Estudo da estabilidade de novas substâncias psicoativas (NPS) em amostras de sangue seco em papel (DBS), e sua aplicação em toxicologia forense / Stability of new psychoactive substances (NPS) in dried blood spots (DBS), and its application in forensic toxicology

Resumo: Introdução: A classe de drogas de abuso conhecida como novas substâncias psicoativas ou, ainda, drogas desenhadas (do inglês new psychoactive substances (NPS) ou designer drugs) é composta por substâncias químicas obtidas a partir de alterações estruturais de substâncias ou mistura de substâncias psicoativas já existentes (e ilícitas), a fim de mimetizar e/ou potencializar os efeitos proporcionados por estas, com a vantagem de circundar a legislação antidrogas vigente. Dentro da classe das NPS, os grupos de maior destaque atualmente são das catinonas sintéticas, dos canabinóides sintéticos e dos NBOMes (feniletilaminas N-2-metoxibenzil substituídas). As catinonas sintéticas, vendidas pela internet como "sais de banho" ou bath salts, são substâncias estruturalmente relacionadas a catinona, um alcalóide presente no Catha edulis (Khat), com propriedades estimulantes. A classe dos NBOMes é derivada da classe dos alucinógenos 2C, a partir da adição de um grupo N-2-metoxibenzil na amina primária. Os NBOMes possuem ação agonista nos receptores de serotonina, especialmente do subtipo 5-HT2A, o que confere os efeitos alucinógenos. Objetivos: Desenvolver e validar métodos para identificação e quantificação de algumas das NPS de maior relevância em amostras de manchas de sangue seco em papel (do inglês dried blood spots, DBS) e comparar a estabilidade entre dois tipos de amostras (DBS e sangue total), em três diferentes temperaturas (ambiente, 4 °C e -20 °C) e períodos de armazenamento. Metodologia: As amostras de DBS e sangue total foram analisadas em cromatógrafo líquido acoplado à espectrômetro de massas com analisador de massas triplo quadrupolar (LC-MS/MS), utilizando os métodos primeiramente desenvolvidos e validados para cada classe de NPS (catinonas sintéticas e NBOMes). Resultados: A técnica de DBS apresentou um aumento significativo da estabilidade das NPS em comparação à técnica convencional de armazenamento de sangue total. Para os NBOMes, observou-se que os compostos eram estáveis no DBS por período de tempo de até 6 meses, nas três temperaturas estudadas, enquanto que no sangue total, os analitos tiveram uma queda maior que 20% da concentração em 15 ou 30 dias em temperatura ambiente e 180 dias para 4 °C. Para as catinonas, em temperatura ambiente, observou-se baixa estabilidade nas duas matrizes. Porém, para armazenamento à 4 °C, observou-se uma queda na concentração inicial maior que 20% com 60 e 90 dias para mefedrona e benzedrona em DBS, respetivamente, contra 45 e 25 dias. Catinonas que possuem grupamento metilenodioxi em sua estrutura, como a butilona e a pentilona, foram mais estáveis, independente da matriz, em comparação àquelas com grupamento alquila no anel aromático, como mefedrona e benzedrona. Conclusão: A técnica de DBS se mostrou vantajosa para análises forenses em comparação à técnica convencional de armazenamento de sangue total. Além de facilitar o armazenamento (por ocupar menos espaço), sua extração se torna mais rápida e facilitada, já que envolve menos etapas, além de tornar possível a identificação dos analitos de interesse por um maior período de tempo, podendo facilmente ser aplicada na rotina laboratorial(AU)

