Reversión del eclipse inmunológico y vacunación terapéutica contra el cáncer en un modelo experimental / Reversion of the immunological eclipse and therapeutic vaccination against cancer in an experimental model

Aunque existen vacunas para prevenir la aparición de tumores en animales de experimentación, la mayoría de los intentos por aplicar aquellas vacunas con fines terapéuticos contra tumores establecidos no han sido exitosos. Para comprender la naturaleza de esta refractariedad, estudiamos un tumor de ratón fuertemente inmunogénico inducido por el carcinógeno químico metilcolantreno. En nuestro modelo, el inicio de esta refractariedad coincidió con el comienzo de un estado de inmunosupresión conocido como "eclipse inmunológico" caracterizado por una pérdida o bloqueo de la respuesta inmune antitumoral después que el tumor ha superado cierto tamaño crítico. Este eclipse inmunológico fue acompañado por un proceso de inflamación sistémica en el organismo. El tratamiento de los ratones portadores de tumor con una única dosis del corticoide sintético dexametasona (DX) redujo los parámetros de inflamación sistémica e indujo la reversión del eclipse. Esta reversión no fue por sí misma curativa pero permitió que un tratamiento inmunológico basado en células dendríticas estimuladas con antígenos tumorales, que por sí solo era absolutamente ineficaz, pudiera ejercer un significativo efecto inhibidor sobre un tumor en crecimiento. El esquema de dos pasos que comprende, primero, un tratamiento antiinflamatorio para revertir el eclipse y segundo, una estrategia de vacunación basada en células dendríticas destinada a estimular la respuesta inmune antitumoral, podría servir, eventualmente, como un modelo de inmunoterapia contra tumores en animales y seres humanos.

Although animals can be prophylactically immunized against the growth of tumor implants, most of the attempts to use immunotherapy to cause the regression of animal and human tumors once they become established have been unsuccessful. To understand the nature of this refractoriness we have studied a methylcholanthrene-induced and strongly immunogenic murine fibrosarcoma. In our model, the onset of this refractoriness was associated with the beginning of an immunosuppressive state known as "immunological eclipse" characterized by a loss of the antitumor immune response when tumor grows beyond a critical size. This immunological eclipse was accompanied by the emergence of a systemic inflammatory condition. Treatment of tumor-bearing mice with a single dose of a synthetic corticosteroid, dexamethasone (DX), reduced significantly all parameters of systemic inflammation and simultaneously reversed the immunological eclipse. The reversion of the eclipse upon DX treatment was not curative itself, but allowed an immunological therapy based in dendritic cells pulsed with tumor antigens, which was itself absolutely ineffective, to exert a significant inhibitory effect against an established growing tumor. The two-step schedule using an anti-inflammatory treatment to reverse the immunological eclipse plus a dendritic cell-based vaccination strategy aimed to stimulate the anti-tumor immune response, could serve eventually as a model of immunotherapy against animal and human tumors.

Exploração funcional do processo de glicosilação aberrante em tumores: mecanismos envolvidos na atividade pró-migratória de galectina-3 / Exploiting the functional significance of aberrant glycosylation in tumors: mechanisms involved in the activity of galectin-3

Com o objetivo de analisar a expressão dos ligantes de galectina-3 associados à transformação maligna, desenvolvemos uma proteína quimérica, a Gal-3/FA. Observamos que a Gal-3/FA pode ser usada como sonda em ensaios de overlay e de imunoistoquímica. Entre os ligantes de galectina-3 identificamos a 1 integrina, mediador da migração celular. A galectina-3 age como modulador positivo do processo de migração em superfícies de laminina-1. Na presença de galectina-3 observamos diminuição de FAK fosforilado e recrutamento da fosfatase SHP-2 para os complexos focais, levando ao turnover desses complexos / Exploiting the functional significance of aberrant glycosylation in tumors: mechanisms involved in the promigratory activity of galectin-3 / We have generated a novel tool for exploiting the clinical and biological significance of a common hallmark of cancer cells, namely the process of aberrant glycosylation. This tool is a chimeric galectin-3 fused to alkaline phosphatase which allowed for in situ identification of galectin-3 ligands in both human and murine tissues...

