Aspectos epidemiológicos da infecção por Ehrlichia canis, Anaplasma platys e Mycoplasma spp. em gatos domésticos / Epidemiological aspects of infection by Ehrlichia canis, Anaplasma platys and Mycoplasma spp. in domestic cats

Hemoparasitoses vêm se tornando cada vez mais importantes na clínica médica de pequenos animais. Dentre os agentes causadores encontramos Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys., e Mycoplasma spp., torna-se de grande importância conhecer a epidemiologia nos gatos domésticos. Objetivou-se com esta pesquisa fazer um levantamento retrospectivo de fichas de gatos advindos de consultas no Hospital Veterinário Mário Dias Teixeira (HOVET) que realizaram exame de Reação de Cadeia da polimerase (PCR) no laboratório de biologia molecular, na Universidade Federal Rural da Amazônia, no ano de 2018 e 2019. No total foram 72 amostras de gatos domésticos processadas, sendo 33 machos e 39 fêmeas, 70 animais SRD e 2 Siameses, todos com trombocitopenia, além de outros sinais clínicos que os levaram a precisar de atendimento veterinário, foram categorizados os meses de entrada e processamento das amostras, bairros dos animais e grupos etários. De todos os animais testados, 34,7% obtiveram diagnóstico positivo para uma das enfermidades, sendo o gênero Mycoplasma spp. o que mais prevaleceu em amostras positivas, com maior frequência em fêmeas adultas, bem como foi descrita ocorrência de E. canis apenas nesse sexo, já A. platysfoi descrito com maior frequência em machos, além de achados de infecções concomitantes observado entre os agentes Anaplasmae Mycoplasma. Concluímos que os gatos atendidos no HOVET possuíam parasitismo por diferentes agentes infecciosos.

Hemoparasitosis have become increasingly important in the small animals' internal medicine. Among the causal agents, there are Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys. and Mycoplasma spp., which give the understanding of the epidemiology in domestic cats a great significance. This research aimed to make a retrospective survey of records from cats that came from appointments at the Veterinary Hospital Mário Dias Teixeira (HOVET) and underwent the Polymerase Chain Reaction (PCR) test at the molecular biology laboratory, at the Amazônia Federal Rural University (UFRA), in the years of 2018 and 2019. In total, 72 samples of domestic cats were processed, from which 33 were males and 39 females, 70 of them were mongrel cats and 2 siamese, all of them showed thrombocytopenia amongst other clinical signs that led them to need a veterinary appointment, the months of admission, processing of the samples, districts the animals came from and age group were categorized. 34,7% of all the animals tested showed positive results for one of the diseases, with the genus Mycoplasma spp. being the most prevalent in positive samples, showing a higher rate in adult females, as the occurrence of E. canis was reported only in females, while A. platys was reported with a higher rate in males, as well as concomitant infections following the observation of the agents Anaplasma and Mycoplasma. In conclusion, the cats admitted at HOVET showed parasitism by different infectious agents.

Molecular detection of anaplasmataceae agents on dogs from the departament of Piura, Peru

This study aimed to study the prevalence of Anaplasmataceae organisms through the nested-PCR and phylogenetic analysis on domestic dogs in the Department of Piura, Peru. Two hundred and twelve canine blood samples were randomly collected on dogs from the central urban areas at the Piura Department in Peru. The extracted DNAs were tested, by nested-PCR based on 16SrRNA gene, to identify agents from Anaplasmataceae family. These results show that there was a prevalence of 18.5% (40/216) of positive dogs, 13.8% (30/216) for Ehrlichia canis, 7.4% (16/216) for Anaplasma platys and 0.1% (2/216) for Ehrlichia sp. confirmed by sequencing analysis. Co-positivity among Anaplasmataceae family species was present in 25% (10/40) of positive samples. There was a significant association among Anaplasmataceae family infection in dogs and the following variables: sex (p=0.034), presence of ticks (p=0.0001), and socio-economic status (p=0.001). There was no statistical association on the variables "living with other animals" and "age group" (p=0.1074). The partial sequences on the portion of the 16S rRNA gene, from positive samples for agents of Anaplasmataceae family demonstrated an identity of 97-100% with the isolated E. canis and A. platys obtained from the GenBank. This is the first study on infection by agents of Anaplasmataceae family in dogs in the Department of Piura, through molecular analysis

Tick-borne pathogens infecting dogs from a highland swamp area / [Infecção em cães por patógenos transmitidos por carrapatos em uma área de brejo de altitude]

Objetivou-se neste estudo relatar a frequência e a identidade de patógenos transmitidos por carrapatos em cães residentes de uma área caracterizada por brejo de alta altitude. Amostras sanguíneas (n=203) foram coletadas e molecularmente analisadas via PCR (Babesia spp., Hepatozoon spp., Anaplasma spp. e Ehrlichia spp.) e sequenciamento de DNA. De todas as amostras analisadas, 8,87% (18/203) foram positivas a algum patógeno transmitido por carrapato. Especificamente, 5,42% (11/203) e 3,45% (7/203) foram positivos a Anaplasma platys e Ehrlichia canis, respectivamente. Este estudo fornece, pela primeira vez, evidência científica de infecção de cães por esses patógenos nessa área de alta altitude e reforça o provável papel de R. sanguineus s.l. como vetor de A. platys, principalmente considerando.se que muitos animais positivos eram infestados por essa espécie de carrapato.(AU)

Molecular detection of Cercopithifilaria bainae and other tick-borne pathogens in Rhipicephalus sanguineus s.l. isolated from dogs in Midwest Brazil / Detecção molecular de Cercopithifilaria bainae e outros patógenos transmitidos por carrapatos em Rhipicephalus sanguineus s.l. isolados de cães no Centro-Oeste do Brasil

Abstract The aim of the present study was to detect Cercopithifilaria bainae and other tick-borne pathogens and to perform molecular characterization of the tick Rhipicephalus sanguineus s.l. collected from dogs. Ticks (n = 432, including 8 larvae, 59 nymphs, and 365 adults) were sampled from domiciled dogs (n = 73) living in Campo Grande, Mato Grosso do Sul (Midwest Brazil). All ticks were morphologically identified as R. sanguineus. Genomic DNA was extracted in pools (three to five ticks per animal) and was used for definition of R. sanguineus haplotypes (based on 16S rRNA analysis) and pathogen identification (Cercopithifilaria sp., Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, Babesia vogeli and Rickettsia spp.). Rhipicephal us sanguineus specimens were identified as haplotypes A and B. DNA of Cercopithifilaria bainae (43.83%; 32/73), Ehrlichia canis (24.65%; 18/73), Anaplasma platys (19.17%; 14/73), and Hepatozoon canis (5.47%; 4/73) was detected. The identity of pathogens was confirmed by DNA sequence analysis. The present study confirms the presence of haplotypes A and B of R. sanguineus in the state of Mato Grosso do Sul and its importance as a vector of several pathogens of veterinary concern. Finally, this is the first report to identify C. bainae in ticks in the Midwestern region of Brazil.