Abstract: Introduction: New psychoactive substances (NPS) or designer drugs is a class of drugs of abuse composed of chemical substances obtained from structural alterations of substances or mixture of existing psychoactive substances (and illicit), in order to mimic and/or maximize their effects, with the advantage of circumventing existing anti-drug legislation. Within the NPS class, the most prominent groups currently are synthetic cathinones, synthetic cannabinoids and NBOMes (phenylethylamines N-2-methoxybenzyl substituted). Synthetic cathinones, sold by the internet as "bath salts", are substances structurally related to cathinone, an alkaloid present in Catha edulis (Khat), with stimulant properties. The class of NBOMes is derived from the hallucinogen class 2C, from the addition of an N-2-methoxybenzyl group to the primary amine. NBOMes have agonist action at serotonin receptors, especially the 5-HT2A subtype, which confers the hallucinogenic effects. Objectives: To develop and validate methods to identify and quantify some of the most relevant NPS in dried blood spots (DBS) samples and to compare the stability between two matrixes (DBS and whole blood), at three different temperatures (ambient, 4 °C and -20 °C) and storage periods. Method: DBS and whole blood samples were analyzed using a liquid chromatography tandem mass spectrometer with a triple quadrupole analyzer (LC-MS/MS), using the developed and validated methods for each class of NPS (synthetic cathinones and NBOMes). Results: The DBS technique showed a significant increase in the NPS stability compared to the conventional whole blood storage technique. For the NBOMes, the compounds were found to be stable in DBS for a time period of up to 6 months, at the three temperatures studied, whereas in whole blood, the analytes had a decreased higher than 20% of the initial concentration in 15 or 30 days at room temperature and 180 days at 4 °C. For the cathinones, at room temperature, low stability was observed in both matrixes. However, for storage at 4 °C, the initial concentration decreased more than 20% at 60 and 90 days for mephedrone and benzedrone in DBS, respectively, against 45 and 25 days. Cathinones having methylenedioxy group in their structure, such as butylone and pentylone, were more stable, independent of the matrix, compared to those with alkyl group on the aromatic ring, such as mephedrone and benzedrone. Conclusion: The DBS technique proved to be advantageous for forensic analysis compared to the conventional storage technique. In addition to occupying less storage space, DBS extraction becomes faster and easier, since it involves fewer steps, besides to make possible to identify the analytes of interest for a longer period of time, which can easily be applied in the laboratory routine(AU)

Phenylethylamines from Browningia candelaris (Cactaceae) / Feniletilaminas de Browningia candelaris (Cactaceae)

The analysis by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS) of the alkaloidal extract of Browningia candelaris (Cactaceae) showed the presence of N-acetyl-3,4-dimethoxyphenylethylamine; N,N-dimethyl-3,4-dimethoxyphenylethylamine; N,N-dimethyl-4-methoxyphenylethylamine; and 4-methoxyamphetamine. The presence of these psychoactive compounds is discussed in terms of their possible ritual use in Andean cultures of Northern Chile.

El análisis por medio de cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-EM) del extracto alcaloidal de Browningia candelaris (Cactaceae) mostró la presencia de N-acetil-3,4-dimetoxifeniletilamina; N,N-dimetil-3,4-dimetoxifeniletilamina; N,N-dimetil-4-metoxifeniletilamina y 4-metoxianfetamina. La presencia de estos compuestos psicoactivos se discute en términos de su posible utilización en ceremonias mágico-religiosas por culturas andinas del norte de Chile.

Concentrações plasmáticas de triptamina, tiramina e feniletilamina em eqüinos sob efeitos de sobrecarga de carboidratos e antiinflamatórios não esteroidais / Plasmatic concentrations of tryptamine, tyramine end phenylethylamine in horses under the effect of carbohydrate overload and non-steroid antinflammatory compounds

As concentrações plasmáticas das aminas triptamina (TRP), tyramina (TYR) e pheniletilamina (PEA) foram determinadas por cromatografia gasosa (CG) de 20 eqüinos sob efeito de sobrecarga por carboidratos (SC). Após 36h da SC os animais foram aleatoriamente divididos em quatro grupos (n=5) e receberam a cada 12h por via iv: solução salina 10mL (GC), ketoprofeno 2,2mg/kg (GK), fenilbutazona 4,4mg/kg (GF) e flunixin meglumine 1,1mg/kg (GFM). As concentrações das aminas TYR e PEA variaram de 0,18 a 164,2mg/L, com diferenças nos tempos avaliados, mas não entre os tratamentos (p<0,01). A concentração plasmática de TRP apresentou diferenças entre os tempos e também entre os tratamentos. O GC diferiu dos demais nos momentos 48h e 60h e as concentrações nos grupos GK e GFM foram menores que nos grupos GF e GC às 72h (P= 0,0012). Conclui-se que nas doses utilizadas os antiinflamatórios não esteroidais avaliados não interferem nas concentrações de TYR e PEA. Entretanto, o ketoprofeno e o flunixin meglumine foram efetivos em diminuir a concentração plasmática de TRP.