Alterations of lipid kinetics and lipoprotein lipase activity in jaundiced tumor bearing rats

Obstructive jaundice is associated with high perioperative morbidity and mortality, and preoperative biliary decompression is still controversial. Profound alterations in intermediary metabolism have been observed with obstructive jaundice. To determine the effect of the common bile duct (CBD) obstruction on lipid metabolism in tumor-bearing animals, free fatty acid (FFA) and very low density lipoprotein-associated triglyceride (VLDL-TG) kinetics were assessed in 20 tumor bearing (subcutaneous MCA sarcoma) Fischer-344 rats, using an obstructive jaundice model. The animals were studied after chronic vascular catheterization, in an unanesthetized, undisturbed state. They were separated into 4 groups: Normal controls (CTL), Tumor-bearing non-jaundiced rats (TBR), Non Tumor Bearing-Jaundiced (NTB-J), Tumor Bearing (tumor burden: 1O per cent body weight)-Jaundiced (TBR-J). All rats were studied 7 days after CBD ligation, or at 1O per cent tumor burden. VLDL-TG and FFA kinetics were assessed by constant infusion of 3H-palmitate-labeled VLDL-TG, and l4C-palmitate bound to albumin, respectively. FFA rate of appearance (FFA-Ra) and clearance (FFA-CI), VLDL-TG rate of appearance (VLDL-TG-Ra) and clearance (VLDL-TG-CI) were determined at steady-states. Tumor burden signiricantly affects FFA-Ra and FFA-CI, as well as VLDL-TG-CI, while CBD ligation selectively affects VLDL-TG-Ra and VLDL-TG-CI. There was significant interaction between tumor burden and jaundice in FFA-Ra. CBD decompression increased significantly VLDL-TG-CI. We conclude that, in jaundiced tumor-bearing rats, tumor burden predominantly affects lipolysis, while CBD obstruction primarily affects triglyceride synthesis and clearance. Lipoprotein lipase (LPL) activity was also markedly decreased by the presence of jaundice and tumor burden, with the associated decrease in the clearance of VLDL-TG.

Inmunidad concomitante contra el sarcoma E 100 comparando dos líneas de ratas / Concomitant immunity against the sarcoma E 100 comparing 2 lineas of rats

El fenómeno de inmunidad concomitante (IC) se define clásicamente como la capacidad que tiene un animal portador de un tumor progresor de inhibir el crecimiento de un segundo inóculo del mismo tumor. En dos líneas de ratas, que tienen distinto comportamiento al desafiarse con Sarcoma E 100 (SE 100), lnea IIMc: 90 por ciento de toma y 100 por ciento de regresión; línea "m": 100 por ciento de toma y muerte), se indujo IC a fin de establecer la participación del huésped en la generación de este fenómeno frente al mismo tumor. Las ratas recibieron el segundo desafío los días 3 ó 14, al igual que los respectivos grupos testigos. Los animales reinoculados el día 7 presentarón menor porcentagen de toma y menores superficies tumorales; además en las ratas IIMc se observó menor desarrollo del primer inóculo. El ensayo de Winn en ratas IIMc confirmó la presencia de células esplénicas (CE) comprometidas contra el SE 100 en los bazos de: ratas inmunes: portadoras de un solo tumor; de primer inóculo en crecimiento y segundo negativo en IC. En línea "m" el porcentagen de toma sólo fue menor en el grupo inoculado conjuntamente con el CE de ratas inmunes. Sólo un 10 por ciento (3/30) de ratas "m" pudieron inmunizarse contra el SE 100. Estos resultados perimitirían atribuir el fenômeno de IC, en ratas IIMc, a mecanismos inmunitários y en ratas "m", de acuerdo a lo postulado por Gorelik, a un factor o factores liberados y/o inducidos por el primer tumor. Se sugiere que prevalecería uno u otro mecanismo según las características biológicas del huésped