Resumo O objetivo do presente estudo foi detectar Cercopithifilaria bainae e outros patógenos transmitidos por carrapatos e realizar a caracterização molecular do carrapato Rhipicephalus sanguineus s.l. coletado em cães. Carrapatos (n = 432, incluindo 8 larvas, 59 ninfas e 365 adultos) foram amostrados de cães domiciliados (n = 73) residentes no município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul (centro-oeste do Brasil). Todos os carrapatos foram identificados morfologicamente como R. sanguineus. O DNA genômico foi extraído em pools (três a cinco carrapatos por animal), seguido pela definição de haplótipos (com base no gene 16S rRNA) e pela investigação de patógenos (Cercopithifilaria sp., Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, Babesia vogeli e Rickettsia spp.). Os espécimes coletados foram identificados como haplótipos A e B de R. sanguineus. Foram detectados DNA de Cercopithifilaria bainae (43,83%; 32/73), Ehrlichia canis (24,65%; 18/73), Anaplasma platys (19,17%; 14/73) e Hepatozoon canis (5,47%; 4/73). A identidade dos patógenos foi confirmada por análise de sequência de DNA. O presente estudo confirma a circulação dos haplótipos A e B de R. sanguineus no estado de Mato Grosso do Sul e sua importância como vetor de vários patógenos de interesse veterinário. Finalmente, este é o primeiro relato de C. bainae em carrapatos na região centro-oeste do Brasil.

Detection of tick-borne rickettsial pathogens in naturally infected dogs and dog-associated ticks in Medellin, Colombia / Detecção de patógenos rickettsiais transmitidos por carrapatos em cães naturalmente infectados e carrapatos associados a cães em Medellin, Colômbia

Abstract Tick-borne rickettsial pathogens (TBRP) are important causes of infections in both dogs and humans. Dogs play an important role as a biological host for several tick species and can serve as sentinels for rickettsial infections. Our aim was to determine the presence of TBRP in dogs and in dog-associated ticks and their potential risk to human diseases in Medellin, Colombia. DNA for E. canis (16S rRNA and dsb) and A. platys (groEl) was detected in 17.6% (53/300) and 2.6% (8/300) of dogs, respectively. Antibodies against Ehrlichia spp. 82 (27.3%) and Anaplasma spp. 8 (2.6%) were detected in dogs. Antibody reactivity against both agents were found in 16 dogs (5.3%). Eight dogs showed antibody for Rickettsia spp. with titers that suggest 3 of them had a probable exposure to R. parkeri. Rhipicephalus sanguineus s.l. (178/193) was the main tick in dogs, followed by R. microplus (15/193). The minimum infection rates (MIR) in R. sanguineus were 11.8% for E. canis and 3.4% for A. platys. E. canis and A. platys are the main TBRP infecting dogs and ticks and R. sanguineus s.l. is likely involved in the transmission of both agents. Interestingly, we found serological evidence of exposure in dogs for spotted fever group rickettsiae.

Resumo As riquétsias transmitidas por carrapatos (RTC) são causas importantes de infecção em cães e humanos. Os cães exercem um papel essencial como hospedeiros biológicos para diversas espécies de carrapatos, assim como podem ser úteis como sentinelas de infecções por riquétsias. O intuito deste estudo foi determinar a presença de RTC em cães, assim como em seus carrapatos, para determinar o risco potencial de doença humana em Medellín, Colômbia. DNA de Ehrlichia canis (16S rRNA e dsb) e Anaplasma platys (groEl) foi detectado em 17,6% (53/300) e 2,6% (8/300) dos cães, respectivamente. Anticorpos contra Ehrlichia spp. (82; 27,3%) e Anaplasma spp. (8; 2,6%) foram detectados nos cães. Reatividade de anticorpos contra ambos patógenos (Ehrlichia e Anaplasma) foi detectada em 16 cães (5,3%). Oito animais apresentaram anticorpos contra Rickettsia spp., e 3 deles sugerem uma provável exposição a Rickettsia parkeri. Rhipicephalus sanguineus s.l. (178/193) foi a principal espécie de carrapatos, seguida de R. microplus (15/193). A taxa de infecção mínima em R. sanguineus foi 11,8% para E. canis e 3,4% para A. platys. E. canis e A. platys são as principais RTC que infectam cãese R. sanguineus s.l. provavelmente está envolvido na transmissão de ambos os agentes. É evidente, porém, a exposição sorológica dos cães a riquétsias do grupo da febre maculosa.

Detección de bacterias de los géneros Ehrlichia Anaplasma y Rickettsia en garrapatas rhipicephalus Sanguineus sl en Pergamino Argentina / Detection of Bacteria of the Genera Ehrlichia, Anaplasma and Rickettsia in Rhipicephalus sanguineus s.l Ticks in the City of Pergamino, Argentina

Las rickettsiosis, ehrlichiosis y anaplasmosis son causadas por bacterias gramnegativas intracelulares obligadas y transmitidas por artrópodos. El objetivo de este trabajo fue determinar especies de garrapatas presentes en caninos de la ciudad de Pergamino y detectar presencia de patógenos de los géneros Ehrlichia, Anaplasma y Rickettsia. MÉTODOS: Se estudiaron 21 garrapatas Rhipicephalus sanguineus s.l obtenidas de caninos de diferentes ambientes de la ciudad de Pergamino. Las muestras fueron analizadas mediante PCR, amplificando un fragmento del gen gltA para Rickettsia spp. y del 16SrRNA para los géneros Ehrlichia/Anaplasma. RESULTADOS: Se detectó positividad a Rickettsia spp. en el 4,76%, identificándose por secuenciación a la especie Rickettsia massiliae. Para la familia Anaplasmataceae se detectó positividad para Ehrlichia canis (23,8%) y Anaplasma platys (19,04%). CONCLUSIONES: Se trata del primer reporte de patógenos de interés zoonótico y/o veterinario pertenecientes a los géneros Rickettsia, Ehrlichia y Anaplasma en garrapatas Rh. sanguineus s.l para el norte de la provincia de Buenos Aires

