Trypanosomatids (Protozoa: Kinetoplastida) in three species of Armored Catfish from Mogi-Guaçu river, Pirassununga, São Paulo, Brazil / Tripanossomatídeos (Protozoa: Kinetoplastida) em três espécies de cascudos do rio Mogi-Guaçu, Pirassununga, São Paulo, Brasil

Abstract Trypanosome infections have been reported in several species of fish, in majority of cases described on the basis of morphological characteristics. Trypanosomes in fish are heteroxenous and transmitted by hirudineans. This study aims to evaluate the prevalence and density of infections by Trypanosoma sp. in blood from three species of catfish, Hypostomus regani, H. strigaticeps, H. albopunctatus, from the Mogi Guaçu River, Pirassununga, São Paulo, Brazil. Further, this study intends to characterize the Trypanosoma specimens found in the blood of these fish by morphological and molecular techniques. The trypanosomes overall prevalence observed was 47.6% with a general average density of 0.75 parasites/µl of blood. Hypostomus regani and Hypostomus strigaticeps showed a significant difference in prevalence. The average densities of parasites were not significantly different among the three fish species. Similar findings were observed for the monthly variations in densities. The parasites found in the three species of catfish studied showed similar morphological characteristics. The morphological data and the statistical analyses used in this study didn’t show the formation of groups. The analyses provided evidence of the presence of pleomorphisms in the trypanosomes found in the three studied fish.

Resumo Infecções por tripanossomas foram descritas em diversas espécies de peixes, sendo a maioria das descrições baseada nas características morfológicas. Tripanossomas de peixes são heteroxenos e transmitidos por hirudíneos. Este estudo tem como objetivo a avaliação da prevalência e densidade da infecção por Trypanosoma sp. no sangue de três espécies de cascudos, Hypostomus regani, H.strigaticeps, H.albopunctatus, do Rio Mogi-Guaçu, Pirassununga, São Paulo, Brasil. Além disso, pretende-se a caracterização das espécies de Trypanosoma encontradas no sangue desses peixes, por meio da utilização de técnicas morfólogicas e moleculares. A prevalência total de tripanossomas foi de 47,6%, e a densidade média foi de 0,75 parasitas/ µl de sangue. Hypostomus regani e Hypostomus strigaticeps apresentaram diferenças significativas em prevalência. As médias das densidades dos parasitas não apresentaram diferenças significativas entre as três espécies de peixes estudadas. O mesmo foi observado com a variação mensal das densidades. Os parasitas encontrados nas três espécies de cascudo possuíam características morfológicas semelhantes. As análises morfológicas e estatísticas obtidas neste estudo não mostraram a formação de grupos. As análises evidenciaram a presença de pleomorfismo dos tripanossomas encontrados nas três espécies de peixes estudados.

Exploring the environmental diversity of kinetoplastid flagellates in the high-throughput DNA sequencing era

The class Kinetoplastea encompasses both free-living and parasitic species from a wide range of hosts. Several representatives of this group are responsible for severe human diseases and for economic losses in agriculture and livestock. While this group encompasses over 30 genera, most of the available information has been derived from the vertebrate pathogenic genera Leishmaniaand Trypanosoma. Recent studies of the previously neglected groups of Kinetoplastea indicated that the actual diversity is much higher than previously thought. This article discusses the known segment of kinetoplastid diversity and how gene-directed Sanger sequencing and next-generation sequencing methods can help to deepen our knowledge of these interesting protists.

Diagnóstico paleoparasitológico de protozoários do gêneroLeishmania Ross, 1903 (Kinetoplastida, Trypanosomatidae)em material arqueológico da América do Sul / Parasitological diagnosis paleo protozoa of the genus Leishmania Ross, 1903 (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) in archaeological material from South America

Espécies do gênero Leishmania (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) são agentescausadores de leishmanioses, que representam um complexo de doenças com variado espectroclínico e diversidade epidemiológica que, em alguns países, constituem-se em grave problema de saúde pública. A origem e evolução das leishmanioses têm estado em debate em seus aspectos clínicos e parasitológicos. Com a introdução da paleoparasitologia baseada na aplicação de diferentes técnicas, tornou-se possível a recuperação de vestígios do parasito,assim como o diagnóstico de infecções em humanos e em outros hospedeiros no passado. Os objetivos desta pesquisa foram diagnosticar parasitos do gênero Leishmania spp., em materiais arqueológicos da América do Sul por meio de técnicas moleculares e imunológicas. Estes são os primeiros registros de recuperação de DNA de Leishmania sp. em material arqueológico do Brasil, assim como também o primeiro registro deL. tarentolae em material antigo. Dois pares de primers que amplificam outras regiões de L. tarentolae foram desenhados para o estudo no intuito de averiguar se outros trechos de DNA desta espécie também teriam se preservado no material, tendo os mesmos não amplificado.Duas explicações são possíveis: devido a natureza fragmentada do DNA antigo o mesmo não se conservou de maneira homogenia no material, ou pode se tratar de um infectron, o que também é um dado relevante pois é uma assinatura da relação estabelecida entre parasito e hospedeiro...

