Effect of ß-mercaptoetanol and cysteine on post-thawing quality and oxidative activity of ram sperm and on the viability of vitrified sheep embryos / Efeito do ß-mercaptoetanol e da cisteína sobre a qualidade e a atividade oxidativa do sêmen ovino após o descongelamento e sobre a viabilidade de embriões ovinos vitrificados

The effects of ß-mercaptoethanol (BME) and cysteine on the viability and oxidative activity of ram sperm after thawing and on development in vitro and viability of vitrified sheep embryos were evaluated. Ejaculates from four rams were pooled and extended, composing six treatments: no antioxidants; 2mM BME; 5mM BME; 2mM BME and 5mM cysteine; 5mM BME and 5mM cysteine; and 5mM cysteine. Sperm motility, membrane and acrosome integrity, mitochondrial functionality, production of reactive oxygen species and total antioxidant capacity were similar across treatments (P>0.05). A medium with no antioxidant presented cleavage and blastocyst development rates (60.3% and 33.6%, respectively) similar (P>0.05) to those of a medium with 50µM BME and 600µM cysteine (64.3% and 36.6%, respectively). Post-thawing viability of vitrified embryos was similar between media (P>0.05). Cysteine and BME had no influence on the post-thawing viability and oxidative activity of ram sperm and on the viability of vitrified sheep embryos.(AU)

Foram avaliados os efeitos do ß-mercaptoetanol (BME) e da cisteína sobre a viabilidade e a atividade oxidativa após o descongelamento do sêmen ovino e sobre o desenvolvimento in vitro e a viabilidade de embriões ovinos vitrificados. Ejaculados de quatro carneiros foram agrupados e diluídos, compondo seis tratamentos: sem antioxidantes; com BME 2mM; com BME 5mM; com BME 2mM e cisteína 5mM; com BME 5mM e cisteína 5mM; e com cisteína 5mM. Motilidade, integridade da membrana e do acrossoma, função mitocondrial, produção de espécies reativas de oxigênio e capacidade antioxidante total foram semelhantes entre os tratamentos (P>0,05). Em um meio sem antioxidantes, as taxas de clivagem e de desenvolvimento embrionário até blastocisto (60,3%, e 33,6%, respectivamente) foram semelhantes (P>0,05) às obtidas em um meio com BME 50µM e cisteína 600µM (64,3% e 36,6%, respectivamente). A viabilidade pós-descongelamento dos embriões vitrificados não diferiu entre os meios (P>0,05). O BME e a cisteína não influenciaram a viabilidade e a atividade oxidativa do sêmen ovino após o descongelamento e a viabilidade de embriões ovinos vitrificados.(AU)

Characterization of biotechnologically relevant extracellular lipase produced by Aspergillus terreus NCFT 4269.10

Abstract Enzyme production by Aspergillus terreus NCFT 4269.10 was studied under liquid static surface and solid-state fermentation using mustard oil cake as a substrate. The maximum lipase biosynthesis was observed after incubation at 30 °C for 96 h. Among the domestic oils tested, the maximum lipase biosynthesis was achieved using palm oil. The crude lipase was purified 2.56-fold to electrophoretic homogeneity, with a yield of 8.44%, and the protein had a molecular weight of 46.3 kDa as determined by SDS-PAGE. Enzyme characterization confirmed that the purified lipase was most active at pH 6.0, temperature of 50 °C, and substrate concentration of 1.5%. The enzyme was thermostable at 60 °C for 1 h, and the optimum enzyme–substrate reaction time was 30 min. Sodium dodecyl sulfate and commercial detergents did not significantly affect lipase activity during 30-min incubation at 30 °C. Among the metal ions tested, the maximum lipase activity was attained in the presence of Zn2+, followed by Mg2+ and Fe2+. Lipase activity was not significantly affected in the presence of ethylenediaminetetraacetic acid, sodium lauryl sulfate and Triton X-100. Phenylmethylsulfonyl fluoride (1 mM) and the reducing, β-mercaptoethanol significantly inhibited lipase activity. The remarkable stability in the presence of detergents, additives, inhibitors and metal ions makes this lipase unique and a potential candidate for significant biotechnological exploitation.

