Efecto de Trichinella spiralis y de Trichinella patagoniensis n.sp. sobre la desialización / Effect of Trichinella spiralis and Trichinella patagoniensis n.sp. on desialization

El ácido siálico tiene importantes funciones biológicas, muchas de las cuales determinan su participación en la respuesta inmune. El objetivo del trabajo fue comparar el efecto de Trichinella spiralis y Trichinella patagoniensis n.sp. sobre la desialización eritrocitaria. Se trabajó con 10 concentrados de larvas musculares de T. spiralis y 10 de T. patagoniensis de la misma concentración larval. Se realizó el tratamiento incubando el sedimento de eritrocitos frescos con igual volumen de concentrado larval (37 ºC), tomando muestra a los 30, 60 y 90 minutos. Los controles fueron incubados de la misma forma con solución salina. Se aplicó el método de Titulación de la Agregación por Polibrene y se determinó el CexpST. Los resultados mostraron que el valor medio del CexpST en los eritrocitos tratados con T. spiralis fue significativamente menor que en los glóbulos tratados con T. patagoniensis, para todos los tiempos estudiados. El aumento del tiempo de tratamiento también disminuyó significativamente el valor medio del CexpST para las dos especies. Éste fue significativamente menor a los 90 minutos de incubación que a los 60 minutos y éstos a su vez menores que a los 30 minutos. Se concluye que T. spiralis provocó mayor desialización eritrocitaria que T. patagoniensis en las condiciones experimentales estudiadas.

Sialic acid has important biological functions, many of which determine its participation in the immune response. The objective of this paper was to compare the effect of Trichinella spiralis and Trichinella patagoniensis n.sp. on erythrocyte desialization. Work was performed on 10 larval concentrates of muscle larvae of T. spiralis and 10 of T. patagoniensis of the same larval concentration. The treatment was carried out incubating the sediment of fresh erythrocytes with an equal volume of larval concentrate (37 °C), taking samples at 30, 60 and 90 minutes. The controls were incubated in the same way treated with saline solution. Titration of aggregation by Polybrene Method was applied and the CexpST was determined. The results showed that the mean value of CexpST in erythrocytes with T. spiralis was significantly lower than in the globules treated with T. patagoniensis, for all the studied times. The increase in treatment time also significantly decreased the mean value of CexpST for the two species, being significantly lower at 90 minutes of incubation than at 60 minutes and these in turn lower than at 30 minutes. It is concluded that T. spiralis caused greater erythrocyte desialization than T. patagoniensis in the experimental conditions studied.

O ácido siálico tem importantes funções biológicas, muitas das quais determinam sua participação na resposta imune. O objetivo foi comparar o efeito de Trichinella spiralis e Trichinella patagoniensis n.sp. sobre a dessialização eritrocitária. Trabalhou-se com 10 concentrados de larvas musculares de T. spiralis e 10 de T. patagoniensis da mesma concentração larval. Realizou-se o tratamento incubando o sedimento de eritrócitos frescos com igual volume de concentrado larval (37 ºC), tomando amostra aos 30, 60 e 90 minutos. Os controles foram incubados da mesma forma com solução salina. Foi aplicado o método de Titulação da Agregação por Polibrene e se determinouo CexpST. Os resultados mostraram que o valor médio do CexpST nos eritrócitos Tratados com T. spiralis foi significativamente menor que nos glóbulos tratados com T. patagoniensis, para todos os tempos estudados. O aumento do tempo de tratamento também diminuiu significativamente o valor médio do CexpST para as duas espécies, sendo significativamente menor aos 90 minutos de incubação que aos 60 minutos e eles por sua vez menores que aos 30 minutos. Conclui-se que T. spiralis provocou maior dessialização eritrocitária que T. patagoniensis nas condições experimentais estudadas.

Desialización eritrocitaria por larvas recién nacidas de Trichinella spiralis incubadas in vitro / Erythrocyte desialylation by Trichinella spiralis newborn larvae incubated in vitro / Dessialização eritrocitária por larvas recém-nascidas da Trichinella spiralis incubadas in vitro

Trichinella spiralis es la especie que causa la mayoría de los casos de infección humana en todo el mundo. Se comunicó que el contacto de los eritrocitos con concentrados de larvas recién nacidas (LRN) no viables provoca la disminución de ácido siálico globular. El objetivo del trabajo fue estudiar la desialización eritrocitaria producida por LRN mantenidas en cultivo. Se realizaron 2 experiencias en las que se incubaron 80 larvas con 100 μL de eritrocitos en 1 mL de medio RPMI suplementado durante 1, 2, 3, 4 y 24 horas a 37 ºC. Se aplicó el Método de Titulación de la Agregación por Polibrene y se calculó Título, Score Total y CexpCASP en los eritrocitos control e incubados con LRN. Los resultados mostraron que en la primera y segunda hora la captación de ácido siálico fue moderada. A las 3 horas el título disminuyó significativamente en relación al del control y el CexpCASP (0,14±0,014) indicó la pérdida casi total de ácido siálico globular. Ambos valores se mantuvieron a las 4 y 24 horas. Al comparar con estudios similares realizados con larvas infectantes, se sugiere que, in vivo, las LRN captarían más rápidamente el ácido siálico que las larvas musculares.