Species of the genus Leishmania (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) are causativeagents of leishmaniasis, which represents a complex disease with varied clinical spectrum and epidemiological diversity that, in some countries, constitute a serious public health problem. The origin and evolution of leishmaniasis has been under discussion in clinical and parasitological aspects. By the introduction of paleoparasitology based on the application of different techniques, as well as the diagnosis of infections in humans and other hosts in the past. Theaims of this research were: diagnosis by molecular PCR technique parasites of the genus Leishmaniain archaeological materials of South America, with the comparison of the sequences obtained from the GenBank for both recent and archaeological material, diagnosis through serological techniques: rapid test DPP and Western Blot, anti-Leishmania antibodies in the samples submitted to PCR, with subsequent comparison of these serological techniques with the previous lyused molecular technique and thus contribute to the knowledge of paleoparasitology of leishmaniasis, giving contributing to studies on the origin and evolution of Leishmania genus...

Whole-cell antigenicity data support sequence-based kinetoplastid taxonomy

Early immunological data, obtained by immunodiffusion and immunoelectrophoresis, on the whole-cell antigenicity of kinetoplastid protozoa were retrieved and used to construct a dendrogram of antigenic distances. Remarkably, they supported the same taxonomic conclusions as analyses based on DNA and protein sequence data.

First record of Trypanosoma sp. (Protozoa: Kinetoplastida) in tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) in the Pantanal wetland, Mato Grosso do Sul State, Brazil / Primeiro registro de Trypanosoma sp. (Protozoa: Kinetoplastida) em tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) no Pantanal, Mato Grosso do Sul, Brasil

The blood infection by Trypanosoma sp. in tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) from the Pantanal wetland was reported in this study. Ten fish from the Paraguay River in the Pantanal were evaluated for the presence of hemoflagellates. Trypomastigotes of Trypanosoma sp. were observed in blood smears from three fish (30 percent prevalence) and some forms were seen to be undergoing division. Using the diagnostic methods of fresh examination and blood centrifugation in hematocrit capillary tubes, the prevalence rate was 80 percent. This is the first report of Trypanosoma sp. in tuvira in Brazil.

O objetivo do presente estudo foi reportar a infecção por Trypanosoma sp. em tuviras (Gymnotus aff. inaequilabiatus) oriundas do Pantanal Sul-mato-grossense, Brasil. Dez peixes provenientes do rio Paraguai, Pantanal Sul-mato-grossense, foram avaliados quanto à presença de hemoflagelados. Tripomastigotas de Trypanosoma sp. foram observados nas extensões sanguíneas de três peixes (30 por cento de prevalência), e algumas formas encontravam-se em divisão. Por meio do exame a fresco e da centrifugação do sangue em capilar de hematócrito como métodos para diagnóstico, a taxa de prevalência foi de 80 por cento. Esse é o primeiro relato de Trypanosoma sp. em tuviras no Brasil.

Caracterização morfológica, bioquímica e molecular de vickermania itaguaiensis n gen, n sp (protozoa, kinetoplastida) / Morphological, biochemical and molecular vickerman itaguaiensis n o gen, n sp (Protozoa, Kinetoplastida)