Soropositividade para brucelose em suínos em abatedouros / Seropositivity for brucellosis in pigs in slaughter houses

O presente trabalho teve por objetivo investigar a soropositividade para brucelose em suínos em abatedouros. Foram coletados 910 soros de suínos, procedentes de 30 propriedades, abatidos em frigoríficos da região central do estado de São Paulo, e submetidos às provas de soroaglutinaçao com antígeno tamponado acidificado (AAT) e 2-Mercaptoetanol (2-Me) objetivando determinar a ocorrência da enfermidade nesta espécie. Do total de soros avaliados foram observados 25 (2,7%) animais reagentes ao AAT pertencentes a 10 propriedades, caracterizando 36% de propriedades positivas. Dos animais positivos ao AAT, 16% apresentaram titulo de 25 (incompleto) e 52% titulo de 25 na soroaglutinação lenta (SAL), 8% apresentaram titulo de 50 incompleto na SAL e 25 incompleto no 2-ME e 8% apresentaram titulo de 50 na SAL e 25 no 2-ME. Estes resultados demonstram o elevado percentual de propriedades positivas para brucelose nesta região e ressaltam a necessidade de implementação de programas oficiais efetivos para o controle da brucelose suína.

The aim of this investigation was to evaluate the seropositivity for brucellosis in pig slaughterhouses. Sera of 910 pigs from 30 farms and slaughtered at slaughterhouses, located in the central region of the state of São Paulo, were tested with Buffered Plate Acidified Antigen (BPAA) and 2-mercaptoethanol (2-Me) as confirmatory test to determine the serological positivity in this species. The results demonstrated that 25 (2.7%) of the pigs from 10 farms reacted to BPAA, corresponding to 36% of positive properties. From BPAA positive animals 16% and 52% presented titers of 25 incomplete and 25 respectively in the Tube agglutination test (TAT), 8% presented 50 and 25 incomplete, respectively, in TAT and 2-ME, and 8% resulted 50 and 25 positive in TAT and 2-ME, respectively. These results demonstrate the high percentage of positive farms for swine brucellosis in this region and reinforce the need for official and effective program implementation for the swine brucellosis control.

Evaluación de las técnicas de aglutinación en lámina con el antígeno TR y el 2-mercaptoetanol: aplicación en el diagnóstico de la leptospirosis humana / Evaluatión of the technicals of the slide macroscopic agglutination reaction with the TR antigen and the 2-mercaptoetanol test: diagnosis of the human leptospirosis

Se evalúan las técnicas de aglutinación en lámina con antígeno TR y el 2-mercaptoetanol (2ME) para el diagnóstico de la leptospirosis humana, determinándose los parámetros cualitativos de sensibilidad (90 por ciento), valores predictivos de una prueba positiva (90 por ciento). Se detecto, por la prueba de 2ME, que de los cuarenta casos positivos por el TR cuantitativo, 36 presentaron anticuerpos de la clase IgM, 3 tenían IgM e IgG y un solo caso IgG. Se cuantificó el nivel de anticuerpos presentes en los sueros reactivos, presentándose el mayor número de casos para la dilución 1/10. Se puede considerar que los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que ambas técnicas deberán ser utilizadas en el diagnóstico de la entidad

Estudio de un brote de brucelosis y valoración diagnóstica de las pruebas de laboratorio / Study of a brucellosis outbreak and diagnostic evaluation of laboratory

