Chave fotográfica auxiliar na identificação de espécies de flebotomíneos (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) da Região Metropolitana da Grande São Paulo / Photographic key to aid in the identification of sand fly species (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) from the Greater São Paulo Metropolitan Region

Introdução: As leishmanioses são antropozoonoses que têm como agentes mais de 20 espécies do gênero Leishmania, transmitidas aos humanos através do repasto sanguíneo realizado por fêmeas de flebotomíneos (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) infectadas por esses protozoários. A elaboração de uma chave fotográfica para identificação de espécies de flebotomíneos para uso simultâneo com a chave dicotômica de Galati, 2018 pode auxiliar profissionais e leigos na identificação desses insetos, colaborando com estudos epidemiológicos sobre as leishmanioses e vigilância de seus vetores, bem como profilaxia e controle dessas doenças na população. Objetivo: Confeccionar chaves fotográficas auxiliares para a identificação de espécies de flebotomíneos com registros para a Grande São Paulo. Material e Métodos: Após levantamento das espécies que ocorrem na Grande São Paulo, foram fotografadas estruturas morfológicas de espécimes machos e fêmeas adultos, montados em lâminas pertencentes à coleção de referência da Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo (FSP-USP) e Coleção didática do Laboratório de Entomologia em Saúde Pública da FSP-USP (LESP-Phlebotominae da FSP-USP), e também da Coleção de Fauna Sinantrópica do Município de São Paulo do Laboratório de Pesquisa em Fauna Sinantrópica (CFS do LABFAUNA). Para execução e tratamento das fotografias utilizou-se o microscópio óptico Axio Zeiss Lab. A1 acoplado a uma câmera fotográfica ligada a um computador com software Zeiss Zen 2012 (Blue edition). Resultados: Dos 39 municípios que compõem a região metropolitana da Grande São Paulo, em 32 deles, existem registros da ocorrência de flebotomíneos. Ao todo foram identificadas 41 espécies pertencentes às subtribos Brumptomyiina, Lutzomyiina, Psychodopygina e Sergentomyiina. Foram confeccionadas nove chaves fotográficas, sendo uma chave para ambos os sexos para identificação das subtribos a que pertencem, quatro chaves para identificação dos machos e quatro para identificação das fêmeas das respectivas subtribos. Foram produzidas aproximadamente 220 fotos de estruturas pertencentes à cabeça, tórax, abdômen e genitálias de machos e fêmeas. Conclusão: Os municípios com as maiores riquezas de espécies foram: São Paulo, Pirapora do Bom Jesus e ltapevi; e as menores, Poá e Ferraz de Vasconcelos. Pintomyia fischeri foi a espécie com registro em um maior número de municípios, seguida por Migonemyia migonei e Psychodopygus lloydi. Distinguiu-se pela primeira vez as fêmeas de Brumptomyia ortizi e Brumptomyia cardosoi, observando diferenças na comparação do tamanho do primeiro flagelômero em relação ao tamanho do labro-epifaringe.

lntroduction: Leishmaniases are anthropozoonoses whose agents are more than 20 species of the genus Leishmania, transmitted to humans through the blood meal performed by female sandflies (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) infected by these protozoa. The elaboration of a photographic key for identlfication of sand fly species for simultaneous use with the dichotomous key of Galati, 2018 can help professionals and lay people in the identification of these insects, collaborating with epidemiological studies on leishmaniases and surveillance of their vectors, as well as prophylaxis and control of these diseases in the population. Objective: To make auxiliary photographic keys to identify sand fly species with records for Greater São Paulo. Material and Methods: After surveying the species that occur in Greater São Paulo, morphological structures of their males and female adults mounted on slides were photographed. These specimens belonging to the reference collection of the Faculty of Public Health of the University of São Paulo (FSP-USP) and didactic collection from the Laboratory of Entomology in Public Health at FSP-USP (LESP-Phlebotominae at FSP-USP), and also from the Synanthropic Fauna Collection of the Municipality of São Paulo from the Research Laboratory of Synanthropic Fauna (CFS - LABFAUNA). For the execution and treatment of the photographs, the optical microscope Axio Zeiss Lab A1 was used. attached to a camera connected to a computer with Zeiss Zen 2012 software (Blue edition). Results: Of the 39 municipalities that make up the metropolitan region of Greater São Paulo, 32 of them have records of the occurrence of sand flies. A total of 41 species belonging to the Brumptomyiina, Lutzomyiina, Psychodopygina and Sergentomyiina subtribes were identified. Nine photographic keys were made, one key for both sexes to identify the subtribes to which they belong, four keys for males and four for females to identify the species of the respective subtribes. Approximately 220 photos of structures belonging to the head, thorax, abdomen and genitalia of males and females were taken. Conclusion: The municipalities with the highest species richness were São Paulo, Pirapora do Bom Jesus and ltapevi; and the smallest, Poá and Ferraz de Vasconcelos. Pintomyia físcheri was the species registered in a greater number of municipalities, followed by Migonemyia migonei and Psychodopygus lloydi. The females of Brumptomyia ortizi and Brumptomyia cardosoi were distinguished for the first time, observing differences in the comparison of the size of the first flagellomere in relation to the size of the labro-epipharynx.

