Prevalencia del virus de la rinotraqueitis infecciosa bovina en el departamento del Caquetá, Amazonía Colombiana / Prevalence of bovine infectious rhinotracheitis virus in Caquetá department, Colombian Amazon

RESUMEN La rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR) es una enfermedad ampliamente difundida en el mundo con gran repercusión socio-económica en las ganaderías bovinas. El objetivo del presente estudio fue determinar la prevalencia de IBR en 100 hatos del departamento del Caquetá, para lo cual, se muestrearon 960 bovinos mayores de 36 meses entre enero y marzo de 2016 en predios seleccionados a partir de los criterios: a) tamaño (50-180 hectáreas), b) con más de 10 vacas en ordeño, c) disponibilidad de los productores para cooperar y d) accesibilidad de las vías. Las muestras de suero sanguíneo se remitieron al Laboratorio de Diagnóstico Clínico Veterinario del ICA y se analizaron a través la prueba Elisa de bloqueo (BHV-1) gB. Los sueros con porcentaje de bloqueo superior al 55% se consideraron positivos a anticuerpos para IBR. Se encontró alta seroprevalencia (73,13%), mayor además en machos que en hembras (p < 0,05). A nivel municipal la seroprevalencia fue mayor en los municipios de El Doncello, Puerto Rico y San Vicente del Caguán y se encontró diferencia significativa (p < 0,05) entre los nueve municipios analizados. A nivel de hatos, la prevalencia fue del 99%. En conclusión, la prevalencia del virus de la rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR) en bovinos de doble propósito del departamento del Caquetá fue muy alta.

ABSTRACT Infectious bovine rhinotracheitis (IBR) is a disease widely spread throughout the world with great socio-economic impact on bovine livestock. The objective of this study was to determine the prevalence of IBR in 100 herds in Caqueta department, for which 960 cattle older than 36 months between January and March 2016 were sampled in farms selected from the criteria: a) size (50-180 hectares), b) with more than 10 cows in milking, c) availability of producers to cooperate and d) accessibility of roads. Blood serum samples were sent to the ICA veterinary clinical diagnostic laboratory and analyzed using the Elisa blocking test (BHV-1) gB, where sera with blocking percentage greater than 55% were considered as positive for IBR antibodies. High seroprevalence was found (73.13%), being higher in males than in females (p < 0.05). At municipal level, seroprevalence was greater in El Doncello, Puerto Rico and San Vicente del Caguán municipalities, significant difference (p<0.05) was found between the nine municipalities analyzed. At herd level prevalence was of 99%. In conclusion the prevalence of Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR) virus in dual-purpose cattle of Caquetá department was very high.

Serological response against bovine herpesvirus and bovine viral diarrhea virus induced by commercial vaccines in Holstein heifers / Resposta sorológica contra herpesvírus bovino e vírus da diarreia viral bovina induzida por vacinas comerciais em novilhas Holandesas

Vaccination is a strategy to the prevention and control of reproductive diseases caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), however the various compositions of commercial vaccines should be evaluated for their ability to induce protection mediated by antibodies. The objective of this research was to evaluate the production of specific neutralizing Abs against BVDV-1 and 2, and BoHV-1 induced by commercial vaccines composed by different adjuvants. Holstein heifers were vaccinated and distributed in three experimental groups: Group I (G1) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1, BVDV-2 and BoHV-1 diluted in alum hydroxide as adjuvant (n=9); Group II (G2) was vaccinated with an product containing inactivated strains of BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 and BoHV-5 diluted in oil emulsion as adjuvant (n=10); Group III (G3) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1 and BVDV-2, besides live modified thermosensitive BoHV-1, diluted in Quil A, amphigen and cholesterol (n=10); A control, non-vaccinated group (n=6) was mock vaccinated with saline. Heifers received two subcutaneous doses of 5mL of each commercial vaccine on the right side of the neck, with 21 days interval. Humoral immune response was assessed by the virus neutralization test (VN) against BVDV-1 (NADL and Singer strains), BVDV-2 (SV253 strain) and BoHV-1 (Los Angeles strain) in serum samples collected on vaccination days zero (D0), 21 (D21) and 42 (D42; 21 days after boosting). Neutralizing Abs against BVDV-1 NADL was detected only in D42, regardless of the vaccine used. Similar geometric mean titers (GMT) for BVDV-1 NADL were observed between G1 (log2=5.1) and G3 (log2=5.1). The seroconversion rate (%) was higher in G1 (78%) when compared to G2 (10%) and G3 (40%). For BVDV-1 Singer, it was also possible to detect Abs production in G1 (log2=5.8, 100% seroconversion rate) and G3 (log2=3.5, seroconversion rate = 60%), only after the booster dose (D42). Neutralizing Abs to BVDV-2 (SV253) were detected only in G3, observing 90% seroconversion associated with high titers of Abs (log2=6.7) after the 2nd dose of vaccine (D42). Heifers from G1 and G3 responded to BoHV-1 after the first dose (D21): G1 (log2=2.5, seroconversion rate = 67%) and G3 (log2=0.7, seroconversion rate = 80%). In D42, a higher magnitude response was observed in the heifers from G3 (log2=6.1, 100%) compared with G1 (log2=4.3, 100%) and G2 (log2=2.7, 60%). Based on the data obtained, it can be concluded that the commercial vaccine contained aluminum hydroxide (G1) was most effective in the induction of antibodies against BVDV-1. On the other hand, this vaccine did not induce the production of neutralizing Abs against BVDV-2. Only the heifers from G3 (Quil A, amphigen and cholesterol) generated neutralizing Abs against BVDV-2. The animals that received commercial vaccine containing oil emulsion as adjuvant (G2) had a weak/undetectable response against BVDV-1 and BVDV-2. The best protective response against BoHV-1 was observed in heifers vaccinated with the live modified thermosensitive virus.(AU)

