Brain structure morphology after being fixated with ethanol on electron microscope / Morfología de la estructura cerebral después de la fijación con etanol en microscopio electrónico

Fixation is one of the processes in preparing histology and pathology. The common material for fixation is buffered formalin including paraformaldehyde. However, the effect of the damaged cells, which is fixed for a long time, causes the research for other fixation materials to become necessary. In addition, paraformaldehyde is also harmful to human body and natural environment. Ethanol is one of the alternative fixation materials, which has been used for two hundred years. It has been used for many purposes, both in routine staining and immunohistochemistry. Nonetheless, no research confirms its effect on the electron microscope. The authors studied the effect of 50 % of ethanol on the cell membrane, organelles, and nucleus of Purkinje cells (Neuron purkinjense) observed on a light microscope and Transmitted Electron Microscope (TEM). Then it was compared to buffered formalin. In the light microscope, it shows that both of fixations have no different effects of the morphology of the cell membrane, cytoplasm, the nucleus of Purkinje cells and the neutrophils. We assume that our 50 % of ethanol concentration is almost the same as BF 10 % in the ability of hardening tissue and color absorption based on the previous study. In TEM, the structure of the cell membrane, organelles, and cytoplasm of Purkinje cell look broken in the cerebellum of 50 % of ethanol except for the nucleus. There was no significant difference diameter of the nucleus. It happened in general because of the shrinkage effect of ethanol. However, the authors recommend using 50 % of ethanol for routine staining.

La fijación es uno de los procesos en la preparación de muestras para histología y patología. El material más común para la fijación es la formalina tamponada. Sin embargo, el daño a las células que se mantienen en formalina durante mucho tiempo, hace necesario buscar otros materiales de fijación. Además, el paraformaldehido también es perjudicial para el cuerpo humano y el medio ambiente natural. El etanol es uno de los materiales de fijación alternativos que se ha utilizado durante muchos años, con diversos objetivos, tanto en la tinción de rutina como en la inmunohistoquímica. Sin embargo no se ha confirmdo su efecto con microscopio electrónico. Los autores estudiaron el efecto del 50 % de etanol sobre la membrana celular, los orgánulos y el núcleo de las células de Purkinje observados en un microscopio óptico y un microscopio de transmisión electrónico (TEM). Luego se comparó con la formalina tamponada. En el microscopio óptico se observó que ambas fijaciones no tienen efectos diferentes a la morfología de la membrana celular, el citoplasma, el núcleo de las células de Purkinje y los neutrófilos. Suponemos que nuestra concentración de 50 % de etanol es casi la misma que BF 10 % en la capacidad de endurecer el tejido y la absorción de color según el estudio anterior. En TEM, la estructura de la membrana celular, los orgánulos y el citoplasma de la célula de Purkinje presentaban daño en el cerebelo con un 50 % de etanol, a excepción del núcleo. No hubo diferencia significativa en el diámetro del núcleo. En general lo anterior se debió al efecto de contracción del etanol. En conclusión los autores recomiendan usar 50% de etanol para la tinción de rutina.

Structure of xanthan gum and cell ultrastructure at different times of alkali stress

Abstract The effect of alkali stress on the yield, viscosity, gum structure, and cell ultrastructure of xanthan gum was evaluated at the end of fermentation process of xanthan production by Xanthomonas campestris pv. manihotis 280-95. Although greater xanthan production was observed after a 24 h-alkali stress process, a lower viscosity was observed when compared to the alkali stress-free gum, regardless of the alkali stress time. However, this outcome is not conclusive as further studies on gum purification are required to remove excess sodium, verify the efficiency loss and the consequent increase in the polymer viscosity. Alkali stress altered the structure of xanthan gum from a polygon-like shape to a star-like form. At the end of the fermentation, early structural changes in the bacterium were observed. After alkali stress, marked structural differences were observed in the cells. A more vacuolated cytoplasm and discontinuities in the membrane cells evidenced the cell lysis. Xanthan was observed in the form of concentric circles instead of agglomerates as observed prior to the alkali stress.

The dynamic structure of Spitzenkörpers of Trichosporon asahii examined by the fluorescent probe FM4-64

Abstract The Spitzenkörper is a dynamic and specialized multicomponent cell complex present in the tips of hyphal cells. The amphiphilic styryl dye FM4-64 was found to be ideal for imaging the dynamic changes of the apical vesicle cluster within growing hyphal tips. It is widely used as a marker of endocytosis and to visualize vacuolar membranes. Here we performed uptake experiments using FM4-64 to study the dynamic of the Spitzenkörper in Trichosporon asahii. We observed that Spitzenkörpers were present at the tip of the budding site of the spore, blastospore, and the germ tube of T. asahii. We also found that Spitzenkörpers were present at the tip of the hyphae as well as the subapical regions. Cytochalasin D, an inhibitor of actin polymerization, leads to abnormal Spitzenkörper formation and loss of cell polarity.