En 1991, en la zona de Villa Corona, Jalisco, se registró un número anormal de casos con fiebre de origen desconocido, con múltiples diagnósticos clínicos. Se revisaron todos los casos estableciéndose la sospecha de un brote de brucelosis. Se consideró caso a cualquier persona entre cinco y 60 años, que desde enero de 1991 presentó fiebre, calosfríos de más de tres días de evolución más cefalea y/o artralgias. Se hizo un muestreo por conglomerado de las viviendas; cada caso se comparó con tres controles, dos convivientes y un vecino del mismo grupo de edad; se realizaron pruebas seriadas y hemocultivo, para comparar la validez y confiabilidad diagnóstica. Se detectaron 31 casos probables y se estudiaron 85 controles (68.5 por ciento de la muestra de controles esperada). Se aisló Brucella melitensis por hemocultivo en un caso. Se definieron 18 casos con brucelosis activa. Se obtuvo una razón de momios (RM) de 12.6 (IC 95 por ciento = 30-56.1); XMH, p<0.000 para la ingesta habitual de lácteos crudos y una RM de 10.0 (IC 95 por ciento=2.5-43.5); Xmh, p<0.000 para la ingesta continua durante seis meses. Este riesgo se ajustó a 3.0 para los pares discordantes que ingerían regularmente leche cruda. Las pruebas seriadas mostraron: Hudlesson, sensibilidad = 50 por ciento y especificidad = 84.6 por ciento; rosa de Bengala, sensibilidad = 94.4 por ciento y especificidad 84.6 por ciento. Los resultados sugieren que la prueba de Hudlesson tiene una baja confiabilidad. La aglutinación en tubo y la prueba de 2 mercaptoetanol tienen resultados serológicos más satisfactorios

Diagnóstico serológico de la leptospirosis humana empleando la técnica de macroaglutinación TR y la prueba del 2-mercaptoetanol / Serologic diagnosis of human leptospirosis using TR macroagglutination technique and 2-mercaptoethanol assay

Se estudiaron 389 monosueros, procedentes de pacientes con diagnóstico clínico presuntivo de ser portadores de una leptopirosis. De ellos 131 resultaron reactivos (33,67%), mediante la técnica de macroaglutinación en lámina con antígeno termorresistente (TR) cuantitativa. Paralelamente, a 119 de estos sueros, se les realizó la prueba del 2-mercaptoetanol al 0,2 molar, con la finalidad de determinar cualitativamente, las clases de inmunoglobulinas presentes en los sueros estudiados. La cuantificación de anticuerpos en los sueros reactivos, se ofrece a través de los títulos obtenidos

Propuesta de caracterización y tipificación de proteínas monoclonales aplicable al laboratorio clínico / Proposal of characterization and typification of monoclonal proteins applicable to clinical laboratory

En el presente trabajo se incorporan y ordenan procedimientos para obtener la mayor información posible a nivel laboratorio clínico en la indagación de proteínas "M" y la definición de su clase (cadenas pesadas) y tipo (cadenas livianas). Se propone una secuencia de las siguientes técnicas: electroforesis, inmunoelectroforesis, inmunofijación, inmunodifusión radial cuantitativa, tratamientos despolimerizantes e inmunosustracción. La inmunosustracción, descripta por W. A. White y col., consiste en la remoción de la inmunoglobulina en estudio mediante un antisuero específico en presencia de polietilenglicol, separación del inmunocomplejo precipitado y posterior evaluación del sobrenadante mediante inmunofijación; se identifica la cadena liviana que pertenece a la inmunoblobulina sustraída por su ausencia al fijar con el antisuero correspondiente. Es particularmente útil cuando se desea establecer la correspondencia liviana/pesada en presencia de bandas homogéneas múltiples, identificar bandas menores enmascaradas en un fondo policlonal y excluir la presencia coincidente de cadenas livianas libres. Se aconseja incorporar el tratamiento despolimerizante con 2-mercaptoetanol previamente a la cuantificación de IgM por inmunodifusión radial ya que la comparación previa entre controles tratados y no tratados reveló una diferencia muy significativa cuando se analizó mediante contraste de diferencias entre pares homólogos (n = 12, test t = 37,2 p <0,01)

Megaesôfago e anticorpos anti-Trypanosoma cruzi / Megaesophagus and antibodies against Trypanosoma cruzi