Levantamento da fauna e infecção por Leishmania spp em flebotomíneos ( Diptera: Psychodidae) na localidade de Catimbau Grande município de Rio Bonito estado do Rio de Janeiro / Fauna survey and infection by Leishmania spp in sandflies (Diptera: Psychodidae) in the locality of Catimbau Grande municipality of Rio Bonito state of Rio de Janeiro

As leishmanioses (tegumentar e visceral) são antropozoonoses causadas por protozoários do gênero Leishmania apontadas como doenças negligenciadas. São endêmicas em 98 países e consideradas neste contexto como um grande problema de saúde pública global. Fatores como desmatamento, migração e urbanização desordenada alteram os habitats dos flebotomíneos, além de provocar a mudança e distribuição de hospedeiros e reservatórios em seus nichos originais. O conhecimento da biologia dos flebotomíneos e o estudo da sua presença em determinada área é de extrema importância para elucidar a epidemiologia local da doença. O objetivo do estudo foi realizar um levantamento da fauna flebotomínica e o diagnóstico de infecção natural de fêmeas de flebotomíneos por Leishmania spp. A área de estudo foi Catimbau Grande, um povoado do município de Rio Bonito no Estado do Rio de Janeiro. Os insetos foram capturados com armadilhas luminosas HP (tipo CDC) instaladas aproximadamente a 1m do solo no peridomicílio e no extradomicílio, no período de janeiro a julho de 2019, as capturas foram realizadas a cada 15 dias em média. Foram registrados em fichas de campo dados como altitude, temperatura, umidade e fase lunar. No laboratório foi realizada a triagem dos insetos capturados e os flebotomíneos separados para montagem em lâmina e identificação. Foram identificados 157 flebotomíneos (67 fêmeas e 90 machos), duas espécies foram identificadas: Nyssomyia intermedia e Migonemyia migonei. Nenhuma das fêmeas analisadas para infecção natural apresentou positividade para Leishmania spp. (AU)

Cutaneous leishmaniasis - Awareness, knowledge and practices among general population in rural and urban areas in Malakand region, Pakistan / Leishmaniose cutânea - conscientização, conhecimentos e práticas entre a população em geral nas áreas rurais e urbanas da região de Malakand, Paquistão

Malakand region is an endemic area for cutaneous leishmaniasis (CL). However, there are limited number of studies of this disease in Pakistan. Therefore, a study was conducted to understand the level of awareness attitude and practice among the residents of Makaland towards CL and the disease vectors. This study adopted a cross-sectional approach with a total of 400 respondents (n=93 rural and n= 307 urban). Overall, the population in Malakand region (61.2%) were well-informed in the role of sand fly in transmitting diseases, but most lack knowledge on the vector's behavior and almost a quarter (24.5%) were unable to provide knowledge on proper control measures. Alarmingly, the practice and attitudes of the general population was not satisfactory as close to half (49.8%) of the population did adopt any control method. This study calls for increase in awareness through health education campaign to reduce the risk of cutaneous leishmaniasis outbreaks in the future.

A região de Malakand é uma área endêmica para leishmaniose cutânea (CL). No entanto, há um número limitado de estudos sobre esta doença no Paquistão. Portanto, foi realizado um estudo para entender o nível de atitude e prática de conscientização entre os residentes de Makaland em relação aos CL e os vetores da doença. Este estudo adotou uma abordagem transversal com um total de 400 entrevistados (n = 93 rural e n = 307 urbano). No geral, a população da região de Malakand (61,2%) estava bem informada sobre o papel da mosca na transmissão de doenças, mas a maioria não possui conhecimento sobre o comportamento do vetor e quase um quarto (24,5%) foi incapaz de fornecer conhecimento sobre medidas de controle adequadas . De maneira alarmante, a prática e as atitudes da população em geral não foram satisfatórias, pois cerca da metade (49,8%) da população adotou algum método de controle. Este estudo apela ao aumento da conscientização por meio de campanhas de educação em saúde para reduzir o risco de surtos de leishmaniose cutânea no futuro.

Cutaneous leishmaniasis–Awareness, knowledge and practices among general population in rural and urban areas in Malakand region, Pakistan / Leishmaniose cutânea - conscientização, conhecimentos e práticas entre a população em geral nas áreas rurais e urbanas da região de Malakand, Paquistão

Malakand region is an endemic area for cutaneous leishmaniasis (CL). However, there are limited number of studies of this disease in Pakistan. Therefore, a study was conducted to understand the level of awareness attitude and practice among the residents of Makaland towards CL and the disease vectors. This study adopted a cross-sectional approach with a total of 400 respondents (n=93 rural and n= 307 urban). Overall, the population in Malakand region (61.2%) were well-informed in the role of sand fly in transmitting diseases, but most lack knowledge on the vector's behavior and almost a quarter (24.5%) were unable to provide knowledge on proper control measures. Alarmingly, the practice and attitudes of the general population was not satisfactory as close to half (49.8%) of the population did adopt any control method. This study calls for increase in awareness through health education campaign to reduce the risk of cutaneous leishmaniasis outbreaks in the future.