Scientific use of the finite element method in Orthodontics

INTRODUCTION: The finite element method (FEM) is an engineering resource applied to calculate the stress and deformation of complex structures, and has been widely used in orthodontic research. With the advantage of being a non-invasive and accurate method that provides quantitative and detailed data on the physiological reactions possible to occur in tissues, applying the FEM can anticipate the visualization of these tissue responses through the observation of areas of stress created from applied orthodontic mechanics. OBJECTIVE: This article aims at reviewing and discussing the stages of the finite element method application and its applicability in Orthodontics. RESULTS: FEM is able to evaluate the stress distribution at the interface between periodontal ligament and alveolar bone, and the shifting trend in various types of tooth movement when using different types of orthodontic devices. Therefore, it is necessary to know specific software for this purpose. CONCLUSIONS: FEM is an important experimental method to answer questions about tooth movement, overcoming the disadvantages of other experimental methods. .

INTRODUÇÃO: o Método de Elementos Finitos (MEF) é um recurso da Engenharia empregado para calcular o estresse e a deformação de estruturas complexas, e tem sido amplamente utilizado nas pesquisas em Ortodontia. Apresenta a vantagem de ser um método não-invasivo e preciso, que fornece dados quantitativos e detalhados acerca das reações fisiológicas que podem ocorrer nos tecidos. OBJETIVO: esse artigo pretende realizar uma revisão da literatura sobre as etapas para realização do Método de Elementos Finitos, bem como de sua aplicabilidade na Ortodontia. RESULTADOS: o MEF é capaz de avaliar a distribuição do estresse na interface entre o ligamento periodontal e o osso alveolar, bem como a tendência de deslocamento em diversos tipos de movimentos dentários, quando utilizados diferentes tipos de aparelhos. Para tanto, é necessário conhecimento de softwares específicos para esse fim. CONCLUSÕES: o MEF é um importante método experimental que pode esclarecer questionamentos acerca da movimentação dentária, superando as desvantagens de outros métodos experimentais. .

The adaptation problems of patients undergoing hemodialysis: socio-economic and clinical aspects / Problemas adaptativos de pacientes em hemodiálise: aspectos socioeconômicos e clínicos / Problemas adaptativos de pacientes en hemodiálisis: aspectos socioeconómicos y clínicos

OBJECTIVES: to identify adaptation problems under Roy's Model in patients undergoing hemodialysis and to correlate them with the socioeconomic and clinical aspects. METHOD: a transversal study, undertaken using a questionnaire. The sample was made up of 178 individuals. The Chi-squared and Mann-Whitney U tests were undertaken. RESULTS: the adaptation problems and the socioeconomic and clinical aspects which presented statistical associations were: Hyperkalemia and age; Edema and income; Impairment of a primary sense: touch and income; Role failure and age; Sexual dysfunction and marital status and sex; Impairment of a primary sense: vision and years of education; Intolerance to activity and years of education; Chronic pain and sex and years of education; Impaired skin integrity and age: Hypocalcemia and access; Potential for injury and age and years of education; Nutrition below the organism's requirements and age; Impairment of a primary sense: hearing and sex and kinetic evaluation of urea; Mobility in gait and/or coordination restricted, and months of hemodialysis; and, Loss of ability for self-care, and months of hemodialysis and months of illness. CONCLUSION: adaptation problems in the clientele undergoing hemodialysis can be influenced by socioeconomic/clinical data. These findings contribute to the development of the profession, fostering the nurse's reflection regarding the care. .

OBJETIVOS: identificar os problemas adaptativos de Roy em pacientes submetidos a hemodiálise e correlacioná-los aos aspectos socioeconômicos e clínicos. MÉTODO: estudo transversal, realizado através de um formulário. A amostra foi de 178 indivíduos. Efetuaram-se os testes qui-quadrado e U de Mann-Whitney. RESULTADOS: os problemas adaptativos e os aspectos socioeconômicos e clínicos que apresentaram associações estatísticas foram: hipercalemia e idade; edema e renda; deficiência de um sentido primário: tátil e renda; falha no papel e idade; disfunção sexual e estado civil e sexo; deficiência de um sentido primário: visão e anos de estudo; intolerância à atividade e anos de estudo; dor crônica e sexo e anos de estudo; integridade da pele prejudicada e idade; hipocalcemia e acesso; potencial para lesão e idade e anos de estudo; nutrição menor que as necessidades do organismo e idade; deficiência de um sentido primário: audição e sexo e avaliação cinética da ureia; mobilidade andar e/ou coordenação restritas e meses de hemodiálise e perda de habilidade de autocuidado e meses de hemodiálise e meses de doença. CONCLUSÃO: problemas adaptativos da clientela hemodialítica podem sofrer influências de dados socioeconômicos/clínicos. Tais achados contribuem para o desenvolvimento da profissão, proporcionando reflexão por parte do enfermeiro acerca do cuidado. .

