Leptospirose: Características da enfermidade em humanos e principais técnicas de diagnóstico laboratorial / Leptospirosis: Characteristics of the human disease and main laboratory diagnostic techniques

A leptospirose é a zoonose de maior distribuição geográfica, com estimativa de cerca de 60.000 mortes por ano. A doença é causada por bactérias do gênero Leptospira, que possui mais de 300 diferentes sorovares e 64 espécies já identificadas, sendo o ambiente a principal fonte de contaminação. A doença em humanos apresenta manifestações clínicas variadas e caráter bifásico, devendo ser confirmada por meio do diagnóstico laboratorial. O objetivo deste trabalho foi reunir conceitos atualizados sobre a leptospirose humana e as principais técnicas de diagnóstico laboratorial empregadas. A MAT é considerada o padrão-ouro para o diagnóstico da leptospirose, mas devido à baixa sensibilidade na fase inicial da doença é necessário o emprego de técnicas mais sensíveis neste período. Baseado em diversos estudos, as metodologias de PCR, ELISA-IgM e teste rápido apresentaram sensibilidade satisfatória nos primeiros dias após o início dos sintomas. Na segunda semana, a MAT apresentou 100% de sensibilidade, mantendo sua alta especificidade em ambas as fases. No geral, os testes sorológicos de ELISA-IgM e teste rápido apresentaram resultados satisfatórios como métodos de diagnóstico precoce, principalmente tratando-se de locais com pouca infraestrutura, diferente dos laboratórios de referência onde é possível empregar as técnicas de PCR e MAT.

Leptospirosis is the most widespread zoonosis, which has a balance of almost 60,000 deaths per year. Bacteria of Leptospira genus, which has more than 300 different serovars and 64 species already identified, cause the disease, being the environment the main source of contamination. The human disease presents a large set of clinical manifestations, showing biphasic presentation, the reason why leptospirosis must be confirmed by laboratory diagnosis. This study aimed to group recent concepts concerning human leptospirosis and the main diagnosis techniques employed at the laboratory. MAT is considered the gold standard for leptospirosis diagnosis, but has low sensitivity on the onset of disease, leading to the use of techniques with higher sensitivity on this period. Based on several studies, PCR, ELISA-IgM and rapid test presented satisfactory sensitivity on the onset of symptoms. In the second week, MAT showed 100% of sensitivity, maintaining its high specificity in both phases. In general, the ELISA-IgM and rapid serological tests showed satisfactory results as methods for early diagnosis, especially in the case of places with poor infrastructure, different from the reference laboratories where it is possible to use the PCR and MAT techniques.

Diagnosis of Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia in hens and laying hens in the western region of Paraná through bacterial isolation and identification in qPCR / Diagnóstico de Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia em aves de postura e matrizes de corte na região oeste do Paraná através do isolamento bacteriano e identificação na qPCR

Bacteria of the genus Brachyspira can cause enteric diseases in poultry causing a decrease in productivity. The occurrence of this disease in chickens has already been verified in countries such as Australia, Italy, and the United States, but in Brazil, until now, epidemiological studies about Brachyspira sp. frequency were only carried out on pig farms. The objective of this study was to evaluate the presence of bacteria of the genus Brachyspira sp. through isolation and confirmation of the species Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia using the qPCR technique. Samples from 110 hens aged from 35 to 82 weeks were collected, 40 were from commercial egg farms and 70 were from laying hens matrices. For the first evaluation, bacterial isolation was performed from the feces. Positive samples were submitted to qPCR to identify the three species proposed. Cecum fragments of the birds were collected and fixed in formaldehyde for histological evaluation and counting of goblet cells. Of the 110 samples, 48 characteristic isolates of Brachyspira (43.6%) were obtained and of these in qPCR 13 identified as B. hyodysenteriae (11.8%) and 5 all from the same farm as Brachyspira intermedia (4.5%), 2 samples were positive for both agents (1.8%) and 28 were not characterized by qPCR (25.5%). None histopathological lesions were observed in the chicken cecum and no significant statistical difference was noticed in the count of goblet cells of the positive hens. It can be evidenced by the occurrence of Brachyspira sp. in laying farms and hens in Brazil, with special relevance to Brachyspira intermedia that can be potentially pathogenic for these animals.(AU)