Herencia de la susceptibilidad a los tumores y a las metástasis en roedores / Inheritance of susceptibility to tumors and metastases in rodents

Se investigaron los factores genéticos que regulan la susceptibilidad al Sarcoma E100 (SE100) y al linfoma TACB (L-TACB) de ratas y la capoacidad metastásica de este tumor. A partir de una línea e endocriada de ratas se obtuvo una sublínea resistente eR y otra susceptible eS al S-E 100. Las frecuencias fenotípicas de resistencia y susceptibilidad en e, eR,, eS, F1 y F2 permitieron elaborar un modelo teórico de dos pares de genes independientes que regularían la susceptibilidad al S-E 100. El comportamiento del L-TACB y las diferentes respuestas inmunes a antígenos del S-E 100 y del L-TACB y a antígenos no relacionados (glóbulos rojos de camero) en eR y eS avalaron la hipótesis de que los genes seleccionados regularían la respuesta inmune antitumoral. L participación del sistema inmunológico no descartó la presencia de factores de crecimeiento tumoral en la respuesta diferencial de eR y eS sugerida por la respuesta a injertos de S-E 100 irradiados debajo de la cápsula renal. Los patrones de herencia de dos linfomas, el L-TACB y el DGE en la rata y en el ratón evidenciaron que la susceptibilidad a estos linfomas está regida por genes dominantes. La capacidad metastática del L-TACB estaría condicionada por genes distintos de los que facilitarían el crescimiento del tumor primario

Efecto inhibidor de Staphylococcus aureus sobre el crecimiento de un sarcoma en ratas / Inhibitory effect of Staphylococcus aureus on the growth of rat sarcoma

Se investigó el efecto modulador de la respuesta antitumoral de S. aureus y diversas poblaciones celulares en ratas portadoras de un sarcoma transplantable (S-E 100). Se comprobó en estas experiencias la capacidad inhibitoria del crecimiento del S-E 100 en ratas endocriadas, a través de la inoculación i.p. de células de exudado peritoneal (CEP), células de bazo (C.B.) y células de bazo no-adherenrtes (CBN-A), provenientes de ratas previamente desafiadas con S. aureus. También se inocularon i.p. células de animales normales (CEPN, CBN, CBN-AN). Se midió el tamaño del S-E 100 en los días 4, 7, 14, 21 y 28 después de iniciado el tratamiento. Se determinó que S. aureus, así como las poblaciones celulares provenientes de animales previamente inoculados con el germen (CE, CB, CBN-A), inhibe significativamente el crecimiento del tumor. Las células de animales normales no inciden en tal efecto. Se discute si este fenómeno es producido por la proteína A de S. aureus o a través de la activación de las poblaciones celulares (linfocitos, macrófagos, NK) inoculadas

Efecto de la ciclosfosfamida sobre el crecimiento de un sarcoma transplantable de rata S-E 100 / Effect of cyclophosphamide on a transplantable rat sarcoma S-E 100

La ciclosfosfamida (Cy) se utiliza en el tratamiento del cáncer como droga citotóxica, produciendo grados variables de inmunodepresión. En trabajos experimentales se ha observado que al administrarse en dosis bajas aumenta la respuesta inmune, preferentemente la mediada por células. Este efecto se debería a una acción selectiva sobre los linfocitos T supresores. Con el objeto de investigar la Cy como moduladora de la respuesta inmune antitumoral se estudió el efecto de una dosis única (20 mg/Kg de peso) sobre el crecimiento de un sarcoma transplantable de rata (S-E100). La droga se administró a distintos días del desafío tumoral. Previamente, se evaluó el efecto de la droga sobre el peso del bazo, el número de células esplénicas y la viabilidad de las células S-E100 in vivo ]cámaras de difusión) con el objeto de determinar una dosis que no ejerciera una acción citotóxica inmediata sobre las células esplénicas ni sobre las células tumorales. Los resultados mostraron que una dosis única de 20mg/Kg de peso no modificó el peso del bazo, el número de células esplénicas ni la viabilidad de las células neoplásicas. Esta misma dosis produjó, en cambio, distintos efectos sobre el crcimiento del S-E100 dependidendo del día de su administración. Cuando se administró la Cy a los 7, 14 o 21 días del crcimiento tumoral se obtuvo la regresión del 100% de los tumores. la histopatología de los tumoes en regresión mostró alteraciones compatibles con un rechazo mediado por células