OBJETIVOS: identificar los problemas adaptativos de Roy en pacientes sometidos a hemodiálisis y correlacionarlos a los aspectos socioeconómicos y clínicos. MÉTODO: estudio transversal, realizado a través de un formulario. La muestra fue de 178 individuos. Se efectuaron las pruebas Chi-cuadrado y U de Mann-Whitney. RESULTADOS: los problemas adaptativos y los aspectos socioeconómicos y clínicos que presentaron asociaciones estadísticas fueron: Hiperkalemia y edad; Edema y renta; Deficiencia de un sentido primario: táctil y renta; Fracaso en el papel y edad; Disfunción sexual y estado civil y sexo; Deficiencia de un sentido primario: visión y años de estudio; Intolerancia a la actividad y años de estudio; Dolor crónico y sexo y años de estudio; Integridad de la piel perjudicada y edad; Hipocalcemia y acceso; Potencial para lesión y edad y años de estudio; Nutrición menor que las necesidades del organismo y edad; Deficiencia de un sentido primario: audición y sexo y evaluación cinética de la urea; Movilidad andar y/o coordinación restringidas y meses de hemodiálisis; y, Pérdida de habilidad de autocuidado y meses de hemodiálisis y meses de enfermedad. CONCLUSIÓN: los problemas adaptativos de la clientela hemodialítica pueden sufrir influencias de datos socioeconómicos/clínicos. Esos hallazgos contribuyen para el desarrollo de la profesión, permitiendo la reflexión del enfermero acerca del cuidado. .

Antifungal activity of the ethanolic extracts of Punica granatum L. and evaluation of the morphological and structural modifications of its compounds upon the cells of Candida spp.

Ethanolic crude extracts prepared from the arils and seeds, pericarp, peels and from the whole fruit of Punica granatum, known as pomegranate, had their antifungal activity tested against Candida spp. The ethanolic crude extracts were analyzed by Mass Spectrometry and yielded many compounds such as punicalagin and galladydilacton. The extracts from the pericarp and peel showed activity against Candida spp., with MICs of 125 µg/mL. The effect of pericarp and peel extracts upon the morphological and structure of C. albicans and C. krusei were examined by scanning and transmission electron microscopy, with the visualization of an irregular membrane and hyphae, formation of vacuoles and thickening of the cell wall. The data obtained revealed potential antimicrobial activity against yeasts cells of the Candida genus, and the bioactive compounds could be responsible for changes in cell morphology and structure. The data obtained open new perspectives for future research in continuation to this study, where information such as determination of the site of action of the compounds could contribute to an alternative therapy against these organisms.

Autophagy, apoptosis and organelle features during cell exposure to cadmium

Cadmium (Cd) induces several effects in different tissues, but our knowledge of the toxic effects on organelles is insufficient. To observe the progression of Cd effects on organelle structure and function, HuH-7 cells (human hepatic carcinoma cell line) were exposed to CdCl2 in increasing concentrations (1 microM - 20 microM) and exposure times (2 h - 24 h). During Cd treatment, the cells exhibited a progressive decrease in viability that was both time- and dose-dependent. Cd treated cells displayed progressive morphological changes that included cytoplasm retraction and nuclear condensation preceding a total loss of cell adhesion. Treatment with 10 microM for 12 h led to irreversible damages. Before these drastic and irreparable damages, treated cells (5 microM for 12 h) presented a progressive loss of mitochond rial function and cytoplasm acidification as well as dysfunction and disorganization of microfilaments and endoplasmic reticulum. These damages led to the induction of apoptotic events and an increase in autophagic bodies in the cytoplasm. These results revealed that Cd affects multiple intra-cellular targets that induce alterations in the mitochondria, cytoskeleton, endoplasmic reticulum and acidic compartments, ultimately culminating in cell death via apoptotic and autophagic pathways.

