Protección del ácido clorogénico frente a lesiones inducidas por venzo(a)pireno en Saccharomyces cerevisiae / Protection of chlorogenic acid against benzo(a)pyrene-induced lesions in Saccharomyces cerevisiae / Proteção do ácido clorogênico contra lesões induzidas por benzo(a)pireno em Saccharomyces cerevisiae

El objetivo del presente estudio fue analizar el efecto del ácido clorogénico, uno de los compuestos polifenólicos con mayor concentración en la infusión de Ilex paraguariensis, sobre el daño celular y molecular inducido por el benzo(a)pireno. La infusión de Ilex paraguariensis ("mate") es bebida por la mayoría de los habitantes de Argentina, Paraguay, sur de Brasil y Uruguay. La levadura Saccharomyces cerevisiae (cepas SC7K lys2-3; SX46A y SX46Arad14() se utilizó como modelo eucariota. Las células en crecimiento exponencial se expusieron a concentraciones crecientes de benzo(a)pireno y a tratamientos combinados con una concentración de 250 ng/mL de benzo(a)pireno y ácido clorogénico a una concentración igual a la encontrada en la infusión de yerba mate. Luego de los tratamientos se determinaron fracciones de sobrevida, frecuencia mutagénica y roturas de doble cadena de ADN así como la modulación en la expresión de la proteína Rad14 a través de un análisis de Western Blot. Se observó un aumento significativo en las fracciones de sobrevida así como una disminución en la frecuencia mutagénica después de la exposición combinada con benzo(a)pireno y ácido clorogénico en comparación con los tratamientos con benzo(a)pireno como único agente. En la cepa mutante deficiente en la proteína Rad14 se observó un aumento significativo en la sensibilidad a benzo(a)pireno en comparación con la cepa SC7K lys2-3. En los tratamientos combinados de benzo(a)pireno y ácido clorogénico se observó una importante disminución de la letalidad. Con respecto a la determinación de roturas de doble cadena de ADN no se observó fraccionamiento cromosómico a la concentración de benzo(a)pireno utilizada en los experimentos. Los análisis de Western Blot mostraron un aumento en la expresión de la proteína Rad14 en las muestras tratadas con benzo(a)pireno como único agente en comparación con la muestra control. Adicionalmente se observó una disminución en la expresión de la proteína cuando en los tratamientos se utilizaron benzo(a)pireno y ácido clorogénico combinados. Los resultados indican que el ácido clorogénico disminuye significativamente la actividad mutagénica producida por el benzo(a)pireno, la cual no se encuentra relacionada con un incremento en la remoción de las lesiones inducidas por el sistema de reparación por escisión de nucleótidos.

The aim of this study was to analyze the effect of chlorogenic acid, a polyphenolic compound found at high concentrations in Ilex paraguariensis infusions, on cellular and molecular damage induced by benzo(a)pyrene. Ilex paraguariensis infusions ("mate") are consumed by most of the population in Argentina, Paraguay, southern Brazil and Uruguay. Saccharomyces cerevisiae yeast (SC7K lys2-3; SX46A and SX46Arad14( strains) were used as eukaryotic model organisms. Cells in an exponential growth phase were exposed to increasing concentrations of benzo(a)pyrene, as well as combined treatments of benzo(a)pyrene at a concentration of 250 ng/mL and chlorogenic acid at a concentration matching that which is commonly found in mate. Determinations of surviving fraction, mutagenic frequency and double strand DNA breaks induction were performed, along with the assessment of the modulation of the expression of protein Rad14 by Western Blot. A significant increase of surviving fractions and a decrease in mutagenic frequency were observed after exposure to benzo(a)pyrene plus chlorogenic acid, contrary to benzo(a)pyrene alone. A substantial increase in sensitivity to benzo(a)pyrene was observed for the Rad14 protein-deficient mutating strain when compared to the SC7K lys2-3 strain. An important decrease in lethality was observed when combined benzo(a)pyrene and chlorogenic acid treatments were applied. As for the determination of DSBs, no chromosomic fractionation was observed at the benzo(a)pyrene concentration tested in the experiments. Western Blot analysis showed an increase in the expression of protein Rad14 for samples treated with benzo(a)pyrene as a single agent when compared against the control sample. Additionally, the expression of this protein was observed to diminish when combined treatments with benzo(a)pyrene and chlorogenic acid were used. Results obtained indicate that chlorogenic acid significantly decreases the mutagenic activity of benzo(a)pyrene, which is not related to an increase in the removal of lesions induced by nucleotide excision repair system.

O objetivo deste estudo foi analisar o efeito do ácido clorogênico, um dos compostos polifenólicos com maior concentração na infusão de Ilex paraguariensis, sobre o dano celular e molecular induzido pelo benzopireno. A infusão de Ilex paraguariensis ("mate") é consumida pela maioria dos habitantes da Argentina, Paraguai, sul do Brasil e Uruguai. A levedura Saccharomyces cerevisiae (cepas SC7K lys2-3; SX46A e SX46Arad14() foi utilizada como modelo eucariótico. Células em crescimento exponencial foram expostas a concentrações crescentes de benzopireno e tratamentos combinados foram realizados com uma concentração de 250 ng/mL de benzo(a)pireno e ácido clorogênico, igual à encontrada na infusão de erva-mate. Após os tratamentos, foram determinadas as frações de sobrevivência, frequência mutagênica e quebras de fita dupla do DNA, bem como a modulação na expressão da proteína Rad14 por meio de análise de Western Blot. Um aumento significativo nas frações de sobrevivência, bem como uma diminuição na frequência mutagênica foram observados após a exposição combinada de benzo(a)pireno e ácido clorogênico em comparação com tratamentos de agente único de benzo(a)pireno. Um aumento significativo na sensibilidade ao benzo(a)pireno foi observado na cepa mutante deficiente em proteína Rad14 em comparação com a cepa SC7K lys2-3. Nos tratamentos combinados de benzo(a)pireno e ácido clorogênico, observou-se uma diminuição significativa na letalidade. Com relação à determinação das quebras de fita dupla de DNA, não foi observado fracionamento cromossômico na concentração de benzo(a)pireno utilizada nos experimentos. A partir da análise de Western Blot, observou-se um aumento na expressão da proteína Rad14 nas amostras tratadas com benzo(a)pireno como agente único em relação à amostra controle. Além disso, uma diminuição na expressão da proteína foi observada quando combinados de benzo(a)pireno e ácido clorogênico foram usados ​​nos tratamentos. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que o ácido clorogênico diminui significativamente a atividade mutagênica produzida pelo benzo(a)pireno, a qual não está relacionada a um aumento na remoção de lesões induzidas pelo sistema de reparo por excisão de nucleotídeos.