A região de Malakand é uma área endêmica para leishmaniose cutânea (CL). No entanto, há um número limitado de estudos sobre esta doença no Paquistão. Portanto, foi realizado um estudo para entender o nível de atitude e prática de conscientização entre os residentes de Makaland em relação aos CL e os vetores da doença. Este estudo adotou uma abordagem transversal com um total de 400 entrevistados (n = 93 rural e n = 307 urbano). No geral, a população da região de Malakand (61,2%) estava bem informada sobre o papel da mosca na transmissão de doenças, mas a maioria não possui conhecimento sobre o comportamento do vetor e quase um quarto (24,5%) foi incapaz de fornecer conhecimento sobre medidas de controle adequadas . De maneira alarmante, a prática e as atitudes da população em geral não foram satisfatórias, pois cerca da metade (49,8%) da população adotou algum método de controle. Este estudo apela ao aumento da conscientização por meio de campanhas de educação em saúde para reduzir o risco de surtos de leishmaniose cutânea no futuro.

The transmission of visceral leishmaniasis in the municipality of Guarujá, on the Coast of São Paulo state, Brazil

ABSTRACT OBJECTIVE To perform an entomological survey, evaluating the circulation of Leishmania spp. in sand flies captured from the new foci of visceral leishmaniasis (VL) in the coastal region of São Paulo state. METHODS Sand flies were captured from November 2016 to September 2018 using light traps of the Centers for Disease Control (CDC), in the neighborhood where VL cases were reported. Leishmania spp. circulation was evaluated by gut dissection and molecular analysis of the females captured. RESULTS Nyssomyia intermedia was the more frequent species (90,7%) within the 1,203 sand flies captured. We found no flagellates in dissected females, but two pools containing females of Ny. intermedia presented DNA of L. infantum. CONCLUSION Our results suggest that Ny. intermedia might be involved in the establishment of this new VL focus in Sao Paulo. However, before incriminating this species as a L. infantum vector, further studies should investigate other vectorial capacity parameters, including competence, survival, and feeding habits.

Avaliação do efeito dos compostos biológicos Bacillus thuringiensis var. israelensis e Espinosade na sobrevida de larvas de Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae) sob condições de laboratório / Evaluation of the effect of biological compounds Bacillus thuringiensis var. israelensis and Spinosade on the survival of Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae) larvae under laboratory conditions

A leishmaniose visceral (LV) continua sendo um grave problema de Saúde Pública principalmente pela expansão a localidades urbanas do Brasil nas últimas décadas. Esta zoonose é causada pelo protozoário Leishmania infantum, transmitida principalmente pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis e tem o cão doméstico como principal reservatório vertebrado. As formas de controle preconizadas no Brasil têm mostrado baixa efetividade na redução de casos e de óbitos, com dificuldades tanto no controle de reservatórios (dificuldades para execução da eutanásia) bem como no controle de vetores. Estes fatos trazem à tona a necessidade de estudos de formas alternativas que possam contribuir em um contexto de manejo integrado. O objetivo foi comparar a suscetibilidade e a sobrevida de formas imaturas de Lutzomyia longipalpis aos larvicidas biológicos Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) e Espinosade. Foram realizados experimentos com doses de 10 mg/g e 20 mg/g dos compostos Bti e Espinosade aplicados no alimento oferecido aos frascos contendo larvas de Lu. longipalpis de terceiro estádio larval. Para cada concentração/composto, foram expostas 30 larvas em 3 réplicas. Como controle, foram utilizadas 30 larvas com aplicação de água. Nos tratamento com Bti foi observada mortalidade de 18,8% na concentração de 10 mg/g e de 50,4% na concentração de 20 mg/g. Quanto ao tempo de desenvolvimento larval e de pupas, observou-se que o tempo mediano de emergência dos alados foi 2,35 vezes maior na concentração de 20 mg/g e 1,9 vezes maior na concentração 10 mg/g, comparados ao grupo controle. Para o composto Espinosade nestas concentrações iniciais, a mortalidade foi de 100%. O ensaio foi repetido com o Espinosade em 4 diluições da menor dose testada anteriormente (10 mg/g), na proporção de 1:10, 1:20. 1:50 e 1:100, com resultados de mortalidade de 71%, 66,5%, 2,1% e 1,4% respectivamente. A DL90 foi estimada em 6,3 mg/g. Os resultados sugerem potencial uso dos dois compostos para o controle de imaturos de Lu. longipalpis, aplicado de forma diluída diretamente nos potenciais criadouros destes insetos, como forma complementar às ações de controle integrados em áreas de transmissão de LV.