Deciphering the contribution of lipid droplets in leprosy: multifunctional organelles with roles in Mycobacterium leprae pathogenesis

Leprosy is an infectious disease caused by Mycobacterium leprae that affects the skin and nerves, presenting a singular clinical picture. Across the leprosy spectrum, lepromatous leprosy (LL) exhibits a classical hallmark: the presence of a collection of M. leprae-infected foamy macrophages/Schwann cells characterised by their high lipid content. The significance of this foamy aspect in mycobacterial infections has garnered renewed attention in leprosy due to the recent observation that the foamy aspect represents cells enriched in lipid droplets (LD) (also known as lipid bodies). Here, we discuss the contemporary view of LD as highly regulated organelles with key functions in M. leprae persistence in the LL end of the spectrum. The modern methods of studying this ancient disease have contributed to recent findings that describe M. leprae-triggered LD biogenesis and recruitment as effective mycobacterial intracellular strategies for acquiring lipids, sheltering and/or dampening the immune response and favouring bacterial survival, likely representing a fundamental aspect of M. leprae pathogenesis. The multifaceted functions attributed to the LD in leprosy may contribute to the development of new strategies for adjunctive anti-leprosy therapies.

Prokaryotic cells: structural organisation of the cytoskeleton and organelles

For many years, prokaryotic cells were distinguished from eukaryotic cells based on the simplicity of their cytoplasm, in which the presence of organelles and cytoskeletal structures had not been discovered. Based on current knowledge, this review describes the complex components of the prokaryotic cell cytoskeleton, including (i) tubulin homologues composed of FtsZ, BtuA, BtuB and several associated proteins, which play a fundamental role in cell division, (ii) actin-like homologues, such as MreB and Mb1, which are involved in controlling cell width and cell length, and (iii) intermediate filament homologues, including crescentin and CfpA, which localise on the concave side of a bacterium and along its inner curvature and associate with its membrane. Some prokaryotes exhibit specialised membrane-bound organelles in the cytoplasm, such as magnetosomes and acidocalcisomes, as well as protein complexes, such as carboxysomes. This review also examines recent data on the presence of nanotubes, which are structures that are well characterised in mammalian cells that allow direct contact and communication between cells.

Avaliação da maturidade pulmonar fetal pela contagem dos corpos lamelares no líquido amniótico / Evaluation of fetal lung maturity by lamellar bodies counting in amniotic fluid

Objetivo: comparar o teste de contagem de corpos lamelares (CCL) no líquido amniótico com o teste da polarização fluorescente (PF) como parâmetro diagnóstico para avaliação da maturidade pulmonar fetal. Método: estudo transversal, analítico e controlado realizado com 60 gestantes atendidas no período de março de 2002 a dezembro de 2007. Foram colhidas amostras de líquido amniótico e realizados os testes de CCL e PF (TDxFLM II), considerados de referência, e comparados à presença ou ausência da Síndrome do Desconforto Respiratório (SDR). Foram estabelecidos valores de corte para maturidade de 30 mil corpos lamelares/µL para o teste da CCL e 55 mg/g de albumina para o PF. Foram avaliadas as características maternas e perinatais, a evolução neonatal e o desempenho dos testes diagnósticos para predição da maturidade pulmonar fetal. Na análise estatística, foram utilizadas medidas descritivas e calculados os valores referentes à sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo dos testes, considerando-se significativos valores de p<0,05. Resultados: a idade materna variou entre 15 e 43 anos, com média de 26,6 anos. A idade gestacional variou entre 24,3 e 41,6 semanas, com média de 35,1 semanas. A Síndrome do Desconforto Respiratório foi diagnosticada em 13,3 por cento dos neonatos. As características perinatais, como peso, índice de Apgar, incidência de SDR, foram comparadas aos resultados dos testes de CCL e PF, sendo observada uma correspondência, estatisticamente significativa (p<0,05), entre os grupos de neonatos clinicamente classificados como imaturos e maduros em ambos os testes. Os testes foram concordantes em 68,3 por cento dos casos. Quando se comparou o teste da PF com o teste da CCL, a sensibilidade foi de 100 por cento para ambos, e a especificidade do teste da CCL foi superior (73,1 por cento), quando comparado com o teste de PF (51,9 por cento). O padrão-ouro para determinação da maturidade fetal é a ocorrência da SDR. O valor...