Trichinella spiralis is the species that causes most human cases of infection in the world. It was reported that contact of erythrocytes with concentrates of non-viable newborn larvae (NL) causes the decrease in erythrocyte sialic acid. The objective was to study erythrocyte desialylation produced by NL maintained in culture. Two experiments were conducted, in which 80 larvae were incubated with 100 μL of erythrocytes in 1 mL of supplemented RPMI medium for 1, 2, 3, 4 and 24 hours at 37 ºC. Titration of Aggregation by Polybrene Method was used and Title, Total Score and CexpCASP were calculated in Control erythrocytes and erythrocytes incubated with NL. The results showed that the sialic acid capture was moderated in the first and second hour. At three hours of incubation, the Title decreased significantly in relation to Control and CexpCASP (0.14±0.014) indicated almost total loss of erythrocyte sialic acid. Both values were maintained at 4 and 24 hours. When compared to similar studies conducted with infective larvae, it is suggested that, in vivo, NL would capture sialic acid faster than muscle larvae.

Trichinella spiralis é a espécie que causa a maioria dos casos de infecção humana em todo o mundo. Comunicou-se que o contato dos eritrócitos com concentrados de larvas recém-nascidas (LRN), não viáveis, provoca a diminuição de ácido siálico globular. O objetivo do trabalho foi estudar a dessialização eritrocitária produzida por LRN mantidas em cultivo. Foram realizadas duas experiências nas quais se incubaram 80 larvas com 100 μL de eritrócitos em 1 mL de meio RPMI suplementado durante 1, 2, 3, 4 e 24 horas a 37 °C. Foi aplicado o Método de Titulação da Agregação por Polibreno e se calculou Título, Pontuação Total (ST) e CexpCASP nos eritrócitos. Os resultados mostraram que na primeira e segunda hora a captação de ácido siálico foi moderada. Às 3 horas o título diminuiu significativamente em relação ao do controle e o CexpCASP (0,14±0,014) indicou a perda quase total de ácido siálico globular. Ambos os valores se mantiveram às 4 e 24 horas. Ao comparar com estudos similares realizados com larvas infetantes, sugere-se que, in vivo, as LRN captariam mais rapidamente o ácido siálico que as larvas musculares.

Detection of bovine viral diarrhea virus by amplification on polycation-treated cells followed by enzyme immunoassay / Detección del virus de la diarrea viral bovina por amplificación sobre células tratadas con policationes seguida de enzimoinmunoensayo

A bovine viral diarrhea virus (BVDV) amplification method combined with an enzyme immunoassay was developed to detect BVDV antigens in seropositive cattle. Reconstitution assays conducted by adding decreasing amounts of BVDV (Singer strain) to Madin-Darby bovine kidney (MDBK) cells showed that the sensitivity threshold of the combined assay was 10-7 TCID50. BVDV amplification was carried out in polycation (DEAE-Dextran and polybrene)- treated MDBK cells. Treated cells were able to replicate both ether-treated virus and neutralizing antibody-coated virus. Ammonium chloride decreased virus replication in polycation-treated cells, suggesting viral penetration by endocytosis. BVDV detection was tested in leukocytes from 104 seropositive cattle from 2 unvaccinated commercial closed dairy herds with high seroprevalence. Lysates and co-cultures of peripheral blood leukocytes (PBL) were tested, directly or after up to 6 blind passages in normal or polycation-treated cells. BVDV was detected in 10/104 cattle after only one co-culture of PBL in treated cells. No virus was detected in whole blood or plasma samples. BVDV positive and negative cattle were retested three times, achieving consistent results. The finding of immune carriers supports the possibility that these animals may constitute an epidemiological risk.

