Tracing probiotic producing bacterial species from gut of buffalo (Bubalus bubalis), South-East-Asia / Rastreando espécies bacterianas produtoras de probióticos de intestino de búfalo (Bubalus bubalis), sudeste da Ásia

Due to extensive application of antibiotics as growth promoters in animal feed, antimicrobial resistance has been increased. To overcome this challenge, rumen microbiologists search for new probiotics to improve the rate of livestock production. The present study was aimed to isolate and evaluate breed-specific lactic acid bacteria (LAB) as potential animal probiotics. The current study was conducted during 10 months from July 2020 to April 2021, in which a total of n=12 strains were isolated from different samples including milk, rumen, and feces of Nilli Ravi Buffaloes. These isolates were evaluated for their antimicrobial potential against common animal pathogens (Bacillus spp., E. coli, Staphylococcus aureus, Salmonella spp., Listeria spp.). All the isolates were identified using 16S rRNA gene sequencing and the phylogenetic analyses inferred that these strains showed close relations to the species of various genera; Enterococcus lactis, Pediococcus pentosaceus, Bacillus subtilis Weissella cibaria, Weissella soli, Bacillus tequilensis, Weissella bombi, Bacillus licheniformis, Lactococcus lactis, Bacillus megaterium, Lactobacillus ruminis, and Lactococcus lactis. NMCC-Ru2 has exhibited the enormous potential of antimicrobial activity, 28 mm, for Salmonella typhimurium;23 mm for Listeria monocytogenes 21 mm for E.coil. Highest resistance was seen in NMCC-Ru2 agasint test antbiotic, like 25.5 mm for Tetracycline. Overall results revesl that the probiotic profile of isolates was achieved using standard criteria, particularly with animal probiotic properties

Devido à extensa aplicação de antibióticos como promotores de crescimento na alimentação animal, a resistência aos antimicrobianos aumentou. Para superar esse desafio, os microbiologistas do rúmen buscam novos probióticos para melhorar a produtividade do gado. O presente estudo teve como objetivo isolar e avaliar bactérias lácticas específicas de raças (BAL) como potenciais probióticos animais. 12 cepas foram isoladas de diferentes amostras, incluindo leite, rúmen e fezes de búfalos Nilli Ravi. Esses isolados foram avaliados quanto ao seu potencial antimicrobiano contra patógenos animais comuns (Bacillus spp., E. coli, Staphylococcus aureus, Salmonella spp., Listeria spp.). Todos os isolados foram identificados por meio do sequenciamento do gene 16S rRNA e as análises filogenéticas inferiram que essas cepas apresentaram estreita relação com as espécies de vários gêneros; Enterococcus lactis, Pediococcus pentosaceus, Bacillus subtilis, Weissella cibaria, Weissella soli, Bacillus tequilensis, Weissella bombi, Bacillus licheniformis, Lactococcus lactis, Bacillus megaterium, Lactobacillus ruminis e Lactococcus lactis. O perfil probiótico dos isolados foi obtido usando critérios padrão, particularmente com propriedades probióticas animais.

Effects of Pasturella Multocida B: 2 and its immunogens (LPS and OMP) on reproductive hormones in Nili-Ravi Buffaloes / Efeitos de Pasteurella multocida B: 2 e seus imunógenos (LPS e OMP) em hormônios reprodutivos em búfalos Nili-Ravi

Abstract Livestock is a fundamental part of the agriculture industry in Pakistan and contributes more than 11.53% to GDP. Among livestock species, the buffaloes are regarded as the black gold of Pakistan. Being the highest milk producers globally, Nili-Ravi buffaloes are the most famous ones. Buffaloes are affected by many endemic diseases, and "Hemorrhagic septicemia" (HS) is one of them. This study was designed to ascertain the effects of experimental exposure ofP. multocida B:2 (oral) and its immunogens, i.e., LPS (oral and intravenous) and OMP (oral and subcutaneous) on reproductive hormonal profiles in Nili-Ravi buffaloes. Repeated serum samples were collected from the jugular vein of experimental animals for 21 days (0, 02, 04, 08, 12, 16, 20, 24, 36, 48, 72, 120, 168, 216, 264, 360, 456 and 504 hours). Hormonal assays to determine the serum concentrations of Gonadotropin-releasing hormone (GnRH), Follicle-stimulating hormone (FSH), Luteinizing hormone (LH), Estrogen (E2) and progesterone (P4) were performed using (MyBioSource) commercial Elisa kits. The hormonal profile of all treatment groups of the buffalo heifers exhibited significant (P<0.05) variations as compared to the control group (G-1). These results indicate suppression in Nili-Ravi buffaloes' reproductive hormonal profile on exposure to P. multocida B:2 and its immunogens. This influence warrants that exposure to H.S may be a possible reason for delayed puberty and poor reproduction performance in Nili-Ravi buffaloes.

Resumo A pecuária é uma parte fundamental da indústria agrícola no Paquistão e contribui com 11,53% do PIB nacional. Entre as espécies de gado, os búfalos são considerados o ouro negro do Paquistão. Sendo os maiores produtores de leite em todo o mundo, os búfalos Nili-Ravi são os mais famosos. Os búfalos são afetados por muitas doenças endêmicas, entre as quais a "septicemia hemorrágica" (SH). Este estudo busca verificar os efeitos da exposição experimental de P. multocida B:2 (oral) e seus imunógenos, ou seja, LPS (oral e intravenoso) e OMP (oral e subcutâneo), nos perfis hormonais reprodutivos em búfalos Nili-Ravi. Amostras de soro repetidas foram coletadas da veia jugular de animais experimentais por 21 dias (0, 2, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 36, 48, 72, 120, 168, 216, 264, 360, 456 e 504 horas). Os ensaios hormonais para determinar as concentrações séricas do hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH), hormônio foliculoestimulante (FSH), hormônio luteinizante (LH), estrogênio (E2) e progesterona (P4) foram realizados usando kits comerciais Elisa (MyBioSource). O perfil hormonal de todos os grupos de tratamento das novilhas bubalinas apresentou variações significativas (P < 0,05) em relação ao grupo controle (G-1). Esses resultados indicam supressão no perfil hormonal reprodutivo de búfalos Nili-Ravi na exposição a P. multocida B:2 e seus imunógenos. Essa influência garante que a exposição à SH possa ser uma possível razão para o atraso da puberdade e o baixo desempenho reprodutivo em búfalos Nili-Ravi.

Key points for the thermal comfort of water buffaloes in Eastern Amazon / Pontos-chave do conforto térmico de bubalinos na Amazônia Oriental

This study presented relevant aspects about the Amazonian environment and how it impacts the thermal comfort of domestic buffaloes (Bubalus bubalis) raised in the Eastern Amazon. Furthermore, strategies for monitoring and mitigating animal heat stress are presented, based on research results with the species. Although domestic buffaloes are considered adaptable animals, exposure to intense solar radiation causes thermal discomfort. This condition is expressed in biophysical indicators, in metabolic, endocrine, behavioral responses, and in body thermographic patterns. Therefore, the biometeorological monitoring of production is crucial to support decision-making regarding environmental management strategies, genetic selection of thermotolerant individuals, and increase in animal welfare. Lastly, the use of silvopastoral systems can help to provide higher thermal comfort, which is a condition that directly impacts the productivity of milk and meat buffaloes when they are raised in tropical regions, such as in the Eastern Amazon.

Objetivou-se apresentar aspectos relevantes sobre o ambiente amazônico e como este impacta no conforto térmico de búfalos domésticos (Bubalus bubalis) criados na Amazônia Oriental. Adicionalmente, são apresentadas estratégias para monitoramento e mitigação do estresse térmico animal, a partir de resultados de pesquisa com a espécie. Apesar dos búfalos domésticos serem considerados animais adaptáveis, a exposição à intensa radiação solar provoca desconforto térmico. Essa condição é expressa em indicadores biofísicos, nas respostas metabólicas, endócrinas, comportamentais e nos padrões termográficos corporais. Assim, o monitoramento biometeorológico da produção é crucial para subsidiar tomadas de decisão em relação a estratégias de manejo ambiental, seleção genética de indivíduos termotolerantes e incremento do bem-estar animal. Por fim, o uso de sistemas silvipastoris pode auxiliar na oferta de maior conforto térmico, que é uma condição que impacta diretamente na produtividade de bubalinos de leite e carne, quando estes são criados em regiões tropicais, como na Amazônia Oriental.