Purpose: to compare the lamellar body number density (LBND) count in amniotic fluid using the fluorescent polarization (FP) test as a diagnostic parameter for the assessment of fetal pulmonary maturity. Method: this was an analytical, controlled cross-sectional study conducted on 60 pregnant women from March 2002 to December 2007. Amniotic fluid specimens were obtained by amniocentesis or at the time of caesarean section, and submitted to the LBND and FP tests (TDxFLM®, Abbott Laboratories), the latter considered to be a reference test, and compared in terms of the presence or absence of respiratory distress syndrome (RDS). Cut-off values for maturity were established at 30,000 lamellar bodies/µL for the LBND test and 55 mg/g albumin for the FP test. Maternal and perinatal characteristics and neonatal evolution were evaluated, and the performance of the diagnostic tests regarding fetal pulmonary maturity was determined. In the statistical analysis, descriptive measures were used and the sensitivity, specificity and positive and predictive values of the tests were determined with the level of significance set at p<0.05. Results: maternal age ranged from 15 to 34 years (mean: 26.6 years) and gestational age ranged from 24.3 to 41.6 weeks (mean: 35.1 weeks). RDS was diagnosed in 35.1 percent of neonates. Perinatal characteristics such as weight, Apgar score, and RDS incidence were compared to the results of the LBND and FP tests and a significant correspondence (p<0.05) was observed between the groups of neonates clinically classified as mature and immature in both tests. The tests were concordant in 68.3 percent of the cases. Comparison of the PF and LBND tests revealed 100 percent specificity for both and a higher specificity for the LBND test (73.1 percent as opposed to 51.9 percent for the PF test). The gold standard for the determination of fetal maturity is the occurrence of RDS. The positive predictive value of the LBND test was higher (36.4%) than that...

Visualización de orgánulos celulares en microscopía de fluorescencia / Display cell organelles in fluorescence microscopy

Conferencia Presentada en el marco del del 2do Congreso Nacional de la Asociación de Anatomistas de Córdoba (ADACO), y el 1er Encuentro latinoamericano de Anatomistas y el 1erEncuentro Latinoamericano de Histólogos y Embriólogos. El resultado de tratar células fijadas o vivas con fluorocromos suele ser muy distinto, dependiendo fundamen-talmente de la membrana plasmática. Fluorocromos que tiñen algunos componentes en células fijadas, marcanotras estructuras en células vivas. El marcaje celular vital es ahora muy apreciado para visualizar orgánulos, evaluar la viabilidad celular y estudiar la incorporación de compuestos con actividad biológica.

The result of treating fixed or live cells with fluorescent dyes is often very different, depending fundamentaltally of the plasma membrane. Some components fluorochromes stained fixed cells labeled other structures in living cells. The vital cell labeling is now appreciated to visualize organelles assess cell viability and to study the incorporation of compounds with biological activity.

Proteínas excretadas/secretadas (ESAs) de Toxoplasma gondii: emprego no diagnóstico sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com Aids / Excreted/secreted proteins (ESAs) of Toxoplasma gondii: use in the sorologic dianosis of cerebral toxoplasmosis in Aids patients

Apesar dos recentes avanços no diagnóstico molecular e sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com aids, ainda existem limitações na prática clínica. O tratamento específico é usualmente iniciado através do diagnóstico presuntivo, baseado em achados clínicos e radiológicos. O presente estudo avalia o emprego das proteínas excretadas/secretadas (ESAs) de Toxoplasma gondii no diagnóstico sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com aids. A escolha do antígeno foi baseada naqueles produzidos por taquizoítos, uma vez que esta forma é responsável pela disseminação da infecção, assim como estimulação da resposta imune celular e humoral. Pelo método de ELISA (ESA-ELISA), o pool de ESAs recuperadas de sobrenadantes de culturas de células VERO infectadas com taquizoítos (cepa RH) 48 horas pós-infecção teve alta especificidade para soros de pacientes com toxoplasmose cerebral. As reações foram comparadas com a ELISA utilizada na sorologia convencional, na qual se emprega como antígeno, um extrato bruto de taquizoítos. Os ensaios foram realizados em 300 amostras de soros divididos em: Grupo I - 106 soros de pacientes com toxoplasmose cerebral e aids (sintomáticos); Grupo II - 99 soros de indivíduos com toxoplasmose crônica (soropositivos), excluindo-se pela suspeita clínica e triagem da Instituição de origem, os soros suspeitos de HIV positivo; e Grupo III - 95 soros de indivíduos sadios sem toxoplasmose (controle). A ELISA convencional não foi capaz de distinguir os Grupos I e II que apresentaram similar reatividade. Em contraste, ESA-ELISA distinguiu soros de pacientes com toxoplasmose cerebral (p<0,05). Estes soros foram três vezes mais reativos do que aqueles de indivíduos soropositivos (médias de 12.6 para 4.2). Os resultados foram confirmados pela concordância com os resultados em western blotting e pela análise estatística. Esses dados sugerem que anticorpos anti-ESAs estão preferencialmente presentes em pacientes com a infecção ativa. Desta form...