A vacinação é utilizada como estratégia para a prevenção e controle das doenças reprodutivas, causadas pelos vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), entretanto, as diversas composições de vacinas comerciais devem ser avaliadas quanto a sua eficiência protetiva mediada por anticorpos (Acs). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a produção Acs neutralizantes específicos para cepas de BVDV-1 e 2, e BoHV-1 induzida por vacinas comerciais contendo diferentes tipos de adjuvantes. Para tal, novilhas Holandesas foram vacinadas e distribuídas em três grupos experimentais: Grupo I (G1) foi vacinado com uma vacina comercial composta por cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2 e BoHV-1 diluídas em hidróxido de alumínio como adjuvante (n=9); Grupo II (G2) foi vacinado com produto contendo as cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 e BoHV-5 em uma emulsão oleosa como adjuvante (n=10); O Grupo III (G3) foi vacinado com uma vacina comercial contendo BVDV-1 e BVDV-2 inativado, além do BoHV-1 vivo modificado e termosensivel, diluídos em adjuvante contendo Quil A, Amphigem e colesterol (n=10); O Grupo Controle não vacinado (n=6) foi inoculado com solução salina. As novilhas receberam duas doses das respectivas vacinas ou solução salina (5mL), com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na tábua do pescoço do lado direito. A resposta imune humoral foi avaliada pelo teste de vírus neutralização (VN) contra o BVDV-1 (cepas NADL e Singer), BVDV-2 (cepa SV253) e BoHV-1 (cepa Los Angeles) em amostras de soro coletadas nos dias (D) de vacinação zero (D0), 21 dias após 1ª dose (D21)e 42 (D42; 21 dias após A 2ª dose). Os anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 NADL foram detectados apenas em D42, independentemente da vacina utilizada. Os títulos médios geométricos (GMT) de anticorpos foram semelhantes entre G1 (log2=5,1) e G3 (log2=5,1). A taxa de soroconversão foi maior no G1 (78%) quando comparado ao G2 (10%) e G3 (40%). Para o BVDV-1 Singer, somente após D42 foi observada a produção de Acs no G1 (log2=5,8; taxa de soroconversão de 100%) e G3 (log2=3,5; taxa de soroconversão = 60%). Os anticorpos contra BVDV-2 (SV253) foram detectados apenas nas novilhas do G3, observando-se taxa de soroconversão de 90% com altos títulos de anticorpos neutralizantes (log2=6,7) em D42. Novilhas G1 e G3 responderam ao BoHV-1 após a primeira dose (D21): G1 (log2=2,5; taxa de seroconversão = 67%) e G3 (log2=0,7; taxa de seroconversão = 80%). Em contrapartida, foi observada uma maior magnitude de resposta para as novilhas G3 (log2=6,1; 100%) em D42, em relação aos animais G1 (log2=4,3; 100%) e G2 (log2=2,7; 60%). Com base nos dados obtidos, foi possível concluir que a vacina composta por hidróxido de alumínio (G1) foi mais eficaz na produção de anticorpos contra o BVDV-1, em contrapartida esse produto não induziu anticorpos contra o BVDV-2. Apenas as novilhas do G3 (Quil A, amphigen e colesterol) geraram Acs neutralizantes contra o BVDV-2. Os animais que receberam a vacina em emulsão oleosa (G2) como adjuvante apresentaram uma resposta fraca/indetectável contra o BVDV-1 e BVDV-2. A melhor resposta protetiva contra o BoHV-1 foi observada nas novilhas vacinadas com a vacina viva modificada termosensível.(AU)

Fatores de risco associados à infecção viral (BoHV-1 e BVDV) em rebanhos leiteiros mestiços com problemas reprodutivos, no município de Uberlândia, MG / Risk factors associated with viral infections (BoHV-1 and BVDV) in crossbreed dairy herds with reproductive failures, Uberlândia, MG

Com frequência, infecções virais são associadas a problemas da reprodução em rebanhos de bovinos de corte e leite de todo o mundo. Este estudo teve como objetivo avaliar variáveis de manejo que possam constituir fatores de risco da infecção por BoHV-1 e/ou por BVDV em rebanhos leiteiros com histórico de problemas da reprodução em vacas mestiças em manejo extensivo e sem histórico de vacinação prévia para o controle de IBR e BVD. Anticorpos neutralizantes anti-BoHV-1, anti-BVDV e para ambos os vírus simultaneamente foram identificados em 62,5% (165/264), 45,1% (119/264) e 31,4% (83/264), respectivamente, das amostras analisadas. Os fatores de risco associados à infecção por BoHV-1 foram rebanhos com número total de fêmeas superior a 100, presença de ordenha mecânica, não utilização de inseminação artificial na reprodução e a compra infrequente de animais. Para BVDV, os fatores de risco foram aptidão mista (leite/corte) do rebanho, presença de ordenha mecânica, ausência de quarentena para os animais recém-adquiridos, presença de piquete de parição e a não utilização de inseminação artificial. Para a infecção simultânea (BoHV-1/BVDV), a presença de ordenha mecânica aumentou o risco em 3,36 vezes, e o uso de inseminação artificial reduziu em 56% o risco de infecção nos rebanhos avaliados.(AU)

Viral infections are frequently associated with reproductive problems in dairy and beef cattle worldwide. The aim of this study was to verify managerial practices that may constitute risk factors associated with infection by BoHV-1 and/or BVDV in dairy herds with a history of reproductive disease in extensively reared dairy cows without a previous history of vaccination against IBR and BVD. Neutralizing antibodies anti-BoHV-1, anti-BVDV or both were detected in 62.5% (165/264), 45.1% (119/264), and 31.4% (83/264), respectively, in the samples analyzed. The risk factors associated with infection by BoHV-1 were herds with more than 100 cows, the presence of mechanical milking, the non-utilization of artificial insemination, and the infrequent acquisition of animals. Risk factors associated with BVDV were dual-purpose herds (milk and beef), these include the utilization of mechanical milking, absence of quarantine for newly acquired animals, the presence of picket calving, and the absence of artificial insemination. For simultaneous infections by both viruses (BoHV-1 and BVDV) the use of mechanical milking increased the chance of infection 3.36-fold while the use of artificial insemination reduced the risk of infection by 56% in these herds.(AU)