Molecular detection of vector-borne agents in cats in Southern Brazil / Detecção molecular de agentes transmitidos por vetores em felinos domésticos no Sul do Brasil

Abstract This study used serological and molecular methods to investigate the occurrence of vector-borne pathogens (VBP) with zoonotic potential in cats neutered at the University Veterinary Hospital in Canoinhas, Santa Catarina. The combined PCR and serological results revealed that 17 (56.6%) cats were positive for one or more pathogens. The sampled cats had antibodies to Ehrlichia spp. (7/30), Anaplasma phagocytophilum (3/30) and Leishmania infantum (2/30). The PCR assay detected DNA closely related to Ehrlichia canis in 6/30 cats, Mycoplasma haemofelis in 2/30 cats, A. phagocytophilum and Cytauxzoon sp. in one cat each. While Bartonella clarridgeiae and B. henselae were detected in two cats each, and B. koehlerae was detected in one cat.

Resumo Como os felinos podem ser parasitados por diversos patógenos transmitidos por vetores (PTV), alguns com caráter zoonótico, este estudo objetivou detectar por métodos sorológicos e moleculares, patógenos transmitidos por vetores hematófagos, em gatos atendidos em um Hospital Veterinário Universitário em Santa Catarina. Os resultados da PCR e da sorologia combinados, revelaram que 17 (56,6%) gatos foram positivos para um ou mais patógenos. Na sorologia, foram positivos 7/30 gatos para Ehrlichia, 3/30 para Anaplasma phagocytophilum e 2/30 para Leishmania infantum. Na PCR foi detectado DNA filogeneticamente associado a: Ehrlichia canis em 6/30 gatos; Mycoplasma haemofelis, em 2/30 gatos; A. phagocytophilum e Cytauxzoon sp. em 1/30 gatos cada. Enquanto Bartonella clarridgeiae e B. henselae foram detectadas, cada uma, em dois gatos, B. koehlerae foi detectada em um gato.

Molecular detection of Bartonella, Ehrlichia and Mycoplasma in feral dogs of El Pedregal de San Angel Ecological Reserve in Mexico City / Detecção molecular de Bartonella, Ehrlichia e Mycoplasma em cães selvagens da Reserva Ecológica El Pedregal de San Angel, na Cidade do México

Abstract Free-ranging and feral dogs represent a group of unattended companion animals. They impact wild animal populations by predating native species, displacing predators and introducing exotic pathogens. The aim of this work was to describe the molecular occurrence of Rickettsia, Ehrlichia, Anaplasma, Mycoplasma and Bartonella in feral dogs. The study was carried out in the last relict of a protected area in Mexico City. Blood clots samples from 19 dogs were obtained and analyzed for detection of specific fragments of the 16S-rRNA gene for Anaplasma, Ehrlichia and Mycoplasma and citrate synthase (gltA) for Bartonella and Rickettsia. Our results showed that DNA from three bacteria species (Bartonella vinsonii subsp. berkhoffii, Ehrlichia canis and Mycoplasma haemocanis) was present with frequencies ranging from 5.3 to 15.8%. This is the first record of B. vinsonii subsp. berkhoffii and M. haemocanis in dogs from México, and also the first finding of Ehrlichia canis in Mexico City. It is important to perform surveillance of feral dog populations in order to identify the impact of these pathogens on wild animal populations and Public Health in order to establish prevention and protection programs.

Resumo Cães errantes e selvagens representam um grupo de animais de companhia livres. Eles impactam as populações de animais selvagens pela predação de espécies nativas, deslocando predadores e introduzindo patógenos exóticos. O objetivo deste trabalho foi descrever a ocorrência molecular de Rickettsia, Ehrlichia, Anaplasma, Mycoplasma e Bartonella em cães selvagens. O estudo foi realizado no último ecossistema de uma área protegida na Cidade do México. Amostras de coágulos sanguíneos de 19 cães foram obtidas e analisadas para detecção de fragmentos específicos do gene 16S-rRNA para Anaplasma, Ehrlichia e Mycoplasma e citrato sintase (gltA) para Bartonella e Rickettsia. Nossos resultados mostraram que o DNA de três espécies de bactérias (Bartonella vinsonii subsp. berkhoffii, Ehrlichia canis e Mycoplasma haemocanis) estava presente com frequências variando de 5,3 a 15,8%. Este é o primeiro registro de B. vinsonii subsp. berkhoffii e M. haemocanis em cães do México, e também a primeira descrição de Ehrlichia canis na Cidade do México. É importante realizar a vigilância das populações de cães selvagens para identificar o impacto desses patógenos nas populações de animais silvestres e na Saúde Pública, a fim de estabelecer programas de prevenção e proteção.

Sistematización de la prevalencia de Anaplasma spp., en caninos y metanálisis de A. platys y A. phagocytophilum / Systematization of the prevalence of Anaplasma spp. in canines and meta-analysis of A. platys and A. phagocytophilum