Proteínas excretadas/secretadas(ESAs) de Toxoplasma gondii: emprego no diagnóstico sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com Aids

Apesar dos recentes avanços no diagnóstico molecular e sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com aids, ainda existem limitações na prática clínica. O tratamento específico é usualmente iniciado através do diagnóstico presuntivo, baseado em achados clínicos e radiológicos. O presente estudo avalia o emprego das proteínas excretadas/secretadas (ESAs) de Toxoplasma gondii no diagnóstico sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com aids. A escolha do antígeno foi baseada naqueles produzidos por taquizoítos, uma vez que esta forma é responsável pela disseminação da infecção, assim como estimulação da resposta imune celular e humoral. Pelo método de ELISA (ESA-ELISA), o pool de ESAs recuperadas de sobrenadantes de culturas de células VERO infectadas com taquizoítos (cepa RH) 48 horas pós-infecção teve alta especificidade para soros de pacientes com toxoplasmose cerebral. As reações foram comparadas com a ELISA utilizada na sorologia convencional, na qual se emprega como antígeno, um extrato bruto de taquizoítos. Os ensaios foram realizados em 300 amostras de soros divididos em: Grupo I - 106 soros de pacientes com toxoplasmose cerebral e aids (sintomáticos); Grupo II - 99 soros de indivíduos com toxoplasmose crônica (soropositivos), excluindo-se pela suspeita clínica e triagem da Instituição de origem, os soros suspeitos de HIV positivo; e Grupo III - 95 soros de indivíduos sadios sem toxoplasmose (controle). A ELISA convencional não foi capaz de distinguir os Grupos I e II que apresentaram similar reatividade. Em contraste, ESA-ELISA distinguiu soros de pacientes com toxoplasmose cerebral (p<0,05). Estes soros foram três vezes mais reativos do que aqueles de indivíduos soropositivos (médias de 12.6 para 4.2). Os resultados foram confirmados pela concordância com os resultados em western blotting e pela análise estatística. Esses dados sugerem que ...

Avaliação morfológica e dos mecanismos de mobilização de Ca2+ pela glicose e acetilcolina em células pancreáticas humanas / Morphologic evaluation and Ca2+ mobilization by glicose and acetylcholine in human pancreatic cells

OBJETIVOS: Avaliar a morfologia das organelas e do citoesqueleto em células pancreáticas humanas cultivadas e a mobilização de Ca2+ em resposta à glicose e ACh por medidas fluorimétricas. MATERIAL E MÉTODOS: As células foram semeadas em lamínulas, fixadas e marcadas com uma combinação de fluoróforos: o núcleo foi corado com DAPI e as mitocôndrias, com Mytotracker Red. Foram utilizados faloidina e anticorpos secundários conjugados com Alexa Fluor verde e vermelho fluorescentes (488 e 594) para identificar proteína actina F e receptor muscarínico tipo M3, respectivamente. Para estudar a mobilização de Ca2+, as células foram incubadas com fura-2/AM. RESULTADOS: As células pancreáticas humanas apresentaram morfologia preservada com grande quantidade de mitocôndrias. Na região de maior densidade celular, evidenciou-se as pseudo-ilhotas e os receptores muscarínicos M3. Por meio da elevação da [Ca2+]c, devido à ação da glicose e ACh, mostrou-se preservação da capacidade responsiva a esses estímulos e foi dependente de concentração desses agonistas. A glicose promoveu uma resposta sustentada e a ACh induziu uma resposta bifásica. CONCLUSÃO: As células pancreáticas humanas cultivadas conservaram sua morfologia. A mobilização de Ca2+ em resposta à glicose e a ACh confirma a sua funcionalidade. Os receptores muscarínicos M3 estão presentes nessas células.

AIMS: The proposal of this study was to analyze morphology of the organelles and cytoskeleton in human pancreatic cells cultured and the mobilization of the cytosolic calcium ([Ca2+]c) in response to glucose and ACh by fluorimetry method. MATERIAL AND METHODS: The cells were plated on glass coverslips, fixed and stained with a combination of fluorophores: the nuclei were stained with DAPI and mitochondria with Mytotracker Red. It was used phalloidin and the secondary antibodies Alexa Fluor conjugated green and red-fluorescent (488 and 594) to identify the protein cell actin F and type M3 muscarinic receptor respectively. The cells also were loaded with fura-2/AM to study Ca2+ mobilization. RESULTS: The human pancreatic cells show characteristics morphologically preserved with great amount of mitochondria. In region major cell density was evidenced pseudo-islets and type M3 muscarinic receptors. Through increase of [Ca2+]c due to action of glucose and ACh were shown that the cellsÆ capacity to respond to these stimuli were conserved. The elevation of the [Ca2+]c depended on concentration by glucose-induced promoting sustained phase and ACh-induced a biphasic response. CONCLUSION: The morphologic characteristics of human pancreatic cells cultured were preserved. The Ca2+ mobilization in response to glucose and ACh confirmed its functionality. The expression of the M3 muscarinic receptors in human pancreatic cell cultured was demonstrated.