Avaliação da presença de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos em chocolates: exposição ao consumo e implicações à saúde / Evaluation of the presence of polycyclic aromatic hydrocarbons in chocolates: exposure to consumption and health implications

Introdução - Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) são compostos que apresentam ação potencialmente carcinogênica e mutogênica, que geram risco à saúde humana. Esses contaminantes são formados a partir da combustão incompleta de matéria orgânica, podendo ocorrer a formação durante o processamento dos alimentos em âmbito industrial (secagem, torra, pré-cozimento) e doméstico (fritar, assar e grelhar) pelo emprego de altas temperaturas. Para a produção do chocolate e outros produtos derivados do cacau, etapas como a secagem, torra e conchagem, são processos que utilizam altas temperaturas e essenciais para a produção de chocolates. Não existem estudos avaliando a presença e a exposição dietética por HPAs em chocolates no Brasil. Objetivo - Otimizar e validar a metodologia de extração e quantificação de 4 HPAs (benzo[a]antraceno (BaA), criseno (Cri), benzo[b]fluoranteno (BbF) e benzo[a]pireno (BaP)) em chocolates, quantificar sua presença em amostras de chocolates comerciais e estimar a exposição dietética aos HPAs a partir do consumo de chocolate. Métodos - As amostras de chocolate (ao leite, branco e amargo com porcentagens de cacau de 40%, 53%, 55%, 60% e 70%) foram obtidas no comércio da cidade de São Paulo. Foi realizada a otimização e validação da metodologia pelos parâmetros de linearidade, seletividade, limite de detecção, limite de quantificação, recuperação e repetibilidade. As amostras foram submetidas a extração líquido-líquido, extração em fase sólida e quantificadas por cromatógrafo líquido de alta eficiência com detector de fluorescência. A estimativa de exposição dietética (DEs) para benzo[a]pireno foi avaliada para três categorias: 1) Sexo (feminino e masculino); 2) Grupos etários: adolescentes (14 a 18 anos), adultos (19 a 59 anos) e idosos (>= 60 anos); 3) Local de residência (urbana e rural). Resultados - O método obteve faixa de linearidade entre 0,50 e 5,00 µg.kg-1 para os quatro HPAs. Com relação à seletividade, houve interferência da matriz apenas para o BaP. O método também mostrou acurácia, com recuperações médias variando entre 95,25 a 108,27% e repetibilidade mostrando valores entre 0,14 e 7,25%. Benzo[a]pireno foi encontrado em todos os chocolates, variando entre 1,58 a 4,34 µg.kg-1 de gordura. As amostras de chocolate com 53-60% cacau e chocolate 70% cacau apresentaram as maiores taxas de contaminação para BaP; já as amostras de chocolate 40% cacau e chocolate ao leite apresentaram menor contaminação. Quanto a exposição dietética, as mulheres (por gênero) e os adolescentes (por idade) apresentaram maiores DEs para BaP pelo consumo de chocolate, principalmente para o chocolate 70% cacau. Os resultados apresentaram baixa contaminação por HPAs nos chocolates analisados, no entanto, o consumo aumentado por diferentes faixas etárias pode contribuir para a DEs ao BaP. Conclusões - A metodologia padronizada foi considerada seletiva e sensível, garantindo a eficiência do ensaio. As amostras analisadas apresentaram resultados abaixo dos limites estabelecidos pelo Regulamento da Comunidade Européia No. 835/2011 para o BaP e para a soma dos 4 HPAs. Frente aos grupos analisados (sexo, idade e local de residência), os chocolates 70% cacau contribuíram para a maior exposição dietética à BaP. A presença dos quatro HPAs prioritários nos chocolates analisados demonstrou a importância de programas de monitoramento da cadeia produtiva em produtos de cacau (massa de cacau, manteiga de cacau e cacau em pó) e ingredientes adicionados (açúcar e leite em pó).

Introduction - Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are compounds that have a potentially carcinogenic and mutogenic action, which generate risk to human health. These contaminants are formed from the incomplete combustion of organic matter, which can occur during industrial (drying, roasting, pre-cooking) and domestic (frying, roasting and grilling) processing of food by the use of high temperatures. For the production of chocolate and other products derived from cocoa, steps such as drying, roasting and conching are processes that use high temperatures and are essential for the production of chocolates. There are no studies evaluating the presence and dietary exposure to PAHs in chocolates in Brazil. Objective - To optimize and validate the methodology for the extraction and quantification of 4 PAHs (benzo[a]anthracene (BaA), chrysene (Chr), benzo[b]fluoranthene (BbF) and benzo[a]pyrene (BaP)) in chocolates, quantify the presence in commercial chocolate samples and estimate dietary exposure to PAHs from the consumption of chocolate. Methods - Chocolate samples (milk, white and dark with cocoa percentages of 40%, 53%, 55%, 60% and 70%) were obtained from commercial stores in the city of São Paulo. The methodology was optimized and validated by the parameters of linearity, selectivity, limit of detection, limit of quantification, recovery and repeatability. The samples were subjected to liquid-liquid extraction, solid-phase extraction and quantified by a High Performance Liquid Chromatograph with fluorescence detector. The dietary exposure estimate (DEs) for benzo[a]pyrene was assessed for three categories: 1) Gender (female and male); 2) Age groups: adolescents (14 to 18 years), adults (19 to 59 years) and elderly (>= 60 years); 3) Place of residence (urban and rural). Results - The method obtained a linearity range between 0.50 and 5.00 µg.kg-1 for the four PAHs. Regarding selectivity, there was interference from the matrix only for BaP. The method also showed accuracy, with average recoveries ranging from 95.25 to 108.27% and repeatability showing values between 0.14 and 7.25%. Benzo[a]pyrene was found in all chocolates, ranging from 1.58 to 4.34 µg.kg-1 of fat. Chocolate samples with 53-60% cocoa and chocolate 70% cocoa showed the high contamination for BaP; the 40% cocoa and milk chocolate samples showed low contamination. As for dietary exposure, women (by gender) and adolescents (by age) had higher DEs for BaP due to chocolate consumption, especially for 70% cocoa chocolate. The results showed low contamination by PAHs in the analyzed chocolates, however, the increased consumption by different age groups can contribute to DEs to BaP. Conclusions - The standardized methodology was considered selective and sensitive, ensuring the efficiency of the test. The analyzed samples showed results below the limits established by the European Community Regulation No. 835/2011 for the BaP and for the sum of the 4 PAHs. In view of the groups analyzed (gender, age and place of residence), chocolates 70% cocoa contributed to the greater dietary exposure to BaP. The presence of the four priority PAHs in the analyzed chocolates demonstrated the importance of programs to monitor the production chain in cocoa products (cocoa mass, cocoa butter and cocoa powder) and ingredients used in chocolate formulation (sugar and powdered milk).