RESUMEN Objetivo. Estimar la prevalencia general de Anaplasma spp. y la prevalencia específica de A. platys y A. phagocytophilum en caninos, mediante estudios publicados entre 2000 y 2018. Materiales y métodos. Revisión sistemática con 14 estrategias de búsqueda, garantizando exhaustividad y reproducibilidad en fases de la guía PRISMA. Se evaluó la calidad con STROBE. Se calcularon frecuencias y se estimó la prevalencia global y las específicas según país, periodo y prueba diagnóstica, con sus intervalos de confianza del 95%. Se realizó Forest Plot para la prevalencia individual y global de A. platys o A. phagocytophilum según PCR, ELISA e IFI, las cuales se compararon con base en el Estadístico Z. Resultados. Se incluyeron 30 estudios con 18.472 caninos, la mayoría de Brasil, Estados Unidos y Alemania. En IFI se halló una prevalencia de 39.0% (IC95%= 37.0-41.0), en ELISA 9.3% (IC95%= 8.8-9.8) y en PCR 7.1% (IC95% = 6.4-7.8). La prevalencia basada en PCR fue estadísticamente mayor en América con 11.9% (IC95% = 10.5-13.3) frente a África con 5.5% (IC95% = 1.2-9.7), Asia 4.1% (IC95% = 3.1-5.1) y Europa 3.5% (IC95% = 2.5-4.5). La prevalencia de A. platys con PCR fue 16.1% (IC95% = 14.2-17.9) y de A. phagocytophilum 3.7% (IC95%= 2.8-4.6). Conclusiones. Se halló una elevada prevalencia de infección, con mayor importancia de A. platys, en un bajo número de publicaciones en el ámbito mundial y con una elevada heterogeneidad según el país, la técnica diagnóstica y la especie implicada.

ABSTRACT Objective. To estimate the general prevalence of Anaplasma spp. and the specific prevalence of A. platys and A. phagocytophilum in canines through studies published between 2000 and 2018. Materials and methods. Systematic review with 14 search strategies to ensure exhaustivity and reproducibility in the stages specified in the PRISMA guide. Quality was evaluated with STROBE. Frequencies were calculated and global and specific prevalences were estimated by country, period of study and diagnostic test employed, with 95% confidence intervals. A forest plot was made showing the individual and global prevalences A. platys and A. phagocytophilum by PCR, ELISA, and IFI, compared using a Z-Test. Results. Thirty studies with 18.472 canines were included, mostly from Brazil, the United States, and Germany. In the studies with IFI, the prevalence was 39.0% (95% CI= 37.0-41.0); with ELISA 9.3% (95% CI=8.8-9.8); and with PCR, 7.1% (95% CI= 6.4-7.8). The prevalence with PCR was statistically higher in America at an 11.9% (95% CI= 10.5-13.3) compared to Africa, at an 5.5% (95% CI= 1.2-9.7), Asia, 4.1% (95% CI= 3.1-5.1), and Europe, 3.5% (95% CI = 2.5-4.5). The prevalence of A. platys with PCR was 16.1% (95% CI= 14.2-17.9), and of A. phagocytophilum, 3.7% (95% CI= 2.8-4.6). Conclusions. The study showed a high prevalence of the infection, with a greater presence of A. platys, in a low number of publications worldwide, with highly heterogeneous results when considering countries, diagnostic techniques, and species involved.

Hemoparasites in ticks of wild birds of Serra dos Órgãos National Park, state of Rio de Janeiro, Brazil / Hemoparasitos em carrapatos de aves silvestres do Parque Nacional da Serra dos Órgãos, estado do Rio de Janeiro, Brasil

Abstract The aim of this study is to detect the presence of tick-borne agents of genera Rickettsia, Borrelia, Babesia, Ehrlichia and Anaplasma in ticks collected from native wild birds in the state of Rio de Janeiro. Birds were captured and observed carefully to find the ectoparasites. DNA detection of hemoparasites was performed by means of the polymerase chain reaction (PCR). The sequences obtained were analyzed and their homologies were compared to the available isolates in the GenBank platform database. A total of 33 birds were captured from 20 different species, of which 14 were parasitized by Amblyomma longirostre (n = 22). There was absence of DNA from agents of the genera Babesia, Anaplasma and Ehrlichia in the evaluated samples. The phylogenetic analysis indicated that one sample had 100% identity with Rickettsia bellii (KJ534309), the other two samples showed 100% identity with Rickettsia sp. Aranha strain and strain AL (EU274654 and AY360216). The positive sample for R. bellii was also demonstrated to be positive for Borrelia sp., which presented a similarity of 91% with Borrelia turcica (KF422815). This is the first description of Borrelia sp. in ticks of the genus Amblyomma in South America.

Resumo Este trabalho teve como objetivo detectar evidências moleculares da presença de agentes dos gêneros Rickettsia, Borrelia, Babesia, Anaplasma e Ehrlichia transmitidos por carrapatos coletados de aves silvestres no estado do Rio de Janeiro. Aves foram capturadas e observadas cuidadosamente a procura de ectoparasitos. A detecção de DNA de hemoparasitos foi realizada por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). As sequências obtidas foram analisadas e sua homologia comparada aos isolados disponíveis na base de dados da plataforma GenBank. Foram capturadas 33 aves, de 20 espécies diferentes das quais 14 estavam parasitadas por Amblyomma longirostre (n = 22). Houve ausência de DNA de agentes dos gêneros Babesia, Anaplasma e Ehrlichia nas amostras avaliadas. A análise filogenética indicou que uma amostra apresentou 100% de identidade com Rickettsia bellii (KJ534309), as outras duas amostras apresentaram 100% de identidade com Rickettsia sp. cepa Aranha e Cepa AL (EU274654 e AY360216.). A amostra positiva para R. bellii também apresentou positividade para Borrelia sp. que apresentou similaridade de 91% com Borrelia turcica (KF422815). Esta é a primeira descrição de Borrelia sp. em carrapatos do gênero Amblyomma na América do Sul.

Detection of a putative novel genotype of Ehrlichia sp. from opossums (Didelphis aurita) from Brazil / Detecção de um suposto novo genótipo de Ehrlichia sp. em gambás (Didelphis aurita) do Brasil

Abstract Erlichiosis affects humans and animals worldwide. Its distribution and prevalence depends on the presence of tick vectors and hosts in one geographic area. The aim of the present study was to investigate the occurrence of Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. in opossums (Didelphis sp.) from the State of Rio de Janeiro, southeast Brazil. Blood samples from 37 animals were tested for these two pathogens using molecular methods. One animal (2.7%) was positive for Ehrlichia sp. by 16S rRNA-based nested PCR. In a phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene using the maximum likelihood method and the GTRGAMMA+I evolutionary model, we detected a novel Ehrlichia sp. genotype closely related to genotypes of E. canis previously reported in dogs from Brazil. To the authors' knowledge, this is the first molecular detection of Ehrlichia sp. in opossums from this State in the southeastern region of the country.