Bactérias do gênero Brachyspira podem ocasionar enfermidades entéricas em aves acarretando a queda de produtividade. A ocorrência desta enfermidade em galinhas já foi verificada em países como a Austrália, Itália e Estados Unidos, porém no Brasil, até o momento, trabalhos epidemiológicos sobre a frequencia de Brachyspira sp. só foram realizados em granjas de suínos. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de bactérias do gênero Brachyspira sp. através do isolamento e confirmação das espécies Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia utilizando a técnica de qPCR. Foram coletadas amostras de 110 aves com idade entre 35 e 82 semanas, sendo 40 de granjas de postura comercial e 70 de granjas de matrizes de corte. Para avaliação primeiramente procedeu-se o isolamento bacteriano a partir das fezes. As amostras positivas foram submetidas a qPCR para identificação das três espécies propostas. Fragmentos de ceco das aves foram coletados e fixados em formol para avaliação histológica e contagem de células caliciformes. Das 110 amostras foram obtidos 48 isolamentos característicos de Brachyspira (43,6%) e destes na qPCR 13 identificadas como B. hyodysenteriae (11,8%) e 5 sendo todas da mesma granja (4,5%) como B. intermedia, 2 amostras foram positivas para ambos os agentes (1,8%) e 28 não foram caracterizadas através da qPCR (25,5%). Não foram observadas alterações histopatológicas no ceco e diferença estatística significativa na contagem de células caliciformes das aves positivas. Conclui-se que a Brachyspira sp. é frequente em granjas de poedeiras e matrizes de corte no Brasil, com especial relevância para a B. intermedia que possui potência patogênico para estas aves.(AU)

Diagnóstico de sífilis: al derecho y al revés / diagnosis of syphilis: rigth and wrong

La sífilis es una infección crónica de transmisión sexual, causada por la espiroqueta Treponema pallidum. A pesar de existir un tratamiento eficaz, continúa siendo un importante problema de salud pública. La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha estimado que más de 6 millones de personas se infectan cada año en el mun-do (1), y los Centros para el Con-trol y la Prevención de Enferme-dades (CDC) de Estados Unidos reportaron con preocupación, en el 2017, una incidencia de sífilis primaria y secundaria de 9,5 casos por cada 100 000 habitantes, lo que equivale a un incremento del 72,7 % en comparación con el 2013 (2). En Colombia, se estima una preva-lencia de sífilis venérea sustan-cialmente mayor, del 1,25 % (3)

Syphilis is a chronic sexually transmitted infection, caused by the spirochete Treponema pallidum. Despite effective treatment, it remains a major public health problem. The World Health Organization (WHO) has estimated that more than 6 million people infected each year in the world (1), and the Centers for Disease Control and Prevention (CDC) in the United States reported with concern, in 2017, an incidence of primary and secondary syphilis of 9.5 cases per 100,000 inhabitants, equivalent to an increase of 72.7% compared to 2013 (2). In Colombia, a prevalence of substantially greater venereal syphilis is estimated at 1.25% (3

Fluorescent membrane markers elucidate the association of Borrelia burgdorferi with tick cell lines

This study aimed to describe the association of Borrelia burgdorferi s.s. with ixodid tick cell lines by flow cytometry and fluorescence and confocal microscopy. Spirochetes were stained with a fluorescent membrane marker (PKH67 or PKH26), inoculated into 8 different tick cell lines and incubated at 30°C for 24 h. PKH efficiently stained B. burgdorferi without affecting bacterial viability or motility. Among the tick cell lines tested, the Rhipicephalus appendiculatus cell line RA243 achieved the highest percentage of association/internalization, with both high (90%) and low (10%) concentrations of BSK-H medium in tick cell culture medium. Treatment with cytochalasin D dramatically reduced the average percentage of cells with internalized spirochetes, which passed through a dramatic morphological change during their internalization by the host cell as observed in time-lapse photography. Almost all of the fluorescent bacteria were seen to be inside the tick cells. PKH labeling of borreliae proved to be a reliable and valuable tool to analyze the association of spirochetes with host cells by flow cytometry, confocal and fluorescence microscopy.