Polycyclic aromatic hydrocarbons degradation by marine-derived basidiomycetes: optimization of the degradation process

ABSTRACT Pyrene and benzo[a]pyrene (BaP) are high molecular weight polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) recalcitrant to microbial attack. Although studies related to the microbial degradation of PAHs have been carried out in the last decades, little is known about degradation of these environmental pollutants by fungi from marine origin. Therefore, this study aimed to select one PAHs degrader among three marine-derived basidiomycete fungi and to study its pyrene detoxification/degradation. Marasmiellus sp. CBMAI 1062 showed higher levels of pyrene and BaP degradation and was subjected to studies related to pyrene degradation optimization using experimental design, acute toxicity, organic carbon removal (TOC), and metabolite evaluation. The experimental design resulted in an efficient pyrene degradation, reducing the experiment time while the PAH concentration applied in the assays was increased. The selected fungus was able to degrade almost 100% of pyrene (0.08 mg mL-1) after 48 h of incubation under saline condition, without generating toxic compounds and with a TOC reduction of 17%. Intermediate metabolites of pyrene degradation were identified, suggesting that the fungus degraded the compound via the cytochrome P450 system and epoxide hydrolases. These results highlight the relevance of marine-derived fungi in the field of PAH bioremediation, adding value to the blue biotechnology.

Anaerobic biodegradation of benzo(a)pyrene by a novel Cellulosimicrobium cellulans CWS2 isolated from polycyclic aromatic hydrocarbon-contaminated soil

Abstract Cellulosimicrobium cellulans CWS2, a novel strain capable of utilizing benzo(a)pyrene (BaP) as the sole carbon and energy source under nitrate-reducing conditions, was isolated from PAH-contaminated soil. Temperature and pH significantly affected BaP biodegradation, and the strain exhibited enhanced biodegradation ability at temperatures above 30 °C and between pH 7 and 10. The highest BaP removal rate (78.8%) was observed in 13 days when the initial BaP concentration was 10 mg/L, and the strain degraded BaP at constant rate even at a higher concentration (50 mg/L). Metal exposure experimental results illustrated that Cd(II) was the only metal ion that significantly inhibited biodegradation of BaP. The addition of 0.5 and 1.0 g/L glucose enhanced BaP biodegradation, while the addition of low-molecular-weight organic acids with stronger acidity reduced BaP removal rates during co-metabolic biodegradation. The addition of phenanthrene and pyrene, which were degraded to some extent by the strain, showed no distinct effect on BaP biodegradation. Gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis revealed that the five rings of BaP opened, producing compounds with one to four rings which were more bioavailable. Thus, the strain exhibited strong BaP degradation capability and has great potential in the remediation of BaP-/PAH-contaminated environments.

Dual effect of Algerian propolis on lung cancer: antitumor and chemopreventive effects involving antioxidant activity

Abstract The purpose of our study was to divulge the antiproliferative effect of an ethanolic extract of Algerian propolis (EEP) in the human lung adenocarcinoma cell line (A549) and reveal the chemopreventive role against benzo(a)pyrene-induced lung carcinogenesis in albino Wistar rats. Cytotoxicity of EEP was evaluated using the MTT assay and cell adhesion in A549 cells. Moreover, rats were given 25 mg/kg of propolis for 5 days before induction of experimental lung cancer by a single intraperitoneal dose of 200 mg/kg benzo(a)pyrene. Body weight, lung weight, lipid peroxidation, marker enzymes, and enzymatic and non-enzymatic antioxidants were estimated. The EEP demonstrated an inhibitory effect on proliferation of A549 at 24 and 72 hours in a dose-dependent manner and blocked adhesion of the cells by fibrinogen. Moreover, EEP reduced the oxidative stress generated by benzo(a)pyrene. The pre-treatment showed that enzymatic and non-enzymatic antioxidants increased and lipid peroxidation decreased. A histological analysis further supported these findings and showed a decrease in the number of side effects. These results are particularly important for both clinical applications of propolis and the possibility for its use as a potential chemotherapeutic agent.

Tolerance to Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs) by filamentous fungi isolated from contaminated sediment in the Amazon region / Tolerância a Hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (HPAs) por fungos filamentosos isolados de sedimentos contaminados da região Amazônica

Tolerance to Polycyclic Hydrocarbons Aromatic (PAHs) is considered an important characteristic when assessing the bioremediation potential of microorganisms. Given this, the objective of this research was to assay filamentous fungi from the Amazon region, isolated from sediments with differents levels of contamination by PAHs, for tolerance to phenanthrene and pyrene. To achieve this, fungal cultures plugs (5 mm), obtained after 7 days growth, were transferred to petri dishes containing 20% Sabouraud dextrose agar medium, after surface innoculation with phenanthrene and pyrene crystals, separately. Radial mycelial growth was evaluated after 10 days at five different concentration levels for each contaminant and control group, all in triplicate for each treatment. Fungal growth and growth inhibition rates were calculated. The average growth of the colonies in each treatment was compared with one-way ANOVA, followed by a Tukey Test (p < 0,05). All fungi showed tolerant to phenanthrene and pyrene. However, Hypoxylon sp. showed the lowest growth inhibition rate and average growth rates significantly different of the other six tested species. Hypoxylon sp. has been shown to be a promising genetic resource for use in new studies of PAHs degradation.

A tolerância a Hidrocarbonetos Policíclicos Aromática (HPAs) é considerada como uma característica importante na avaliação do potencial de micro-organismos para biorremediação. Diante disso, o objetivo desta pesquisa foi avaliar fungos filamentosos da região amazônica, isolados de sedimentos com diferentes níveis de contaminação por HPAs, quanto à tolerância ao fenantreno e pireno. Para tanto, discos das culturas fúngicas (5 mm), obtidas após 7 dias de crescimento, foram transferidas para placas de Petri contendo meio Agar Sabouraud Dextrose a 20%, após inoculação superficial com cristais de fenantreno e pireno, separadamente. O crescimento micelial radial foi avaliado após 10 dias em cinco concentrações diferentes para cada contaminante e grupo controle, ambos em triplicata para cada tratamento. As taxas de crescimento fúngico e de inibição de crescimento foram calculadas. O crescimento médio das colônias em cada tratamento foi comparado com ANOVA one way, seguido pelo teste de Tukey (p < 0,05). Todos os fungos mostraram tolerância ao fenantreno e ao pireno. No entanto, Hypoxylon sp. apresentou menor taxa de inibição de crescimento e taxas médias de crescimento significativamente diferentes das outras seis espécies testadas. Hypoxylon sp. tem se mostrado um recurso genético promissor para uso em novos estudos sobre degradação de HPAs.