Resumo A erliquiose afeta seres humanos e animais em todo o mundo. Sua distribuição e prevalência dependem da presença de vetores de carrapatos e hospedeiros em uma área geográfica. O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de Ehrlichia sp. e Anaplasma sp. em gambás (Didelphis sp.) do Estado do Rio de Janeiro, sudeste do Brasil. Amostras de sangue de 37 animais foram testadas para estes dois patógenos usando métodos moleculares. Um animal (2,7%) foi positivo para Ehrlichia sp. baseado em 16S rRNA-nested PCR. Em uma análise filogenética baseada no gene 16S rRNA usando o método de máxima verossimilhança e o modelo evolutivo GTRGAMMA + I, detectamos um novo genótipo de Ehrlichia sp. intimamente relacionado a genótipos de E. canis previamente relatados em cães do Brasil. Para o conhecimento dos autores, esta é a primeira detecção molecular de Ehrlichia sp. em gambás deste estado na região sudeste do país.

Ehrlichiosis monocítica humana y babesiosis en Venezuela / Human monocytic ehrlichiosis and babesiosis in Venezuela

Resumen La babesiosis o "Fiebre de garrapatas" es una enfermedad febril y anemizante, producida en animales domésticos y salvajes y ocasionalmente en humanos por especies del genero Babesia, las cuales son protozoarios intraeritrocíticos. Se denomina ehrlichiosis y anaplasmosis a un grupo de infecciones bacterianas transmitidas por garrapatas duras (Ixodidae), que afectan al ser humano y a los animales. Son de distribución universal, y están relacionadas con varias especies de los géneros Anaplasma y Ehrlichia (familia Anaplasmataceae). La fiebre de origen desconocido en pacientes con historia de viajes a zonas endémicas de Ixodes resulta con alto índice de sospecha para la búsqueda de infecciones por Babesia, Borrelia y Ehrliquia, ya que pueden ocurrir simultáneamente, particularmente con estos dos últimos géneros. Se reporta un caso de paciente femenina de 49 años de edad, procedente de Tumeremo estado Bolívar, ocupación minera, quien consultó por fiebre con escalofríos, cefalea y mialgias predominantes en miembros inferiores. Ingresó a Terapia intensiva por cuadro de distres respiratorio y shock séptico. Se descartó malaria por gota gruesa seriada negativas, el hemocultivo y urocultivo reportaron ausencia de crecimiento bacteriano. Se realizó frotis de capa blanca siendo positiva para Ehrliquia monocítica y Babesia bigemina. La paciente evolucionó satisfactoriamente luego del tratamiento con Doxiciclina, clindamicina más meropenem. El fin de este reporte es concientizar a la comunidad médica de la existencia de la ehrlichiosis como entidad clínica emergente en nuestro país y la posibilidad de coexistir con otros microorganismos que comparten el mismo vector, con el fin de considerar tratamiento empírico oportuno en pacientes con factores de riesgo en las zonas rurales.

Abstract Babesiosis or "Tick fever" is a feverish and anemic disease, produced in domestic and wild animals and occasionally in humans by species of the genus Babesia, which are intra-erythrocytic protozoans. Ehrlichiosis and anaplasmosis are called a group of bacterial infections transmitted by hard ticks (Ixodidae), which affect humans and animals. They are of universal distribution, and are related to several species of the genera Anaplasma and Ehrlichia (family Anaplasmataceae). Fever of unknown origin in patients with a history of travel to endemic areas of Ixodes results in a high index of suspicion for the search for Babesia, Borrelia and Ehrliquia infections, since they can occur simultaneously, particularly with these last two genera. We report a case of female patient, 49 years old, from Tumeremo Bolívar state, mining occupation, who consulted for fever with chills, headache and myalgias predominant in lower limbs. He entered intensive therapy for respiratory distress and septic shock. Malaria was ruled out by gross negative strains, blood culture and urine culture showed no bacterial growth. White-coat smears were positive for monocytic Ehrliquia and Babesia bigemina. The patient progressed satisfactorily after treatment with Doxycycline, clindamycin plus meropenem. The purpose of this report is to make the medical community aware of the existence of ehrlichiosis as an emerging clinical entity in our country and the possibility of coexisting with other microorganisms that share the same vector in order to consider timely empirical treatment in patients with factors risk in rural areas.

Serological evidence of exposure to some zoonotic microorganisms in cattle and humans with occupational exposure to livestock in Antioquia, Colombia / Evidencia serológica de exposición a algunos microorganismos zoonóticos en bovinos y humanos con exposición ocupacional a ganadería en Antioquia, Colombia / Evidências sorológicas de exposição a alguns microrganismos zoonóticos em bovinos e em humanos com exposição ocupacional ao gado na Antióquia, Colômbia

Bacteria belonging to Anaplasma, Ehrlichia, Rickettsia and Coxiella genera are considered emerging pathogens and livestock is one of the contexts where the transmission of these microorganisms can occur. The goal of this study was to determine serological evidence for the exposure to these bacteria in cattle and humans with occupational exposure to livestock in the subregions North and Magdalena Medio, Antioquia, Colombia, and to explore related factors. A cross-sectional study was conducted in 48 livestock farms distributed in six municipalities from both subregions: Belmira, Entrerríos and San Pedro de los Milagros (North), and Puerto Berrío, Puerto Nare and Puerto Triunfo (Magdalena Medio). Blood samples from 332 people and 384 bovines were evaluated by serology (IgM and IgG) screening for bacteria from the Anaplasma, Ehrlichia, Rickettsia, and Coxiella genera. Seropositivity in humans from both regions was 42.4% (95%CI: 31.2-55.1) for Anaplasma, 74.2% (95%CI: 66.0-84.4) for Ehrlichia, 72.5% (95%CI: 62.1-82.0) for Rickettsia, and 60.7% (95%CI: 59.7-69.1) for Coxiella burnetii. In cattle, seropositivity was 31.6% (95%CI: 19.9-44.2), 66.8% (95%CI: 55.2-78.1), 64.6% (95%CI: 53.8-74.5), and 61.6% (95%CI: 51.9-69.2), respectively. History of biting by ticks, milking, vaccination, having dogs and hens in the residence, as well as the consumption of raw milk derivatives were some factors associated with the infection by the bacteria studied. The results suggest a previous and recent exposure to these zoonotic bacteria genera in people with occupational exposure to livestock, as well as in cattle in the two studied subregions.