Anti-leptospiral agglutinins in marmosets (Saguinus oedipus and Saguinus leucopus) from illegal trade / Aglutininas anti-leptospira en monos tití (Saguinus oedipus y Saguinus leucopus) de comercio ilegal

Objective. Determine the infection status with pathogenic Leptospira of one Saguinus oedipus and nine Saguinus leucopus at the Cali Zoo that had been confiscated in Colombia from illegal trade. Materials and methods. A full physical examination, blood work, urinalysis were conducted in all individuals during the reception health check-up, in addition to running the microagglutination test with a pool of 19 serovars, with a starting dilution of 1:50. Results. A high positive titer (≥1:3200) to Leptospira alexanderi serovar manhao in an asymptomatic S. oedipus was detected. All S. leucopus tested negative or less than 1:50. Conclusions. Captive locations have been documented to artificially enhance opportunities to come into contact with contaminated bodily fluids from peridomestic rodents. However, infectious diseases acquired during the illegal transport of wildlife to major metropolitan centers are rarely considered a wildlife conservation or public health threat. Infection with zoonotic pathogens should also be considered an additional threat to endangered wild primates involved in illegal trade, which could hamper reintroduction efforts or other population management procedures for primate species with restricted and fragmented distributions.

Objetivo. Determinar el estado de infección con Leptospira patógena en un Saguinus oedipus y nueve Saguinus leucopus en el Zoológico de Cali tras haber sido decomisados de tráfico ilegal en Colombia. Materiales y métodos. Se procedió a realizar un examen físico, cuadro hemático y bioquímica, urianálisis, y adicionalmente se realizó la prueba de microaglutinación con un pool de 19 serovares, en una dilución inicial de 1:50. Resultados. Se detectó una respuesta elevada en títulos (≥1:3200) a Leptospira alexanderi serovar manhao en un S. oedipus. Todos los S. leucopus resultaron negativos o con títulos menores de 1:50. Conclusiones. Se ha documentado que el cautiverio puede incrementar artificialmente las oportunidades para que los animales en encierros entren en contacto con fluidos corporales contaminados de roedores peridomésticos. Sin embargo, las enfermedades infecciosas adquiridas durante el transporte ilegal de la fauna silvestre a los principales centros metropolitanos son rara vez consideradas amenazas a la conservación de la fauna o para la salud pública. La infección con patógenos zoonóticos se debería también considerar como un riesgo adicional para primates en peligro de extinción involucrados en tráfico ilegal, lo que podría afectar esfuerzos de reintroducción u otras medidas de manejo de poblaciones de primates con distribuciones fragmentadas y restringidas.

Osteomielitis hematógena aguda: mito o realidad / Acute hematogenous osteomyelitis: myth or reality

Antecedentes: Las infecciones óseas y de las articulaciones se conocen desde tiempos remotos, pero fue hasta principios del siglo pasado que se hizo avances en el diagnóstico y tratamiento para disminuir morbilidad y mortalidad. Basados en que todavía son poco conocidos algunos aspectos básicos de la osteomielitis hematógena aguda, se realizó revisión de la fisiopatología,método diagnóstico, tratamiento y complicaciones, con el objeto de proveer datos consensuados que faciliten diagnóstico y tratamiento oportuno, para evitar complicaciones y secuelas.Fuentes: se consultó bibliografía sobre el tema publicados en base de datos Medline, PubMed y biblioteca Cochrane. Desarrollo: La entidad conocida como osteomielitis hematógena aguda, aunque bien definida en la actualidad, todavía ocasiona complicaciones y secuelas en cerca del 6% de los niños afectados. La exploración física y la anamnesis son la piedra angular en el diagnóstico, sobre todo en los países como Honduras donde no siempre se tiene a la disposición, estudios de radiología y laboratorio. El tratamiento tiene como base el uso de antibióticos de acuerdo a hemocultivo cuando son positivos o bien del aspirado o drenaje del material vertido fuera de la metáfisis; sin embargo, el abordaje quirúrgico para drenaje del pus más la descompresión mediante ventana ósea o perforaciones de la metáfisis ósea comprometida generalmente es la regla más que la excepción. Conclusión: Las infecciones óseas y de las articulaciones en los niños no son tan frecuentes, sin embargo, debido a que son entidades con características únicas y poco conocidas en el ámbito médico, en muchas ocasiones pasan desapercibidas, ocasionando un resultado funcional y estético desfavorable para el paciente...