Padronização de uma PCR multiplex para a detecção de fraude em leite bubalino e caprino por adição de leite bovino / Standardization of a multiplex PCR for detection of fraud in buffalo and goat milk by addition of bovine milk

O consumo de leite de espécies como bubalino e caprino tem se popularizado por representarem uma alternativa para indivíduos que possuem restrições alimentares relacionadas ao leite bovino e em virtude das propriedades nutricionais desses alimentos. No entanto, fatores como a baixa produção e a sazonalidade predispõem a adulterações destes alimentos, principalmente pela adição de leite bovino, visando maior rendimento e lucratividade. Assim, o objetivo do estudo foi padronizar um método de PCR multiplex para autenticação de leites bubalino e caprino. Para isso, amostras de leite exclusivamente de cada espécie foram utilizados para a padronização da técnica. Em seguida, foi realizada a fraude pela adição de leite bovino ao caprino e ao bubalino, em proporções de 0,1% até 100%. A técnica foi eficaz, precisa, rápida e prática para a detecção do DNA de bovino, bubalino e caprino, separadamente e em conjunto. Na fraude experimental, o limite de detecção da técnica ocorreu a partir do menor percentual testado (0,1%) tanto no leite caprino quanto no bubalino. Dessa forma, a PCR multiplex testada mostrou ser uma importante ferramenta para a autenticação de leite, pendendo ser utilizada para fins de fiscalização por órgãos competentes.

Milk consumption of species such as buffalo and goat has become popular due to the nutritional properties of these foods and because they represent an alternative for individuals who have dietary restrictions related to bovine milk. However, factors such as low production and seasonality predispose to adulteration, mainly by the addition of bovine milk, aiming at higher yield and profitability. Thus, the aim of the present study was to standard a multiplex PCR method for buffalo and goat milks authentication. For this, the milks exclusively of each species were used to standardize the technique. Subsequently, fraud was performed by the addition of bovine milk to goat and buffalo in proportions from 0.1% to 100%. The technique was effective and accurate for detecting bovine, buffalo and goat DNA separately and together quickly and practically. In experimental fraud, the detection limit of the technique occurred from the lowest percentage tested (0.1%) in both goat and buffalo milk. Thus, the multiplex PCR tested proved to be an important tool for milk authentication, pending to be used for supervision by competent agencies.

Application of lectins for detection of glycomic differences in the epididymal duct in water buffalo (Bubalus bubalis) and dromedary camel (Camelus dromedarius) / Aplicación de lectinas para la detección de diferencias glucómicas en el conducto epididimario en búfalos de agua (Bubalus bubalis) y dromedarios (Camelus dromedarius)

SUMMARY: The present study was conducted to detect the differences in glycohistochemical features in the epididymal duct of the dromedary camel and the water buffalo. Epididymal sections (caput, corpus and cauda) from both species were stained with fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugated lectins. Binding sites for five lectins (DBA, GSA-1, HPA, PNA and WGA) have been found in both species. The binding sites of different lectins showed significant variations in the pattern of distribution in both a species. This included both species-specific and region-specific order. Additionally, only three (GSA-1, PNA and WGA) out the five lectins studied exhibited binding sites in all epididymal regions in both species. The other two lectins (DBA and HPA) followed the same order recorded for the other three (GSA-1, PNA and WGA) in buffalo, but failed to show any binding sites in cauda epididymis in camel. In conclusion, the variable regional and species-specific distribution features of lectins revealed that both species have diverse glycomic characteristics that may be related to their different reproductive patterns. However, the glycome-associated functional capacities remain obscured and need further profound investigations.

RESUMEN: El presente estudio se realizó para detectar las diferencias en las características glicohistoquímicas del conducto epididimal del dromedario y el búfalo de agua. Las secciones del epidídimo (cabeza, cuerpo y cola) de ambas especies se tiñeron con lectinas conjugadas con isotiocianato de fluoresceína (FITC). Se encontraron sitios de unión para cinco lectinas (DBA, GSA-1, HPA, PNA y WGA) en ambas especies. Los sitios de unión de diferentes lectinas mostraron variaciones significativas en el patrón de distribución en ambas especies. Esto incluía tanto el orden específico de la especie como el específico de la región. Además, solo tres (GSA-1, PNA y WGA) de las cinco lectinas estudiadas exhibieron sitios de unión en todas las regiones del epidídimo en ambas especies. Las otras dos lectinas (DBA y HPA) siguieron el mismo orden registrado para las tres restantes (GSA-1, PNA y WGA) en búfalos, pero no mostraron ningún sitio de union en la cola del epidídimo en camellos. En conclusión, las características de distribución regionales y específicas de especies variables de las lectinas revelaron que ambas especies tienen características glucómicas diversas que pueden estar relacionadas con sus diferentes patrones reproductivos. Sin embargo, las capacidades funcionales asociadas con el glicoma permanecen desconocidas y requieren mayor investigación.

Potencial antioxidante de hidrolisados proteicos obtidos a partir de caseinato de ruminantes pela ação de proteases comerciais / Potential antioxidant of protein hydrolysates obtained from ruminant caseinate by the action of commercial proteases

Introdução: a oxidação em sistemas biológicos está relacionada ao desenvolvimento de patologias em humanos. A ingestão de alimentos ricos em compostos químicos que exercem atividade antioxidante contribui para a prevenção e redução dos efeitos deletérios dos radicais livres formados no organismo. Peptídeos derivados das caseínas têm mostrado um elevado potencial como agentes antioxidantes. Objetivos: neste sentido, o presente estudo avaliou a atividade antioxidante de hidrolisados derivados de caseínas de leites das espécies bubalina, bovina e caprina, obtidos pela ação de diferentes proteases. Metodologia: inicialmente, as caseínas foram isoladas dos demais componentes do leite, depois foram submetidas ao processo de proteólise pelas enzimas bromelina, papaína, tripsina e neutrase, individualmente. A atividade antioxidante dos hidrolisados foi avaliada, através da capacidade de eliminação dos radicais: hidroxila (OH­Ë™), superóxido (O2­Ë™), 2,2 difenil-1-picrilhidrazil (DPPH˙), 2,2'azinobis-(3-ácido etilbenzotiazolino-6-sulfônico (ABTS˙), e quelante dos íons metálicos cobre (Cu2+) e ferro (Fe2+). Resultados: os resultados mostraram que a caseína bovina apresentou o menor (35,54%) grau de hidrólise e a caseína bubalina apresentou o maior (85,64%) grau de hidrólise pela ação da neutrase e bromelina após 480 minutos, respectivamente. O potencial para o sequestro dos radicais hidroxila variou entre 0 e 100%, superóxido superior a 80%, ABTS superior a 85%, DPPH entre 20 e 95% habilidade de quelar ferro entre 10 e 100% e cobre entre 14 e 80%. Conclusão: assim, a hidrólise das caseínas do leite bubalino, bovino e caprino foram capazes de produzir hidrolisados com elevado potencial antioxidante e que, mediante novos estudos, poderá vir ser incorporado em produtos alimentícios para o consumo humano.

Introduction: oxidation in biological systems is related to the development of pathologies in humans. The ingestion of foods rich in chemical compounds that exert antioxidant activity contributes to the prevention and reduction of the deleterious effects of free radicals formed in the body. Peptides derived from caseins have shown high potential as antioxidant agents. Objectives: the present study evaluated the antioxidant activity of casein hydrolysates derived from bubaline, bovine, and caprine milk obtained by the action of different proteases. Methodology: initially, the caseins were isolated from the other milk components, and then subjected to the proteolysis process by the enzymes bromelain, papain, trypsin and neutrase, individually. The antioxidant activity of the hydrolysates was evaluated, through the capacity of elimination of the radicals: hydroxyl (OH-˙), superoxide (O2-˙), 2,2 diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH˙), 2,2'azinobis-(3-ethylbenzothiazolino-6-sulfonic acid (ABTS˙), and chelating of the metal ions copper (Cu2+) and iron (Fe2+). Results: the results showed that bovine casein showed the lowest (35.54%) degree of hydrolysis and bubaline casein showed the highest (85.64%) degree of hydrolysis by the action of neutrase and bromelin after 480 minutes, respectively. The potential for hydroxyl radical sequestration varied between 0 and 100%, superoxide higher than 80%, ABTS higher than 85%, DPPH between 20 and 95% and the ability to chelate iron between 10 and 100% and copper between 14 and 80%. Conclusion: thus, the hydrolysis of caseins from bubaline, bovine and goat milk were able to produce hydrolysates with high antioxidant potential and that, upon further studies, may be incorporated into food products for human consumption.