Foram analisados 240 soros de pacientes portadores de megaesôfago atendidos no Hospital das Clínicas de Goiânia, pelas técnicas de hemaglutinaçäo indireta (HAI) e de aglutinaçäo direta com pré-tratamento com 2-mercaptoetanol (AD2ME). Em 179 casos, ambas as reaçöes sorológicas foram concordantemente positivas (74,6%). Em 35 casos (14,6%) as reaçöes sorológicas foram positivas com uma técnica e negativas com a outra, sendo que a repetiçäo de ambas as técnicas e/ou a realizaçäo das técnicas de imunofluorescência indireta (IFI) e de fixaçäo de complemento (FC), demonstraram finalmente a positividade destes 35 soros "duvidosos'. Conclui-se que 89,2% dos pacientes portadores de megaesôfago na amostra estudada apresentaram anticorpos anti-Trypanosoma cruzi, confirmando a sua etiologia chagásica. Nos restantes 26 casos (10,85) ambas as reaçöes foram concordantemente negativas. Esta ausência de anticorpos específicos foi confirmada por IFI e por FC. Em oito destes 26 casos, uma nova amostra de soro confirmou estes resultados. Em 24/26 casos, existiam antecedentes epidemiológicos de doença de Chagas, e em dois destes 24 casos houve confirmaçäo parasitológica (xenodiagnóstico positivo). O encontro de dois casos sorologicamente negativos com parasitas circulantes demonstra que a etiologia chagásica näo pode ser afastada, mesmo na ausência de anticorpos específicos, se existirem antecedentes epidemiológicos e indicadores clínicos da doença de Chagas

Brucellosis en el medio policial: pruebas serológicas para su seguimiento; importancia del 2-mercaptoetanol / Brucellosis in police milieu: serological tests for its follow-up; importance of 2-mercaptoethanol

Se presenta un estudio de 25 pacientes atendidos en el Hospital Central de la Sanidad de las Fuerzas Policiales con síntomas y signos de PIG., en las que las aglutinaciones para Brucellas presentaron títulos superiores a 1.100 por los métodos de placa y de tubo; asimismo a todos los pacientes se les hizo un seguimiento con 2 Mercaptoetanol. En los primeros 15 días de la enfermedad los Ac. aglutinantes fueron del tipo IgM; los Ac. IgG (2ME) aparecen después de los 15 días. Se demuestra que la evolución de los Ac. aglutinantes son independientes a la respuesta del tto, los títulos aumentan y se mantienen durante los 2 primeros meses, su disminución es en forma lenta. La prueba de aglutinación con 2ME es innecesario para la evolución y control del enfermo, el aumento de su título mínimo indicará recaída. Un buen número de enfermos presentan resultados paradojales en sus títulos aglutinantes

Hemolisinas de Listeria monocytogenes demostrables por activación con 2- mercaptoctanol / Demonstrable Listeria monocytogenes hemolysins by 2- mercaptocthanol activation

Jones y Seeliger, con el apoyo del Comité Internacional sobre Bacteriología Sistemática, Subcomité sobre Taxonomía de Listeria, han propuesto la necesidad de reemplazar la cepa de L. monocytogenes ATCC 15313 como prototipo en virtud de su incapacida de inducir hemólisis en medios gelificados que contienen 5 o 10% de hematíes de origen ovino o equino (método clásico). En este trabajo se demuestra que, si bien, la cepa ATCC 15313 no induce hemólisis en las condiciones anteriores es capaz de hemolizar hematíes de carnero cuando los sobrenadantes de cultivos en infusión cerebro corazón adicionado de 0,5% de glucosa son previamente activados con 2-mercaptoetanol, condición que resulta general para todas las cepas de L. monocytogenes ensayadas. Igualmente la cepa ATCC 15313 induce lisis en medio gelificado de agar base sangre con hematíes de carnero cuando es cultivada en microaerofilia. Se estudiarion 13 cepas caracterizadas originalmente com L. monocytogenes. Se demuestra que la presencia de hemolisinas por el método directo y/o detección por activación con 2-mercaptoetanol es compatible con la identificación como L. monocytogenes, por lo cual se recomienda la inclusión de estaspruebas en todo estudio identificatorio. Además el estudio de capacidad hemolítica no puede obviar la prueba en microaerofilia. La ausencia de capacidad hemolítica en todas estas condiciones de ensayo es un factor de importancia para cuestionar la identificación de una cepa como L. monocytogenes