A família Trypanosomatidae inclui parasitas de uma grande variedade de vertebrados, invertebrados (principalmente insetos), plantas e algumas espécies de protozoários, sendo, depois do nematóides, os de maior distribuição de hospedeiros na natureza. No presente trabalho, um novo isolado foi obtido por coprocultivo de trato intestinal de Leptoglossus stigma Herb, 1784 (Hemíptera, Coreidae), capturado no município de Itaguaí/RJ. O isolado original e três clones (obtidos por citometria de fluxo) foram depositados na “Coleção de Flagelados do Laboratório de Transmissores de Leishmanioses.” Um clone foi caracterizado por diversas abordagens em comparação com espécies de referência de diferentes gêneros. Foi analisado o crescimento em meio de cultivo em intervalos de 24 h, entre 48-144 h, a diferenciação celular e a morfometria dos principais estágios evolutivos encontrados. A análise de isoenzimas foi realizada utilizando-se os seguintes sistemas: GPI, PGM, 6PGDH, HK, ACON, MPI, FUM, IDH, MDH e ACON. RAPD-PCR foi realizado utilizando-se 6 iniciadores, conjuntamente com outros tripanosomatídeos. Os dados destas análises foram processados numericamente e submetidos à análise computacional utilizando-se o coeficiente de associação Jaccard e o SSU rRNA e o fragmento analisado foi alinhado com vinte e uma seqüências depositadas no GenBank, gerando uma árvore filogenética resultante do pareamento. O conjunto de resultados deste trabalho sugere que a amostra obtida constitui nova espécie, pertencendo a um novo gênero, nomeada Vickermania itaguaiensis.

Estudo de determinantes antigêncios para respostas imunes de células humanas em KMP-11 (Kinetoplastid Membrane Protein-11) de Leishmania amazonensis / Antigenic determinants study for human cell immune responses to KMP-11 (Kinetoplastid Memrane Protein-11) of Leishmania amazonensis

As leishmanioses formam um grupo de doenças antropozoonóticas, endêmicas em 88 países e presentes em quase todos os estados brasileiros. O desenvolvimento de uma vacina contra das leishmanioses é altamente desejável já que a terapia e as características biológicas e ecoepidemiólogicas dos parasitos e seus vetores associados não facilitam o controle da doença. Kinetoplastid Membrane Protein-11 (KMP-11) é uma molécula candidata a vacina contra as leishmanioses. Utilizando ferramentas in vitro e in silico, foi avaliada a antigenicidade de 13 peptídeos sintéticos abrangendo a sequência inteira de KMP-11. Para os estudos in vitro foram usadas células mononucleares de sangue periférico (PBMC) de pacientes com leishmaniose cutânea (LC) do estado do Rio de Janeiro. Estas células foram empregadas para testar a antigenicidade dos 13 peptídeos individualmente e da proteína integral KMP-11 recombinante, através de ensaios de ELISA e ELISPOT. Na dosagem de citocinas por ELISA observamos que a proteína KMP-11 recombinante estimulou respostas de citocinas quase sempre superiores às induzidas pelos peptídeos isolados. No que se refere a IFN-gama, dois dos 13 peptídeos (P9 e P10) estimularam níveis desta citocina significativamente (p menor que 0,05) mais baixos do que os observados com a proteína inteira. Dez peptídeos (P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12 e P13) apresentaram níveis de IL-10 e TNF-alfa significativamente inferiores aos observados com a proteína inteira. KMP-11 mostrou-se um potente indutor de IL-10 em PBMC de pacientes com LC, confirmando resultados anteriormente publicados, mas também foi capaz de induzir a produção de IFN-gama e altos níveis de TNF-alfa, em níveis superiores aos dos peptídeos estudados. Na avaliação da razão IFN-gama/IL-10 observou-se um acentuado contraste entre a maioria dos peptídeos e a proteína KMP-11. As respostas a 11 dos 13 peptídeos mostraram um claro viés de resposta de tipo 1 (IFN-gama maior que IL-10), a exceção dos peptídeos...

Distribución de los vectores de Leishmania infantum (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) en Colombia / Distribution of Leishmania infantum vector species in Colombia

Introducción. Debido a la importancia que tiene la vigilancia entomológica como principal medida de control en el manejo de la leishmaniasis visceral, es necesario contar con información actualizada acerca de la distribución y ecología de los insectos involucrados en la transmisión para optimizar las estrategias de prevención. Objetivo. Presentar la distribución actualizada geo-referenciada de L. longipalpis y L. evansi, vectores de los parásitos que causan leishmaniasis visceral en Colombia, teniendo en cuenta la asociación de los insectos con su hábitat. Materiales y métodos. Los registros de distribución se obtuvieron a partir de los ejemplares recolectados en Colombia desde 1967. La información obtenida se organizó en una base de datos a partir de la cual se tomaron las localidades que, posteriormente, fueron sometidas a análisis geográficos por medio de Arc View que se utilizaron para realizar los mapas de distribución. Resultados. Para L. longipalpis se obtuvieron 40 localidades todas distribuidas a lo largo del valle del río Magdalena: Alto (24), Medio (11) y Bajo (5) Magdalena. L. evansi fue registrado en 19 localidades también ubicadas en el mismo valle: cinco en el Magdalena Medio y 14 el Magdalena Bajo. Conclusiones. Ambas especies demostraron una consistente asociación con regiones clasificadas principalmente como bosque seco tropical según las zonas de vida de Holdridge lo que confirma el riesgo epidemiológico de leishmaniasis visceral en estas áreas