Morphological changes and growth of filamentous fungi in the presence of high concentrations of PAHs

In this study, we evaluated the effect of low and high molecular weight polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), i.e., Phenanthrene, Pyrene and Benzo[a]pyrene, on the radial growth and morphology of the PAH-degrading fungal strains Aspergillus nomius H7 and Trichoderma asperellum H15. The presence of PAHs in solid medium produced significant detrimental effects on the radial growth of A. nomius H7 at 4,000 and 6,000 mg L⁻¹ and changes in mycelium pigmentation, abundance and sporulation ability at 1,000–6,000 mg L⁻¹. In contrast, the radial growth of T. asperellum H15 was not affected at any of the doses tested, although sporulation was observed only up to 4,000 mg L⁻¹ and as with the H7 strain, some visible changes in sporulation patterns and mycelium pigmentation were observed. Our results suggest that fungal strains exposed to high doses of PAHs significantly vary in their growth rates and sporulation characteristics in response to the physiological and defense mechanisms that affect both pigment production and conidiation processes. This finding is relevant for obtaining a better understanding of fungal adaptation in PAH-polluted environments and for developing and implementing adequate strategies for the remediation of contaminated soils.

Equivalentes tóxicos de hidrocarburos aromáticos políciclicos en particulado atmosférico en Valencia, Venezuela / Toxic equivalency factors of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHS) in Valencia, Venezuela

El particulado atmosférico de las áreas urbanas contiene mezclas de compuestos contaminantes con diferentes grados de toxicidad como los Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (HAPs), provenientes de las emisiones de combustión incompleta de diversas fuentes no naturales. Los HAPs pueden provocar cáncer, malformaciones congénitas, trastornos del sistema nervioso, entre otros, al ser absorbidos, ya sea por inhalación o ingesta. El factor de equivalencia de toxicidad (FET), es un parámetro estimativo que relaciona la toxicidad de un compuesto con un componente de referencia, cuyo objetivo es evaluar la toxicidad y el riesgo de diversas sustancias y, en el caso de HAPs, el benzo(a)pireno (BaP) es el compuesto de referencia. El objetivo de este trabajo fue estimar el riesgo potencial de exposición a HAPs en habitantes de la zona de estudio a través de los FET. Catorce HAPs fueron extraídos del particulado atmosférico colectado en filtros y analizados por Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia con detector de fluorescencia. Se determinó la concentración de los HAPs, se calculó la concentración tóxica equivalente para cada compuesto y de la mezcla total de acuerdo al método propuesto por la Agencia de Protección Ambiental (EPA) de Estados Unidos. La concentración promedio total de HAPs en el particulado fue de 1,97 ng/m³. La contribución del BaP fue del 2,54% en la mezcla total de HAPs. La concentración tóxica equivalente total fue de 0,08 ng/m³ de la mezcla de aire. Las concentraciones tóxicas equivalentes para cada HAP y para el total en el particulado atmosférico no exceden el valor de 1 ng/m³ en equivalentes de BaP, indicado en diversas regulaciones internacionales.

The atmospheric particulate from urban areas contains mixtures of contaminants with different degrees of toxicity such as Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs) derived from emissions from incomplete combustion of various natural sources. PAHs can cause cancer, birth defects and nervous system disorders when they are absorbed either by inhalation or ingestion. The toxic equivalency factor (TEF) is a parameter that relates the toxicity of a compound with a reference component in order to evaluate the toxicity and risk of various substances. The benzo(a)pyrene (BaP) is the reference compound in the case of PAHs mixture. The aim of this study was to estimate the potential risk of exposure to PAHs in people of the study area through the TEF. Fourteen PAHs were extracted from particulate filters and analyzed by liquid chromatography- fluorescence detection. The concentration of PAHs was calculated. The total average concentration of PAHs in the particulate was 1.97 ng/m³. Then, the equivalent toxic concentration of each compound and the total mixture were calculated too according to the method proposed by the United States Environmental Protection Agency (EPA). The contribution of BaP was 2.54% in the total mixture of PAHs. The total equivalent toxic concentration was 0.08 ng/m³ in the air mixture. The toxic equivalent concentrations for each PAH and the total in the atmospheric particulate were not exceeding the value of 1 ng/m3 in BaP equivalent that is the level indicated in international regulations.

Efeito da mistura de diazinon e benzo[a]pireno naS-transferase da Glutationa em Tilápias do Nilo / Effect of mixture of diazinon and benzo[a]pyrenein Glutathione S-transferase of Nile tilapia

Atualmente, com a crescente contaminação dos ecossistemas aquáticos, muitos compostos, como pesticidas e hidrocarbonetos,são lançados de forma indevida em corpos d’água. Estudos relacionando a exposição de poluentes, individualmente,com variações bioquímicas são abundantes na literatura. Entretanto, ainda são poucos os voltados às misturas complexas.Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi analisar se a mistura diazinon e benzo[a]pireno pode afetar as atividadesbioquímicas de biomarcadores clássicos, tais como acetilcolinesterase (AChE), carboxilesterase (CbE), catalase (CAT), glutationaperoxidase (GPx) e glutationa S-transferase (GST) em Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) e comparar os efeitosnos sistemas enzimáticos quando estão expostos à mistura e aos compostos separadamente. Foi medida a atividade dasenzimas em brânquias e fígados de Tilápia do Nilo após 2 e 7 dias de exposição ao Diazinon (0,5 mg/L) e ao benzo[a]pireno (1,0 mg/L) individualmente e em mistura. Os resultados mostraram que no grupo mistura do fígado após 7 dias deexposição, o benzo[a]pireno aumentou a ação inibidora do Diazinon na atividade da enzima GST. Isso indica que a toxicidadedas interações ambientais entre pesticida e hidrocarboneto policíclico aromático pode apresentar efeito sinérgico.Desse modo, é importante levar em conta esse fator, pois irá auxiliar na compreensão de resultados obtidos em estudosde campo, como em um monitoramento ambiental.