Identificação do agente etiológico da Doença de Lyme-símile brasileira (Síndrome Baggio-Yoshinari) / Identification of the causative agent of Brazilian Lyme diseaselike illness (Baggio-Yoshinari Syndrome)

A Doença de Lyme-símile brasileira ou Síndrome Baggio-Yoshinari (SBY) é uma zoonose emergente, transmitida por carrapatos e até o momento, de descrição restrita ao território brasileiro. O agente etiológico da SBY era desconhecido até o presente trabalho. O objetivo principal do estudo foi identificar a etiologia da SBY. Foi selecionado 2 grupos de pacientes: grupo A (n=68) composto por pacientes com suspeita diagnóstica de SBY, a maioria na fase latente da doença; grupo B (n=10), composto por pacientes com diagnóstico de SBY, que apresentaram obrigatoriamente eritema migratório e que encontravam-se sintomáticos no momento da coleta. Foi utilizado também um grupo controle composto por indivíduos saudáveis e com epidemiologia negativa (n=50). Amostras de sangue foram coletadas para a realização de sorologias, culturas, análises microscópicas (óptica e eletrônica) e reação de cadeia da polimerase (PCR) para diferentes micro-organismos (Mycoplasma spp, Chlamydia spp e Borrelia spp). Além disso, foi realizado um estudo preliminar, através da PCR para Borrelia spp em 47 amostras de carrapatos oriundos de áreas de risco do Espírito Santo (sendo 17 Rhipicephalus microplus e 30 Rhipicephalus sanguineus), e amostras de sangue total de 27 bovinos e 26 equinos, animais estes oriundos da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Os resultados mostraram que a SBY não se trata de uma zoonose causada por um conjunto de micro-organismos como pensado inicialmente e sim pela Borrelia burgdorferi sensu lato. Descoberta essa que foi possível empregando-se novos primers amplificadores do principal gene envolvido na síntese do gancho flagelar da Borrelia, chamado flgE...

Brazilian Lyme disease-like illness (BLDL) or Baggio-Yoshinari Syndrome (BYS) is an emerging zoonosis, transmitted by ticks and so far, restricted to the description of the Brazilian territory. The causative agent of BYS was unknown until now. The main objective of this study was to identify the etiology of BYS. We have selected two groups of patients: group A (n = 68) consisting of patients suspected of BYS, mostly in the latent stage of disease; group B (n = 10), composed of patients diagnosed with BYS, who had compulsorily erythema migrans and that were symptomatic at the time of blood collection. We also used a control group composed of healthy individuals with negative epidemiology (n = 50). Blood samples were collected, in which we performed serology, cultures, microscopic analysis (optical and electron) and polymerase chain reaction (PCR) for different microorganisms (Mycoplasma spp, Chlamydia spp and Borrelia spp). In addition, a preliminary study was conducted by PCR for Borrelia spp in 47 samples of ticks from risk areas at Espirito Santo State (being 17 Rhipicephalus microplus and 30 Rhipicephalus sanguineus), 27 cattle and 26 horses, being these animals from the Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. The results showed that BYS is not a zoonosis caused by a set of microorganisms as initially thought, but by Borrelia burgdorferi sensu lato. These findings were possible after employing new primers that are able to amplify portions of the main genes involved in the synthesis of the Borrelia flagellar hook protein, called flgE. We confirmed positivity for the flgE in 6 patients from group B, 2 ticks, a cow, and a horse, which showed 99% homology with the gene of Borrelia burgdorferi flagellar hook protein (flgE) deposited in GenBank (L43849)...

Tratado de infectologia: v. 2 / Treaty of infectious diseases

Como é de conhecimento geral, a Infectologia apresentou expressivo avanço, que se particularizou no estudo: do vírus da AIDS e da hepatite; na imunologia e imunogenética, por força dos quadros de imunodepressão e dos transplantes, associados ao mapeamento de genes; dos quadros bacterianos sistêmicos, sobretudo a sepse, com mudanças revolucionárias na ambiência das UTIs; da infecção hospitalar; da epidemiologia, que cada vez mais converge para a clínica, e a clínica, por sua vez, valoriza-a como fator preditivo e indicativo da morbidade; da terapêutica, com descoberta de novas drogas quimioterápicas e antibacteriana; e mais recentemente, no diagnóstico e tratamento da Influenza A/H1N1 (Gripe Suína).