Introduction. Since entomological surveillance is the main control strategy for visceral leishmaniasis, updated information on the distribution and ecology of involved vector species is necessary for planning preventive measures. Objective. To present the updated and geo-referenced distribution of L. longipalpis and L. evansi, vectors of visceral leishmaniasis in Colombia, considering their relationship with their habitat. Materials and methods. Distribution was estimated from records of the sand fly specimens collected since 1967.The information was organized in a database from which the localities were selected and geographically analyzed with Arc view in order to develop the distribution maps. Results. 40 localities were established for L. longipalpis along the upper (24), middle (11) and lower (5) Magdalena river valley . L. evansi was recorded in 19 localities of the middle (5) and lower (14) Magdalena valley. Conclusions. Both species showed consistent association with dry tropical forest ( sensu Holdridge 1967), confirming the epidemiological risk for visceral leishmaniasis in these areas.

Pre-mRNA trans-splicing: from kinetoplastids to mammals, an easy language for life diversity

Since the discovery that genes are split into intron and exons, the studies of the mechanisms involved in splicing pointed to presence of consensus signals in an attempt to generalize the process for all living cells. However, as discussed in the present review, splicing is a theme full of variations. The trans-splicing of pre-mRNAs, the joining of exons from distinct transcripts, is one of these variations with broad distribution in the phylogenetic tree. The biological meaning of this phenomenon is discussed encompassing reactions resembling a possible noise to mechanisms of gene expression regulation. All of them however, can contribute to the generation of life diversity.

Phylogeny of the kinetoplastida: taxonomic problems and insights into the evolution of parasitism

To further investigate phylogeny of kinetoplastid protozoa, the sequences of small subunit (18S) ribosomal RNA of nine bodonid isolates and ten isolates of insect trypanosomatids have been determined. The root of the kinetoplastid tree was attached to the branch of Bodo designis and/or Cruzella marina. The suborder Trypanosomatina appeared as a monophyletic group, while the suborder Bodonina was paraphyletic. Among bodonid lineages, parasitic organisms were intermingled with free-living ones, implying multiple transitions to parasitism and supporting the `vertebrate-first hypothesis'. The tree indicated that the genera Cryptobia and Bodo are artificial taxa. Separation of fish cryptobias and Trypanoplasma borreli as different genera was not supported. In trypanosomatids, the genera Leptomonas and Blastocrithidia were polyphyletic, similar to the genera Herpetomonas and Crithidia and in contrast to the monophyletic genera Trypanosoma and Phytomonas. This analysis has shown that the morphological classification of kinetoplastids does not in general reflect their genetic affinities and needs a revision

Dinâmica de transmissão de protozoários cinetoplastidas para a população humana de Paço do Lumias, MA: descrição de rede trófica associada com a transmissão de trypanosoma cruzi / Dinamics of transmission of kinetoplastida protozoa for the population human being of Paço do Lumiar, MA: description of trophic net associated with the transmission of trypanosoma cruzi

As infecções causadas por protozoários da Ordem cinetoplastida, Trypanosoma Cruzi, Leishemania chagasi e Leishemania braziliensis são enzooticas nos trópicos, em cuja floresta úmida encontra-se abundância de reservatórios mamíferos, vetores e ecótopos naturais onde são observados os elos da cadeia de transmissão...

Dinâmica de transmissäo de protozoários cinetoplastidas para a populaçäo humana de Paço do Lumiar, MA: descriçäo de rede trófica associada com a transmissão de trypanosoma cruzi