Infecção latente pelo herpesvírus bovino tipo 1 em búfalos (Bubalus bubalis) no Rio Grande do Sul / Bovine herpesvirus type 1 latent infection in buffalo (Bubalus bubalis) in Rio Grande do Sul

Apesar dos bovinos serem considerados os hospedeiros naturais do BoHV-1, estudos sorológicos têm sugerido que búfalos podem ser suscetíveis ao BoHV-1 e a outros alfa-herpesvírus geneticamente relacionados. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de DNA viral de BoHV-1 em 202 amostras de gânglios trigêmeos de búfalos, pela técnica de semi-nested PCR, para detecção de um segmento do gene codificante da glicoproteína D (gD) do BoHV-1. Além disso, 242 amostras de soro foram analisadas pela técnica de soroneutralização (SN) para a detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1, BoHV-5 e BuHV. Todas as amostras clínicas foram coletadas em um matadouro na cidade de Pelotas, RS, Brasil. O DNA de BoHV-1 foi detectado em 61 (30,1%) gânglios, e os resultados da SN demonstraram que 27,6% dos animais apresentaram anticorpos contra, pelo menos, um dos vírus testados. O sequenciamento genômico e a análise de 14 amplicons confirmaram a presença do DNA do BoHV-1 nos tecidos analisados. Em resumo, os resultados indicam que o BoHV-1 está distribuído em rebanhos bubalinos provenientes da região Sul do Brasil. Entretanto, são necessárias investigações adicionais, no sentido de elucidar o papel exato dos búfalos na epidemiologia das infecções pelo BoHV-1.(AU)

Although bovines are natural hosts for BoHV-1, serologic studies in several countries have suggested that buffaloes (Bubalus bubalis) may be susceptible to BoHV-1 and other genetically related alphaherpesvirus. This study aimed to investigate the presence of BoHV-1 DNA in trigeminal ganglia from 202 buffaloes by a semi-nested PCR to amplify partially the glycoprotein D (gD) gene of BoHV-1. Additionally, 242 serum samples were tested by serum neutralization (SN) for the detection of antibodies against BoHV-1, BoHV-5 and BuHV. All clinical samples were collected in a slaughterhouse located in Pelotas, RS, Brazil. BoHV-1 DNA was detected in 61 (30.1%) of the samples and SN revealed 27.6% of the animals with neutralizing antibodies against at least one of the tested viruses. Nucleotide sequencing of 15 amplicons followed by BLAST analysis confirmed the presence of BoHV-1 DNA in the analyzed tissues. Taken together, these data indicate that BoHV-1 infection is distributed in buffaloes in southern Brazil. However, the role of buffaloes in the BoHV-1 epidemiology needs further investigation.(AU)

Bovine alphaherpesvirus 1 and 5 in semen from bulls presenting genital lesions under field conditions in Brazil / Alfaherpesvírus bovino 1 e 5 em sêmen de touros com lesões genitais, sob condições a campo no Brasil

Bovine alphaherpesviruses 1 and 5 (BoHV-1/5) are main pathogens of respiratory, reproductive and neurological diseases in cattle. The aim of this study was to investigate the frequency of neutralizing antibodies against BoHV-1/5 in serum samples and to detect viral DNA in semen of bulls from beef cattle farms located in RS. A total of 372 serum and semen sample from bulls were collected in eighteen farms. Serum samples were submitted to virus neutralization (VN) assay, while semen samples were used to detect BoHV-1 and BoHV-5 DNA by PCR. VN results showed that BoHV-1/5 antibodies were detected in bulls of 66.7% (12/18) of the farms, 295 (79.5%) BoHV positive bulls, 287 for BoHV-1 and 234 for BoHV-; at 43 vaccinated bulls 72.1% (31/43) showing serology negative. BoHV-1/5 DNA was detected in the semen of three bulls; one of the them presenting BoHV-1, one out three presenting BoHV-5 and one BoHV-1/5.co-infection All BoHV DNA positive samples came from animals presenting posthitis and other genital lesions at sampling. Results showed a high seroprevalence of BoHV-1/5 antibodies in bulls as well as strong evidence that these viruses are actively circulating in the cattle farms. A remarkable finding is that in the presence of clinically evident lesions in the genital tract, both BoHV-1 and 5 may found in semen.(AU)

Os alfa-herpesvírus bovinos 1 e 5 (BoHV-1/5) são importantes patógenos de doença respiratória, reprodutiva e neurológica em bovinos. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência de detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1/5 em amostra de soro e detectar DNA viral em sêmen de touros do rebanho bovino localizado nas fazendas de gado de corte do RS. Um total de 371 amostras de soro e sêmen foi coletado de touros em 18 fazendas, 325 das quais são provenientes de touros não vacinados e 43 de vacinados. Amostras de soro foram submetidas à técnica de vírus-neutralização (VN), enquanto as amostras de sêmen foram submetidas à extração de DNA e posterior PCR (polymerase chain reaction) para detecção de BoHV-1 e 5. Os resultados da VN demostraram que anticorpos contra BoHV-1/5 foram detectados nos touros não vacinados em 66,7% (12/18) das fazendas, 295 (79,5%) touros mostraram-se positivos para BoHV, 287 para BoHV-1 e 234 para BoHV-5; e para 43 touros vacinados, observou-se que 72,1% (31/43) foram negativos na sorologia DNA de BoHV-1/5, detectado no sêmen de três touros: um deles apresentava BoHV-1, outro BoHV-5 e em um foi detectada coinfecção por BoHV-1/5. Todas as amostras positivas para o DNA viral eram provenientes de animais que apresentavam lesões de postite e outras lesões genitais. Esses resultados demonstram que há uma alta soroprevalência de BoHV-1/5 em touros, bem como uma forte evidência de que esses vírus estão circulando ativamente no rebanho bovino dessas fazendas. Um achado interessante foi a detecção de BoHV-1 e 5 em touros com lesões na região do trato genital.(AU)

Impairment on nuclear maturation rate in oocytes from cows naturally infected by bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) / Comprometimento na taxa de maturação nuclear em ovócitos de vacas naturalmente infectadas pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1)

Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P<0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.(AU)

Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.(AU)

Neurological diseases of cattle in the state of Goiás, Brazil (2010-2017) / Doenças neurológicas de bovinos no estado de Goiás (2010-2017)

A retrospective study was conducted on neurological diseases of cattle in the state of Goiás, Brazil, from March 2010 to August 2017. Samples of three veterinary diagnostic laboratories were analyzed. Diagnosis was established in 170 out of 407 cattle with neurological signs. Epidemiological, clinical, and anatomic pathology features of each case were researched in the files. Main disorders included diseases caused by viruses (rabies 29.41%, meningoencephalitis by bovine herpesvirus 15.88%, and malignant catarrhal fever 1.76%), by bacteria (botulism 5.88%, suppurative meningitis 3.53%, encephalic abscesses 2.94%, listeriosis 1.76%, and thrombotic meningoencephalitis 1.76%), of metabolic origin (polioencephalomalacia 17.06%), of indefinite cause (lymphoplasmacytic meningoencephalitis 11.18%, traumatic hemorrhages 3.53%, and multifocal malacia with gliosis 1.18%), congenital (hydrocephaly 1.18% and multiple malformations 0.59%), toxic (urea poisoning 1.18% and insecticide poisoning 0.59%), and parasitic (meningoencephalitis associated with infection by Trypanosoma sp. 0.59%).(AU)

Foi realizado um estudo retrospectivo de doenças neurológicas de bovinos no estado de Goiás durante o período de março de 2010 a agosto de 2017, analisando amostras de três laboratórios de diagnóstico veterinário. De 407 bovinos que apresentaram sinais clínicos neurológicos, o diagnóstico foi estabelecido em 170 casos. Desses casos, foram pesquisadas nas fichas as características epidemiológicas, clínicas e anatomopatológicas. As principais doenças diagnosticadas foram causadas por vírus (raiva 29,41%, meningoencefalite por herpesvírus bovino 15,88% e febre catarral maligna 1,76%), de origem metabólica (polioencefalomalacia 17,06%), por bactérias (botulismo 5,88%, meningite supurativa 3,53%, abscessos encefálicos 2,94%, listeriose 1,76% e meningoencefalite trombótica 1,76%), sem causa definida (meningoencefalite linfoplasmocítica 11,18%, hemorragias traumáticas 3,53% e malacia multifocal com gliose 1,18%), congênitas (hidrocefalia 1,18% e malformações múltiplas 0,59%), tóxicas (intoxicação por ureia 1,18% e intoxicação por inseticida 0,59%), e parasitária (meningoencefalite associada à infecção por Trypanosoma sp. 0,59%).(AU)

Potencial antiviral e virucida da melitina e apamina contra herpesvírus bovino tipo 1 e vírus da diarreia viral bovina / Antiviral and virucidal potential of melittin and apamin against bovine herpesvirus type 1 and bovine viral diarrhea virus

A busca por alternativa aos fármacos sintéticos têm revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com várias ações farmacológicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), após verificação das respectivas doses tóxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentrações de apamina, melitina e sua associação. Esse tratamento ocorreu antes e após a infecção com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de cepas citopatogênicas de herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e vírus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Após incubação por 72 horas, 37oC, as células foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das células, para rompimento das mesmas e mensuração dos títulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensões de BoHV-1 e BVDV com as soluções de apamina, melitina e associação por 24 horas a 37oC e 22oC. O título viral foi avaliado às 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubação. A concentração citotóxica para 50% das células (CC50) de melitina foi 2,32 μg/ml e apamina não demonstrou toxicidade à maior concentração testada (100μg/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentração de 2μg/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infecção e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado após a infecção. Houve ainda redução de 90% das partículas virais de BoHV-1. Em menores concentrações (1 e 1,5μg/ml) de melitina não houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando efeito citopático do vírus. Na associação das duas substâncias houve queda no título de BVDV e observou-se maior viabilidade celular quando comparados à ação isolada dos composto sobre este vírus. Isso se confirma na atividade virucida, uma vez que houve decréscimo de 90% das partículas virais de BVDV com a associação dos dois compostos do veneno de abelhas. Atuando individualmente, melitina apresentou efeito antiviral e virucida frente ao BoHV-1, zerando seu título em apenas 2 horas a 37oC. Conclui-se que melitina tem ação antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e sua associação com apamina potencializou seus efeitos frente ao BVDV.(AU)

The search for an alternative to synthetic drugs have revealed discoveries in the field of pharmacology and, according to melittin and apamin, two components of bee venom which have been described were with various pharmacological actions.This study aimed to evaluate the in vitro antiviral and virucidal capabilities of these components. Therefore, after verification of their toxic doses by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, MDBK cells (Madin Darby Bovine Kidney) have been cultivated in microplates and treated with different concentrations of apamin, melittin and its association. This treatment occurred before and after infection with MOI (multiplicity of infection) 0.1 of cytopathogenic strains of bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) strain Los Angeles and bovine viral diarrhea virus (BVDV) strain NADL. After incubation for 72 hours, 37°C, the cells were submitted to MTT assay to estimate cell viability. In parallel experiments, plates were subjected to the same procedure suffered freezing and thawing cycle the cells to rupture the same and measurement of viral titers. The virucidal assay was performed by incubating suspension of bovine herpesvirus type-1 and BVDV with apamin solutions, melittin and association for 24 hours at 37°C and 22°C. The viral titer was evaluated at 0 hours, 1, 2, 4, 8 and 24 hours of incubation. The cytotoxic concentration to 50% of the cells (CC50) of melittin was 2.32g/mL and apamin did not show toxicity at the greater concentration tested (100μg/mL). There was antiviral effect of melittin on bovine herpesvirus type-1, especially at a concentration of 2μg/mL, where was observed 85.96% cell viability when treatment was performed before the infection and 86.78% viability when the treatment was carried out after infection. There was also a 90% reduction of viral particles of bovine herpesvirus type-1. In lower concentrations (1 and 1.5μg/mL) melittin no antiviral activity because cell viability was low, showing cytopathic effect of the virus. At the association two substances there were a decrease in the title of BVDV and there was higher cell viability when compared to the isolated action of the compounds of this virus. This is confirmed in the virucidal activity, since there was a decrease of 90% of the viral particles of BVDV with the combination of the two compounds of bee venom. Acting individually, melittin showed antiviral effect and virucidal against for BoHV-1, zeroing its title in just 2 hours at 37°C. It is concluded that melittin has antiviral and virucidal action against the BoHV-1 and its association with apamin potentiate its effects against BVDV.(AU)

Herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1): método de diagnóstico e sua influência na qualidade espermática em touros infectados experimentalmente / Bovine Herpes virus type 1 (BoHV-1): Diagnosis method and its influence on spermatic quality in experimentally infected bulls

O herpesvírus bovino tipo-1 (BoHV-1) é um vírus amplamente distribuído no Brasil e no mundo, havendo um crescente número de estudos envolvendo métodos de diagnóstico e o seu impacto na reprodução animal. O objetivo deste trabalho foi identificar o material genético do BoHV-1 no sêmen de touros infectados experimentalmente por meio da técnica de PCR e avaliar a influência do vírus sobre a qualidade espermática desses animais. A técnica de PCR foi satisfatória, permitindo identificar a presença do material genético do vírus no sêmen de todos os animais a partir de sete dias pós-infecção, com persistência de 21 até 28 dias. Apesar da presença do vírus BoHV-1 por um longo período no sêmen dos animais experimentais, não foram observados efeitos deletérios na qualidade do sêmen fresco e nem após a criopreservação.(AU)

Bovine Herpesvirus type-1 (BoHV-1) is a virus widely distributed in Brazil and worldwide, with a growing number of studies involving diagnostic methods and their impact on animal reproduction. The objective of this work was to identify the genetic material of BoHV-1 in the semen of experimentally infected bulls through the PCR technique, and to evaluate the influence of the virus on the sperm quality of these animals. The PCR technique was satisfactory, allowing for the identification of the presence of the genetic material of the virus in the semen of all the animals from 7 days post infection, with persistence of 21 to 28 days. Despite the presence of the BoHV-1 virus over a long period in the semen of the experimental animals, no deleterious effects were observed on the quality of either fresh semen or semen after the cryopreservation.(AU)

Transferência de imunidade passiva (TIP) e dinâmica de anticorpos específicos em bezerros naturalmente expostos para as viroses respiratórias / Passive immune transfer (PIT) and dynamics of specific antibodies in calves naturally exposed to the respiratory viruses

Esta pesquisa avaliou a TIP e a dinâmica de anticorpos (ACs) específicos em bezerros naturalmente expostos aos agentes causadores da doença respiratória bovina (DRB). Foram selecionados 19 bezerros Holandeses alimentados com colostro proveniente de doadoras vacinadas para DRB. Amostras de soro foram obtidas antes e após a ingestão do colostro (48h) para a soroneutralização (SN). Os valores médios (log2) detectados após colostragem foram de 11,5±1,6 (BVDV), 8,8±1,3 (BoHV-1), 5,5±1,6 (BRSV) e 8,4±1,5 (BPIV-3). Cinco bezerros foram criados do nascimento aos 240 dias de vida, observando-se decréscimo nos títulos de ACs para BVDV, BoHV-1 e BPIV-3 ao longo do tempo (P≤0,001). As taxas de infecções detectadas entre o D14 e o D240 foram de 40% (2/5), 20% (1/5), 80% (4/5), e 60% (3/5), respectivamente, para BVDV, BoHV-1, BRSV e BPIV-3. A maioria dos bezerros manifestou broncopneumonia após as infecções virais. Os bezerros apresentaram ACs para todas as viroses às 48 horas de vida, porém os títulos adquiridos para o BRSV foram baixos. A susceptibilidade para as infecções variou de acordo com os níveis e a duração dos títulos de ACs maternos.(AU)

This research evaluated the PIT and the dynamics of specific antibody (Ab) for calves naturally exposed to the viral agents involved in Bovine Respiratory Disease (BRD). Nineteen Holstein calves fed colostrum from vaccinated donors for DRB. Serum samples were obtained before and after colostrum intake (48h) for serum neutralization (SN). Mean values (log2) detected after colostrum feeding were 11.5±1.6 (BVDV), 8.8 ±1.3 (BoHV-1) 5.5±1.6 (BRSV) and 8.4±1.5 (BPIV-3). Five calves were raised from birth to 240 days of life and presented a decrease in Ab titers for BVDV, BoHV-1 and BPIV-3 over time (P≤ 0.001). Infection rates from D14 to D240 were of 40% (2/5), 20% (1/5), 80% (4/5) and 60% (3/5), respectively for BVDV, BoHV-1, BRSV and BPIV-3. Most of the calves presented bronchopneumonia after seroconversion to the virus. Calves presented Ab for all viruses at 48 hours of life, however BRSV Ab titer were low. Levels and persistence of maternal antibody titers determined the susceptibility to viral infections.(AU)

Atividade antiviral e virucida de extratos hidroalcoólicos de própolis marrom, verde e de abelhas Jataí (Tetragonisca angustula) frente ao herpersvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e ao vírus da diarreia viral bovina (BVDV) / Antiviral and virucidal activity of hydroalcoholic extracts of propolis brown, green and jataí bees (Tetragonisca angustula) against Bovine Herpesvirus Type-1 (BoHV-1) and Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV)