Currently, with the growing contamination of aquatic ecosystems, many compounds, such as pesticides and hydrocarbons,are improperly released into rivers and lakes. Studies about the exposure of single pollutants causing biochemical variationsare abundant in the literature. However, there are few studies focused on the biological effects of complex mixtures.The aim of this investigation was to evaluate whether mixture diazinon and benzo[a]pyrene can affect the biochemicalactivities of classic biomarkers such as acetylcholinesterase (AChE), carboxylesterase (CbE), catalase (CAT), glutathioneperoxidase (GPx) and glutathione S-transferase (GST) in Nile tilapia and compare the effects on enzymatic systems of theexposure to a mixture of compounds and the effects observed when they are exposed separately. We measured the activityof enzymes in gills and liver of Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) after 2 and 7 days of exposure to Diazinon (0.5 mg/L)and benzo[a]pyrene (1.0 mg/L) individually and in mixture. The results showed that in the mixture group after 7 days ofexposure, the benzo[a]pyrene increased the inhibitory action of Diazinon in GST enzyme activity, in liver tissue. This indicatesthat the toxicity of the interactions between pesticide and polycyclic aromatic hydrocarbon may show synergisticeffect. These results suggest the importance of studies with mixture of compounds, because these data will help to understandthe results obtained in field studies, such as those from environmental monitoring.

El benzo(a)pireno en los alimentos y su relación con el cáncer / Benzo[a]pyrene from food and cancer

Antecedentes: el benzo(a)pireno es un hidrocarburo aromático policíclico con efectos adversos para la salud, una de las fuentes es la ingestión de alimentos, formados durante procesamiento industrial o en el hogar. Objetivo: indagar sobre la formación de benzo(a)pireno en los alimentos, su activación biológica, relación con el cáncer, contenido en los alimentos y la normativa que regula la cantidad en alimentos para humanos. Materiales y métodos: se realizó una búsqueda bibliográfica de artículos publicados en las bases de datos nacionales e internacionales. Resultados: el benzo(a)pireno ingerido con los alimentos se absorbe por el intestino, se metaboliza predominantemente en el hígado, allí se activa y puede inducir cáncer de diversa localización, como esófago, estómago, intestino, piel, vejiga, pulmón e hígado, evidenciado en estudios experimentales en animales. El benzo(a)pireno atraviesa la placenta y es potencialmente tóxico para el feto. Las cantidades en algunos alimentos exceden las máximas permitidas por la Comisión Europea entidad que periódicamente actualiza las normas sobre el tema. En Colombia no se encontró reglamentación. Conclusión: el benzo(a)pireno procedente de alimentos genera compuestos capaces de desarrollar cáncer principalmente del tracto gastrointestinal. La Comisión Europea actualiza periódicamente la normativa que regula el contenido de benzo(a)pireno en alimentos, Colombia carece de normas sobre el tema.

Background: Benzo[a]pyrene is a polycyclic aromatic hydrocarbon which has been related with adverse health outcomes. Food is a source of benzo[a]pyrene; which is produced during industrial processing or cooking. Objective: To review information about benzo(a)pyrene formation in food, biological activation, association with cancer, food content and regulation of benzo(a)pyrene content in human food. Methods: A literature search from national and international scientific databases was developed. Results: benzo[a]pyrene ingested is absorbed by the intestine metabolized and activated, predominantly, by the liver. Animal studies have associated benzo[a]pyrene with esophagus, stomach, intestine, skin, bladder, lung, and liver cancer. Benzo[a]pyrene is potentially toxic to the fetus, due to it passes trough placenta. Benzo[a]pyrene amounts in some foods exceed the maximum level allowed by the European Commission; which periodically updates legislation on this topic. In Colombia there is not regulation about benzo[a]pyrene. Conclusion: benzo[a]pyrene in food generates compounds that may be associated with cancer, mainly gastrointestinal cancer. The European Commission regularly updates regulation about benzo[a] pyrene content in foods. Colombia does not have regulation on this topic.

Interacciones genotóxicas de mutágenos en mezclas binarias mediante ensayo cometa alcalino en linfocitos humanos / Interaction of mutagens in binary mixtures using the alkaline comet assay in human lymphocytes

Introducción. Los mutágenos contenidos en mezclas complejas presentan interacciones de sinergismo, aditivas o antagónicas. Se han desarrollado enfoques experimentales que permitan dilucidar el responsable de las interacciones en la mezcla. Objetivo. Desarrollar un diseño experimental para comprender los procesos que se llevan a cabo entre los compuestos presentes en las mezclas complejas. Materiales y métodos. Se expusieron linfocitos humanos a mezclas binarias de mutágenos B[a]P, DMBA, Trp-P-1 y MX durante una hora, con activación metabólica y sin ella. La viabilidad se evaluó con azul de tripano y, la genotoxicidad, con cometa alcalino. Resultados. Ningún hidrocarburo tuvo efecto con furanona. Con S9 y sin él, se observó que se presentaban interacciones tóxicas entre hidrocarburos. Se observó sinergismo sin S9 entre B[a]P y Trp-P-1 y, con actividad metabólica, entre DMBA y Trp-P-1. Sin S9 se observó interacción antagónica entre Trp-P-1 y DMBA y, con S9, entre Trp-P-1 y MX y entre MX y DMBA. Se observó un incremento dependiente de la dosis en la longitud de la cola. Hubo daño genotóxico medio y aumento de las células dañadas. Para todas las mezclas se pudo determinar la concentración mínima en la que se observaban efectos adversos y solo para algunas se determinó la concentración máxima en la cual no se observaron efectos adversos. Conclusión. Se hace un aporte para comprender los procesos que ocurren cuando en una mezcla hay presentes, al menos, dos mutágenos y se valida un modelo de análisis que permite dilucidar el compuesto que tiene efecto sobre otro. También, se demostró que según el tipo de compuestos en la mezcla, se tendrá o no un umbral de riesgo.

Introduction. Mutagens contained in complex mixtures can present synergistic interactions, either additive or antagonistic. Therefore, development of experimental approaches is necessary to elucidate which is the responsible agent for the effect in the mixtures. Objective. An experimental design was developed that allowed an understanding of the processes between the compounds of complex mixtures. Materials and methods. Human lymphocytes were exposed to binary mixtures of the mutagens B[a]P, DMBA, Trp-P-1 and MX for 1 hour with or without S9. Viability was assessed with trypan blue dye and the genotoxicity by the comet assay. Results. All of the hydrocarbon showed an effect with furanone. With and without S9, the most toxic interactions were observed between hydrocarbons. Synergistic interaction was observed without S9 between B [a] P and Trp-P-1 and between DMBA and Trp-P-1 with metabolic activity. Without S9 antagonistic interaction was observed only between Trp-P-1+DMBA, and with S9 between Trp-P-1+MX and MX+DMBA. It observed an increase dose dependent in tail length. Half the cultures showed genotoxic damage and increased cell damage. For each mixture, minimum concentrations were determined at which adverse effects are observed; for some only the maximum concentration was determined at which no adverse effects are observed. Conclusion. The processes between mutagens present in a mixture have become better understood, and the results validated an analytical model that determined which component had an effect on another. The results also showed that the type of compounds in the mixture determined whether or not a risk threshold was present.