As infecções causadas por protozoários da Ordem cinetoplastida, Trypanosoma cruzi, Leishmania chagasi e Leishmania braziliensis são enzooticas nos trópicos, em cuja floresta úmida encontra-se abundância de reservatórios mamíferos, vetores e ecótopos naturais onde são observados os elos da cadeia de transmissão. A degradação desse ecossistema pela ação antrópica leva à ruptura de cadeia trófica, propiciando a transferência da enzootia para a população humana. O município de Paço do Lumiar, Ilha de São Luis Estado do Maranhão, apresenta condições favoráveis à emergência dessas infecções causadas por flagelados cinetoplastidas. A ecorregião degradada, localizada na área de influência do Rio Tocantins apresenta sinais de erosão do meio ambiente, sem possibilidades de recuperação nas próximas décadas. A profunda transformação da ecorregião está associada ao aumento da densidade demográfica nos últimos 30 anos. Flora e fauna devastadas parecem estar diretamente relacionadas com o surgimento de casos humanos dessas infecções, acompanhando o crescimento exponencial da população. Diante da escassez de pássaros e mamíferos na ecorregião degradada, os vetores silvestres dessas infecções invadem as casas, durante a noite, nas estações chuvosas, atraídas pela luz e pelo alimento. Inquérito soroepidemiológico em 25.451 pessoas do Município de Paço do Lumiar detectou 212 (0,83 por cento) indivíduos soropositivos para a infecção pelo T. cruzi, 163 (0,6 por cento) pela L. chagasi, e 364 (1,4 por cento) indivíduos soropositivos para L. braziliensis. O levantamento triatomínico nas residências e em palmeiras babaçu (Attalea phalerata) revelou índices elevados de infecção pelo T. cruzi

Estudio de un minicírculo recombinante de leishmania (viannia) braziliensis: transcripción, marcos de lectura para péptidos, y secuencia de interés para diagnóstico y estudio de minicírculos

La Leishmaniasis, enfermedad causada por el protozoario Leishmania es una de las principales enfermedades parasitarias en países en desarrollo como Perú. Leishmania se caracteriza por presentar una estructura denominada Kinetoplasto, el cual contiene el DNA mitocondrial (kDNA). Los minicírculos son los componentes mayoritarios del kDNA y su función biológica, a pesar del conocimiento del proceso de edición en el cual están involucrados, es desconocido. En el presente trabajo, la utilización de sistemas de hibridación en "Northern Blot", ensayos de "Run-On", y RT-PCR nos permite describir por primera vez en Leishmania, la presencia de moléculas de RNA provenientes de la transcripción de minicírculos. Se sugiere una posible codificación de péptidos pequeños, mediante el análisis de marcos de lectura (ML) presentes en la secuencia de un minicírculo de Leishmania (Viannia) braziliensis (A53). Destacan los posibles péptidos PEP 7 y PEP 9, los que de ser sintetizados in vitro, podrían uno constituir un péptido señal para localización de proteínas en mitocondria (PEP 7), y el otro cumplir algún rol de importancias en leishmanias del complejo reportados en el GenBank. Luego del clonamiento de minícirculos de Leishmania (Viannia) braziliensis y L. (V) peruviana, se seleccionaron 4 clonas recombinantes y se obtuvo su secuencia parcial (B21,B39, A78) y total (A53). Del análisis comparativo de las secuencias describimos: Una región altamente conservada de 70 pares de bases, lo que permitió el diseño de oligonicleótidos (MP1-L y MP3-H) utilizados como cebadores de extensión en la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR. Estos cebadores han demostrado, en trabajos previos, su utilidad en el diagnóstico de Leishmaniosis causada por especies del complejo L. braziliensis. La existencia de una variación de la secuencia "12mer" del origen de replicación descrita en minicírculos de tripanosomáticos; El potencial de la técnica de PCR para el estudio de familias de minicírculos. Se diseñó un cebador adicional (MP2-L), éste y el oligonucleótido MP3-H fueron utilizados para estudiar 56 aislamientos de leishmanias. Encontramos que un tipo particular de minicírculos (B39 predomina en aislamientos de zonas andinas (81 por ciento) y no en aislamientos de zonas selváticas (19 por ciento). Palabras claves: Leishmania, Kinetoplasto, Minicírculo, Transcripción.

Reciente caracterización de leishmania aislada de humanos y animales de Ecuador, utilizando análisis de enzima de restricción del DNA del kinetoplasto

Se realizaron aislamientos de parásitos Leishmania de humanos y animales silvestres en focos endémicos de leishmaniasis del Ecuador. Después de varios pases de cultivos in vitro, los parásitos fueron examinados por medio de análisis de restricción de enzimas del DNA del kinetoplasto, conocido como schizodeme analysis. El DNA del kinetoplasto fue obtenido a partir de aislamientos ecuatorianos de Leishmania y digeridos con las endonucleasas de restricción MSp I y RSaI. De los resultados de patrones fragmentados, fueron identificados tres aislamientos obtenidos de tres especies de mamíferos silvestres. Sciurus vulgaris, Potos flavus y tamandúa tetradactyla fueron identificados como L. amazonensis. Los resultados fueron paralelos...