Hemorragia pulmonar por leptospirose de instalação rápida / Pulmonary hemorrhage for leptospirose of rapid instalment

A leptospirose é uma doença infecto-contagiosa, caracterizada por comprometer diversos órgãos, sendo frequente o acometimento pulmonar, com incidência de 20 a 70% dos casos. Pode se manifestar como pneumonia intersticial ou até mesmo como hemorragia pulmonar difusa. Esta se traduz por dispnéia progressiva, hipoxemia, hemoptise e infiltrados pulmonares. As formas graves estão se tornando cada vez mais comuns, apresentando rápida evolução para hemoptise maciça, seguida de insuficiência respiratória e morte por asfixia. Relatamos o caso de uma paciente com leptospirose, que evoluiu rapidamente com hemorragia pulmonar e insuficiência respiratória, necessitando de tratamento em unidade de terapia intensiva.

Leptospirosis is infectious and contagious disease characterized by compromise many organs, the pulmonary involviment is common, affecting about 20-70%. This can occur from interstitial pneumonia to diffuse pulmonary hemorrhage. This is reflected by progressive dyspnea, hypoxemia, hemoptysis and pulmonary infiltrates. Severe forms are be becoming increasingly common, with fast progression to massive hemoptysis, followed by respiratory failure and death by asphyxia. This case report of leptospirosis that developed quickly with pulmonary hemmorrhage and respiratory failure, requiring treatment inintensive care unit.

Saúde bucal da crianças de Goiânia: prevalência de doença gengival e presença de espiroquetas em placa subgengival de 300 crianças de 2 a 11 anos de idade com baixa condição socioeconômica / Children's oral health in Goiânia: prevalence of gingivitis disease and presence of spiroquets in subgengival plaque of 300 children aged 2-11 years with low social economic condition

A proposta desta investigação foi determinar a associação de gengivite - espiroquetas em placa subgengival de 300 crianças de 2 a 11 anos, com baixa condição socioecônomica, matriculadas em creches e escolas dos bairros da periferia de Goiânia. Materail e Método - As amostras subgengivais de 1.200 sítios, correspondendo a 4 sítios por criança, foram colhidas por intermédio de palitos de madeira e coradas pelo método de Fontana-Tribondeau para detectar a presença de espiroquetas. Para a análise clínica gengival foi aplicada a classificação do índice gengival (IG) segundo Loe. Resultados - Os dados mostraram que 53,75% das amostras apresentaram espiroquetas, sendo mais prevalentes nas crianças do sexo masculino. Os resultados foram submetidos à análise estatística de qui-quadrado com grau de significância de 5% e a frequência relativa observada de espiroquetas em função da variável idade, sugere uma tedência crescente estatisticamente significativa. Nas idades de 2-3 anos foi de 45,84%; 4-5 anos 51,27%; 6-7 anos 54,41%; 8-9 anos 54,84% e de 10-11 anos 70%. A idade das crianças também, influenciou de forma crescente quanto às proporções de espiroquetas em função dos sítios sangrantes das gengivas, com uma maior prevalência de 77,23% na faixa etária de 10-11 anos. Conclusão - A análise estatística da associação de espiroquetas em sítios sangrantes das gengivas com 94,69% em relação a não sangrantes sugere que essa correlação pode ser utilizada em crianças de baixa condição econômica como indicador de futuro dano periodontal.

Espiroquetosis del colon. Un caso en Medellín, Colombia / Colonic spirochetosis. A case report in Medellin, Colombia

Nosotros reportamos un caso de espiroquetosis intestinal, en un hombre de 61 años de edad con cuadro clínico de diarrea crónica. El hallazgo fue encontrado luego de realizar una colonoscopia en la cual se tomaron biopsias de varios pólipos. En el estudio anatomopatológico se informa espiroquetosis intestinal. En nuestra experiencia es el primer caso que se diagnostica en 6.639 colonoscopias realizadas y se constituye en el primer caso publicado en el país.