Microwave-induced fast decalcification of rat bone for electron microscopic analysis: an ultrastructural and cytochemical study

Bone decalcification is a time-consuming process. It takes weeks and preservation of the tissue structure depends on the quality and velocity of the demineralization process. In the present study, a decalcification methodology was adapted using microwaving to accelerate the decalcification of rat bone for electron microscopic analysis. The ultrastructure of the bone decalcified by microwave energy was observed. Wistar rats were perfused with paraformaldehyde and maxillary segments were removed and fixed in glutaraldehyde. Half of specimens were decalcified by conventional treatment with immersion in Warshawsky solution at 4ºC during 45 days, and the other half of specimens were placed into the beaker with 20 mL of the Warshawsky solution in ice bath and thereafter submitted to irradiation in a domestic microwave oven (700 maximum power) during 20 s/350 W/±37ºC. In the first day, the specimens were irradiated 9 times and stored at 40ºC overnight. In the second day, the specimens were irradiated 20 times changing the solution and the ice after each bath. After decalcification, some specimens were postfixed in osmium tetroxide and others in osmium tetroxide and potassium pyroantimonate. The specimens were observed under transmission electron microscopy. The results showed an increase in the decalcification rate in the specimens activated by microwaving and a reduction of total experiment time from 45 days in the conventional method to 48 hours in the microwave-aided method.

A preservação da estrutura de ossos é dependente da qualidade e da velocidade em que ocorre o processo de desmineralização. Neste estudo foi observada a ultraestrutura de maxila de rato descalcificada utilizando microondas. Ratos Wistar sofreram perfusão com paraformaldeído e o segmento de maxila retirado e fixado em glutaraldeído. Após esta etapa algumas amostras foram descalcificadas por imersão em solução de Warshawsky durante 45 dias a 4(0)C. Outras amostras foram submetidas a irradiação por microondas (forno de microondas doméstico 700 Watts de potência), durante 20 s/350 W/ ± 37ºC. No primeiro dia foram realizadas um total de 9 irradiações e os espécimes foram deixadas posteriormente a 4ºC por 12 h na solução descalcificadora sem agitação. No segundo dia, os fragmentos foram submetidos à nova irradiação totalizando 20 banhos, trocando-se a solução e o gelo a cada banho. A seguir algumas amostras foram pós-fixadas com tetróxido de ósmio e outras com tetróxido de ósmio e piroantimonato de potássio. As amostras foram observadas em microscópio eletrônico de transmissão. Os resultados mostraram que o processo de descalcificação ativado por microondas reduziu para 48 h o período de descalcificação, o qual pelo método tradicional ocorre em 45 dias.

Mitocondriopatías: las manifestaciones de una organela enferma ¿ quién hace el diagnóstico? / Mitochondrial disease: the manifestations of a sick organoid: who is to be making the diagnosis?

Las enfermedades mitocondriales son relativamente comunes y resultan de defectos en la cadena respiratoria de esa organela. Sus manifestaciones pueden ser multisistématicas o localizadas en un solo tejido. Además, pueden ser adquiridas en forma esporádica o por herencia mendeliana o materna.Su diagnostico es un desafío y requiere de un trabajo multidisciplinario ya que en los niños suelen presentarse con un gran espectro clínico y alteraciones bioquímicas no especificas o difíciles de demostrar. Algunas manifestaciones son funcionales y no tienen un correlato morfológico claro en la microscopia óptica, y el examen ultraestructural, si bien puede ser de ayuda cuando se lo considera junto a otros hallazgos, por si solo es inespecífico. En esta revisión se analizan las características biológicas de las mitocondrias, la clasificación y características clínicas, de laboratorio, anatomo-patológicas y genéticas de sus enfermedades.

Secretory organelles of pathogenic protozoa

Processos de secreção celular desempenham papel relevante na biologia e no ciclo de vida de protozoários patogênicos. A presente revisão analisa, sob uma perspectiva de biologia celular, o processo de secreção em (a) micronemas, roptrias e grânulos densos encontrados em membros do grupo Apicomplexa, onde essas estruturas participam da penetração do protozoário no interior da célula hospedeira, na sua sobrevivência intravacuolar e no posterior egresso da célula hospedeira, (b) a fenda de Maurer, encontrada em Plasmodium, uma estrutura envolvida na secreção de proteínas sintetizadas pelo protozoário intravacuolar e transportada, através de vesículas, para a superfície do eritrócito, (c) a secreção de macromoléculas na bolsa flagelar de tripanosomatídeos, e (d) a secreção de proteínas que fazem parte da parede cística de Giardia e Entamoeba e que se concentram nas vesículas de encistamento.

