RESUMO
Diidroergocristina (DHEC) é um fármaco semi-sintético, derivada do alcalóide do Ergot, principalmente utilizada para enxaqueca e estudada em distúrbios cognitivos relacionados ao envelhecimento. No presente estudo, o seu principal metabólito 8-hidroxidiidroergocristina (8'-OH-DHEC) foi produzido através de incubação de preparações enzimáticas de fígado de boi usando o Mesilato de Diidroergocristina como substrato. Foi feita uma avaliação de qual o melhor método de preparação enzimática a ser utilizado para produção do padrão do metabólito ativo em grande escala através da comparação de atividade enzimática entre microssomos e S12, ambos extraídos de heptócitos de fígado bovino. A purificação desse metabólito foi feita através da utilização de uma coluna cromatográfica clássica com sílica gel e cromatografia líquida de fase reversa. Sua identificação foi baseada em mensuração de sua massa molecular por espectro de fragmentação de massa e Ressonância Magnética (NMR - 1H/13C). Através da produção dessa substância in vitro, um método rápido, sensível e robusto de determinação da DHEC e seu principal metabólito foi desenvolvido e validado em LC-MS/MS a partir de análise de plasma humano. Bromocriptina foi utilizado com padrão interno e os limites de quantificação da DHEC e 8-OH-DHEC foram 10 pg/ml e 20 pg/ml, respectivamente. Os parâmetros farmacocinéticos foram investigados em 12 voluntários masculinos através da administração de uma dose única oral de 18mg...
Dihydroergocristine (DHEC) is a semi-synthetic drug mainly used for migraine and studied in age-related cognitive impairment. In this study, its major metabolite 8´-hydroxy-dihydroergocristine (8´-OH-DHEC) was produced in incubates of a bovine liver preparation using dihydroergocristine mesylate (DHECM) as substrate. An evaluation of the best enzymatic preparation method was done in order to verify the adequate process for massive production of the metabolite. A comparison between microssomes and S12 was performed, where both preparations were extracted from bovine hepatocytes. Purification was achieved by flash silica gel column and reverse phase liquid chromatographies, and identification was based on accurate molecular mass measurements, mass fragmentation spectra and NMR (1H/13C) chemical shifts. By using the substance produced in vitro, a fast, sensitive, specific and robust LC/MS/MS method for the simultaneous determination of DHEC and its major metabolite in human plasma was...