Intestinal spirochetosis and colon diverticulosis

Um caso de espiroquetose intestinal é relatado em um homem branco de 62 anos. A condição foi caracterizada por flatulência crônica e episódios de hemorragia intestinal, além da evidência de doença diverticular hipotônica dos cólons, com numerosos organismos filamentosos no epitélio e nas criptas do cólon. Os espiroquetas foram demonstrados pela coloração de Whartin-Starry. Os testes sorológicos para sífilis e HIV foram positivos. A espiroquetose foi tratada com penicilina G e o paciente permanece sem queixas intestinais após 20 meses.

Diagnóstico microbiológico: texto y atlas color / Diagnostic microbiologycal: text and atlas color

La información en cada uno de los 21 capítulos de este texto ha sido revisada con todo cuidado. Desde la publicación de la cuarta edición se han producido numerosos adelantos en la clasificación y nomenclatura taxonómica de los microorganismos de importancia clínica, y por eso han sido evaluados, revisados y actualizados centenares de nuevos métodos para el aislamiento e identificación de un conjunto de microorganismos siempre creciente. es muy importante destacar que en este texto se ha mantenido un enfoque centralizado en las propiedades bioquímicas y fisiológicas únicas de cada familia, género y especie de microorganismos clínicamente relevantes

Estudos de carrapatos e pequenos mamíferos silvestres naturalmente infectados com espiroquetas semelhantes à Borrelia, no município de Itapevi, Estado de Säo Paulo / Studies of ticks and small wild mammals infected with spirochetes likes a Borrelia, Itapevi city, Säo Paulo state, Brazil

Este estudo contribui para elucidar os aspectos de transmissäo borreliose, em um condomínio residencial no município de Itapevi, SP, onde foram registrados os primeiros casos humanos com quadro clínico e sorológico compatíveis com a doença de Lyme. Os focos naturais de espiroquetas foram estudados no período entre janeiro/1995 e junho/1996. Um total de 134 pequenos mamíferos e 88 carrapatos coletados nestes hospedeiros foram investigados. Os carrapatos adultos foram identificados como Ixodes didelphidis, Ixodes Ioricatus e Amblyomma cajennense e os estágios imaturos como Ixodes sp. Para ambos, hospedeiros e carrapatos, foi calculado o índice de densidade relativa e correlacionado com dados meteorológicos pelos coeficientes de Spearman e Pearson. Para marsupiais e carrapatos estas correlaçöes näo foram significantes. Para roedores as correlaçöes foram significantes e diretamente relacionadas às baixas temperaturas e índices pluviométricos (p<0,05). A maior freqüência de carrapatos imaturos ocorreu na estaçäo seca, principalmente em roedores; entretanto, carrapatos adultos predominaram durante a estaçäo chuvosa, ocorrendo somente em marsupiais. Sangue e órgäos dos hospedeiros e carrapatos foram inoculados em meio BSK. Foram observadas espiroquetas semelhantes à Borrelia em culturas de sangue de 13 por cento dos marsupiais da espécie Didelphis marsupialis e em 36,4 por cento dos carrapatos coletados neste hospedeiro. Espiroquetas foram também observadas em 9,7 por cento das culturas de sangue e órgäos dos roedores Akodon cursor, bolomys lasiurus e Oxymycterus hispidus e em 30,3 por cento dos carrapatos coletados nestes hospedeiros

Intestinal spirochetosis: first cases reported in Brazil and the use of immunohistochemistry as an aid in histopathological diagnosis

A colonizacao do colo e reto por espiroquetas intestinais foi detectada pela primeira vez no Brasil em 4 de 282 (1,41 por cento) pacientes submetidos a sigmoidoscopia e/ou colonoscopia com o diagnostico histopatologico de colite cronica inespecifica. A frequencia e provavelmente menor que a real, uma vez que especimens cirurgicos nao foram considerados no presente estudo. O diagnostico histopatologico foi feito atraves de coloracoes de rotina, tais como a hematoxilina-eosina, que mostraram franja basofilica de 3u de espessura sobre a borda em escova do epitelio e por impregnacoes pela prata como o metodo de Whartin-Starry. Metodos imunohistoquimicos, usando dois soros primarios policlonais, um contra o Treponema pallidum e outro contra Leptospira interrogans, serovar copenhageni serogrupo...