Lung apoptosis after intra-pulmonary instillation of Benzo(a)pyrene in Wistar rats / Apoptose pulmonar após instilação intrapulmonar de Benzo(a)pireno em ratos Wistar

PURPOSE: To evaluate the influence of pulmonary instillation of Benzo[a]pyrene in lung apoptosis of Wistar rats. METHODS: Male Rattus norvegicus albinus, Wistar lineage was carried through an intra-pulmonary instillation of the Benzo[a]pyrene (B[a]P) dilution in alcohol 70 percent. Three experimental groups had been formed with 08 animals each: Control Group (Alcohol 70 percent); B[a]P Group 40 mg/kg; e B[a]P Group 80mg/kg, submitted to euthanasia 16 and 18 weeks after the experimental procedure. The pulmonary sections had been processed by TUNEL method and submitted to the histomorphometric analysis to quantify the apoptotic cell number. RESULTS: After 16 weeks, mean of apoptotic cells number in control group (19,3±3,2) was greater than 40mg/Kg group (11,8±1,9; p<0,01) and 80mg/Kg group (7,0±1,4; p<0,01). Significant difference also observed between 40mg/Kg and 80mg/Kg (p<0,05). After 18 weeks, mean of apoptotic cells number in control group (18,0±2,2) was greater than 40mg/Kg group (8,8±1,7; p<0,01) and 80mg/Kg group (5,5±1,3; p<0,01). Significant difference wasn't observed between 40mg/Kg and 80mg/Kg (ns). CONCLUSION: Intra-pulmonary instillation of Benzo[a]pyrene induces significant decrease of apoptotic activity in lung tissue.

OBJETIVO: Avaliar a influência da instilação intrapulmonar de Benzo[a]pireno na apoptose pulmonar de ratos Wistar. MÉTODOS: Rattus norvegicus albinus, linhagem Wistar machos foram submetidos à instilação intra-pulmonar da diluição em álcool 70 por cento de Benzo[a]pireno (B[a]P). Foram formados três grupos experimentais com 08 animais cada: Grupo Controle (álcool 70 por cento); Grupo B[a]P 40 mg/kg; e Grupo B[a]P 80mg/kg, submetidos a eutanásia 16 e 18 semanas após o procedimento experimental. As secções pulmonares foram processadas pelo método TUNEL e submetidas à análise histomorfométrica para quantificação do número de células apoptóticas. RESULTADOS: Após 16 semanas, a média do número de células apoptóticas do grupo controle (19,3±3,2) mostrou-se maior que o grupo 40mg/Kg (11,8±1,9; p<0,01) e 80mh/Kg (7,0±1,4; p<0,01). Diferença significante foi também observada entre os grupos 40mg/Kg e 80mg/Kg (p<0,05). Após 18 semanas, a média do número de células apoptóticas do grupo controle (18,0±2,2) mostrou-se maior que o grupo 40mg/Kg (8,8±1,7; p<0,01) e 80mh/Kg (5,5±1,3; p<0,01). Não foi observada diferença significante entre os grupos 40 e 80mg/Kg (ns). CONCLUSÃO: A instilação intrapulmonar de Benzo[a]pireno induziu diminuição significativa da atividade apoptótica em tecido pulmonar.

Hidrocarbonetos policíclicos aromáticos - benzo(a)pireno: uma revisão / Polycyclic aromatic hydrocarbons - benzo-(a)pyrene: a review

Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) constituem um grupo de compostos contendo dois ou mais anéis aromáticos condensados. Estes compostos são formados, principalmente, pela combustão incompleta da matéria orgânica. Os estudos em cobaias têm demonstrado que muito desses compostos, incluindo o benzo(a)pireno (BaP), são carcinogênicos e mutagênicos, sendo também considerados potencialmente genotóxicos e carcinogênicos para os humanos. O BaP é um dos HPAs mais estudados e é utilizado como indicador da presença de outros HPAs. Esse composto é um contaminante de ampla distribuição ambiental, presente em diversas matrizes, como solo, água, ar e alimentos. Na presente revisão são abordados os aspectos gerais dos HPAs, especialmente do BaP, assim como as metodologias analíticas publicadas desde a década de 1960. São apresentadas as modificações nos diferentes métodos de extração e nos solventes utilizados, as quais têm resultado numa significativa redução de tempo de análise, de volumes de solvente e de custo. São também discutidas as técnicas cromatográficas empregadas para a quantificação desses compostos, como CLAE e CGMS.

Otimização de metodologia para determinação de benzo(a)pireno em cachaças por CLAE com detecção de fluorescência e avaliação de sua ocorrência

Os objetivos deste trabalho foram: comparar, adaptar e validar metodologia analítica para identificação e quantificação de benzo(a)pireno (BaP) em amostras de cachaça por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por fluorescência (CLAE-DFl) e confirmação por cromatografia gasosa com detector de massas (CG/DM); avaliar a contaminação de cachaças comercializadas na cidade de São Paulo, e verificar quais etapas de produção de uma cachaça de alambique que poderiam contribuir para a contaminação por BaP. Foram estudados 3 métodos distintos para extração de BaP: extração em fase sólida (EFS), em cartucho C18 e ciclohexano; extração líquido-líquido com ciclohexano (ELL-CHX) e extração líquido-líquido com dimetilformamida e ciclohexano (ELL-DMF/CHX). Após as ELL, foi feita a purificação dos extratos em coluna de sílica gel, utilizando ciclohexano para eluição. A quantificação foi realizada por CLAEDFl, em coluna C18, fase móvel acetonitrila/água (70:30). Os resultados dos testes de validação foram satisfatórios para os 3 métodos estudados, porém, a EFS apresentou vantagens em relação à ELL: reduzido tempo de análise, menor utilização de solventes, descarte de resíduos e exposição do analista, além de custo inferior. Quanto ao estudo do processamento da cachaça, foram analisadas amostras da cana, do caldo, do vinho e do destilado pelo método da ELL-DMF/CHX; os resultados obtidos situaram-se abaixo do limite de detecção. Foram analisadas 51 amostras de cachaça utilizando a EFS, obtendo-se concentrações de BaP na faixa de não detectado a 0,86 ppb, sendo que, em 24% das amostras, os teores foram superiores ao limite de quantificação (0,1 ppb). Em virtude do potencial carcinogênico e genotóxico do BaP, os dados deste trabalho poderão trazer subsídios às autoridades brasileiras para o estabelecimento de limite máximo de BaP em cachaças. Os resultados das determinações de metanol e componentes secundários em cachaças revelaram que 61%...