Visceral leishmaniasis (LV) is a serious issue in public health in Brazil mainly by the spread in urban areas in the last decades. This zoonosis is caused by the protozoan Leishmania infantum, transmitted mainly by Lutzomyia longipalpis. The control measures recommended in Brazil showed low effectiveness in the reduction of cases, with difficulties in the control of domestic reservoirs as well as the vector control. These facts highlight the necessity of studies evaluating alternative methods that can contribute in an integrated management approach. The objective was to compare the susceptibility and the survival of Lutzomyia longipalpis immature forms to the biological compounds Bacillus thuringiensis var. israelensis and Spinosade. Experiments with doses of 10 mg/g and 20 mg/g of each compound, Bacillus thuringiensis var. israelensis and Spinosade were realized applying in Petri dishes containing larvae third instar. For each stage 30 larvae were exposed to each concentration compound and the observation was realized in triplicate. As control 30 larvae of each instar in which was applied water. The treatments with Bti resulted in mortality of 18.78% at a concentration of 10 mg/g and of 50.42% at a concentration of 20 mg/g and delay in the development of immature forms, with a median time for emergence of adults forms 2.35 times higher in the first group and 1.9 times higher in the second compared to the control group. For the Spinosad compound at these initial concentrations, the mortality was 100%. The assay was repeated with Espinosade in 4 dilutions of the lowest dose tested previously (10 mg/g), in the proportion of 1:10, 1:20. 1:50 and 1:100, with mortality results of 71%, 66.5%, 2.1% and 1.4% respectively. LC90 was estimated at 6.3 mg/g. The results suggest potential use of the two compounds for the control of Lu. Longipalpis immatures, applied in a diluted form directly to the potential breeding sites of these insects, as a complement to integrated control actions in areas of VL transmission.

Taxonomia integrativa de espécies da série Shannoni de Psathyromyia (Psathyromyia) Barretto, 1962 (Diptera, Psychodidae, Phlebotominae) do estado de São Paulo / Integrative taxonomy of Psathyromyia (Psathyromyia) Barretto, 1962 Shannoni series species (Diptera, Psychodidae, Phlebotominae) from São Paulo state

Os flebotomíneos são dípteros que habitam ambientes florestais e antrópicos e são encontrados comumente em cavernas. Com exceção da Antártica, habitam todos os demais continentes. Atualmente o grupo é composto por pouco mais de 1.000 espécies. As fêmeas são hematófagas e várias espécies apresentam relevância em saúde pública como vetores de agentes de leishmanioses, arboviroses e bartonelose. A taxonomia dos flebotomíneos vem se desenvolvendo desde o início do século XX amplamente baseada em estudos morfológicos e morfométricos lineares das formas adultas. Atualmente tem sido recomendada a abordagem integrativa na delimitação das espécies, que além dos estudos clássicos, utiliza informações moleculares, das formas imaturas, geometria e ecologia, além de outros parâmetros. O objetivo deste projeto foi contribuir para um melhor conhecimento das quatro espécies do subgênero Psathyromyia que ocorrem no estado de São Paulo, duas das quais foram recentemente descritas (Pa. baratai e Pa. ribeirensis) e as duas outras revalidadas (Pa. bigeniculata e Pa. limai), a fim de encontrar diferenças entre as fêmeas dessas espécies, morfologicamente muito semelhantes. Coleções entomológicas foram consultadas, e para a coleta de espécimes foram amostrados ambientes florestais e antrópicos do estado de São Paulo e Mato Grosso do Sul, utilizando diferentes armadilhas de coleta. Foram realizadas análises discriminantes na morfometria linear de estruturas da cabeça e na morfometria geométrica das asas, além de análises moleculares do fragmento do gene citocromo c oxidase subunidade I (COI) por meio da construção de uma árvore de Neighbor-Joining (NJ) e método de delimitação de espécies ABGD (Automatic Barcode Gap Discovery), com a inclusão de sequências de Pa. abonnenci, Pa. bigeniculata e Pa. shannoni depositadas no GenBank. Como resultados, as análises discriminantes da morfometria linear possibilitaram a separação das espécies, exceto o par Pa. ribeirensis/Pa. limai. Para a morfometria geométrica, o tamanho do centroide evidenciou diferenças entre as asas de Pa. limai e Pa. ribeirensis em relação à de Pa. bigeniculata e a análise de variância de procrustes evidenciou a separação de todas as espécies, mesmo após a validação cruzada, exceto entre Pa. ribeirensis e Pa. limai, sugerindo que essas duas espécies são indistinguíveis morfometricamente. As análises do fragmento do gene COI foram úteis para separar as espécies. Psthyromyia bigeniculata apresentou altos valores de distância intraespecífica (4,7%), que pode representar diversidade críptica. De modo geral, a taxonomia integrativa foi útil para separar três das quatro espécies estudadas e corrobora a retirada de Pa. limai e Pa. bigeniculata da sinonímia de Pa. shannoni, bem como a descrição de Pa. baratai como um táxon diferente. Fêmeas de Pa. ribeirensis permanecem indistinguíveis daquelas de Pa. limai pela morfologia e morfometrias linear e geométrica.