Desenvolvimento de bebidas lácteas probióticas adicionadas de polpa de morango e suplementadas com L-triptofano elaboradas a partir de leite bubalino e bovino / Development of probiotic dairy beverages with strawberry pulp and supplemented with L-tryptophan from buffalo and bovine milk

O objetivo deste estudo foi desenvolver uma formulação de bebida láctea bubalina probiótica adicionada de polpa de morango, comparando os efeitos do uso do leite de búfala e de vaca na elaboração dos produtos e verificando a possibilidade de suplementação com triptofano nos produtos lácteos probióticos. Como primeira etapa do trabalho, bebidas lácteas probióticas foram elaboradas a partir de leite bubalino e bovino, fermentadas com Streptococcus thermophilus TA040, Lactobacillus bulgaricus LB340 e Lactobacillus acidophilus La5, e formuladas com 0, 25 e 50% de soro em sua formulação. As bebidas foram avaliadas quanto à cinética de fermentação das culturas láticas utilizadas, ao teor de proteína, gordura e sólidos totais não gordurosos, pós-acidificação, viabilidade das culturas fermentadoras e sua capacidade de sobrevivência ao estresse gastrointestinal in vitro. As bebidas lácteas bubalinas apresentaram resultados superiores as bebidas bovinas. O uso do leite de búfala na elaboração das bebidas lácteas promoveu benefícios quanto as culturas láticas presentes nos produtos, exercendo efeito protetivo e influindo na preservação da viabilidade das bactérias ao longo do armazenamento refrigerado e durante a simulação do estresse gastrointestinal in vitro. As bebidas lácteas elaboradas com 25% apresentaram os resultados mais próximos aos obtidos pelos produtos controle, sem adição de soro, sendo selecionadas para a segunda parte do estudo. Nesta etapa, as formulações de bebida láctea com 25% de soro, foram acrescidas de um preparado com polpa de morango e bebidas sem adição da fruta, utilizadas como controle. As bebidas lácteas bubalinas frutadas, apresentaram menor teor de gordura e melhores características reológicas, com maior viscosidade e consistência do que os produtos controle, sem afetar a pós-acidificação, o perfil de ácido graxo, assim como, a viabilidade e a resistência às condições de estresse gastrointestinal in vitro das culturas fermentadoras. A avaliação da possibilidade de suplementar lácteos probióticos com triptofano foi realizada em conjunto com a Universidade de Milão. Para isso, iogurtes probióticos receberam adição de triptofano antes ou após a fermentação, sendo avaliados com relação ao perfil de pós-acidificação, quantidade de triptofano nos produtos, número de células viáveis por plaqueamento e citometria de fluxo ao longo do armazenamento a 25° e 4°C. Complementarmente, a influência da presença do triptofano no crescimento e produção de compostos antimicrobianos pelas culturas láticas, também foi avaliada. A adição de triptofano após a fermentação dos iogurtes, que foram armazenados sob refrigeração (4°C), além de não afetar a pós-acidificação dos produtos, apresentou benefícios quanto a viabilidade L. acidophilus, redução do dano e aumento do número de células vivas, promovendo teor maior do aminoácido nos iogurtes. A presença do triptofano nos meios de cultivo, também influenciou de forma positiva o crescimento de S. thermophilus e L. acidophilus, melhorando o desenvolvimento das bactérias durante a fermentação e influindo em uma maior atividade antilistérica por parte do S. thermophilus. Diante da influência positiva da aplicação do leite de búfala na elaboração das bebidas lácteas, assim como, a adição do triptofano em iogurtes probióticos, a suplementação do aminoácido em bebidas lácteas bubalinas frutadas permitiria a obtenção de um produto funcional, onde seus benefícios estariam relacionados tanto ao consumo do probiótico presente no produto quanto a complementação de triptofano na dieta do consumidor

The aim of this study was to develop a formulation of probiotic buffalo dairy beverage added with strawberry pulp, comparing the effects of using buffalo and cow's milk in the preparation of products and verifying the possibility of tryptophan supplementation in probiotic dairy products. As a first stage of the work, probiotic dairy beverages were made from buffalo and bovine milk, fermented with Streptococcus thermophiles TA040, Lactobacillus bulgaricus LB340 and Lactobacillus acidophilus La5, and formulated with 0, 25 and 50% whey in their formulation. The beverages were evaluated for the fermentation kinetics of the used lactic cultures, the levels of protein, fat and total no fat solids, post-acidification, fermenting cultures viability and their ability to survive gastrointestinal stress in vitro. Buffalo milk use in dairy beverages production promoted benefits regarding the lactic cultures present in the products, exerting a protective effect and influencing the viability preservation of bacteria during the cold storage and simulation of gastrointestinal stress in vitro. Dairy beverages made with 25% whey addition showed results similar to those obtained by the control products, without whey addition, being selected for the second part of the study. In this part, the dairy beverages formulations with 25% whey, were added with a preparation were added with a strawberry pulp preparation and dairy beverages without added fruit, used as a control. Fruity bubaline dairy beverages had lower fat content and better rheological characteristics, with higher viscosity and consistency than control products, without affecting post-acidification, fatty acid profile, as well as viability and resistance to in vitro gastrointestinal condition of fermented cultures. The possibility of supplementing probiotic dairy products with tryptophan was evaluated in partnership with the University of Milan. For this, probiotic yogurts received the addition of tryptophan before or after fermentation, being evaluated in relation to the post-acidification profile, tryptophan amount in the products, viable cell number per plating and flow cytometry during storage at 25°C and 4°C. In addition, the influence of the tryptophan presence on the growth and production of antimicrobial compounds by lactic cultures was also evaluated. The addition of tryptophan after the yogurt fermentation, which were stored under refrigeration (4°C), in addition to not affecting the post-acidification of the products, showed benefits to the viability of L. acidophilus, reduced the damage and increased the number of cells promoting higher amino acid content in yogurts. Tryptophan presence in the culture media also positively influenced the growth of S. thermophiles and L. acidophilus, improving the development of bacteria during fermentation and influencing better antilisteric activity in the part of S. thermophiles. In view of the buffalo milk positive influence observed after the application in dairy beverage preparation, as well as the addition of tryptophan in probiotic yoghurts, amino acid supplementation in fruity buffalo dairy beverages would allow to obtain a functional product, where its benefits would be related both to the consumption of the probiotic present in the product as to the supplementation of tryptophan in the consumer's diet

Desenvolvimento de bebidas lácteas probióticas adicionadas de polpa de morango e suplementadas com L-triptofano elaboradas a partir de leite bubalino e bovino / Development of probiotic dairy beverages with strawberry pulp and supplemented with L-tryptophan from buffalo and bovine milk

O objetivo deste estudo foi desenvolver uma formulação de bebida láctea bubalina probiótica adicionada de polpa de morango, comparando os efeitos do uso do leite de búfala e de vaca na elaboração dos produtos e verificando a possibilidade de suplementação com triptofano nos produtos lácteos probióticos. Como primeira etapa do trabalho, bebidas lácteas probióticas foram elaboradas a partir de leite bubalino e bovino, fermentadas com Streptococcus thermophilus TA040, Lactobacillus bulgaricus LB340 e Lactobacillus acidophilus La5, e formuladas com 0, 25 e 50% de soro em sua formulação. As bebidas foram avaliadas quanto à cinética de fermentação das culturas láticas utilizadas, ao teor de proteína, gordura e sólidos totais não gordurosos, pós-acidificação, viabilidade das culturas fermentadoras e sua capacidade de sobrevivência ao estresse gastrointestinal in vitro. As bebidas lácteas bubalinas apresentaram resultados superiores as bebidas bovinas. O uso do leite de búfala na elaboração das bebidas lácteas promoveu benefícios quanto as culturas láticas presentes nos produtos, exercendo efeito protetivo e influindo na preservação da viabilidade das bactérias ao longo do armazenamento refrigerado e durante a simulação do estresse gastrointestinal in vitro. As bebidas lácteas elaboradas com 25% apresentaram os resultados mais próximos aos obtidos pelos produtos controle, sem adição de soro, sendo selecionadas para a segunda parte do estudo. Nesta etapa, as formulações de bebida láctea com 25% de soro, foram acrescidas de um preparado com polpa de morango e bebidas sem adição da fruta, utilizadas como controle. As bebidas lácteas bubalinas frutadas, apresentaram menor teor de gordura e melhores características reológicas, com maior viscosidade e consistência do que os produtos controle, sem afetar a pós-acidificação, o perfil de ácido graxo, assim como, a viabilidade e a resistência às condições de estresse gastrointestinal in vitro das culturas fermentadoras. A avaliação da possibilidade de suplementar lácteos probióticos com triptofano foi realizada em conjunto com a Universidade de Milão. Para isso, iogurtes probióticos receberam adição de triptofano antes ou após a fermentação, sendo avaliados com relação ao perfil de pós-acidificação, quantidade de triptofano nos produtos, número de células viáveis por plaqueamento e citometria de fluxo ao longo do armazenamento a 25° e 4°C. Complementarmente, a influência da presença do triptofano no crescimento e produção de compostos antimicrobianos pelas culturas láticas, também foi avaliada. A adição de triptofano após a fermentação dos iogurtes, que foram armazenados sob refrigeração (4°C), além de não afetar a pós-acidificação dos produtos, apresentou benefícios quanto a viabilidade L. acidophilus, redução do dano e aumento do número de células vivas, promovendo teor maior do aminoácido nos iogurtes. A presença do triptofano nos meios de cultivo, também influenciou de forma positiva o crescimento de S. thermophilus e L. acidophilus, melhorando o desenvolvimento das bactérias durante a fermentação e influindo em uma maior atividade antilistérica por parte do S. thermophilus. Diante da influência positiva da aplicação do leite de búfala na elaboração das bebidas lácteas, assim como, a adição do triptofano em iogurtes probióticos, a suplementação do aminoácido em bebidas lácteas bubalinas frutadas permitiria a obtenção de um produto funcional, onde seus benefícios estariam relacionados tanto ao consumo do probiótico presente no produto quanto a complementação de triptofano na dieta do consumidor