Dentre as propriedades biológicas da própolis, a atividade antimicrobiana tem merecido destacada atenção. No presente trabalho, descreve-se a ação antiviral e virucida de três extratos hidroalcoólicos de própolis (marrom, verde e de abelhas jataí (Tetragonisca angustula), frente ao Herpesvírus Bovino tipo (BoHV-1) e ao Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV). Os três extratos hidroalcoólicos foram obtidos de extração etanólica e são oriundos do sul do Brasil. A composição química dos extratos de própolis foi determinada pela cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrômetro de massas (UFLC-PDA-ESI-TOF/MS) que identificou e quantificou compostos como: ácido cafeico e ácido p-cumárico, ácido clorogênico, ácido ferúlico, além de flavonoides como a rutina. A toxicidade celular bem como a atividade antiviral dos extratos de própolis em monocamadas de células MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney) foi avaliada através de observação microscópica e quantificada pelo teste de MTT (3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo). O extrato de própolis de abelhas jataí demonstrou ser menos citotóxico (1,57µg/mL), quando comparado aos extratos verde (0,78µg/mL) e marrom (0,39µg/mL). Quanto a atividade antiviral, a própolis verde demostrou maior eficácia em ambos os tratamentos celulares (pós e pré-exposição) frente ao BoHV-1 em relação aos outros extratos, ou seja, houve maior viabilidade celular quando comparada aos controles de células e vírus. Já a de jataí apresentou atividade frente aos dois vírus (BoHV-1 e BVDV) no método pré-infecção, enquanto a própolis marrom demonstrou ação apenas frente ao BoHV-1 também no método pré-infecção. Para determinação da atividade virucida foram utilizadas diferentes diluições dos vírus, bem como temperaturas e tempos distintos de incubação. A própolis verde a 37°C propiciou a maior redução no título viral (4,33log) em relação a marrom (log = 3,5log) e de jataí (log = 3,24log). No entanto, frente ao BVDV a própolis jataí apresentou os melhores resultados em ambas as temperaturas (22oC e 37oC). Portanto, os extratos avaliados apresentaram atividade antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e BVDV, o que os torna alvo para o desenvolvimento de novos biofármacos como alternativa ao uso de antivirais comerciais em Medicina Veterinária.(AU)

Among the biological properties of propolis, the antimicrobial activity has received prominent attention. In this paper, we describe the antiviral and virucidal effect of three hydroalcoholic extracts of propolis (brown, green and jataí bees (Tetragonisca angustula), against bovine herpesvirus type-1 (BoHV-1) and bovine viral diarrhea Virus (BVDV). All hydroalcoholic extracts were obtained from ethanol extraction. The chemical composition of propolis extracts was determined by high-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometer (UFLC-PDA-ESI-TOF/MS) to identify and quantify compounds such as caffeic acid and p-coumaric acid, chlorogenic acid, ferulic, and flavonoids such as rutin. Cell toxicity and antiviral activity of propolis extracts in monolayers of MDBK cells (Madin-Darby Bovine Kidney) were assessed by microscopic observation and quantified by the MTT assay (3- (4.5 dimethylthiazol-2yl) -2- 5-diphenyl-2H-tetrazolato bromine). Propolis extract from Jataí bees proved to be less cytotoxic (1.57mg / ml) when compared to green extracts (0.78mg / ml) and brown (0.39mg/mL). Regarding antiviral activity, propolis has shown greater efficacy in both cellular treatments (post and pre-exposure) against BoHV-1 when compared to other extracts, ie, there was increased cell viability compared to cell and virus controls. Extracts from Jataí showed activity against both viruses (BoHV-1 and BVDV) infection in the pre-test, whereas brown propolis demonstrated action only against the BoHV-1 in the pre-infection method. To determine the virucidal activity, it were used different dilutions of virus, as well as different temperatures and incubation times. The green propolis at 37°C led to a greater reduction in viral titer (4.33log) compared to brown (3.5log) and jataí (3.24log). Jataí propolis showed the best results in both temperatures (22oC and 37oC) when tested against BVDV. In summary, the evaluated extracts showed antiviral and virucidal activity against BoHV-1 and BVDV, and may be important targets for the development of new compounds as an alternative to commercial antivirals.(AU)

Safety and immunogenicity of a glycoprotein E gene-deleted bovine herpesvirus 1 strain as a candidate vaccine strain / Atenuação e imunogenicidade de uma cepa recombinante do herpesvírus bovino tipo 1 defectiva na glicoproteína E

A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gEΔ) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gEΔ or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or Montanide™ (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gEΔ vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gEΔ and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gEΔ is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.(AU)

Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gEΔ) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou Montanide™ (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gEΔ, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gEΔ) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.(AU)

Occurrence of antibodies anti -Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leptospira interrogans in a captive deer herd in Southern Brazil / Ocorrência de anticorpos anti -Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leptospira interrogans em um rebanho de cervídeos de cativeiro do sul do Brasil

Abstract A large number of Brazilian zoos keep many endangered species of deer, however, very few disease surveillance studies have been conducted among captive cervids. Blood samples from 32 Brazilian deer (Blastocerus dichotomus, Mazama nana and Mazama americana) kept in captivity at Bela Vista Biological Sanctuary (Foz do Iguaçu, Brazil) were investigated for 10 ruminant pathogens, with the aims of monitoring deer health status and evaluating any potential zoonotic risk. Deer serum samples were tested for Brucella abortus, Leptospira (23 serovars), Toxoplasma gondii, Neospora caninum, bovine viral diarrhea virus, infectious bovine rhinotracheitis virus, foot-and-mouth disease virus, western equine encephalitis virus, eastern equine encephalitis virus and Venezuelan equine encephalitis virus. Antibodies against T. gondii (15.6%), N. caninum (6.2%) and L. interrogans serogroup Serjoe (3.1%) were detected. The serological results for all other infectious agents were negative. The deer were considered to be clinically healthy and asymptomatic regarding any disease. Compared with studies on free-ranging deer, the prevalences of the same agents tested among the captive deer kept at the Sanctuary were lower, thus indicating good sanitary conditions and high-quality management practices at the zoo.