Influencia de los macrofagos intratumorales en el crecimiento de un sarcoma de rata / Influence of intratumoral macrophages on the growth of a rat sarcoma

La eliminación de las células fagocíticas activas (CFA) de las suspensiones de um sarcoma de rata (S-E 100), provoca um menor desarrollo del mismo en ratas de línea "m", probablemente porque esas células que infiltran el tumor poseen funciones inhibitorias de la respuesta inmune antitumoral. En este trabajo se investiga si el efecto atribuido a las CFA es general, o depende del tipo de interación que se genera entre los macrófagos (MÝ) que infiltran el tumor donante y el huesped receptor. El S-E 100 se inoculó en ratas de línea "m" (S-E 100) y de línea "c" (S-E 100, c); las CFA se eliminaron con hierro carbonílico (FeC), inoculando las células sobrenadantes (S.FeC - m) y (S.FeC-c) y las suspensiones celulares testigos (S.Te-m) y (S.Te - c). Todos los inóculos fueron de 1 x 10**6 células vía s.c., enreceptores adultos "m" y "c". La eliminación de las CFA indujo un menor desarrollo del tumor en receptores "m", sólo si el inóculo provenía de S-E 100,m. En el receptor "c" no se observó ninguna variación en el crecimiento del tumor, tanto si el inóculo prevenía de S-E 100, como de S-E 100,c.Se postula que el efecto inhibidor de la respuesta inmune ejercio por los MÝ que infiltran el S-E 100 no es un efecto general, sino particular de una línea y sólo obtiene si los MÝ intratumorales son singénicos con el receptor

A ceruloplasmina como enzima marcadora de atividade neoplásica maligna / The ceruloplasmin with enzyme activity maligna neoplasm

Os autores estudaram os níveis de atividade oxidásica da cerulopasmina sérica em ratos machos da linhagem isogênica U inoculados com um sarcoma singênico. Hiperceruloplasminemia estatisticamente significativa foi observada em todas as fases de crescimento tumoral. Valores normais de cerulopasmina foram obtidos unicamente após a 1ª dose de ciclofosfamida (100 mg/Kg, por via intraperitoneal). A subseqüente administraçäo semanal da droga näo bloqueou o reaparecimento da hiperceruloplasminemia nos animais portadores de sarcoma. Ratos normais tratados pela ciclofosfamida, de acordo com o mesmo esquema, apresentaram queda na atividade enzimática após a 1ª dose. Os autores concluem que a hiperceruloplasminemia sugere a presença latente de células neoplásicas viáveis e pode servir como um teste bioquímico para monitorizar o processo maligno

Thymocytolytic autoantibodies elicited by immunization of mice with chemically-induced sarcoma and leukemia cells.

Suero anti-sarcoma, inducido por metilcolantreno, y anti celulas leucemicas mostro actividad litica, dependiente del complemento, hacia celulas timicas de ratones de diferentes haplotipos H-2. Una reaccion positiva con linfocitos singenicos pudo igualmente ser observada. Experimentos de absorcion indicaron que el antigeno reconocido por este anticuerpo no estaba restringido a linfocitos y esta compartido por las celulas de las diferentes cepas de ratones probados. Un posible papel in vivo de este autoanticuerpo estuvo sugerido por el hallazgo preliminar de diferentes modificaciones hemato-inmunologicas en tales animales inmunizados