The concentrations of the bioactives amines tryptamine (TRP), tyramine (TYR) and phenylethylamine (PEA) were determined by gas chromatography in plasma samples of 20 horses submitted to carbohydrate overload. Thirty hours after the overload, the horses were randomly distributed in four groups (n=5) and were submitted to four IV treatments every 12 hours: 10ml of saline (GC), ketoprofen 2.2mg/kg (GK), phenylbutazone 4.4mg/kg (GF), and flunixin meglumine 1.1mg/kg (GFM). Blood samples were collected at various times after the overload (0-72 h). Plasma TYR and PEA concentrations ranged from 0.18 to 164.2mg/L, and differed significantly with time (p<0.01), but did not differ in the treatments. Plasma concentrations of TRP differed between times and treatments. The GC was significantly major than other treatments at 48h and 60h after the overload, and the plasma concentration of TRP in groups GK and GFM was significantly lower than in groups GF and GC at 72 h (p=0.0012). We concluded that the anti-inflammatory drugs evaluated do not interfere in the plasma concentration of TYP and PEA. For TRP, ketoprofen and flunixin meglumine was effective to reduce de plasmatic concentration of this amine.

Nuevos antiarrítmicos en lafibrilación auricular / New antiarrhythmic agents in atrial fibrillation

The convenience to count with a safe and effective pharmacological wealth for atrial fibrillation treatment had conduced, in a way, to a deep depuration of the vast array of antiarrhythmic drugs, keeping only a very restricted number of compounds with a widely proved anti-atrial activity. On the other hand, it had lead to the discovery of the pathophysiological concepts that point to novel therapeutic targets. Within these objectives is that new antiarrhythmic drugs with preferential, even selective, activity on myocardial atrium ion channels had been developed. Among these new antiarrhythmics, dofetilide, and AVE0118, are taken into account. In addition, new possibilities are opened based on the knowledge of the cardioprotective-antiarrhythmic qualities of the opioidergic system.

O uso da venlafaxina no tratamento do transtorno do deficit de atencao e hiperatividade / The use of venlafaxine in attention deficit disorder

Uma revisao acerca do uso da venlafaxina no transtorno do deficit de atencao e hiperatividade revela poucos estudos, todos utilizando amostras pequenas. Observou-se eficacia clinica em todos estudos...

Estudios sobre la Feniltilamina en Orina y el Acido Fenilacético en sangue y orina en pacientes depresivos / Phenylethylamine in urine and phenylacetic acid in blood and urine in depressive patients

Se pasa una revista general a valores de fenetilamina(FEA) en ratas y sus cambios luego de la administración de diferentes drogas. Se presentam valores de FEA urinaria en 4710 pacientes psiquiátricos con sintomatología depresiva. Se comparam valores de FEA en orina de 24h con los de su metabolito, el ácido fenilacético total (AFAT) en orina de 24h. Se hace un estudio comparativo de valores urinarios y plasmáticos de AFAT concluyéndose que en pacientes depresivos se encuentra una disminuición de AFAT en urina y que la determinación de AFAT en plasma bien puede usarse como marcador de enfermedades depresivas

Serotonina plaquetaria en enfermos depresivos endógenos y controles normales / Platelet serotonin in endogenous depressive patients and normal controls