Otimização de metodologia para determinação de benzo(a)pireno em cachaças por CLAE com detecção de fluorescência e avaliação de sua ocorrência / Methodological optimization for determination of benzo(a)pyrene in cachaças by HPLC with fluorescence detection and evaluation of its occurrence

Os objetivos deste trabalho foram: comparar, adaptar e validar metodologia analítica para identificação e quantificação de benzo(a)pireno (BaP) em amostras de cachaça por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por fluorescência (CLAE-DFl) e confirmação por cromatografia gasosa com detector de massas (CG/DM); avaliar a contaminação de cachaças comercializadas na cidade de São Paulo, e verificar quais etapas de produção de uma cachaça de alambique que poderiam contribuir para a contaminação por BaP. Foram estudados 3 métodos distintos para extração de BaP: extração em fase sólida (EFS), em cartucho C18 e ciclohexano; extração líquido-líquido com ciclohexano (ELL-CHX) e extração líquido-líquido com dimetilformamida e ciclohexano (ELL-DMF/CHX). Após as ELL, foi feita a purificação dos extratos em coluna de sílica gel, utilizando ciclohexano para eluição. A quantificação foi realizada por CLAEDFl, em coluna C18, fase móvel acetonitrila/água (70:30). Os resultados dos testes de validação foram satisfatórios para os 3 métodos estudados, porém, a EFS apresentou vantagens em relação à ELL: reduzido tempo de análise, menor utilização de solventes, descarte de resíduos e exposição do analista, além de custo inferior. Quanto ao estudo do processamento da cachaça, foram analisadas amostras da cana, do caldo, do vinho e do destilado pelo método da ELL-DMF/CHX; os resultados obtidos situaram-se abaixo do limite de detecção. Foram analisadas 51 amostras de cachaça utilizando a EFS, obtendo-se concentrações de BaP na faixa de não detectado a 0,86 ppb, sendo que, em 24% das amostras, os teores foram superiores ao limite de quantificação (0,1 ppb). Em virtude do potencial carcinogênico e genotóxico do BaP, os dados deste trabalho poderão trazer subsídios às autoridades brasileiras para o estabelecimento de limite máximo de BaP em cachaças. Os resultados das determinações de metanol e componentes secundários em cachaças revelaram que 61% das amostras apresentavam...

Experimental model of pulmonary carcinogenesis in Wistar rats

PURPOSE: To elaborate an experimental model of pulmonary carcinogenesis in Wistar rats. METHODS: Male Rattus norvegicus albinus, Wistar lineage was carried through an intra-pulmonary instillation of the Benzo[a]pyrene (B[a]P) dilution in alcohol 70 percent, a polycyclic aromatic hydrocarbon widely known by its power of tumoral induction. Three experimental groups had been formed with 08 animals each: Control Group (Alcohol 70 percent); B[a]P Group 10 mg/kg; e B[a]P Group 20mg/kg, submitted to euthanasia 08, 10, 12 and 14 weeks after the experimental procedure. The pulmonary sections had been colored by hematoxilin-eosin (HE) and submitted to the morphometrical analysis to describe the tissue alterations. RESULTS: The presence of diffuse inflammatory alterations was observed in all groups, however, at the analysis of the pulmonary tissue of the experimental groups, it had been observed hyperplasic alterations (BALT hyperplasia), and in one of the animals of the experimental group 20mg/kg (12 weeks), it was noticed the presence of cellular epithelial tracheal pleomorphism, suggesting the adenocarcinoma formation in situ. CONCLUSION: The main secondary alterations to the intra-pulmonary instillation of B[a]P in Wistar rats were: cellular proliferation, inflammatory alterations of several degrees and nodular lymphoid hyperplasias. The association of an activator agent of the pulmonary metabolic reply is necessary to establish the ideal reply-dose to the development of the lung cancer.

OBJETIVO: Elaborar um modelo experimental de carcinogênese pulmonar em ratos wistar. MÉTODOS: Rattus norvegicus albinus, linhagem Wistar foram submetidos a instilação intra-pulmonar da diluição em álcool 70 por cento de Benzo[a]pireno (B[a]P), um hidrocarboneto aromático policíclico amplamente conhecido por seu poder de indução tumoral. Foram formados três grupos experimentais com 08 animais cada: Grupo Controle (álcool 70 por cento); Grupo B[a]P 10 mg/kg; e Grupo B[a]P 20mg/kg, submetidos a eutanásia 08, 10, 12 e 14 semanas após o procedimento experimental. As secções pulmonares foram coradas por HE e submetidas a análise morfométrica para descrição das alterações teciduais. RESULTADOS: em todos os grupos observou-se a presença de alterações inflamatórias difusas, porém na análise do tecido pulmonar dos grupos experimentais, observou-se alterações hiperplásicas (hiperplasia de BALT), e em um dos animais do grupo experimental 20mg/kg (12 semanas) notou-se a presença de pleomorfismo celular epitelial traqueal, sugerindo a formação de adenocarcinoma in situ. CONCLUSÃO: as principais alterações secundárias à instilação intra-pulmonar de B[a]P em ratos Wistar foram: proliferação celular, alterações inflamatórias de diversos graus e hiperplasias nodulares linfóides. A associação de um agente ativador da resposta metabólica pulmonar pode ser necessária para estabelecimento da dose-resposta ideal ao desenvolvimento do câncer de pulmão.

Usefulness of argyrophilic nucleolar organizer regions in detection of lung cells alterations after benzo[a]pyrene instillation

PURPOSE: To verify the relationship between AgNOR expression and lung tissues changes of Wistar rats after pulmonary instillation of benzo[a]pyrene (B[a]P). METHODS: Male Rattus norvegicus albinus,Wistar lineage were given a single intrapulmonary instillation of B[a]P at doses of 10 and 20 mg/kg in a volume of approximately 0,3 ml. After 7 and 21 days the rats were killed and the lung slices submitted to a histological technique of AgNOR. AgNOR dots were quantified and the result analyzed by statistical tests; p <= 0,05 was considered significant. RESULTS: The mean values of AgNOR dots for the experimental groups 10/7 (1,51±0,86) and 10/21 (1,84±0,13) were statistically different (p = 0,009). Among the groups 20/7 (1,63±0,11) and 20/21 (2,48±0,28) was observed statistically significant difference (p = 0,003). CONCLUSION: The AgNOR technique can be useful in identification of cells changes induced by B[a]P.

