,05. El mismo efecto se observó post selección espermática (36,9±2,9 versus 46,8±2,9%) p < 0,019. La tasa global de gestación/ciclo fue de 11,16%. No se observó diferencia significativa del IFS entre el nivel de más superficial a más profundo del contenedor criogénico (15,89±2,33 versus 12,88±0,64%) p < 0,25 ni tampoco de los parámetros seminales de motilidad progresiva (33,19±3,97 versus 38,33±4,72%) p < 0,40. Conclusiones: El índice de fragmentación espermático (IFS) no se modificó con el tiempo de criopreservación ni por el nivel de ubicación de las muestras en el contenedor criogénico. La motilidad progresiva (a+b) post descongelación y post selección espermática empeoró con el tiempo de almacenamiento pero no se vio influida por el nivel de almacenamiento (AU)

Effect of the conditions of storage of semen frozen on the fragmentation of the DNA and the pre and post freezing seminal parameters, as well as spermatic selection by density gradient semen donors (SD) used for intrauterine insemination; also to analyse pregnancy outcomes, and the effects of freezing time and vial location inside the cryogenic container. Material and Methods: Samples cryopreserved between 2003 and 2008 from 17 SD and used in 70 intrauterine insemination, were evaluated. The sperm DNA fragmentation was carried out of the SCD (Sperm Cromatin Dispersion) method ( Halosperm® Indas). Post-thaw and postsperm selection relative loss of progressive mobility was analysed (gradient centrifugation). Also the pregnancy/cycle rate was assessed. All parameters were analysed considering the storage time at thawing (≥ 3 or < 3 years), and their relative location within the container (1 = most superficial, 11 = deepest). Results: The time of criopreservation was 978±79 days (media±EEM). The IFS was 14.47±1.28 in 17 studied DS. When we analyze the IFS according to the time of storage (≥ 3 or <3) years the results were similar (13.50±2.63 versus 15.85±2.66 %) p < 0.39. When the time of storage was superior to 3 years the progressive motility (a+b) post thawed was minor, that the stored less than 3 years (34.7 ± 2.6 versus 41.9±2.4 %) p < 0.05. The same effect observed post spermatic selection (36.9±2.9 versus 46.8±2.9 %) p< 0.019. The global rate of gestation / cycle was 11.16 %. Was not observed significant difference of the IFS between the level of more superficial to deeper of the cryogenic container (15.89±2.33 versus 12.88±0.64 %) p <0.25 not neither of the seminal parameters of progressive motility (33.19±3.97 versus 38.33±4.72 %) p < 0.40. Conclusions: The spermatic index of fragmentation (IFS) they were not modified by the time of cryopreservation not by the level of location of the samples in the cryogenic container. The progressive motility (a+b) post thawing and post spermatic selection deteriorated with the time of storage but not see influenced by the level of storage (AU)

Organización y puesta en práctica de la reproducción asistida, periodo 2004-2005: reproducción asistida en un centro homologado de recogida de esperma en el Depósito de Sementales de Ávila. Organización y resultados / Assited reproduction in an approved center for the gathering of sperm in, the stallion farm in Avila. Organization and results

En el depósito de sementales de Ávila existe un centro homologado para la recogida de esperma que cumple todos los requisitos marcados por la Directiva 92/65/CE en lo referente a instalaciones, sementales etc. En este centro pueden ser aplicadas las diferentes biotecnologías reproductivas, siendo la de más frecuente uso la Inseminación Artificial ya sea con semen refrigerado o congelado; el empleo de esta técnica requiere un diagnostico ecográfico del momento óptimo de la inseminación y que sea aplicada con las suficientes garantías higiénicas. Los índices de preñez con semen refrigerado son similares a los obtenidos mediante el uso de la monta natural

In Avila's stallion farm, there is an approved center to gather sperm which meets all the requirements established by the European administration (92/65/CE) in relation to the installations, stallions etc. In this center all the different reproductive biotechnologies can be applied, being the most frequently used Artificial Insemination either with cooled semen or frozen semen; the use of this technique requires an ecographic diagnostic of the proximity of ovulation and it should be carried out the strictest hygienical procedures. The pregnancy rates with cooled semen are similar to those obtained during the natural service

