Hiperinsulinismo endógeno: dois desafios diagnósticos / Endogenous hyperinsulinism: two diagnostic challenges

A hipoglicemia em um adulto aparentemente saudável é um achado raro na prática clínica que exige uma investigação exaustiva da causa. A identificação de glicemia plasmática diminuída associada a concentrações plasmáticas de insulina e peptídeo-C não suprimidos deverá levar à exclusão de causas raras de hipoglicemia, entre elas, doença das células betapancreáticas e hipoglicemia autoimune. Neste artigo, descrevemos dois casos de hipoglicemia associada a hiperinsulinismo endógeno, cujas causas são pouco habituais na prática clínica. A propósito desses casos clínicos revemos aspectos importantes de diagnósticos e tratamento da hipoglicemia no contexto de hiperinsulinismo endógeno.

Hypoglycemia in apparently healthy adults is a rare finding in clinical practice requiring a thorough investigation of the cause. During the investigation, identification of hypoglycemia associated with inappropriately high levels of insulin and C-peptide should prompt the exclusion of rare causes of hypoglycemia, including pancreatic islet-cells disease and autoimmune hypoglycemia. In this paper, we describe two cases of hypoglycemia associated with endogenous hyperinsulinism, whose causes are uncommon in clinical practice, and review important aspects of the diagnosis and treatment of hyperinsulinemic hypoglycemia.

Hypothyroidism decreases proinsulin gene expression and the attachment of its mRNA and eEF1A protein to the actin cytoskeleton of INS-1E cells

The actions of thyroid hormone (TH) on pancreatic beta cells have not been thoroughly explored, with current knowledge being limited to the modulation of insulin secretion in response to glucose, and beta cell viability by regulation of pro-mitotic and pro-apoptotic factors. Therefore, the effects of TH on proinsulin gene expression are not known. This led us to measure: a) proinsulin mRNA expression, b) proinsulin transcripts and eEF1A protein binding to the actin cytoskeleton, c) actin cytoskeleton arrangement, and d) proinsulin mRNA poly(A) tail length modulation in INS-1E cells cultured in different media containing: i) normal fetal bovine serum - FBS (control); ii) normal FBS plus 1 µM or 10 nM T3, for 12 h, and iii) FBS depleted of TH for 24 h (Tx). A decrease in proinsulin mRNA content and attachment to the cytoskeleton were observed in hypothyroid (Tx) beta cells. The amount of eEF1A protein anchored to the cytoskeleton was also reduced in hypothyroidism, and it is worth mentioning that eEF1A is essential to attach transcripts to the cytoskeleton, which might modulate their stability and rate of translation. Proinsulin poly(A) tail length and cytoskeleton arrangement remained unchanged in hypothyroidism. T3 treatment of control cells for 12 h did not induce any changes in the parameters studied. The data indicate that TH is important for proinsulin mRNA expression and translation, since its total amount and attachment to the cytoskeleton are decreased in hypothyroid beta cells, providing evidence that effects of TH on carbohydrate metabolism also include the control of proinsulin gene expression.

Frequency Of Pancreatic Beta-Cell Autoimmunity Markers In Patients With Autoimmune Thyroid Disease / Frecuencia de marcadores de autoinmunidad beta pancreática en pacientes con enfermedad tiroidea autoinmune

A total of 305 ambulatory patients recruited at the Division of Endocrinology, Hospital de Clínicas, University of Buenos Aires, with autoimmune thyroid disease (AITD) were studied to search for associations between autoimmune thyroid disease and presence of serum markers of autoimmune diabetes mellitus. Screening for markers of pancreatic beta-cell autoimmunity was performed by radioligand binding assays (RBA) as follows: autoantibodies to glutamic acid decarboxylase (GADA) and proinsulin (PAA) were determined in all sera, whereas autoantibodies to protein tyrosine phosphatase (IA-2A) and insulin (IAA) were additionally measured in 200 sera randomly selected from the total collection. In addition, every GADA positive serum among the remaining 105 sera was systematically tested for the presence of IA-2A and IAA. In the cohort of 305 AITD patients 22 (7.2%) were previously diagnosed as type 1, type 2 or insulin-requiring type 2 diabetics. Ten of these patients presented serum marker positivity specific for β-cell autoantigens and 12 were marker negative. On the other hand, considering the majority of non-diabetic AITD patients (n=283), β-cell marker positivity was detected in 17 individuals (6.0%). The prevalence of autoimmune diabetes markers was much higher in the studied population than in the general population utilized as a control group, and GADA was the most frequent marker.