OBJETIVO: Verificar a relação entre a expressão de AgNOR e alterações teciduais pulmonares em ratos Wistar após instilação pulmonar de benzo[a]pireno (B[a]P). MÉTODOS: Rattus norvegicus albinus, linhagem Wistar machos foram submetidos à instilação pulmonar única de B[a]P em doses de 10 e 20mg/kg, em um volume aproximado de 0,3 ml. Os animais foram sacrificados após 7 e 21 dias e o tecido pulmonar submetido a técnica histológica de AgNOR. Os pontos AgNOR foram quantificados e os resultados analisados estatisticamente; foram considerados significantes os valores de p <= 0,05. RESULTADOS: Os valores médios de pontos AgNOR no grupo experimental 10/7 (1,51±0,86) e 10/21 (1,84±0,13) foram estatisticamente significantes (p = 0,009). Entre os grupos 20/7 (1,63±0,11) e 20/21 (2,48±0,28) a diferença observada foi também considerada significante (p = 0,003). CONCLUSÃO: A técnica de AgNOR pode ser útil na identificação de alterações celulares induzidas pelo B[a]P.

Individual sensitivity to cytogenetic effects of benzo[ alpha ]pyrene in cultured human lymphocytes: influence of glutathione S-transferase M1 genotype

Sister chromatid exchange (SCE) and chromosome aberrations (CA) in peripheral lymphocytes has been widely used in assessing exposure to mutagens and carcinogens. One of the extensively studied genotoxins is benzo[alpha]pyrene (BaP). We studied the ability of BaP to induce SCE and CA in 16 glutathione S-transferase M1 (GSTM1)-positive and 15 GSTM1-null individuals by analyzing 72-h whole-blood lymphocyte cultures, either BaP-untreated (controls) or treated with 5 æM of BaP for 24 or 48 h. There was no differences in the level of BaP-induced chromosomal aberrations between GSTM1-positive or null individuals when the cells were BaP-exposed for 24 h (0.083 ± 0.059 vs. 0.090 ± 0.058) or 48 h (0.092 ± 0.057 vs. 0.096 ± 0.050. The frequency of SCE in controls was GSTM1-positive = 2.96 ± 0.35 and GSTM1-null = 3.23 ± 0.56 while that for BaP-treated lymphocytes was GSTM1-positive = 5.56 ± 0.83 and GSTM1-null = 6.09 ± 1.11 and were not statistically significant. The rates of BaP-induced in vitro chromatid and chromosome-type gaps and breaks were similar in all groups, although GSTM1-null genotype chromatid-type breaks were more frequent (0.064 ± 0.039 per metaphase) than chromosome-type breaks (0.032 ± 0.027 per metaphase) after 48 h treatment with BaP (p < 0.001). These findings suggest that BaP-induced in vitro SCE and CA are not influenced by the GSTM1 genotype.

Evaluación de las modificaciones epiteliales, la presencia de mastocitos y glucógeno intraepitelial de la mucosa labial en un modelo de carcinogénesis química / Evaluation of the epithelial modifications, the presence of mast cells and intraepithelial glucogen of the labial mucosa in a chemical carcinogenesis model

Este estudio fue llevado a cabo con el propósito de estudiar las modificaciones epiteliales en un proceso de carcinogénesis, además, la variación en la presencia de mastocitos y glucógeno, producitdos por la aplicación de benzopireno bore la mucosa labial de ratones machos IBF1 (IOR/HAB x C57/BL). Se seleccionaron ratones de 4 a 6 semanas de edad y se les suministró comida y aguda ad libitum y se dividieron en tres grupos. El primer grupo fue tratado con benzo(a)pireno, el segundo con acetona y el tercero permaneció como control Se aplicaron 10 il de estas sustancias sobre la mucosa labial de los animales durante 44 semanas, tres veces por semana. Todos los animales se sacrificaron y se realizó disección del labio. Las muestras fueron fijadas en formalina neutra al 10 por ciento. Posteriormente, se procesaron por la técnica clásica de inclusión en parafina y se utilizaron tres coloraciones: H&E, PAS y azul de toluidina. Estas biopsias fueron examinadas a las semanas 6, 16, 32 y 44, siguiendo los parámetros propuestos por la OMS (Smith, C y J.J. Pindborg)(1). El grupo tratado con benzo(a)pireno presentó cáncer en la semana 44. Los cambios histológicos más sobresalientes en los diferentes estadios fueron la queratinización superficial, grosor epitelial y displasia previa a estadios neoplásicos. El glucógeno disminuyó hacia la semana 44. Se presentaron cambios en la presencia de mastocitos en el proceso de carcinogéensis química, aunque su papel no se comprende aún.

Estudio cariométrico de la mucosa bucal en modelo de carcinogénesis química / Cariometric study of oral mucosa in the model of chemical carcinogenesis

Con el objetivo de precisar las modificaciones de la mucosa bucal, tratada con un Condensado de Humo de Cigarrillo, y compararla con los restantes grupos de diseño experimental atendiendo al tiempo de aplicación del carcinógeno, se seleccionaron 120 espécimenes de mucosa labial. Las muestran fueron obtenidas de ratones IBF1, a los cuales se les realizaron aplicaciones tópicas durante 32 semanas de acuerdo al diseño experimental, Los fragmentos de tejidos fueron procesados por la técnica de inclusión en parafina y los bloques cortados en series a 4 micras de espesor siendo coloreadas con Hematoxilina y Eosina cada quinto corte. Se realizó una evaluación cariométrica de los espécimenes con el empleo de un ocular de medición una vez efectuados los cálculos matemáticos correspondientes a cada unidad de escala. En cada muestra fueron estudiadas las poblaciones celulares de estratos basal y espinoso. En cada uno fueron medidos 30 núcleos a los cuales se les calcularon sus volúmenes nucleares. Los datos fueron registrados en tablas y gráficos confeccionados al efecto. Como contrastación de hipótisis fué empleada la prueba estadística t de Student. El incremento de los volúmenes nucleares resultó un hallazgo constante en los grupos tratados con carcinógenos, haciéndose más evidente en los que recibían Condensado de Humo durante las semanas 16 y 32 (P<0,05).