Se determinó la concentración de serotonina plaquetaria (5-Hidroxitriptamina Plaquetaria 5HT-P) en 31 pacientes depresivos y en 29 casos control. Los pacientes depresivos fueran seleccionados de acuerdo al diagnóstico clínico y a los valores de feniletilamina (FEA) y ácido fenilacético total (AFAT) urinarios ya que consideramos que la disminución de estos dos parámetros es casi una constante en los procesos depresivos. De los 29 controles estudiados se seleccionaron 23 en los que los valores de FEA y AFAT fueron normales de acuerdo con publicaciones anteriores. El rango de valores de 5HT-P en este grupo fue de 527-900 ng/10 9 plaquetas plaq. con una media de 698+/-125 ng/10 9 plaq. En cuanto a los pacientes depresivos, se observaron 2 perfiles distintos. 19 presentaron valores de 5HT-P menores a los de los controles: 157-513 ng/10 9 plaq. con una media de 407+/-102, mientras que en los 13 restantes los valores fueron similares a los del grupo control: 552-780 ng/10 9 plaq. Considerando a las plaquetas como modelo de terminaciones nerviosas, cabe esperar, en ambos grupos una respuesta diferente al tratamiento con antidepresivos inhibidores de la recaptación de la serotonina, tema de estudio que hemos iniciado.

Marcadores biologicos en Psiquiatria / Biological markers in Psychiatry

In order to determine wheter psycopathology is associated with charactheristic neurochemical changes of psychiatric patients, Noradrenergic; Dopaminergic and Serotoninergic urine compounds were quantified in 50 patients (32 females and 18 males) between 20 and 60 years old. They were classified in four groups, according to DSM-IV criteria; in MAJOR DEPRESSION (MD) 30 cases, OBSESSIVE COMPULSIVE DISEASE (OCD) 9 cases, BIPOLAR DEPRESSION (BD)4 cases and SCHIZOPHRENIA (SZ) 7 cases. The following Amine metabolites were determined in 24 hours urine samples Phenylethilamine (PEA); 3-Metho-4-Hidroxy Phenilglycol (MHPG); 5-Hidroxy-indol acetic acid (5HIAA) Homovanilic acid (HVM); Bufotenine (BU); Ometil Bufotenine (OMBU) and 3-5 Metoxy-NN-Dymethyltryptamine (MNNDMT). The results showed a dicrease of Pea levels in 43 per cent of DM; 33 per cent of OCD; 25 per cent of BP and 42 per cent SZ. MOPEG levels were disminished in 53 per cent of DM; 66 per cent of OCD; 25 per cent of BP and 85 per cent of SZ. There was an increase of HVM levels in 10 per cent of DM; 11 per cent of OCD and 25 per cent of BP. There was a dicrease of 5-HIAA levels in 10 per cent of DM while it was increased in 33 per cent and 14 per cent of SZ, BU, OMBU and NNDMT were positive in 71 per cent of SZ; 46 per cent of DM; 55 per cent of OCD and 50 per cent of BP. Our findings are consistent with the hypothesis that PEA; MHPG; 5-HIAA and HVM compounds could be "State markers"of DM and HVM of BP and SZ patients. There is further evidence to support a close interrelationship between the three systems and the urinary excretion of methylates compounds specially in SZ and in DM, OCD and BP patients.

Método rápido y sensible para detectar aminas primarias y secundarias no fenólicas en orina humana / A fast and sensitive method to detect primary and secondary non-phenolic amines in human urine

En este trabajo se desarrolló una metodología cromatográfica rápida y precisa para buscar aminas primarias y secundarias O-metiladas, típicas de ciertos desórdenes mentales, en muestras de orina humanas de 24 horas. La extracción de la orina fue llevada a cabo bajo condiciones alcalinas para evitar la interferencia de catecolaminas y ácidos urinarios. Después de la extracción alcalina, a cada muestra se la hizo reaccionar con cloruro de dansilo en acetonitrilo en presencia de bicarbonato de sodio en exceso, para formar las correspondientes dansilamidas. Las fenetilamidas y las indolalquilaminas O-metiladas fueron visualizadas en placas de fase reversa de alta resolución (HP-TLC), por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y por cromatografía gas-líquido (CGL) y, además, fueron identificadas por cromatografía gas-líquido acoplada con espectrometría de masas (CGL-EM). Este método es lo suficientemente sensible para estos metabolitos en muestras de orina y, por lo tanto, resulta útil para investigaciones biomédicas y clínicas de aminas primarias y secundarias no fenólicas en orina