The aim of this study was to develop a formulation of probiotic buffalo dairy beverage added with strawberry pulp, comparing the effects of using buffalo and cow's milk in the preparation of products and verifying the possibility of tryptophan supplementation in probiotic dairy products. As a first stage of the work, probiotic dairy beverages were made from buffalo and bovine milk, fermented with Streptococcus thermophiles TA040, Lactobacillus bulgaricus LB340 and Lactobacillus acidophilus La5, and formulated with 0, 25 and 50% whey in their formulation. The beverages were evaluated for the fermentation kinetics of the used lactic cultures, the levels of protein, fat and total no fat solids, post-acidification, fermenting cultures viability and their ability to survive gastrointestinal stress in vitro. Buffalo milk use in dairy beverages production promoted benefits regarding the lactic cultures present in the products, exerting a protective effect and influencing the viability preservation of bacteria during the cold storage and simulation of gastrointestinal stress in vitro. Dairy beverages made with 25% whey addition showed results similar to those obtained by the control products, without whey addition, being selected for the second part of the study. In this part, the dairy beverages formulations with 25% whey, were added with a preparation were added with a strawberry pulp preparation and dairy beverages without added fruit, used as a control. Fruity bubaline dairy beverages had lower fat content and better rheological characteristics, with higher viscosity and consistency than control products, without affecting post-acidification, fatty acid profile, as well as viability and resistance to in vitro gastrointestinal condition of fermented cultures. The possibility of supplementing probiotic dairy products with tryptophan was evaluated in partnership with the University of Milan. For this, probiotic yogurts received the addition of tryptophan before or after fermentation, being evaluated in relation to the post-acidification profile, tryptophan amount in the products, viable cell number per plating and flow cytometry during storage at 25°C and 4°C. In addition, the influence of the tryptophan presence on the growth and production of antimicrobial compounds by lactic cultures was also evaluated. The addition of tryptophan after the yogurt fermentation, which were stored under refrigeration (4°C), in addition to not affecting the post-acidification of the products, showed benefits to the viability of L. acidophilus, reduced the damage and increased the number of cells promoting higher amino acid content in yogurts. Tryptophan presence in the culture media also positively influenced the growth of S. thermophiles and L. acidophilus, improving the development of bacteria during fermentation and influencing better antilisteric activity in the part of S. thermophiles. In view of the buffalo milk positive influence observed after the application in dairy beverage preparation, as well as the addition of tryptophan in probiotic yoghurts, amino acid supplementation in fruity buffalo dairy beverages would allow to obtain a functional product, where its benefits would be related both to the consumption of the probiotic present in the product as to the supplementation of tryptophan in the consumer's diet

La suplementación estratégica de bucerros manejados en pasturas con predominio de Hymenachne amplexicaulis estimula las conductas de ingestión y mejora la ganancia de peso / Strategic supplementation of buffalo calves managed in pastures with a predominance of Hymenachne amplexicaulis stimulates ingestion behavior and improves weight gain

Introducción: En Colombia, la producción bufalina viene creciendo de forma importante. Los búfalos se adaptan bien a zonas aluviales, que se caracterizan por la presencia de especies de gramíneas nativas, como Hymenachne amplexicaulis. Objetivo: Evaluar el efecto de diferentes tipos de suplementación sobre el desempeño productivo y comportamiento ingestivo de bucerros manejados en pasturas con predominio de Hymenachne amplexicaulis. Materiales y métodos: Treinta bucerros Murrah, con 67.5 (DE=2) kg de peso y 4 meses de edad, se asignaron, aleatoriamente, sí son tres tratamientos: SS: sin suplementación; SM: suplemento mineral y SM+C: suplemento mineral + balanceado (0.5% peso corporal). Los animales pastorearon en praderas con predominio de Hymenachne amplexicaulis, y en la noche recibieron el suplemento en corrales. Las variables estudiadas fueron la ganancia de peso y el tiempo destinado a realizar diferentes conductas de ingestión, además de las tasas de bocados y estaciones de alimentación. Resultados: El consumo diario de mezcla mineral fue de 33.8 g en los dos grupos suplementados, y el de balanceado de 149.3 g. La oferta de SM y de SM+C produjo un incremento extra en la ganancia de peso de 68 y de 227 g, respectivamente (p <0.001). Los animales suplementados presentaron mayor tiempo de pastoreo (p<0.001) y menor tiempo de rumia (p =0.001). La relación beneficio/costo, para los tratamientos SM y SM+C, fue de 4.2 y 4.3, respectivamente. Conclusión: Bajo las condiciones de estudio, las dos estrategias de suplementación evaluadas mejoraron el desempeño de los animales y presentaron viabilidad económica, en especial la oferta simultanea de mezcla mineral y de alimento balanceado.

Introduction: In Colombia, buffalo production has been growing significantly. Buffaloes adapt well to alluvial areas, which are characterized by the presence of native grass species, such as Hymenachne amplexicaulis. Objective: To evaluate the effect of different strategies of supplementation on the productive performance and ingestive behavior of calves managed in pastures with a predominance of Hymenachne amplexicaulis. Materials and methods: Thirty Murrah calves, weighing 67.5 (SD=2) kg and 4 months old, were randomly assigned to three treatments: SS: no supplementation; SM: mineral supplement and SM+C: mineral supplement + concentrate (0.5% body weight). The animals grazed in meadows with a predominance of Hymenachne amplexicaulis, and at night they received the supplement in pens. The variables studied were weight gain and time spent on different eating behaviors, in addition to biting rate and feeding stations. Results: The mineral mixture consumption was 33.8 g in the SM and SM+C groups, and the balanced consumption was 149.3 g. The supply of SM and SM+C produced an extra increase in weight gain of 68 and 227 g, respectively (p < 0.001). Supplemented animals grazed longer (p<0.001) and ruminated less time (p =0.001). The benefit/cost ratio for the SM and SM+C treatments was 4.2 and 4.3, respectively. Conclusion: Under the study conditions, the supplementation strategies evaluated improved the performance of the animals and presented economic viability, especially the simultaneous offer of mineral mix and balanced feed.

Ocurrence enzootic hematuria in buffaloes in Brazil: epidemiological, clinical, and pathological aspects / Ocorrência de hematúria enzoótica em búfalos no Brasil: aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos

It is reported the occurrence of enzootic hematuria (EH) in buffaloes in Brazil after performing an epidemiological survey and clinicopathological analises. To date, EH caused by ingestion of Pteridium esculentum subsp. arachnoideum, a radiomimetic plant popularly known as "bracken fern", has not been described in this species in Brazil. Bovine EH is responsible for high economic losses in Brazil's Southeast Region not only because of the deaths it causes, but also owing to its negative effect on productivity. In São José do Barreiro County, São Paulo, some farmers in areas with a high incidence of bovine EH have been replacing cattle with buffaloes, based on the premise that the latter would be more resistant to poisoning by ingestion of Pteridium spp. However, even though initial observations indicated that buffaloes are indeed less sensitive than cattle to the toxic principle of Pteridium spp., cases of hematuria in this species have been reported. According to preliminary date, EH only occurs in buffaloes over six years of age. Macroscopic examination revealed a thickened urinary vesicle mucosa, along with multiple foci of ulcerated, exophytic, verrucous, and pedunculated lesions. In one of the buffaloes studied, the bladder wall was ruptured and exhibited marked secondary inflammation. Histologically, neoplastic and non-neoplastic changes similar to those described in cattle poisoned by Pteridium spp. were observed. The neoplasms found included papilloma, carcinoma in situ, urothelial carcinoma (low and high grade), inverted, microcystic, and trabecular variants, urothelial carcinoma with divergent differentiation (squamous and glandular), squamous cell carcinoma, lymphangioma, hemangioma, and hemangiosarcoma. There was also coexistence of epithelial and mesenchymal neoplasms. Bovine papillomavirus particles were not detected by polymerase chain reaction in the bladder samples analyzed.