Sand flies are dipterans that inhabit forest and anthropic environments and are commonly found in caves. Except for Antarctica, they inhabit all other continents. Currently the group comprises about 1,000 species. Females are hematophagous and several species are relevant for public health as leishmaniasis, arboviruses and bartonellosis agent vectors. The taxonomy of sand flies has been developing since the beginning of the 20th century, largely based on morphological and linear morphometric studies of the adult forms. Currently, an integrative approach to species delimitation has been recommended, which, in addition to classical studies, uses molecular information, immature forms, geometry and ecology, among other parameters. The aim of this project was to contribute to a better understanding of the four species of the Psathyromyia subgenus that occur in the state of São Paulo, two of them were recently described (Pa. baratai and Pa. ribeirensis) and the two others revalidated (Pa. bigeniculata and Pa. limai), in order to find differences between the females of the species, which have similar morphological traits. Museum entomological collections were consulted, and wild-caught specimens were collected in forest and anthropic environments in the states of São Paulo and Mato Grosso do Sul, using different collection traps. Discriminant analyzes were performed on the linear morphometry of head structures and on geometric morphometry of wing, in addition to molecular analyzes of the cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene fragment by means of the construction of a Neighbor-Joining (NJ) tree and species delimitation method ABGD (Automatic Barcode Gap Discovery), wth the inclusion of Pa. abonnenci, Pa. bigeniculata and Pa. shannoni sequences deposited in GenBank. As a result, the discriminant analyzes of linear morphometry allowed the separation of species, except for the pair Pa. ribeirensis/Pa. limai. For the geometric morphometry, the centroid size showed differences between wings of Pa. limai and Pa. ribeirensis in relation to that of Pa. bigeniculata, while the procrustes analysis of variance showed the separation of all species even after cross-validation, except between Pa. ribeirensis and Pa. limai, suggesting that these two species are morphometrically indistinguishable. COI gene fragment analyzes were useful to separate the species. Psthyromyia bigeniculata showed high intraspecific distance values (4.7%), which may represent cryptic diversity. In general, the integrative taxonomy was useful to separate three of the four species studied and corroborates the resurrection of Pa. limai and Pa. bigeniculata from the synonymy of Pa. shannoni, as well as the description of Pa. baratai as a different taxon. Females of Pa. ribeirensis remain indistinguishable from those of Pa. limai for linear and geometric morphology and morphology.

The gene expression of Leishmania infantum chagasi inside Lutzomyia longipalpis, the main vector of visceral leishmaniasis in Brazil

Leishmania infantum chagasi is the causative agent and Lutzomyia longipalpis is the main vector of visceral leishmaniasis in the Americas. We investigated the expression of Leishmania genes within L. longipalpis after artificial infection. mRNAs from genes involved in sugar and amino acid metabolism were upregulated at times of high parasite proliferation inside the insect. mRNAs from genes involved in metacyclogenesis had higher expression in late stages of infection. Other modulated genes of interest were involved in immunomodulation, purine salvage pathway and protein recycling. These data reveal aspects of the adaptation of the parasite to the microenvironment of the vector gut and reflect the preparation for infection in the vertebrate.

In silico and in vitro evaluation of primers for molecular differentiation of Leishmania species / Avaliação in silico e in vitro de iniciadores para a diferenciação molecular de espécies de Leishmania

Abstract Leishmaniasis is a zoonotic disease caused by over 20 species of protozoan parasites of the genus Leishmania. Infection is commonly spread by sandflies and produces a wide spectrum of clinical signs and symptoms. Therefore, from an epidemiological and therapeutic standpoint, it is important to detect and differentiate Leishmania spp. The objective of this study was to combinate in silico and in vitro strategies to evaluate the analytical specificity of primers previously described in the literature. According to electronic PCR (e-PCR) analysis, 23 out of 141 pairs of primers selected through literature search matched their previously reported analytical specificity. In vitro evaluation of nine of these primer pairs by quantitative PCR (qPCR) confirmed the analytical specificity of five of them at the level of Leishmania spp., L. mexicana complex or Leishmania and Viannia subgenera. Based on these findings, the combination of e-PCR and qPCR is suggested to be a valuable approach to maximize the specificity of new primer pairs for the laboratory diagnosis of infections with Leishmania spp.

Resumo As leishmanioses são zoonoses causadas por mais de 20 espécies de protozoários do gênero Leishmania. As infecções são comumente disseminadas por flebotomíneos e causam um amplo espectro de manifestações clínicas. Portanto, a detecção e diferenciação de espécies de Leishmania são importantes do ponto de vista epidemiológico e terapêutico. O objetivo deste estudo foi combinar estratégias in silico e in vitro para avaliar a especificidade analítica dos primers descritos anteriormente na literatura. De acordo com a PCR eletrônica (e-PCR), 23 dos 141 pares de primers selecionados por meio de pesquisa da literatura estavam de acordo com a especificidade analítica anteriormente relatada. A avaliação in vitro de nove desses pares de primers, por PCR quantitativa (qPCR), confirmou a especificidade analítica de cinco deles ao nível de espécie de Leishmania, do complexo L. mexicana ou dos subgêneros Leishmania e Viannia. Com base nos resultados, sugere-se que a combinação de e-PCR e qPCR é uma abordagem valiosa para a validação e maximização da especificidade de novos pares de primers para o diagnóstico laboratorial de infecções com Leishmania spp.