Effects of phenylethylamine on rat locomotor behavior and avoidance learning

1. The effects of ß-phenylethylamine (PEA) alone and in association with caroxazone, a potent inhibitor of monoamine oxidase B (MAO B), on the activity and long-term memory in the wheel-shaped activity monitor and on fixed-interval two-way avoidance acquisition were studied in rats. In a separate study, we determined the effects of PEA and of d-amphetamine on the variable-internal two-way avoidance acquisition. 2. The action of PEA was markedly different from that of aplhetamine in several aspects. The stimulating effects of PEA in the wheel-shaped activity monitor were of a more subtle nature than those of amphetamine and in the variable-interval two-way avoidance acquisition PEA had no effect, while amphetamine improved performance. 3. PEA did not induce an increase in path-choice stereotypy, but caroxazone did. The absence of any caroxazone-session interaction effects on the path interation frequency suggested that there were no long-term memory effects. 4. In the fixed-interval two-way avoidance acquisition experiments, PEA increased the avoidance responses of tats while caroxazone had no effect. The association of the two drugs did not potenciate either

Revisión y actualización de la sensibilidad diagnóstica del test de la supresión de la dexametasona y de la determinación de feniletilamina y ácido 3-metoxi-4-hidroxi-feniletilglicol urinários en el diagnóstico de la depresión endógena / Review and updating of the diagnostic sensibility of the dexamethazone suppression test and urinary determination of phenylethylamine and 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol in the diagnosis of endogenous depression

Se estudian sesenta pacientes depresivos endógenos (DSM III: 296.2x, 3x y 296.5x) con las siguientes técnicas diagnósticas: DST (Standarization de Carroll), la cuantificación (u) de FEA (Técnica de Spatz) y la cuantificación (u) de MOPEG (Técnica de Bigelow). Se obtienen siete subgrupos, según resulten positivos por lo menos en una de las determinaciones. Se observa una gran sensibilidad al utilizar las tres técnicas, pues sólo un 5% de los pacientes no es detectado. Se discute el camino crítico que conduce a estas conclusiones

Efectos de la feniletilamina en la actividad refleja de la medula espinal de la rana. / Effect of phenylethylamines on spinal cord reflex activity of the frog

Recientemente se ha presentado interes por las acciones fisiologicas y farmacologicas de la feniletilamina (FEA), y varios autores han postulado que esta monoamina podria actuar como neuromodulador en el sistema nervioso central. Este trabajo tiene como finalidad tratar de estudiar las acciones de la FEA en la actividad refleja de la medula espinal aislada de la rana. Esta preparacion es un modelo generalmente empleado para identificar acciones de farmacos en sinapsis centrales.Los resultados muestran que la FEA produce acciones principalmente depresoras en la actividad refleja espinal, y que estas acciones pueden ser explicadas tentativamente basandose en una accion liberadora o potenciadora de otras monoaminas biogenas

Terapeutica especifica en la enfermedad de Parkinson: ciertos aspectos diagnosticos y su manejo / Especific therapeutic in Parkinson's disease: diagnostic aspects and management

Se hace un analisis clinico basado en 100 pacientes con enfermedad de Parkinson que asisten a la consulta externa del Departamento de Neurologia del Hospital General (Londres). Algunas formas poco frecuentes son analizadas: 11 pacientes con sintomas sensitivos primarios y 5 pacientes con caidas inexplicables. Se hace una revision farmacologica y terapeutica de las principales drogas empleadas actualmente en el manejo de la enfermedad de Parkinson y se analiza la terapeutica con Levodopa a la luz de 10 anos de experiencia