Descreve-se, através de levantamento epidemiológico e avaliação clínico-patológica, a ocorrência de hematúria enzoótica (HE) em búfalos no Brasil. Essa condição, causada pela ingestão da planta radiomimética Pteridium esculentum subsp. arachnoideum, conhecida popularmente como "samambaia" ou "samambaia do campo", até então não havia sido descrita nessa espécie no Brasil. Na Região Sudeste, a HE bovina é responsável por elevadas perdas econômicas, devidas não apenas aos óbitos, mas também em função da queda de produtividade. No município de São José do Barreiro/SP, alguns produtores de áreas com alta incidência de HE bovina, vêm substituindo os bovinos por búfalos, com base na premissa de que estes seriam mais resistentes à intoxicação. Embora, de acordo com observações iniciais, os búfalos realmente sejam menos sensíveis que os bovinos ao princípio tóxico de Pteridium spp., ainda assim, tem-se verificado a ocorrência de casos de hematúria nessa espécie. De acordo com o levantamento inicial, a HE só ocorre em búfalos com idade a partir de seis anos. Ao exame macroscópico, verificou-se a mucosa da bexiga espessa, com múltiplos focos de lesões ulceradas, exofíticas, papiliformes, verrucosas, pedunculadas. Histologicamente, foram observadas alterações neoplásicas e não neoplásicas semelhantes às descritas nos bovinos com HE. Entre as neoplasias foram encontrados papiloma, carcinoma in situ, carcinoma urotelial (baixo e alto grau), variantes invertida, microcística e trabecular, carcinoma urotelial com diferenciação divergente (escamosa e glandular), carcinoma de células escamosas, linfangioma, hemangioma e hemangiossarcoma. Ocorreu também coexistência entre neoplasias epiteliais e mesenquimais. Não foram detectadas partículas de papilomavírus bovino pelo teste PCR nas amostras de bexiga analisadas.

Accidental monensin poisoning in buffaloes in Bahia, Brazil / Intoxicação acidental por monensina em búfalos na Bahia, Brasil

Monensin is an ionophore antibiotic (IA) widely used for growth promotion and weight gain in the production of ruminants. However, it has caused intoxication in several species, including buffaloes, mainly because of the ignorance or disrespect of the recommendations for use in each animal species. The objective of this study was to describe, for the first time, clinical-epidemiological and anatomopathological data of an outbreak of accidental poisoning by monensin in buffalos and rediscuss the recommendation of the use of IA in the production of this species. The outbreak affected 21 adult buffaloes after consumption of remains from a feed formulated on the farm and whose constituents were mixed by hand. Clinical and first death signs were observed 24 hours after ingestion of this food. In general, the clinical picture was characterized by muscle weakness, tremors, difficulty in locomotion, and decubitus. Fifteen buffaloes presented clinical signs of poisoning (71.5% morbidity), followed by death (100% lethality), after acute to subacute evolution (<24h to 96h). Laboratory tests indicated elevated serum activity of creatine phosphokinase and aspartate aminotransferase enzymes. Three buffaloes underwent necropsy, and samples from several organs were collected for histopathological examination. The main injuries found were hyaline degeneration and multifocal segmental necrosis in the skeletal and cardiac striated muscles (myopathy and degenerative-necrotic multifocal multifocal-necrotic cardiopathy). The diagnosis was confirmed by the toxicological evaluation of suspected ration remains, which detected 461.67mg/kg of monensin. The death of 71.5% buffaloes in this lot occurred due to a succession of errors, which included faults in the formulation of the ration and, above all, due to the use of monensin in a highly sensitive species. Despite the possible beneficial effects of IA use as a dietary supplement for buffaloes, we are of the opinion that IAs should never be used in bubalinoculture since any increment in production does not compensate for the imminent risk of death due to a small safety margin for this species and the absence of antidotes.

Monensina é um antibiótico ionóforo (AI) amplamente empregado na produção de ruminantes para promoção de crescimento e ganho de peso, mas que tem causado intoxicação em diversas espécies, incluindo os búfalos, principalmente, pelo desconhecimento ou desrespeito das recomendações de uso e às particularidades de cada espécie animal. Objetivou-se descrever, pela primeira vez na Bahia, dados clínico-epidemiológicos e anatomopatológicos de um surto de intoxicação acidental por monensina em búfalos e rediscutir a recomendação do uso de AI na produção de bubalinos. O surto acometeu um lote de 21 búfalos adultos após consumo de sobras de uma ração para bovinos formulada na fazenda e cujos constituintes eram misturados à mão. Os sinais clínicos e primeiros óbitos foram observados 24 horas após a ingestão dessa ração. O quadro clínico, em geral, se caracterizou por fraqueza muscular, tremores, dificuldade de locomoção e decúbito. Quinze búfalos apresentaram sinais clínicos de intoxicação (morbidade 71,5%), seguido de morte (letalidade 100%), após evolução aguda a subaguda (<24h até 96h). Exames laboratoriais indicaram acentuada elevação na atividade sérica das enzimas CPK e AST. Três búfalos foram necropsiados, sendo coletadas amostras de diversos órgãos para exame histopatológico. A principal lesão encontrada foi degeneração hialina e necrose segmentar multifocal nos músculos estriados esqueléticos e cardíacos (miopatia e cardiopatia degenerativo-necrótica tóxica multifocal polifásica). O diagnóstico foi confirmado pela avaliação toxicológica das sobras da ração suspeita, que detectou 461,67mg/kg de monensina. A morte de 71,5% dos búfalos deste lote ocorreu devido a uma sucessão de erros, que incluíram falhas na formulação da ração e, sobretudo, devido ao uso da monensina em uma espécie altamente sensível. Enfatizamos que, apesar dos possíveis efeitos benéficos do uso AIs como suplemento dietético para bubalinos, somos da opinião que os AIs nunca devem ser empregados na bubalinocultura, uma vez que os eventuais incrementos na produção não compensam o risco iminente de morte, devido a pequena margem de segurança para essa espécie e a inexistência de antídotos.

Accidental monensin poisoning in buffaloes in Bahia, Brazil / Intoxicação acidental por monensina em búfalos na Bahia, Brasil

Monensin is an ionophore antibiotic (IA) widely used for growth promotion and weight gain in the production of ruminants. However, it has caused intoxication in several species, including buffaloes, mainly because of the ignorance or disrespect of the recommendations for use in each animal species. The objective of this study was to describe, for the first time, clinical-epidemiological and anatomopathological data of an outbreak of accidental poisoning by monensin in buffalos and rediscuss the recommendation of the use of IA in the production of this species. The outbreak affected 21 adult buffaloes after consumption of remains from a feed formulated on the farm and whose constituents were mixed by hand. Clinical and first death signs were observed 24 hours after ingestion of this food. In general, the clinical picture was characterized by muscle weakness, tremors, difficulty in locomotion, and decubitus. Fifteen buffaloes presented clinical signs of poisoning (71.5% morbidity), followed by death (100% lethality), after acute to subacute evolution (<24h to 96h). Laboratory tests indicated elevated serum activity of creatine phosphokinase and aspartate aminotransferase enzymes. Three buffaloes underwent necropsy, and samples from several organs were collected for histopathological examination. The main injuries found were hyaline degeneration and multifocal segmental necrosis in the skeletal and cardiac striated muscles (myopathy and degenerative-necrotic multifocal multifocal-necrotic cardiopathy). The diagnosis was confirmed by the toxicological evaluation of suspected ration remains, which detected 461.67mg/kg of monensin. The death of 71.5% buffaloes in this lot occurred due to a succession of errors, which included faults in the formulation of the ration and, above all, due to the use of monensin in a highly sensitive species. Despite the possible beneficial effects of IA use as a dietary supplement for buffaloes, we are of the opinion that IAs should never be used in bubalinoculture since any increment in production does not compensate for the imminent risk of death due to a small safety margin for this species and the absence of antidotes.(AU)

Monensina é um antibiótico ionóforo (AI) amplamente empregado na produção de ruminantes para promoção de crescimento e ganho de peso, mas que tem causado intoxicação em diversas espécies, incluindo os búfalos, principalmente, pelo desconhecimento ou desrespeito das recomendações de uso e às particularidades de cada espécie animal. Objetivou-se descrever, pela primeira vez na Bahia, dados clínico-epidemiológicos e anatomopatológicos de um surto de intoxicação acidental por monensina em búfalos e rediscutir a recomendação do uso de AI na produção de bubalinos. O surto acometeu um lote de 21 búfalos adultos após consumo de sobras de uma ração para bovinos formulada na fazenda e cujos constituintes eram misturados à mão. Os sinais clínicos e primeiros óbitos foram observados 24 horas após a ingestão dessa ração. O quadro clínico, em geral, se caracterizou por fraqueza muscular, tremores, dificuldade de locomoção e decúbito. Quinze búfalos apresentaram sinais clínicos de intoxicação (morbidade 71,5%), seguido de morte (letalidade 100%), após evolução aguda a subaguda (<24h até 96h). Exames laboratoriais indicaram acentuada elevação na atividade sérica das enzimas CPK e AST. Três búfalos foram necropsiados, sendo coletadas amostras de diversos órgãos para exame histopatológico. A principal lesão encontrada foi degeneração hialina e necrose segmentar multifocal nos músculos estriados esqueléticos e cardíacos (miopatia e cardiopatia degenerativo-necrótica tóxica multifocal polifásica). O diagnóstico foi confirmado pela avaliação toxicológica das sobras da ração suspeita, que detectou 461,67mg/kg de monensina. A morte de 71,5% dos búfalos deste lote ocorreu devido a uma sucessão de erros, que incluíram falhas na formulação da ração e, sobretudo, devido ao uso da monensina em uma espécie altamente sensível. Enfatizamos que, apesar dos possíveis efeitos benéficos do uso AIs como suplemento dietético para bubalinos, somos da opinião que os AIs nunca devem ser empregados na bubalinocultura, uma vez que os eventuais incrementos na produção não compensam o risco iminente de morte, devido a pequena margem de segurança para essa espécie e a inexistência de antídotos.(AU)