Se investigó la asociación entre enfermedad tiroidea autoinmune y la presencia de marcadores séricos de diabetes mellitus en 305 pacientes ambulatorios con enfermedad tiroidea autoinmune reclutados en la División Endocrinología. La búsqueda de marcadores de autoinmunidad contra las células beta pancreáticas se realizó por la técnica de unión de radioligandos (RBA) como se detalla a continuación: se determinaron autoanticuerpos contra la decarboxilasa del ácido glutámico (GADA) y proinsulina (PAA) en todos los sueros, mientras que los anticuerpos contra la proteína tirosina fosfatasa (IA-2A) e insulina (IAA) fueron medidos en 200 de estos sueros tomados al azar de la colección total. Además, en los restantes 105 pacientes, la presencia de IA-2A y IAA fue evaluada en todos los sueros positivos para GADA. Del grupo de 305 pacientes con enfermedad tiroidea autoinmune 22 (7.2%) fueron diagnosticados previamente como diabéticos tipo 1, tipo 2 o tipo 2 insulino-requirientes. Diez de ellos presentaron positividad para marcadores específicos de autoantígenos de célula β, en tanto 12 fueron negativos. Por otra parte, en 17 de los 283 pacientes (6.0%) con enfermedad tiroidea autoimmune y sin diagnóstico previo de diabetes, se detectó positividad para marcadores de célula β. La prevalencia de marcadores de autoinmunidad asociados a diabetes fue mayor en la población estudiada que en la población general usada como grupo control, siendo GADA el marcador más frecuente.

Association between proinsulin, insulin, proinsulin/insulin ratio, and insulin resistance status with the metabolic syndrome

The Metabolic Syndrome (MS) constitutes an independent risk factor of cardiovascular disease. There is evidence that proinsulin blood levels and the proinsulin/insulin ratio are associated to the MS. The purpose of this study was to compare proinsulin and insulin, insulin resistance index, and the proinsulin/insulin ratio as predictors of MS. This is a cross-sectional study involving 440 men and 556 women with a mean age of 24 years. Diagnosis of MS was made according to the National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III. Blood levels of insulin and proinsulin were measured, and the insulin resistance status was estimated using the homeostatic model assessment (HOMA-IR). The prevalence of MS was 10.1 percent. HOMA-IR was the best MS risk factor for both women and men (OR = 2.04; 95 percent CI: 1.68-2.48 and 1.09; 95 percent CI: 1.05-1.13, respectively). HOMA-IR presented the best positive predictive value for MS: 22 percent and 36 percent for men and women, respectively, and was the best MS indicator. The proinsulin/insulin ratio did not show significant association with MS. HOMA-IR, proinsulin, and insulin presented good negative predictive values for both genders that could be used to identify an at-risk population.

A síndrome metabólica (SM) constitui um fator de risco independente para doenças cardiovasculares. Existem evidências de que níveis sangüíneos de proinsulina e o índice proinsulina/insulina estão associados com a presença da SM. O objetivo deste trabalho foi comparar proinsulina e insulina, índice de resistência insulínica e o fator proinsulina/insulina para predizer a presença da SM. Este é um estudo transversal envolvendo 440 homens e 556 mulheres com média de 24 anos de idade. O diagnóstico da SM foi feito de acordo com o Painel III do programa de tratamento nacional educacional de colesterol para adultos. Níveis sangüíneos de insulina e proinsulina foram medidos, o índice de resistência insulínica foi estimado através do modelo de avaliação hemostático (HOMA-IR). A prevalência da SM foi de 10 por cento. HOMA-IR demonstrou ser o melhor fator de risco da SM em homens e mulheres (OR = 2,04; 95 por cento CI: 1,68-2,48 e 1,09; 95 por cento CI: 1,05-1,13, respectivamente). HOMA-IR apresentou o melhor valor preditivo positivo para SM: 22 por cento e 36 por cento para homens e mulheres, respectivamente, e foi o melhor indicador da SM. O índice proinsulina/insulina não apresentou associação significativa com SM. HOMA-IR, proinsulina e insulina apresentaram bons valores preditivos negativos para ambos sexos, o que poderia ser usado para identificar uma população de risco.