Caracterização e identificação de uma proteina secretada no sobrenadante de culturas celulares infectadas por toxoplasma gondii / Characterization and identification of a secreted protein in the swimming of infected cultures cellular for toxoplasma gondii

A toxoplasmose é uma infecção causada por um protozoário com ampla propagação na natureza. É uma zoonose de felídeos com características próprias, na qual o parasita, Toxoplasma gondii, infecta células nucleadas de vários animais na escala zoológica. No Brasil a incidência é alta em várias regiões do país e acomete indivíduos de todas as esferas sociais. As lesões mais sérias são encontradas em mulheres que adquiriram a infecção durante o período de gestação, pessoas que sofrem de algum tipo de imunossupressão ou imunocompetentes que tiveram a infecção mal diagnosticada e não receberam tratamento adequado. Durante o estabelecimento da doença, diferentes processos acontecem no hospedeiro em resposta à entrada dos parasitas nas células. As proteínas produzidas pelo parasita são responsáveis por vários fenômenos envolvendo interações entre os organismos. Elas participam dos mecanismos de escape do sistema imune e estabelecem condições de permanência do parasita na célula. O presente estudo teve como objetivo analisar proteínas de Toxoplasma gondii liberadas no sobrenadante de culturas de células infectadas, identificá-las e avaliar sua capacidade imunogênica. Foram utilizados taquizoítos para infectar células VERO. Os sobrenadantes resultantes das culturas foram retirados em diferentes tempos após a infecção, filtrados e concentrados. A análise por SDS-PAGE mostrou a presença de uma proteína majoritária com massa molecular de cerca de 70 kDa. Pelas análises realizadas neste estudo, acreditamos que esta proteína é liberada no momento em que o parasita penetra na célula hospedeira. O concentrado protéico foi purificado por cromatografia de troca iônica e, com a proteína de 70 kDa purificada, determinamos os primeiros 20 aminoácidos da região N-terminal. A seqüência é inédita pois quando foi comparada com as já descritas na literatura não foi observada nenhuma homologia. Soros de indivíduos portadores de toxoplasmose apresentam alta reatividade contra a proteína. Ela mostrou-se também altamente específica para T. gondii, pois soros de indivíduos saudáveis ou de outras infecções não foram reativos para protéina em ELISA e "Immunoblot". Anticorpos de camundongos imunizados com a proteína reconheceram especificamente em "Immunoblot", lisado bruto de taquizoítos. Estes dados sugerem que a proteína de cerca de 70 kDa participa do processo entrada dos taquizoítos na célula hospedeira e desencadeia uma resposta imune importante. Contudo, mais estudos devem ser...

A unique mechanism of nuclear division in Giardia lamblia involves components of the ventral disk and the nuclear envelope

The fine structure of the binucleate, parasitic protist Giardia lamblia during interphase and divisional stages was studied by serial thin sectioning and three-dimensional reconstructions. The earlier sign of nuclear division is the development of a few peripheral areas of densely packed chromatin directly attached to the inner nuclear envelope. An intracytoplasmic sheet of ventral disk components grows from the cell periphery towards one of the nuclei, apparently constricting this nucleus, which becomes located at a ventral bulge. After the basal bodies become duplicated, a full nuclear division occurs in trophozoites, giving two pairs of parent-daughter nuclei. This full division occurs in a dorsal-ventral direction, with the resulting nuclear pairs located at the sides of the two sets of basal bodies. A new ventral disk is formed from the disk-derived sheets in the cell harboring the four nuclei. Cytokinesis is polymorphic, but at early stages is dorsal-to-dorsal. Encysting trophozoites show the development of Golgi cisternae stacks and dense, specific secretory granules. 3-D reconstructions show that cysts contain a single pair of incompletely strangled nuclei. The dividing Giardia lacks a typical, microtubular spindle either inside or outside the nuclei. The nuclear envelope seems to be the only structure involved in the final division of the parent-daughter nuclei.

Fine structural study of the red seaweed Gymnogongrus torulosus (Phyllophoraceae, Rhodophyta)

The present study analyzed several characters of the red seaweed Gymnogongrus torulosus, such as cellular structure of the thallus, cuticle, pit plug and cell wall ultrastructure, and morphology of some organelles like plastids, Golgi bodies and mitochondria. Also, anomalous chloroplasts with thylakoid disorganization were found in medullary cells. The significance of this thylakoid disposition is still unclear. This is one of the first studies focused on the fine structure of a red alga recorded in Argentina.