Standardization of a rapid quadruplex PCR method for the simultaneous detection of bovine, buffalo, Salmonella spp, and Listeria monocytogenes DNA in milk / [Padronização de um método rápido de PCR quadriplex para a detecção simultânea de DNA de bovino, bubalino, Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em leite]

The objective of the present study was to Standardize a Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol for the authentication of bovine and buffalo milk, and to detect the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. For this, the target DNA was extracted, mixed, and subjected to a PCR assay. Milk samples were defrauded and experimentally contaminated with microorganisms to assess the detection of target DNA at different times of cultivation, bacterial titers, and concentration of genetic material. In addition, the protocol was tested with DNA extracted directly from food, without a pre-enrichment step. The proposed quadruplex PCR showed good accuracy in identifying target DNA sequences. It was possible to simultaneously identify all DNA sequences at the time of inoculation (0h), when the samples were contaminated with 2 CFU/250mL and with 6h of culture when the initial inoculum was 1 CFU/250mL. It was also possible to directly detect DNA sequences from the food when it was inoculated with 3 CFU/mL bacteria. Thus, the proposed methodology showed satisfactory performance, optimization of the analysis time, and a potential for the detection of microorganisms at low titers, which can be used for the detection of fraud and contamination.

O objetivo do presente estudo foi padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a autenticação de leite bovino e bubalino e a detecção da presença de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. Para isso, o DNA-alvo foi extraído, misturado e submetido ao ensaio de PCR. Amostras de leite foram fraudadas e contaminadas experimentalmente com os micro-organismos, para se avaliar a detecção do DNA-alvo em diferentes tempos de cultivo, os títulos bacterianos e a concentração de material genético. Além disso, o protocolo foi testado com DNA extraído diretamente do alimento, sem a etapa de pré-enriquecimento. A PCR quadriplex proposta mostrou boa precisão na identificação de sequências de DNA-alvo. Foi possível identificar simultaneamente todas as sequências de DNA no momento da inoculação (0h), quando as amostras estavam contaminadas com 2 UFC/250mL, e com seis horas de cultura, quando o inóculo inicial foi de 1 UFC/250mL. Também foi possível detectar diretamente as sequências de DNA do alimento quando este foi inoculado com 3 UFC/mL de bactérias. Dessa forma, a metodologia proposta apresentou desempenho satisfatório, otimização do tempo de análise e potencial para detecção de micro-organismos em baixos títulos, podendo ser utilizada para detecção de fraude e contaminação.

Lesões de pele diagnosticadas em búfalos (Bubalus bubalis) na região do baixo Amazonas / Skin injuries diagnosed in buffaloes (Bubalus bubalis) in the lower Amazon region

A pele é o maior órgão do corpo e pode ser acometida por uma série de processos patológicos. As doenças dermatológicas em geral são um aspecto frustrante na clínica de animais de grande porte. Desse modo, o objetivo deste estudo foi relatar lesões de pele diagnosticadas em búfalos na região do Baixo Amazonas, estado do Pará. Foram avaliados 156 búfalos das raças Murrah, Mediterrâneo e seus mestiços; adultos e jovens, com idade variando de oito meses a nove anos. No exame físico constatou-se que 36,5% (57/156) dos animais apresentavam abscessos no local de vacinação. Destes, 12,2% (19/156) eram abscessos com presença de alopecia e 1,3% (2/156) com fistulação Além disso, 1,3% (2/156) dos animais apresentaram ainda no local de vacinação, feridas ulceradas com presença de secreção purulenta. Identificou-se que 3,8% (6/156) dos búfalos possuíam lesões provenientes da marcação a fogo, com queimaduras, de aspecto crostoso, eritematoso e exsudativo, na região da garupa.; A maioria 64,1% (100/156) dos animais apresentaram corte das orelhas, 1,9% (3/156) apresentaram lesões por penetração de corno e em 1,2% (2/156) observou-se lesão de pele no membro posterior direito. Conclui-se que foi possível diagnosticar diversas lesões cutâneas nos búfalos na região do Baixo Amazonas, sendo o erro no manejo dos animais as principais causas das lesões diagnosticadas. Além disso, houve correlação entre dois grupos de animais avaliados (com e sem lesão).

The skin is the largest organ in the body and can be affected by a series of pathological processes. Dermatological diseases in general are a frustrating aspect in the clinic of large animals. Thus, the objective of this study was to report skin lesions diagnosed in buffaloes in the region of Baixo Amazonas, state of Pará. 156 buffaloes of the Murrah, Mediterranean and crossbred breeds were taken; Adults and young people, with ages varying from eight months to nine years. On physical examination, it was found that 36.5% (57/156) of the animals had abscesses at the vaccination site. Of these, 12.2% (19/156) were abscesses with the presence of alopecia and 1.3% (2/156) with fistulation. In addition, 1.3% (2/156) of the animals separated at the vaccination site, ulcerated wounds with the presence of purulent secretion. It was identified that 3.8% (6/156) of the buffaloes had the location of the fire mark, with burns, with a crusted, erythematous and exudative aspect, in the croup region. The majority 64.1% (100/156) of the animals separation of the ears, 1.9% (3/156) dissipation by penetration of the horn and in 1.2% (2/156) a skin lesion was observed in any limb posterior right. It was concluded that it was possible to diagnose several cutaneous lesions in buffaloes in the region of Baixo Amazonas, with the error in handling animals being the main causes of the diagnosed injuries. In addition, there was a correlation between two groups of acquired animals (with and without injury).

Lesões de pele diagnosticadas em búfalos (Bubalus bubalis) na região do baixo Amazonas / Skin injuries diagnosed in buffaloes (Bubalus bubalis) in the lower Amazon region

A pele é o maior órgão do corpo e pode ser acometida por uma série de processos patológicos. As doenças dermatológicas em geral são um aspecto frustrante na clínica de animais de grande porte. Desse modo, o objetivo deste estudo foi relatar lesões de pele diagnosticadas em búfalos na região do Baixo Amazonas, estado do Pará. Foram avaliados 156 búfalos das raças Murrah, Mediterrâneo e seus mestiços; adultos e jovens, com idade variando de oito meses a nove anos. No exame físico constatou-se que 36,5% (57/156) dos animais apresentavam abscessos no local de vacinação. Destes, 12,2% (19/156) eram abscessos com presença de alopecia e 1,3% (2/156) com fistulação Além disso, 1,3% (2/156) dos animais apresentaram ainda no local de vacinação, feridas ulceradas com presença de secreção purulenta. Identificou-se que 3,8% (6/156) dos búfalos possuíam lesões provenientes da marcação a fogo, com queimaduras, de aspecto crostoso, eritematoso e exsudativo, na região da garupa.; A maioria 64,1% (100/156) dos animais apresentaram corte das orelhas, 1,9% (3/156) apresentaram lesões por penetração de corno e em 1,2% (2/156) observou-se lesão de pele no membro posterior direito. Conclui-se que foi possível diagnosticar diversas lesões cutâneas nos búfalos na região do Baixo Amazonas, sendo o erro no manejo dos animais as principais causas das lesões diagnosticadas. Além disso, houve correlação entre dois grupos de animais avaliados (com e sem lesão).

The skin is the largest organ in the body and can be affected by a series of pathological processes. Dermatological diseases in general are a frustrating aspect in the clinic of large animals. Thus, the objective of this study was to report skin lesions diagnosed in buffaloes in the region of Baixo Amazonas, state of Pará. 156 buffaloes of the Murrah, Mediterranean and crossbred breeds were taken; Adults and young people, with ages varying from eight months to nine years. On physical examination, it was found that 36.5% (57/156) of the animals had abscesses at the vaccination site. Of these, 12.2% (19/156) were abscesses with the presence of alopecia and 1.3% (2/156) with fistulation. In addition, 1.3% (2/156) of the animals separated at the vaccination site, ulcerated wounds with the presence of purulent secretion. It was identified that 3.8% (6/156) of the buffaloes had the location of the fire mark, with burns, with a crusted, erythematous and exudative aspect, in the croup region. The majority 64.1% (100/156) of the animals separation of the ears, 1.9% (3/156) dissipation by penetration of the horn and in 1.2% (2/156) a skin lesion was observed in any limb posterior right. It was concluded that it was possible to diagnose several cutaneous lesions in buffaloes in the region of Baixo Amazonas, with the error in handling animals being the main causes of the diagnosed injuries. In addition, there was a correlation between two groups of acquired animals (with and without injury).