Persistent cutaneous canine leishmaniasis caused by Leishmania (Viannia) braziliensis in an area with predominance of Nyssomyia neivai in the state of São Paulo, Brazil / Leishmaniose cutânea canina persistente causada por Leishmania (Viannia) braziliensis em uma área com predomínio de Nyssomyia neivai no estado de São Paulo, Brasil

Abstract American cutaneous leishmaniasis (ACL) is a neglected zoonotic disease caused mainly by Leishmania (Viannia) braziliensis, which is endemic throughout Brazil. Canine ACL cases were investigated in a rural area of Monte Mor, São Paulo, where a human ACL case had been confirmed. Dogs were evaluated through clinical and laboratory diagnosis including serology, cytological tissue preparations and PCR on skin lesions, lymph node and bone marrow samples. Entomological investigations on sandflies trapped in the surroundings of the study area were performed for 14 months. Nyssomyia neivai was the predominant phlebotomine species, comprising 94.65% of the captured specimens (832 out of 879). This species was the most abundant in all trapping sites, including human homes and dog shelters. Ny. whitmani, Migonemyia migonei, Pintomyia monticola, Evandromyia cortellezzii, Pi. fischeri and Expapilata firmatoi were also captured. Two of the three dogs examined were positive for anti-Leishmania IgG in ELISA using the antigen Fucose mannose ligand and skin samples were positive for L. (V.) braziliensis in PCR, but all the samples collected were negative for L. (L.) infantum. One of the dogs had a confirmed persistent infection for more than one year.

Resumo A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) é uma doença zoonótica negligenciada, causada principalmente por Leishmania (Viannia) braziliensis, sendo endêmica em todo o Brasil. Foram investigados casos de LTA canina em uma área rural da cidade de Monte Mor, São Paulo, onde foi confirmado um caso humano de LTA. Os cães foram avaliados por diagnóstico clínico e laboratorial, incluindo sorologia, esfregaços microscópicos e PCR de amostras em lesões de pele, linfonodos e medula óssea. Também foram realizadas investigações entomológicas durante 14 meses, usando-se armadilhas luminosas para flebotomíneos nas proximidades da área de estudo. Nyssomyia neivai foi a espécie de flebotomíneo predominante com 94,65% dos espécimes capturados (832 de 879). Essa espécie foi a mais abundante em todos os locais de captura, incluindo-se abrigos para humanos e cães. Foram também capturadas as espécies Ny. whitmani, Migonemyia migonei, Pintomyia monticola, Evandromyia cortellezzii, Pi. fischeri e Expapilata firmatoi. Dos três cães examinados, dois apresentaram IgG anti-Leishmania positivo no ELISA, usando-se o antígeno "Fucose mannose ligand", PCR da lesão de pele positivo para L. (V.) braziliensis e negativo em todas amostras para L. (L.) infantum. Um dos cães apresentou infecção persistente por mais de um ano.

Proposta de Procedimento Operacional Padrão (POP) para a Vigilância Entomológica da leishmaniose visceral canina no Município de Franco da Rocha, Estado de São Paulo / Proposal of a Standard Operational Procedure (SOP) for the entomological surveillance of canine visceral leishmaniasis in the Municipality of Franco da Rocha, State of São Paulo

A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma doença de importância em saúde pública, com expansão no estado de São Paulo, onde a presença do vetor e da transmissão canina ocorrem principalmente em áreas urbanas. A Leishmania infantum chagasi é um protozoário que acomete o homem, cão e outros vertebrados, que se manifesta no homem (LV) e no cão (LVC) com diferentes sintomas. O principal vetor do agente etiológico no Brasil é o flebotomíneo Lutzomyia longipalpis e Lutzomyia cruzi, porém Migonemyia migonei e Pintomyia fisheri também podem participar da transmissão,mesmo comprovado há a necessidade de avaliação da participação local. Considerando a expansão da LV no estado de São Paulo se faz necessário o fortalecimento da vigilância entomológica para uma adequada resposta para a prevenção da ocorrência desta zoonose. O presente trabalho teve como objetivo a elaboração de um Procedimento Operacional Padrão (POP), voltado para as ações de vigilância entomológica no Município de Fanco da Rocha, que apesar de ser classificado como área sem transmissão, é vulnerável à ocorrência da LV. O POP é apresentado em linguagem simples e com incorporação da realidade do município e de forma abrangente, aborda os tópicos da biologia do vetor, das técnicas de coleta, dos índices de monitoramento, inquérito sorológico na ocorrência de casos autóctones e os relacionados ao cão como os testes sorológicos, os sinais e sintomas, a responsabilidade do tutor, tratamento, formulários de notificação e discorre sobre a eutanásia, nas situações onde não é realizado o tratamento. Propõem-se, ainda, um material de divulgação sobre a doença para ser utilizado nas unidades básicas de saúde e proposta de treinamento para os profissionais da área. Com esse POP espera-se reforçar os trabalhos desenvolvidos pela Unidade de Vigilância em Zoonoses (UVZ) do município no desenvolvimento de ações de prevenção e, caso necessário, atuação no controle da LVC.

Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a disease of public health importance, with expansion in the state of São Paulo, where the presence of vector and canine transmission occur mainly in urban areas. Leishmania infantum chagasi is a protozoan that affects man, dog and other vertebrates, manifesting in the man (LV) and dog (CVL) with different symptoms. The main vector of the etiological agent in Brazil is the sand fly Lutzomyia longipalpis and Lutzomyia cruzi, but Migonemyia migonei and Pintomyia fisheri could also be involved in the transmission. Considering the expansion of VL in the state of São Paulo, it is necessary to strengthen entomological surveillance for an adequate response to prevent the occurrence of this zoonosis. The present work aimed to develop a Standard Operating Procedure (POP), focused on surveillance actions in the municipality of Franco da Rocha, which despite being classified as an area without transmission is vulnerable to the occurrence of VL. The POP is presented in simple language and with incorporation of the reality of the municipality and comprehensively, addresses the topics of vector biology, collection techniques, monitoring indexes, serological survey in autochthonous cases and those related to the dog such as serological tests, signs and symptoms, responsibility of the tutor, treatment , notification forms and discusses euthanasia in situations where treatment is not carried out. It is also proposed a material for dissemination on the disease to be used in basic health units and a proposal for training for professionals in the area. With this POP it is expected to reinforce the work developed by the Surveillance Unit in Zoonosis (UVZ) of the municipality in the development of prevention actions and, if necessary, action in the control of CVL.

Natural infection of Lutzomyia longipalpis (Cembrene-1 population) with Leishmania infantum in a new visceral leishmaniasis focus in the eastern region of São Paulo State, Brazil

Abstract INTRODUCTION Visceral leishmaniasis (VL) transmission has been associated with two different populations of the Lutzomyia longipalpis complex in São Paulo state. METHODS In a recent focus of VL, we captured and dissected sand flies and investigated Leishmania infantum infection by parasitological, PCR, and sequencing analysis. RESULTS Flagellates were observed in 2 of 47 (4.2%) cembrene-1 Lu. longipalpis females. The sequences obtained matched those of Le. infantum. CONCLUSIONS We found that the transmission of Le. infantum by cembrene-1 females may occur at a high rate in this focus of VL and presented new data on the vector capacity of this population.

Saúde, ciência e desenvolvimento: a emergência da leishmaniose tegumentar americana como desafio médico-sanitário no Amazonas / Health, science and development: the emergence of American cutaneous leishmaniasis as a medical and public health challenge in Amazonas state, Brazil

Resumo O artigo faz análise histórica da emergência da leishmaniose tegumentar americana como objeto do conhecimento e desafio médico-sanitário no Amazonas desde a década de 1970. Fornece visão geral dessa época, as medidas sanitárias e os estudos científicos realizados no contexto de implantação dos principais projetos de desenvolvimento regionais executados em nome da política de integração nacional do governo federal. Utiliza como metodologia a análise documental de leis, produção científica, relatórios de pesquisa, boletins epidemiológicos e jornais. Os resultados da pesquisa mostram que a doença surgiu no Amazonas associando o grande problema de saúde com mudanças político-econômicas e alterações socioambientais.

Abstract The history of the emergence of American cutaneous leishmaniasis in the Brazilian state of Amazonas since the 1970s is analyzed as an object of knowledge and a medical and public health challenge. An overview of the period is provided, including the public health measures and scientific studies undertaken in the context of the execution of large-scale regional developments pursued in the name of national integration by the federal government. The methodology uses documental analysis of laws, the scientific literature, research reports, epidemiological bulletins, and newspapers. The results show that American cutaneous leishmaniasis emerged as a major health problem in Amazonas in close association with the political, economic, and socioenvironmental changes seen in the period.

Exposure to Leishmania spp. infection and Lutzomyia spp. in individuals living in an area endemic for visceral leishmaniasis in Brazil

Abstract INTRODUCTION: This study aimed to investigate human exposure to Leishmania spp. infection and sandflies in an area endemic for the disease. METHODS: The presence of antibodies specific for Leishmania spp. and saliva of Lutzomyia spp. and that of L. infantum DNA in blood were evaluated. RESULTS: Antibodies against Leishmania spp. and sandfly saliva were observed in 20.8% and 37.7% of individuals, respectively. DNA of Leishmania spp. was amplified from the blood of one patient. CONCLUSIONS: The results suggest that Leishmania spp. infection may be underdiagnosed in this area.

Transmission of Leishmania infantum from cats to dogs / Transmissão de Leishmania infantum de gatos para cães

Abstract Leishmania infantum infection in cats has been reported in several countries, including Brazil. However, the transmission of visceral leishmaniasis (VL) from cats to another host has not been proven yet. Therefore, the aim of this study was to verify the possibility of L. infantum transmission from cats to dogs. In order to verify the possibility of VL transmission from the cat to the dog, xenodiagnosis was carried out in a VL-positive cat, using 55 female Lutzomyia longipalpis. Five days later, 40 insects were dissected to verify Leishmania infection. The remaining 15 females were fed in a healthy dog. The potential infection of the dog was verified through clinical, serological, parasitological examinations, and PCR, at three, six, and twelve months post-infection. All 55 L. longipalpis females became visibly engorged. Leishmania promastigotes were detected in 27.5% of the dissected insects. Leishmania infection in the dog was confirmed upon first evaluation. DNA sequencing of the parasite isolated from the cat confirmed L. infantum infection and showed 99% similarity with the L. infantum DNA sequences from the dogs. Through this study, it was possible to confirm the L. infantum experimental transmission from a domestic cat to a domestic dog through its biological vector L. longipalpis.