Resumo Um grande número de zoológicos brasileiros abriga espécies de cervídeos ameaçados de extinção, entretanto, estudos de vigilância de doenças em cervídeos de cativeiro são escassos. Amostras de sangue de 32 cervídeos brasileiros (Blastocerus dichotomus, Mazama nana e Mazama americana), mantidos em cativeiro no Refúgio Biológico Bela Vista (Foz do Iguaçu, Brasil), foram investigados para 10 patógenos de ruminantes, visando monitorar o estado de saúde dos cervídeos e avaliar a presença de agentes zoonóticos. As amostras de soro foram testadas para Brucella abortus, Leptospira (23 sorovares), Toxoplasma gondii, Neospora caninum, diarreia viral bovina, rinotraqueíte infecciosa bovina, febre aftosa, encefalomielite equina do oeste, encefalomielite equina do leste e encefalomielite equina venezuelana. Foram detectados anticorpos para T. gondii (15,6%), N. caninum (6,2%) e para L. interrogans sorogrupo Serjoe (3,1%). As sorologias apresentaram resultado negativo para as demais doenças. Os cervídeos foram considerados clinicamente sadios e assintomáticos para doenças. Comparados aos estudos de populações de vida livre, as soroprevalências para os mesmos agentes testados foram menores para os cervídeos mantidos no Refúgio, indicando as boas condições sanitárias e a qualidade das práticas de manejo no zoológico.

Prevalência das infecções latentes por BoHV-1 e BoHV-5 em bovinos de corte no Estado do Paraná / Prevalence of latent infection with BoHV-1 and BoHV-5 in beef cattle of Parana, Brazil

O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência das infecções latentes por BoHV-1 e por BoHV-5 em bovinos de corte criados no Estado do Paraná. Os gânglios do nervo trigêmeo foram coletados de 400 bovinos hígidos, entre 18 e 36 meses de idade, provenientes de 90 propriedades rurais localizadas em diferentes mesorregiões geográficas do Estado e abatidos em frigorífico com Serviço de Inspeção Federal. A reação em cadeia da polimerase com amplificação do gene que codifica a glicoproteína C foi empregada para a detecção do DNA viral. Cento e nove bovinos eram herpéticos (27,25%), sendo 14,25% (57/400) infectados com BoHV-1, 9,75% (39/400) infectados com BoHV-5 e 3,25% (13/400) portadores de infecção mista. A distribuição geográfica foi heterogênea e as infecções foram mais prevalentes nas mesorregiões localizadas ao norte do Estado. A vigilância para a encefalite por BoHV-5 deve ser intensificada na mesorregião Noroeste.

The prevalence of latent infection with BoHV-1 or BoHV-5 in beef cattle raised in the state of Paraná, Brazil, was studied. The trigeminal ganglia were collected in a slaughterhouse from 400 healthy cattle, 18 to 36 months old, raised in 90 farms located in distinct geographical regions of the state. Polymerase chain reaction for amplification of the gene encoding C glycoprotein was performed to detect virus DNA. One hundred and nine (27.25%) animals were herpetic; 14.25% (57/400) were infected with BoHV-1, 9.75% (39/400) were infected with BoHV-5 and 3.25% (13/400) had mixed infection. The geographical distribution was heterogeneous and the infections were more prevalent in the north of the state. The surveillance for BoHV-5 encephalitis should be intensive in the Northwest region.

A glycoprotein E gene-deleted bovine herpesvirus 1 as a candidate vaccine strain

A bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) defective in glycoprotein E (gE) was constructed from a Brazilian genital BoHV-1 isolate, by replacing the full gE coding region with the green fluorescent protein (GFP) gene for selection. Upon co-transfection of MDBK cells with genomic viral DNA plus the GFP-bearing gE-deletion plasmid, three fluorescent recombinant clones were obtained out of approximately 5000 viral plaques. Deletion of the gE gene and the presence of the GFP marker in the genome of recombinant viruses were confirmed by PCR. Despite forming smaller plaques, the BoHV-1△gE recombinants replicated in MDBK cells with similar kinetics and to similar titers to that of the parental virus (SV56/90), demonstrating that the gE deletion had no deleterious effects on replication efficacy in vitro. Thirteen calves inoculated intramuscularly with BoHV-1△gE developed virus neutralizing antibodies at day 42 post-infection (titers from 2 to 16), demonstrating the ability of the recombinant to replicate and to induce a serological response in vivo. Furthermore, the serological response induced by recombinant BoHV-1△gE could be differentiated from that induced by wild-type BoHV-1 by the use of an anti-gE antibody ELISA kit. Taken together, these results indicated the potential application of recombinant BoHV-1 △gE in vaccine formulations to prevent the losses caused by BoHV-1 infections while allowing for differentiation of vaccinated from naturally infected animals.

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.(AU)

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.(AU)

Surveillance of neutralizing antibodies against Bovine Herpesvirus 1 in cattle herds from different farming property systems / Distribuição de anticorpos neutralizantes contra o Herpesvirus bovino 1 em propriedades bovinas de diferentes sistemas de criação

The aim of this study was to investigate the presence of neutralizing antibodies against bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) in 722 non-vaccinated animals from eight properties that use different farming systems (extensive, semi-confinement and confinement). Serum samples were subjected to neutralization tests in order to search for anti-BoHV-1 antibodies. Serological results were categorized as negative, low titer, intermediate titer or high titer. One property showed no positive samples; while other properties presented frequency of positive samples ranging from 17.95% to 86.96%. For animals raised under confinement, the number of positive samples and neutralizing antibody titers were lower compared to others, possibly due to good sanitary practices adopted by this type of system. Altogether, our results can contribute towards the understanding of the endemic infection in Brazil.

Este trabalho teve por objetivo avaliar a distribuição de anticorpos neutralizantes contra o herpesvirus bovino 1 (BoHV-1) em 722 animais não vacinados pertencentes a oito propriedades que utilizam diferentes sistemas de criação (extensivo, semi-confinamento e confinamento). As amostras sorológicas foram submetidas ao teste de soroneutralização para pesquisa de anticorpos anti-BoHV-1. Os resultados foram classificados em títulos negativo, baixo, médio e alto. Uma propriedade não apresentou amostras positivas, enquanto que nas demais propriedades a frequência de amostras positivas variou de 17,95% a 86,96%. Os animais do sistema de criação por confinamento apresentaram menor número de amostras positivas quando comparado aos animais do outros sistemas de criação, possivelmente devido às boas práticas sanitárias adotadas por esse sistema. Dessa forma, nossos resultados podem contribuir para o entendimento dessa infecção endêmica no Brasil.