Las bacterias pertenecientes a los géneros Anaplasma, Ehrlichia, Rickettsia y Coxiella son consideradas patógenos emergentes y la ganadería es uno de los contextos donde se puede producir la transmisión de este tipo de microorganismos. El objetivo de este estudio fue determinar la evidencia serológica, debida a la exposición a estas bacterias en bovinos y humanos con exposición ocupacional a ganadería en las subregiones Norte y Magdalena Medio, Antioquia, Colombia, además de estudiar los factores relacionados. Se realizó un estudio transversal en 48 fincas ganaderas, distribuidas en seis municipios de ambas subregiones: Belmira, Entrerríos y San Pedro de los Milagros (Norte), y Puerto Berrío, Puerto Nare y Puerto Triunfo (Magdalena Medio). Las muestras de sangre de 332 personas y 384 bovinos fueron evaluadas mediante tamización serológica (IgM e IgG) para la detección de bacterias de los géneros Anaplasma, Ehrlichia, Rickettsia, y Coxiella. La seropositividad en humanos de ambas regiones fue 42,4% (IC95%: 31,2-55,1) en el caso de Anaplasma, un 74,2% (IC95%: 66,0-84,4) en Ehrlichia, un 72,5% (IC95%: 62,1-82,0) en Rickettsia, y un 60,7% (IC95%: 59,7-69,1) en Coxiella burnetii. En los bovinos, la seropositividad fue 31,6% (IC95%: 19,9-44,2), 66,8% (IC95%: 55,2-78,1), 64,6% (IC95%: 53,8-74,5), y 61,6% (IC95%: 51,9-69,2), respectivamente. El antecedente de haber sido mordido por garrapatas, ordeñar, vacunación, tener perros y gallinas en la residencia, así como el consumo de derivados de leche cruda fueron algunos de los factores asociados con la infección por las bacterias estudiadas. Los resultados sugieren la exposición previa y reciente a estas bacterias en personas con una exposición ocupacional a la ganadería, así como a los bovinos en las dos subregiones estudiadas.

As bactérias dos gêneros Anaplasma, Ehrlichia, Rickettsia e Coxiella são considerados patógenos emergentes, e a transmissão desses microrganismos pode ocorrer no contexto da pecuária. O estudo teve como objetivos determinar as evidências sorológicas de exposição a essas bactérias em bovinos e em humanos com exposição ocupacional ao gado nas sub-regiões Norte e Magdalena Médio, Antióquia, Colômbia, e explorar fatores associados. Foi realizado um estudo transversal em 48 fazendas de gado bovino distribuídas em seis municípios nas duas sub-regiões: Belmira, Entrerríos e San Pedro de los Milagros (Norte) e Puerto Berrío, Puerto Nare e Puerto Triunfo (Magdalena Médio). Amostras de sangue de 332 humanos e 384 bovinos foram analisadas com sorologia (IgM e IgG) para bactérias dos gêneros Anaplasma, Ehrlichia, Rickettsia e Coxiella. Os níveis de sorologia positiva em humanos das duas regiões foram de 42,4% (IC95%: 31,2-55,1) para Anaplasma, 74,2% (IC95%: 66,0-84,4) para Ehrlichia, 72,5% (IC95%: 62,1-82,0) para Rickettsia e 60,7% (IC95%: 59,7-69,1) para Coxiella burnetii. Nos bovinos, os níveis foram 31,6% (IC95%: 19,9-44,2), 66,8% (IC95%: 55,2-78,1), 64,6% (IC95%: 53,8-74,5) e 61,6% (IC95%: 51,9-69,2), respectivamente. Os fatores associados às bactérias estudadas foram: história de picada de carrapato, ordenha, vacinação, presença de cães e galinhas no domicílio e consumo de laticínios feitos com leite cru, entre outros. Os resultados sugerem exposição prévia e recente a esses gêneros bacterianos zoonóticos em pessoas com contato ocupacional com gado, assim como nos próprios animais, nas duas sub-regiões estudadas.

Molecular detection of Anaplasmataceae agents in Dasyprocta azarae in northeastern Brazil / Detecção molecular de agentes Anaplasmataceae em Dasyprocta azarae no nordeste do Brasil

Abstract Recently, the importance of wild-living rodents for maintenance of pathogens of the family Anaplasmataceae in the environment was investigated. These mammals play a role as reservoirs for these pathogens and act as hosts for the immature stages of tick vectors. The aim of the present study was to investigate the prevalence of Ehrlichia sp. and Anaplasma sp. in 24 specimens of Azara's agouti (Dasyprocta azarae) that had been trapped in the Itapiracó Environmental Reserve, in São Luís, Maranhão, northeastern Brazil, using molecular methods. Four animals (16.7%) were positive for Ehrlichia spp. in nested PCR assays based on the 16S rRNA gene. In a phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene, using the maximum likelihood method and the GTRGAMMA+I evolutionary model, Ehrlichia sp. genotypes detected in Azara's agoutis were found to be closely related to E. canis and to genotypes relating to E. canis that had previously been detected in free-living animals in Brazil. The present work showed the first molecular detection of Ehrlichia sp. in Azara's agoutis in Brazil.

Resumo Recentemente, a importância de roedores selvagens na manutenção de agentes Anaplasmataceae no ambiente tem sido investigada, haja visto o papel que tais mamíferos podem desempenhar como reservatórios para os patógenos e como hospedeiros para estágios imaturos dos carrapatos vetores. O presente estudo objetivou investigar a ocorrência de Ehrlichia sp. e Anaplasma sp. em 24 cotias (Dasyprocta azarae) capturadas na Reserva Ambiental de Itapiracó, em São Luís, Maranhão, nordeste do Brazil, utilizando métodos moleculares. Quatro animais (16,7%) mostraram-se positivos nos ensaios de nested PCR para Ehrlichia spp. baseados no gene 16S rRNA gene. Na análise filogenética baseda no gene 16S rRNA e utilizando o método de Máxima Verossimilhança e modelo evolutivo GTRGAMMA+I, os genótipos de Ehrlichia sp. detectados em cotias mostraram-se filogeneticamente relacionados às sequências de E. canis e outros genótipos relacionados a E. canis detectados previamente em animais selvagens no Brasil. O presente trabalho mostrou a primeira detecção molecular de Ehrlichia sp. em cotias no Brasil.