Use of cooled buffalo semen as a strategy to increase conception rates in fixed-time artificial insemination programs during unfavorable reproductive periods / [Uso de sêmen resfriado de búfalo como estratégia para aumentar as taxas de concepção em programas de inseminação artificial em tempo fixo, durante períodos reprodutivos desfavoráveis]

The objective of this study was to compare the reproductive efficiency of dairy buffaloes undergoing fixed-time artificial insemination (FTAI) protocols based on progesterone/estrogen (P4/E2) and eCG during unfavorable breeding season using cooled (CS) and frozen semen (FS). A total of 446 buffaloes (> 40 days postpartum) were randomly distributed into four blocks (years): B1-2014 (n = 143), B2-2015 (n = 34), B3-2016 (n = 90), and B4-2017 (n = 179). Each block was subdivided into two (AI with CS and FS using the same ejaculate of each bull). Thus, the block subdivision was as follows: B1 (CS = 71 and FS = 72); B2 (CS = 18 and FS = 16); B3 (CS = 47 and FS = 43); and B4 (CS = 90 and FS = 89). The ejaculates of eight Murrah bulls collected using an artificial vagina were divided into two aliquots: one aliquot was diluted in Botu-Bov® commercial extender and cooled (BB-CS), and the other was diluted in the same extender and frozen (BB-FS). BB-CS aliquots were cooled at 5 °C/24 h using a refrigerator. BB-FS group aliquots were also cooled, and after equilibrating at 5 °C for 4 h, were placed in a 21-L Styrofoam box, 5 cm above the surface of liquid nitrogen. In the afternoon (A) on D0 (2:00 p.m.) the animals received EB 2.0 mg IM (Estrogin®) and an ear implant (CRESTAR® 3.0 mg P4). At D9 (A), the implant was removed, and the animals received eCG 400 IU IM (Folligon® 5000) + Cloprostenol PGF2α 0.530 mg IM (Sincrocio®). At D10 (A), the animals received EB 1.0 mg IM (Estrogin®), and at D12 (8:00 a.m.), AI was performed. At D42, pregnancy was diagnosed via ultrasonography. Total CRs were 48.2% CS and 34.6% FS for years 2014 to 2017, with a significant difference of 13.7% (P<0.05). In conclusion, cooled semen resulted in higher CR than frozen semen in dairy buffaloes under the P4/E2 and eCG FTAI during the unfavorable reproductive season.(AU)

O objetivo deste estudo foi comparar a eficiência reprodutiva de búfalas leiteiras submetidas a protocolos de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) à base de progesterona/estrogênio (P4/E2) e eCG, durante a estação reprodutiva desfavorável, usando-se sêmen resfriado (SR) e congelado (SC) Um total de 446 búfalas (> 40 dias após o parto) foi distribuído aleatoriamente em quatro blocos (anos): B1-2014 (n = 143), B2-2015 (n = 34), B3-2016 (n = 90) e B4-2017 (n = 179). Cada bloco foi subdividido em dois (IA com SR e SC utilizando-se a mesma ejaculação de cada touro). Assim, a subdivisão do bloco foi a seguinte: B1 (SR = 71 e SC = 72); B2 (SR = 18 e SC = 16); B3 (SR = 47 e SC = 43); e B4 (SR = 90 e SC = 89). Os ejaculados de oito touros Murrah coletados com vagina artificial foram divididos em duas alíquotas: uma alíquota diluída em diluente comercial Botu-Bov® e resfriada (BB-SR), e a outra diluída no mesmo diluente e congelada (BB-SC). As alíquotas de BB-SR foram resfriados a 5°C/24h usando-se um refrigerador. As alíquotas do grupo BB-SC também foram resfriadas e, após equilíbrio a 5°C por 4h, foram colocadas em uma caixa de isopor de 21L, 5 cm acima da superfície do nitrogênio líquido. À tarde (A), no D0 (14h), os animais receberam BE 2,0 mg IM (Estrogin®) e um implante auricular (Crestar® 3,0 mg P4). No D9 (A), o implante foi retirado e os animais receberam eCG 400 UI IM (Folligon® 5000) + cloprostenol PGF2α 0,530 mg IM (Sincrocio®). No D10 (A), os animais receberam BE 1,0mg IM (Estrogin®), e, no D12 (8h da manhã), foram realizadas as IAs. No D42, a gestação foi diagnosticada por ultrassonografia. As taxas de concepção (TC) totais foram 48,2% SR e 34,6% SC para os anos de 2014 a 2017, com uma diferença significativa de 13,7% (P<0,05). Em conclusão, o sêmen resfriado resultou em maior TC do que o sêmen congelado em bubalinos leiteiros sob P4/E2 e eCG FTAI durante a estação reprodutiva desfavorável.(AU)

Use of estradiol cypionate to induce ovulation in buffalo raised in floodplain areas of Itacoatiara, Amazonas / [Uso do cipionato de estradiol na indução da ovulação de búfalas criadas em várzea da região de Itacoatiara, Amazonas]

This study aimed to determine the efficiency of estradiol cypionate (EC) as an ovulation inducer in a Timed Artificial Insemination protocol. 69 buffalo cows received an intravaginal progesterone device and 2mg of estradiol benzoate (EB) at D0. On D9, the intravaginal device was removed and 0.53mg of prostaglandin (PGF2α) and 400UI of equine chorionic gonadotrophin (eCG) were applied. The cows were distributed into two groups: the first group received 1mg of EC (ECG) in D9, and the second group received 1mg of EB (EBG) in D10. Inseminations occurred on D11. Ovarian activity and pregnancy diagnosis were analyzed by ultrasonography. There was no difference (P>0.05) in follicular diameter (9.6 ± 0.89mm vs. 10.7 ± 1.12mm; P=0.06), in ovulation rate (90.9% vs. 90.9%; P=1) and pregnancy rate (58.8% vs. 62.9%; P=0.79), however, buffalo cows from the ECG treatment have less time between P4 removal and ovulation when compared to EBG buffalos (37.4h vs. 52.8h; P=0.001), respectively. Thus, it was concluded that the implantation of TAI in the floodplain of Amazonas is feasible and the use of EC results in successful rates, similar to EB.(AU)

O objetivo deste trabalho foi determinar a eficiência do cipionato de estradiol (CE) como indutor de ovulação em um protocolo de inseminação artificial de tempo fixo. Para isso, 69 búfalas receberam no D0 um dispositivo intravaginal de progesterona e 2mg de benzoato de estradiol (BE). No D9, o dispositivo intravaginal foi removido e foram aplicados 0,53mg de prostaglandina (PGF2α) e 400UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG), para, então, os animais serem divididos em dois grupos: um deles (GCE) recebeu 1mg de CE no D9, e o outro (GBE) recebeu 1mg de BE 24h após. As inseminações ocorreram no D11. A atividade ovariana e o diagnóstico de prenhez foram avaliados por ultrassonografia. Não houve diferença (P>0,05) no diâmetro folicular (9,6 ± 0,89mm vs. 10,7 ± 1,12mm; P=0,06), na taxa de ovulação (90,9% vs. 90,9%; P=1) e na taxa de prenhez (58,8% vs. 62,9%; P=0,79), no entanto búfalas do tratamento GCE apresentaram menor tempo entre a remoção da P4 e a ovulação, quando comparadas com as búfalas do GBE (37,4h vs. 52,8h; P=0,001), respectivamente. A implantação da IATF nas várzeas do Amazonas é viável e a utilização do CE resulta em taxas de sucesso similares ao BE.(AU)

Deciphering the functional role of EGR1 in Prostaglandin F2 alpha induced luteal regression applying CRISPR in corpus luteum of buffalo