Demanda y utilización de un banco de semen en pacientes oncológicos. Criopreservacion de semen pre-quimioterapia, pre-radioterapia y pre-cirugía / Request for utilization of a semen bank among oncological patients. Semen cryopreservation prior to chemotherapy, radiotherapy and surgery

OBJETIVO: El tratamiento del cáncer, tanto quirúrgico como radioterápico o farmacológico puede ocasionar subfertilidad o esterilidad irreversibles. La quimioterapia y la radioterapia tienen efectos citotóxicos sobre la gametogénesis, sin que exista por el momento una alternativa que permita su prevención. El objetivo del trabajo ha sido llevar a cabo una revisión de los criterios actuales de criopreservación de semen y su utilidad como método para preservar la fertilidad en pacientes con cáncer. METODO/RESULTADOS. Se ha realizado la revisión de un nutrido grupo de artículos originales y revisiones sistemáticas recientes sobre el tema, en los que el denominador común siempre fue el estado de la fertilidad tras el tratamiento del cáncer. CONCLUSIONES. Debe proponerse a todo paciente oncológico en edad fértil y con potencial deseo genésico la posibilidad de almacenar muestras congeladas de semen antes de comenzar los tratamientos oncológicos, con excepción de aquellos que sean azoospérmicos en el momento del diagnóstico (AU)

Avances en reproducción humana asistida. La (r)evolución lleva tiempo / No disponible

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Regulación de la medicina reproductiva en Norteamérica o el Salvaje Oeste de la medicina (Parte II)

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Consideraciones bioéticas de la ingeniería genética / Bioethical considerations of genetic engineering

La tecnología del ADN recombinante, popularmente llamada ingeniería genética, tiene numerosas aplicaciones, que han fascinado y alarmado al público. Desde mediados de la década de los 70, los beneficios de esta tecnología superan, por lo general, a los riesgos. Estos beneficios, plasmados en un aumento del conocimiento y en la mejora de los productos de diagnóstico y terapéuticos, han tenido un amplio impacto no sólo en el laboratorio, sino también en la vida diaria. El desarrollo de la ciencia y las nuevas direcciones científicas en la biología dictan la necesidad de que los científicos tengan una avanzada concepción filosófica del mundo para valorar acertadamente los resultados y perspectivas de cualquier ciencia biológica, incluso los de la ingeniería genética; es muy importante que tenga el enfoque biosocial. Se debe luchar irreconciliablemente contra las ideas pseudocientíficas y los intentos de utilizar los recientes adelantos de la biología con fines reaccionarios, antihumanos (AU)

Legal and ethical aspects in assisted reproductive techniques. The debate in Spain

La regulación española sobre Reproducción Asistida se convirtió en ley en Noviembre de 1988. El artículo 21 de esta Ley 35 / 1988 propone la creación de un Comité Nacional de Reproducción Asistida pero pasaron casi nueve años hasta su constitución en Marzo de 1997. Este Comité esta formado por 25 miembros nombrados por diferentes Ministerios, sociedades científicas y organizaciones sociales, y desempeña un papel asesor para el Ministerio de Sanidad. Durante los primeros dos años el Comité debatió sobre seis cuestiones que necesitaban una urgente revisión ética y legal: 1) el periodo legal de crioconservación del esperma , 2) crioconsevación de ovocitos , 3) el periodo legal de crioconservación de embriones y sus alternativas futuras, 4) la clonación humana, 5) el pago a donantes, 6) la investigación con embriones humanos. La discusión sobre estos temas y las conclusiones alcanzadas por el Comité fueron remitidas al Gobierno en dos informes diferentes. En la mayoría de los casos el Comité recomienda una modificación de la regulación actual, pero las iniciativas de cambio todavía no se han llevado a cabo (AU)

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