Investigação molecular de Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum e Rickettsia spp. em felídeos selvagens cativos / Molecular investigation of Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum and Rickettsia spp. in captive wild felids

Doenças transmitidas por vetores estão emergindo e reemergindo em todo o mundo, representando um desafio na medicina humana e veterinária. Entre essas doenças estão aquelas causadas pelos agentes da ordem das Rickettsiales, que são bactérias Gram-negativas intracelulares obrigatórias, com capacidade de infectar vários animais e seres humanos. As Rickettsiales das espécies Ehrlichia spp. e Anaplasma spp. são observadas em vacúolos citoplasmáticos de leucócitos e plaquetas. As Rickettsiales da espécie Rickettsia spp. infectam livremente citoplasma ou núcleo de células hospedeiras. O objetivo do presente estudo foi investigar a infecção natural por Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum e Rickettsia spp. em felídeos selvagens cativos no Distrito Federal e Goiás, Brasil. Além disso, também objetivou-se relacionar possíveis alterações hematológicas decorrentes da presença desses agentes. Amostras de sangue de 34 animais foram analisadas por meio da PCR para detecção de presença de DNA desses agentes. O DNA de Ehrlichia canis foi detectado em 5,8% (2/34) das amostras, A. platys foi detectado 64,7% (22/34), A. phagocytophilum foi detectado em 5,8% (2/34). O DNA de Rickettsia spp. não foi detectado em nenhuma amostra. Dois felídeos apresentaram coinfecção por E. canis e A. platys e dois apresentaram coinfecção por A. platys e A. phagocytophilum. Não houve diferenças significativas nos dados hematológicos das amostras positivas e negativas. Os dados sugerem que os felídeos selvagens cativos podem servir como potenciais reservatórios para Ehrlichia spp. e Anaplasma spp., a despeito de não ocasionarem alterações hematológicas.(AU)

Vector-borne diseases have been emerging and reemerging all over the world, causing a challenge to veterinary and human medicine. Among these diseases are those caused by agents of the order Rickettsiales, obligatory intracellular Gram-negative bacteria, with ability to infect several animals and humans. Rickettsiales of the species Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. residing in cytoplasmic vacuoles of leukocytes and platelets. Rickettsiales of the species Rickettsia spp. freely infect cytoplasm or nucleus of host cells. The aim of the present study was to investigate the natural infection with Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum and Rickettsia spp. in captive wild felids at the Federal District and Goiás, Brazil. In addition, it was also aimed to relate possible changes in hemogram with the presence of these agents. Blood samples from 34 animals were analyzed by PCR to detect the presence of DNA from these agents. The DNA of Ehrlichia canis was detected in 5.8% (2/34) of samples. A. platys was detected in 64.7% (22/34), A. phagocytophilum was detected in 5.8% (2/34). The DNA of Rickettsia spp. was not detected in any sample. Two felides presented co-infection with E. canis and A. platys, and two presented co-infection with A. platys and A. phagocytophilum. There were no significant differences in hematological data from positive and negative samples. The data suggest that captive wild felids can serve as potential reservoirs for Ehrlichia spp. and Anaplasma spp., despite hematological abnormalities were not observed.(AU)

Detection of Anaplasma sp. phylogenetically related to A. phagocytophilum in a free-living bird in Brazil / Detecção de Anaplasma sp. filogeneticamente associado a A. phagocytophilum em uma ave de vida livre no Brasil

Abstract Wild animals play an important role in carrying vectors that may potentially transmit pathogens. Several reports highlighted the participation of wild animals on the Anaplasma phagocytophilum cycle, including as hosts of the agent. The aim of this study was to report the molecular detection of an agent phylogenetically related to A. phagocytophilum isolated from a wild bird in the Midwest of the state of Paraná, Brazil. Fifteen blood samples were collected from eleven different bird species in the Guarapuava region. One sample collected from a Penelope obscura bird was positive in nested PCR targeting the 16S rRNA gene of Anaplasma spp. The phylogenetic tree based on the Maximum Likelihood analysis showed that the sequence obtained was placed in the same clade with A. phagocytophilum isolated from domestic cats in Brazil. The present study reports the first molecular detection of a phylogenetically related A. phagocytophilum bacterium in a bird from Paraná State.

Resumo Animais selvagens possuem participação importante como carreadores dos vetores responsáveis por transmitir doenças e vários relatos destacam a participação de animais silvestres no ciclo do Anaplasma phagocytophilum, inclusive como hospedeiros do agente. O presente trabalho tem por objetivo relatar pela primeira vez a detecção molecular da infecção por um agente filogeneticamente associado a A. phagocytophilum em uma ave silvestre no interior do Paraná, Brasil. Foram colhidas 15 amostras de sangue originadas de onze espécies diferentes de aves, todas provenientes da região de Guarapuava. Apenas uma amostra pertencente a uma ave da espécie Penelope obscura foi positiva para o ensaio de nested PCR baseado no gene 16S rRNA. A árvore filogenética baseada na análise por máxima verossimilhança demonstrou que a sequência obtida no presente estudo se posicionou no mesmo clado com cepas de A. phagocytophilum isoladas de gatos domésticos no Brasil. O presente trabalho relata pela primeira vez a detecção molecular de Anaplasma sp. filogeneticamente relacionado à A. phagocytophilum, em um animal da espécie P. obscura, assim como a presença do parasita em uma ave silvestre do Estado do Paraná, Brasil.

Molecular survey of Anaplasma platys and Ehrlichia canis in dogs from Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil

ABSTRACT This study investigated the frequency of infection by Anaplasma platys and Ehrlichia canis in dogs submitted to animal health centers in Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, Brazil. E. canis and A. platys showed infection frequencies of 55.75% and 16.96%, respectively. The identity of the two species was confirmed by DNA sequencing.