BACKGROUND: PGF2α is essential for the induction of the corpus luteum regression which in turn reduces progesterone production. Early growth response (EGR) proteins are Cys2-His2-type zinc-finger transcription factor that are strongly linked to cellular proliferation, survival and apoptosis. Rapid elevation of EGR1 was observed after luteolytic dose of PGF2α. EGR1 is involved in the transactivation of many genes, including TGFß1, which plays an important role during luteal regression. METHODS: The current study was conducted in buffalo luteal cells with the aim to better understand the role of EGR1 in transactivation of TGFß1 during PGF2α induced luteal regression. Luteal cells from mid stage corpus luteum of buffalo were cultured and treated with different doses of PGF2α for different time durations. Relative expression of mRNAs encoding for enzymes within the progesterone biosynthetic pathway (3ßHSD, CYP11A1 and StAR); Caspase 3; AKT were analyzed to confirm the occurrence of luteolytic event. To determine if EGR1 is involved in the PGF2α induced luteal regression via induction of TGFß1 expression, we knocked out the EGR1 gene by using CRISPR/Cas9. RESULT: The present experiment determined whether EGR1 protein expression in luteal cells was responsive to PGF2α treatment. Quantification of EGR1 and TGFß1 mRNA showed significant up regulation in luteal cells of buffalo at 12 h post PGF2α induction. In order to validate the role of PGF2α on stimulating the expression of TGFß1 by an EGR1 dependent mechanism we knocked out EGR1. The EGR1 ablated luteal cells were stimulated with PGF2α and it was observed that EGR1 KO did not modulate the PGF2α induced expression of TGFß1. In PGF2α treated EGR1 KO luteal cell, the mRNA expression of Caspase 3 was significantly increased compared to PGF2α treated wild type luteal cells maintained for 12 h. We also studied the influence of EGR1 on steroidogenesis. The EGR1 KO luteal cells with PGF2α treatment showed no substantial difference either in the progesterone concentration or in StAR mRNA expression with PGF2α-treated wild type luteal cells. CONCLUSION: These results suggest that EGR1 signaling is not the only factor which plays a role in the regulation of PGF2α induced TGFß1 signaling for luteolysis.

Spoligotyping, genotyping, and spatial distribution of Mycobacterium bovis in cattle in the state of Bahia, Brazil / Genotipagem por spoligotyping e distribuição espacial de Mycobacterium bovis em bovinos no estado da Bahia, Brasil

Mycobacterium bovis is responsible for bovine and buffalo tuberculosis, an important zoonotic disease with global distribution. The knowledge of the distribution and the precise identification of this disease, including advanced diagnoses such as spoligotyping, allows choosing the best strategies to fight the disease's progress. The present work aimed to investigate mycobacteria's presence, genotype their strains, and evaluate tuberculosis cases' spatial distribution from suggestive lesions in carcasses of bovine and buffalo inspected in slaughterhouses under an official inspection regime in the state of Bahia, Brazil. The study investigated 453,417 animals. Among these, 31 (0.007%) from 17 municipalities were suspected of tuberculosis. Among the culture medium growth, 95% of these were categorized as alcohol-acid resistant bacilli (BAAR). All isolates were subjected to spoligotyping and 95% were confirmed as M. bovis (SB0120, SB0121, SB0852, SB0828, SB0295, SB0881, SB1648, SB6119, SB0140, SB1055). The strain SB0120 was the most prevalent, and this profile has been described in cases of human tuberculosis by M. bovis, highlighting the zoonotic potential of this profile. This study also identified strains never reported in Bahia, highlighting a distinctive pattern from other parts of Brazil, besides mixed infections. Besides, to identify strains never before described in the state, highlighting a distinctive pattern in Brazil (SB6119 and SB0852, respectively). An unpublished profile was identified and inserted in the international database (Mbovis.org), named SB2715.(AU)

O Mycobacterium bovis é o responsável pela tuberculose bovina e bubalina, doença zoonótica importante e com distribuição global. O conhecimento da distribuição e a identificação precisa dessa enfermidade, incluindo diagnósticos mais avançados como o spoligotyping, permite escolher as melhores estratégias de combate ao avanço da doença. O presente trabalho objetivou investigar a presença de micobactérias, genotipar suas estirpes e avaliar a distribuição espacial dos casos de tuberculose a partir de lesões sugestivas nas carcaças de bovinos e bubalinos inspecionadas em frigoríficos sob regime de inspeção oficial no estado da Bahia. Foram investigados 453.417 animais dentre os quais 31 (0,007%) foram suspeitos de doença e provenientes de 17 municípios. Após o crescimento em meio de cultura, 95% foram categorizados como bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR). Todos os isolados foram submetidos à spoligotyping e 95% foram confirmados M. bovis (SB0120, SB0121, SB0852, SB0828, SB0295, SB0881, SB1648, SB6119, SB0140, SB1055). A cepa SB0120 foi a mais prevalente e este perfil vem sendo descrito na literatura com casos de tuberculose humana por M. bovis ressaltando o potencial zoonótico deste perfil. Este estudo também identificou cepas nunca relatadas no estado da Bahia, destacando um padrão distinto de outras partes do Brasil, além da existência de infecções mistas. Permitiu ainda relatar linhagens nunca antes descritas no estado com destaque para um padrão novo no Brasil (SB6119 e SB0852 respectivamente). Um perfil inédito identificado foi identificado e inserido no banco de dados internacional (Mbovis.org), nomeado SB2715.(AU)

Buffaloes (Bubalus bubalis) mycotic eye infection: reported herd cases in Thi-Qar province, Iraq / Infecção ocular micótica em búfalos (Bubalus bubalis): relato de casos em rebanho na província de Thi-Qar, Iraque

Buffaloes are one of the important farm animals in the south of Iraq and play an essential economical role mainly acting as dairy, meat, and draft animals. This study intended to diagnose buffalo mycotic eye infections in Thi-Qar province/Iraq. Some 250 buffaloes in the herd of 3,700 animals suffered from eye infections from December 2017 to November 2018. Eye swabs were collected from each infected eye of the affected buffaloes of both sexes before treatment. The animals were in different age groups. All samples were transferred to the laboratory in transfer media, and cultured on Sabouraud dextrose (SDA) agar with and without 0.05 g/mL and 0.4 g/mL chloramphenicol and cycloheximide, respectively. Later, the agars were incubated at 25oC and 37oC. The total percentage of eye infection was (6.75%), constituting (49.2%) mycotic infections. The predominant clinical manifestations that appeared on the infected buffaloes were eye inflammation represented by congestion, lacrimation, the opacity of cornea and edema, and reduced productivity of the infected animals. Different fungal isolates were identified from the samples including Aspergillus fumigates, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Penicillium spp., Alternaria spp., Fusarium spp., Candida spp., Cladosporium spp., Rhodotorula spp., Mucor spp. and Rhizopus spp. Calves buffaloes below one-year-old were more prone to mycotic infection than one-year-old or more. Additionally, male buffaloes were more susceptible to infection than females. In conclusion, this study isolated various types of fungus from the inflamed eyes of buffaloes. Fungal eye infection and the potential risk factors for fungal keratitis in buffaloes were also investigated. The study also approved the rapid diagnosis of fungi by direct microscopic detection and culture. The author recommends future studies including large numbers of the buffalo herd in Iraq to determine the epidemiology of this condition in the country.(AU)

Os búfalos são um dos animais de fazenda mais importantes no sul do Iraque e desempenham um papel econômico essencial, atuando principalmente na produção de leite, carne e como animal de tração. Este estudo objetivou diagnosticar infecções oculares micóticas em búfalos na província de Thi-Qar, Iraque. 250 búfalos no rebanho de um total de 3700 animais apresentaram infecção ocular durante o período compreendido entre dezembro de 2017 e novembro de 2018. Os esfregaços oculares foram colhidos dos olhos infectados dos búfalos afetados de ambos os sexos antes do tratamento. Os animais estavam em diferentes faixas etárias. Todas as amostras foram transferidas para o laboratório por meio de transferência e cultivadas em Ágar Sabouraud e Dextrose (SDA) com e sem 0,05 g/mL e 0,4 g/mL de cloranfenicol e cicloheximida, respectivamente. Posteriormente, os ágares foram incubados a 25ºC e 37ºC. A porcentagem total de infecção ocular foi de 6,75%, representando 49,2% de infecção micótica. As manifestações clínicas predominantes nos búfalos infectados foram inflamação ocular com congestão, lacrimejamento, opacidade da córnea e edema. Os animais acometidos também apresentaram redução de produtividade. Diferentes isolados de fungos foram identificados a partir das amostras, incluindo Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Penicillium spp., Alternaria spp., Fusarium spp., Candida spp., Cladosporium spp., Rhodotorula spp., Mucour spp. e Rizopus spp. Búfalos com menos de um ano de idade foram mais propensos a infecções micóticas do que com um ano ou mais. Além disso, os búfalos machos foram mais suscetíveis a infecção do que as fêmeas. Em conclusão, este estudo registrou o isolamento de vários tipos de fungos em olhos inflamados de búfalos. Além disso, a infecção ocular por fungos e os fatores de risco potenciais para ceratite fúngica em búfalos também foram observados. O estudo também aprovou o diagnóstico rápido de fungos por detecção microscópica direta e cultura. O autor recomenda outro estudo futuro, incluindo um grande número de rebanhos de búfalos no Iraque para determinar a epidemiologia desta condição no país.(AU)