Resumo A infecção por Leishmania infantum em gatos tem sido relatada em vários países, incluindo o Brasil. No entanto, a transmissão da leishmaniose visceral (LV) de gatos para outro hospedeiro ainda não foi comprovada. Portanto, o objetivo deste estudo foi verificar a possibilidade de transmissão de L. infantum de gatos para cães. Para verificar a possibilidade de transmissão da LV do gato para o cão, foi realizado xenodiagnóstico em um gato com LV, utilizando-se 55 fêmeas de Lutzomyia longipalpis. Cinco dias depois, 40 insetos foram dissecados para verificar a infecção por Leishmania. As 15 fêmeas restantes foram alimentadas em um cão saudável. A possível infecção no cão foi verificada por meio de exames clínicos, sorológicos, parasitológicos e PCR, três, seis e doze meses após a infecção. Todas as 55 fêmeas de L. longipalpis ficaram visivelmente ingurgitadas. Promastigotas de Leishmania foram detectadas em 27,5% dos insetos dissecados. A infecção por Leishmania no cão foi confirmada na primeira avaliação. O sequenciamento do DNA do parasito isolado do gato confirmou a infecção por L. infantum e apresentou 99% de similaridade com sequências de DNA de L. infantum de cães. Através deste estudo, foi possível confirmar a transmissão experimental de L. infantum de um gato doméstico para um cão doméstico através do seu vetor biológico L. longipalpis.

Increasing putative vector importance of Trichophoromyia phlebotomines (Diptera: Psychodidae)

Despite some phlebotomines being well recognised as vectors of leishmaniasis agents, vector importance of those belonging to the genus Trichophoromyia has not been extensively studied. The present study provides evidence regarding the putative vector role played by some species of Trichophoromyia on leishmanine enzootics, based on literature reports and findings obtained from field experiments conducted in the ecotopes of Pará State, Brazil. The species Th. ubiquitalis, Th. velascoi, Th. auraensis, Th. ininii and Th. brachipyga possess minimal criteria to be included in the list of suspected leishmanine vectors. However, knowledge on man-biting behavior, substantiation of vector competence and determination of epidemiological implications are limited for all of the above mentioned species. Published studies together with present data draw attention to prioritize these phlebotomine species in entomological surveillance programs and studies on experimental susceptibility to Leishmania spp. infection.

Insights into the proteomic profile and gene expression of Lutzomyia longipalpis-derived Lulo cell line

BACKGROUND Lutzomyia longipalpis-derived cell line (Lulo) has been suggested as a model for studies of interaction between sandflies and Leishmania. OBJECTIVES Here, we present data of proteomic and gene expression analyses of Lulo cell related to interactions with Leishmania (Viannia) braziliensis. METHODS Lulo cell protein extracts were analysed through a combination of two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry and resulting spots were further investigated in silico to identify proteins using Mascot search and, afterwards, resulting sequences were applied for analysis with VectorBase. RESULTS Sixty-four spots were identified showing similarities to other proteins registered in the databases and could be classified according to their biological function, such as ion-binding proteins (23%), proteases (14%), cytoskeletal proteins (11%) and interactive membrane proteins (9.5%). Effects of interaction with L. (V.) braziliensis with the expression of three genes (enolase, tubulin and vacuolar transport protein) were observed after an eight-hour timeframe and compared to culture without parasites, and demonstrated the impact of parasite interaction with the expression of the following genes: LLOJ000219 (1.69-fold), LLOJ000326 (1.43-fold) and LLOJ006663 (2.41-fold). CONCLUSIONS This set of results adds relevant information regarding the usefulness of the Lulo cell line for studies with Leishmania parasites that indicate variations of protein expression.

Phylogenetic relationships of closely-related phlebotomine sand flies (Diptera: Psychodidae) of Nyssomyia genus and Lutzomyia subgenus

BACKGROUND The Nyssomyia genus and Lutzomyia subgenus include medical important species that are Latin American leishmaniases vectors. Little is known about the phylogenetic relationships of closely-related species in each of these taxonomic groups that are morphologically indistinguishable or differentiated by very subtle details. OBJECTIVES We inferred the phylogenetic relationships of closely-related species within both the Nyssomyia genus and the Lutzomyia subgenus using a cytochrome c oxidase subunit I (COI) fragment. METHODS The sampling was carried out from 11 Argentinean localities. For genetic analyses, we used GenBank sequences in addition to our sequences from Argentina. Kimura 2-parameter (K2P) genetic distance and nucleotide divergence (Da) was calculated between closely-related species of Nyssomyia genus, Lutzomyia subgenus and between clades of Lutzomyia longipalpis complex. FINDINGS The K2P and Da values within species of Nyssomyia genus and Lutzomyia subgenus were lower than the divergence detected between clades of Lu. longipalpis complex. The haplotype network analyses within Lutzomyia subgenus showed shared haplotypes between species, contrary to Nyssomyia genus with none haplotype shared. Bayesian inference within Nyssomyia genus presented structuring by species. MAIN CONCLUSIONS This study evidences the phylogenetic proximity among closely-related species within Nyssomyia genus and Lutzomyia subgenus. The COI sequences of Nyssomyia neivai derived from the present study are the first available in GenBank.