Molecular epidemiology of Anaplasma platys, Ehrlichia canis and Babesia vogeli in stray dogs in Paraná, Brazil / Epidemiologia molecular de Anaplasma platys, Ehrlichia canis e Babesia vogeli em cães não domiciliados do Paraná

Hemoparasitic infections are tick-borne diseases, which affect animals and humans. Considering the importance of canine hemoparasitic infections in veterinary clinics, this study aimed to determine the occurrence of Anaplasma platys, Ehrlichia canis and Babesia vogeli in blood samples from 182 dogs not domiciled in the city of Pato Branco, southwestern region of Paraná State, Brazil, using polymerase chain reaction (PCR). The prevalence of A. platys and B. vogeli was 32.9% and 10.9% respectively, and A. platys infection prevailed (p<0.001). The number of dogs positive for A. platys was larger in Winter (p<0.05). All blood samples were negative for E. canis. In the dogs, infestation by Amblyomma cajennense predominated over that by Rhipicephalus sanguineus (p<0.001); but there was no significant association between PCR and the variables presence of ticks, sex and age. Dogs infected by A. platys and B. vogeli showed thrombocytopenia, lymphopenia and leukocytosis; but there was no correlation between such hematological changes and infection by hemoparasites. This appears to be the first molecular study that demonstrates the existence of A. platys and B. vogeli in dogs from the southwestern region of Paraná.(AU)

As hemoparasitoses são enfermidades transmitidas por carrapatos que afetam os animais e os humanos. Considerando a importância das hemoparasitoses caninas na clínica médica veterinária, este estudo objetivou determinar a ocorrência de Anaplasma platys, Ehrlichia canis e Babesia vogeli em amostras de sangue de 182 cães não domiciliados do município de Pato Branco, região sudoeste paranaense, Brasil, utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR). A prevalência de A. platys e B. vogeli foi de 32,9% e 10.9%, respectivamente, predominando a infecção por A. platys (p<0,001). Constatou-se um maior número de cães positivos para A. platys no período do inverno (p<0.05). Todas as amostras de sangue foram negativas para E. canis. Nos cães, a infestação por Amblyomma cajennense prevaleceu sobre a infestação por Rhipicephalus sanguineus (p<0,001), mas não foi observada associação significativa entre a PCR e as variáveis presença de carrapatos, sexo e idade. Cães infectados por A. platys e B. vogeli apresentaram trombocitopenia, linfopenia e leucocitose, porém não houve correlação destas alterações hematológicas com a infecção pelos hemoparasitas. Este é o primeiro estudo molecular que demonstra a existência de A. platys e de B. vogeli em cães da região sudoeste paranaense.(AU)

Molecular detection of Anaplasma species in dogs in Colombia / Detecção molecular de espécies de Anaplasma em cães na Colômbia

Abstract Anaplasma platys and A. phagocytophilum are tick-borne pathogens that parasitize platelets and neutrophils, respectively, of humans and animals. The former is the etiological agent of canine cyclic thrombocytopenia, while the latter is that of canine granulocytic anaplasmosis. This work involved the detection and identification of Anaplasma species in blood samples from dogs in Colombia, using molecular techniques. Between December 2008 and April 2009, blood samples were drawn from the cephalic vein of 91 dogs in the central-western region of Colombia (cities of Bogota, Villavicencio and Bucaramanga) and stored in tubes containing EDTA. These samples were used in 16S rRNA-Anaplasma spp. nPCR and the preparation of blood smears. One (1.1%) of the 91 sampled dogs showed inclusions suggestive of Anaplasmataceae agents in the cytoplasm of platelets. Based on PCR followed by sequencing and phylogenetic analysis, A. platys and Anaplasma sp. closed related to A. phagocytophilum were detected in two and one dog, respectively. Interestingly, all the samples were negative for specific msp-2-A. phagocytophilum real-time qPCR, suggesting the circulation of an Anaplasma species phylogenetically related to A. phagocytophilum in dogs in the aforementioned region. Hence, Anaplasma spp. circulates among dogs in Colombia, albeit with low frequency. To the best of authors' knowledge, this is the first molecular detection of Anaplasma spp. in dogs in Colombia.

Resumo Anaplasma platys e A. phagocytophilum são patógenos transmitidos por carrapatos que parasitam plaquetas e neutrófilos, respectivamente, de humanos e animais. Enquanto o primeiro é agente etiológico da trombocitopenia cíclica canina, o último é o agente responsável pela anaplasmose granulocítica canina. O presente trabalho objetivou detectar e caracterizar, utiizando técnicas moleculares, a presença de espécies de Anaplasma em amostras de sague de cães na Colômbia. Entre Dezembro de 2008 e Abril de 2009, amostras de sangue colhidas em tubos contendo EDTA da veia cefálica de 91 cães da região centro-oeste da Colômbia (cidades de Bogotá, Villavicencio e Bucaramanga). As amostras de sangue foram utilizadas em reações de nPCR para 16S rRNA-Anaplasma spp. e confecção de esfregaços sanguíneos. Um (1,1%) dos 91 cães amostrados mostraram inclusões sugestivas de agentes Anaplasmataceae no citoplasma de plaquetas. Baseada na PCR seguida de sequenciamento e análise filogenética, A. platys and Anaplasma sp. relacionado a A. phagocytophilum foram detectados em dois e um cão, respectivamente. Interessantemente, todas as amostras mostraram-se negativas na PCR em tempo real quantitativa específica para msp-2-A. phagocytophilum, sugerindo a circulação de uma espécie de Anaplasma sp. filogeneticamente relacionado ao A. phagocytophilum em cães na região estudada. Embora em uma baixa freqüência, Anaplasma spp. circula entre cães na Colômbia. O presente trabalho representa a primeira detecção de Anaplasma spp. em cães na Colômbia.

Wolbachia spp. interfere na detecção molecular de Ehrlichia canis e Anaplasma platys em cães com microfilaremia / Wolbachia spp. interferes with molecular detection of Ehrlichia canis and Anaplasma platys in microfilaremic dogs

This report aimed to study the interference in molecular testing for Ehrlichia canis and Anaplasma platys in blood of 155 dogs from the coastal region of Rio de Janeiro. Five Anaplasmataceae positive samples but negative for E. canis and A. platys, from microfilaremic animals, were chosen for sequencing. These sequences, when compared to Gen et Bank database, showed 88% to 100% similarity with Wolbachia spp. denoting an interference in the detection of DNA from other members of Anaplasmataceae, possibly due to a high concentration of Wolbachia spp. DNA.(AU)