Se desarrolló un método de detección de antígenos del virus de la diarrea viral bovina (BVDV) combinando amplificación viral con enzimoinmunoensayo. El método combinado presentó una sensibilidad de 10-7 TCID50 en ensayos con diluciones decrecientes de BVDV cepa Singer sobre la línea celular MDBK. La amplificación del título viral se efectuó sobre células MDBK tratadas con policationes Estas células replicaron tanto el BVDV tratado con éter como el unido a anticuerpos. La replicación viral en las células tratadas disminuyó ante la presencia de cloruro de amonio, lo que sugiere la penetración viral por endocitosis. El BVDV se determinó en leucocitos de 104 bovinos seropositivos de dos rodeos en producción, cerrados y con alta seroprevalencia. Los leucocitos de sangre periférica (LSP) fueron lisados y analizados directamente o luego de hasta 6 pasajes ciegos sobre células normales o tratadas con policationes. El BVDV se detectó en 10 de los 104 animales después de solamente un cultivo de LSP en células tratadas. No se pudo detectar presencia viral en las muestras de sangre o plasma. Los estudios se repitieron tres veces en animales BVDV positivos y negativos, con resultados consistentes. El hallazgo de bovinos seropositivos portadores del virus indica la posibilidad de que estos animales puedan significar un riesgo epidemiológico.

Diagnóstico laboratorial da anemia hemolítica auto-imune: características do teste manual direto do Polybrene / Laboratory diagnosis of auto-immune hemolytic anemia: characteristics of the manual direct test of Polybrene

O teste manual direto do Polybreneâ (TDP) e o teste de Coombs direto (TCD) foram utilizados para a detecçäo de IgG na superfície de hemácias de pacientes com diagnóstico clínico e laboratorial de anemia hemolítica auto-imune (AHAI). Objetivo. Comparar a sensibilidade e especificidade do TPD e do TCD no diagnóstico da AHAI. Método. Foram estudados 18 pacientes com diagnóstico clínico-laboratorial de AHAI. Como indivíduos controles, foram testados 20 doadores de sangue assintomáticos e 20 pacientes com anemia falciforme. Resultados. O TCD foi positivo em 14 pacientes e negativo em quatro indivíduos, enquanto o TDP foi positivo em 17 pacientes e negativo em um indivíduo que apresentava TCD positivo devido a fixaçäo de complemento (C3d) nas hemácias. Todos os eluatos positivos realizados com a técnica de diclorometano revelaram anticorpos quentes com especificidade "anti-Rh". A sensibilidade do TDP (94 por cento) para detectar fixaçäo de IgG in vivo foi significantemente maior (p<0,05) que a do TCD (78 por cento), enquanto os dois testes apresentaram a mesma especificidade (100 por cento). Conclusäo. O presente estudo permite concluir que, além de apresentar maior sensibilidade que o TCD, o TDP é um método rápido e de baixo custo, sendo, dessa forma, um teste auxiliar útil no diagnóstico de AHAI, especialmente nos pacientes com TCD negativo.

Estudio comparativo de soluciones de baja fuerza iónica, albúmina bovina 22% y prueba de Coombs indirecta como medio de detección de anticuerpos irregulares / Comparative study of ionic low force solutions, 22% bovino albumin, and Coombs indirect test as mens of irregular antybodies detections

Con el objeto de comparar dos medios de baja fuerza iónica (LISS y LIM-P), albúmina bovina 22% (ALB) y la prueba de Coombs indirecta (PCI) en la detección de anticuerpos irregulares, se estudiaron prespectivamente 134 donantes de sangre y 11 pacientes con diversas patologías. De los 134 donantes, 6 tuvieron anticuerpos detectables por alguna de las técnicas. Del análisis estadístico en conjunto de donantes y pacientes con anticuerpos, se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los medios (P < 0,005). Para conocer si era conveniente completar las incubaciones con PCI se efectuó una comparación entre los tres medios y a éstos agregada la PCI. Se observó que no había diferencias al efectuar la PCI (P> 0,05). Estos resultados indicam que la sensibilidad no aumenta al efectuar una PCI. Esta afirmación es más válida para el medio LIM-P (P > 0,9). Cuando se compararon los métodos de ALB y LISS no se observaron diferencias entre ambos (P > 0,10); lo mismo ocurrió con ALB-PCI vs LISS-PCI (P > 0,5). En cuanto al medio LIM-P se observaron diferencias altamente significativas en detectar positividad con respecto a los medios ALB y LISS (sin PCI: P < 0,005, y PCI: P < 0,05). Concluimos que el medio LIMP-P es recomendable para la detección de anticuerpos irregulares, aunque se requieren más estudios para confirmarlo

Reacción hemolítica transfusional por anticuerpo anti-JKa demostrado sólo por el método manual de baja concentración iónica y agregado de polibrene (LIM-P) / Hemolytic transfusion reaction by anti-JKa antibody only demonstrated by the manual method of low ionic concentration and adding of polybrene

Se comunica el caso de una mujer multigesta que presentó grave reacción hemolítica transfusional por anticuerpo anti-JKa no identificado por las pruebas convencionales de compatibilidad y sólo detectado en el período inmediato post-reaccional por el método manual de baja concentración iónica y agregado de polibrene