Relevamiento serológico de anticuerpos contra enfermedades virales de interés sanitario en llamas (Lama glama) de la provincia de Jujuy, Argentina / Serological survey of antibodies aainst vital diseases of public health interest in llamas (Lama glama) from Jujuy rpovince, Argentina

Las poblaciones de llamas de Argentina se concentran principalmente en la provincia de Jujuy; su explotación representa un importante recurso económico de las comunidades altoandinas. El objetivo de este trabajo fue evaluar la seroprevalencia de anticuerpos contra algunos agentes virales asociados a enfermedades de impacto productivo en rodeos de llamas de Jujuy. Se analizaron 349 sueros de llamas adultas de 6 departamentos de la puna jujeña ubicados por encima de los 3300 msnm. Se obtuvo una prevalencia del 100 % para rotavirus grupo A y del 70 % para el virus parainfluenza-3 bovino, mientras que no se detectaron reactores para herpesvirus bovino 1, virus de la diarrea viral bovina, influenza A humana (H1N1) e influenza equina (H3N8). Los resultados obtenidos confirman la amplia distribución de rotavirus y virus parainfluenza y la baja susceptibilidad a herpesvirus y pestivirus en las tropas de llamas de la puna jujeña

Llama population from Argentina is mainly concentrated in the Andean Puna, Jujuy. Llamas represent an important economic resource for the Andean communities. The aim of this study was to investigate the prevalence of antibodies against viral antigens associated to viral diseases of economic impact (neonatal diarrhea, reproductive and respiratory syndromes). A total of 349 serum samples from adult llamas were analyzed. The obtained antibody prevalence was 100 % for Rotavirus A and 70 % for Bovine parainfluenza virus 3. In contrast, no reactors were detected to Bovine herpesvirus 1, Bovine viral diarrhea virus 1, Human influenza A virus (H1N1) and Equine influenza virus (H3N8). These results confirm the wide circulation of rotavirus and parainfluenza virus in Argentinean llamas and suggest that susceptibility to infection with bovine herpesvirus, pestivirus and influenza A viruses is low. This serologic survey provides novel information regarding the epidemiology of viral diseases affecting llamas from the Argentinean Andean Puna

Prokaryotic expression of a truncated form of bovine herpesvirus 1 glycoprotein E (gE) and its use in an ELISA for gE antibodies / Expressão procariota de uma forma truncada da glicoproteína E (gE) do herpesvírus bovino tipo 1 e uso em ELISA para anticorpos contra a gE

This article describes the expression of a truncated form of bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) glycoprotein E (gE) for use as immunodiagnostic reagent. A 651 nucleotide fragment corresponding to the amino-terminal third (217 amino acids) of BoHV-1 gE - that shares a high identity with the homologous BoHV-5 counterpart - was cloned as a 6×His-tag fusion protein in an Escherichia coli expression vector. A soluble protein of approximately 25 kDa purified from lysates of transformed E. coli was recognized in Western blot (WB) by anti-6xHis-tag and anti-BoHV-1 gE monoclonal antibodies. In addition, the recombinant protein was specifically recognized in WB by antibodies present in the sera of cattle seropositive to BoHV-1 and BoHV-5. An indirect ELISA using the expressed protein as coating antigen performed comparably to a commercial anti-gE ELISA and was able to differentiate serologically calves vaccinated with a gE-deleted BoHV-5 strain from calves infected with BoHV-1. Thus, the truncated gE may be useful for serological tests designed to differentiate BoHV-1/BoHV-5 infected animals from those vaccinated with gE-negative marker vaccines.

Este trabalho relata a expressão de uma forma truncada da glicoproteína E (gE) do herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) para uso em imunodiagnóstico. Um fragmento de 651 pares de bases (pb) correspondente ao terço amino-terminal (217 aminoácidos) da gE do BoHV-1 - que compartilha uma alta identidade com a gE do BoHV-5 - foi clonada como proteína de fusão com cauda 6x de histidina em um vetor de expressão em Escherichia coli. Uma proteína solúvel de aproximadamente 25 kDa purificada de lisados de E.coli foi reconhecida em Western blot (WB) por anticorpos monoclonais anti-6xHis-tag e anti-gE. Além disso, a proteína recombinante purificada foi reconhecida em WB por anticorpos presentes no soro de animais soropositivos ao BoHV-1 e BoHV-5. Um ELISA indireto utilizando a proteína recombinante como antígeno apresentou performance comparável a um ELISA gE comercial e foi capaz e diferenciar sorologicamente animais vacinados com uma cepa gE-negativa de BoHV-5 de animais infectados com o BoHV-1. Portanto, a gE truncada pode ser útil em testes sorológicos diferenciais para uso conjunto com vacinas com marcador antigênico gE para o BoHV-1 e BoHV-5.

Analysis of isotype-specific antibody responses to bovine herpesviruses 1.1 and 1.2a allows to estimate the stage of infection

Specific IgM, IgA, IgG1, IgG2, as well as neutralizing antibody responses were evaluated in sera of calves experimentally infected with two isolates of bovine herpesvirus type 1 (BoHV1) of distinct subtypes (subtype 1, BoHV1.1; subtype 2a, BoHV-1.2a). No significant differences were observed in the antibody responses induced by each BoHV-1 subtype. The antibody responses following primary acute infection were characterized by an increase in specific IgM and IgA levels between days 2 and 14 post inoculation (pi). IgG1 was detected from days 11 to 30 pi. IgG2 was detected on the sample taken on day 30 pi. Reactivation of infection following dexamethasone administration induced a significant rise in IgA levels, whereas IgG1 and IgG2 levels, which were at high levels from the beginning of the reactivation process, showed a slight alteration after corticosteroid treatment. These results suggest that it is possible to estimate the dynamics of BoHV-1 infections with basis on the analysis of class- and subclass-specific antibody responses. Such information may be particularly useful for the study of the kinetics of the infection in a herd and to aid in the adoption of appropriate control measures..