Obtención de 35 S-proinsulina humana recombinante y su aplicación en un ensayo radiométrico combinado: Utilidad del método desarrollado para predecir el requerimiento de insulina en pacientes diabéticos adultos / Obtaining of 35 recombinant human S-proinsulina and its application in a combined radiometric test: Utility of the developed method to predict the insulin requirement in adult diabetic patients

Los autoanticuerpos anti glutamano decarboxilasa y anti insulina/proinsulina(GADA e IAA/PAA)tienen valor predictivo del requerimiento insulínico en pacientes diabéticos con comienzo clínico en edad adulta. En este trabajo se desarrolló un nuevo trazador 35 S-Proinsulina y se lo utilizó en un ensayo de unión de radioligando combinado con el trazador 35 S-GAD para la determinación simultñanea de GADA y PAA (RBA-combi). Se aplico el ensayo a 85 pacientes infanto-juveniles con diabetes tipo 1, a 98 pacientes con comienzo clínico en edad adulta y a 53 controles normales. El 100% de los pacientes con diabetes tipo 1 con al menos un marcador positivo, y el 17,7% de los que eran negativos para ambos marcadores, fueron positivos por el RBA-combi(RBA-comi+). El 100% de los pacientes adultos PAA+(GADA+ o GADA-) el 92,3% de los pacientes GADA+/PAA-, y el 1,3% de los pacientes GADA-/PAA-, fueron RBA-combi+. El 88.9% de los pacientes adultos RBA-combi+evolucionaron a requerimiento insulínico. En conclusión, el nuevo trazador 35 S-Proinsulina fue apto para su utilización en el método radiométrico combinado, permitiendo la detección simultánea de los marcadores GADA Y PAA. El RBA- combi es una herramienta valiosa para detectar procesos autoinmunes asociados a un futuro requerimiento insulínico, en pacientes diabéticos adultos.

Expresión de receptores de membrana plaquetaria en el síndrome urémico hemolítico / Expression of platelet membrane glycoproteins in hemolytic uremic syndrome

El objetivo de este trabajo fue el estudio de receptores de membrana plaquetaria en el Síndrome Urémico Hemolítico. Se estudiaron 20 niños de 17,3 ñ 5,2 meses de edad con diagnóstico clínico y de laboratorio de dicha enfermedad. En muestras obtenidas a los 15 días, al mes y a los dos meses del comienzo de la enfermedad se aislaron las plaquetas de los pacientes y también de controles normales de una población etaria comparable. Se solubilizaron las glicoproteínas (GP) de membranas y se procedió al análisis de las mismas por Western-blot. Se utilizaron anticuerpos monoclonales específicos. Se observaron niveles bajos de GPIb y GPlIbIIIa en la primera muestra. La GPIb, luego, aumentó rápidamente normalizándose al mes de evolución. En cambio, el complejo GPlIbIIIa, si bien aumentó ligeramente en la tercera muestra, se mantuvo francamente disminuido (5-25 por ciento). La GPlIb presentó niveles bajos no alcanzando la normalidad dentro del período estudiado, mientras que la GPIIIa mantuvo un nivel estable cercano al límite inferior normal (25-50 por ciento). De los resultados obtenidos se puede concluir que la síntesis de GP no estaría alterada ya que la GPIb se normaliza rápidamente; la integrina GPlIbIIIa es el principal receptor afectado. Esta alteración puede deberse a algún bloqueo por anticuerpos inespecíficos o por péptidos de secuencia RGD o bien a una alteración estructural de la GPlIb por proteólisis inespecífica

Specific insulin and proinsulin secretion in glucokinase-deficient individuals

Glucokinase (GCK) is an enzyme that regulates insulin secretion, keeping glucose levels within a narrow range. Mutations in the glucokinase gene cause a rare form of diabetes called maturity-onset diabetes of the young (MODY). An early onset (less than 25 years), autosomal dominant inheritance and low insulin secretion stimulated by glucose characterize MODY patients. Specific insulin and proinsulin were measured in serum by immunofluorimetric assays (IFMA) during a 75-g oral glucose tolerance test (OGTT). Two kindreds (SA and LZ) were studied and compared to non-diabetic unrelated individuals (control group 1) matched for age and body mass index (BMI). In one kindred, some of these subjects were also obese (BMI>26 kg/m2), and other family members also presented with obesity and/or late-onset NIDDM. The MODY patients were also compared to a group of five of their first-degree relatives with obesity and/or late-onset NIDDM. The proinsulin profile was different in members of the two MODY kindreds. Fasting proinsulin and the proinsulin/insulin ratio were similar in MODY members of kindred LZ and subjects from control group 1, but were significantly lower than in MODY members of kindred SA (P<0.02 and P<0.01, for proinsulin and proinsulin/insulin ratio, respectively). Moreover, MODY members of family SA had higher levels of proinsulin and proinsulin/insulin ratio, although not significantly different, when compared to their first-degree relatives and to subjects from control group 2. In conclusion, we observed variable degrees of proinsulin levels and proinsulin/insulin ratio in MODY members of two different kindreds. The higher values of these parameters found in MODY and non-MODY members of kindred SA is probably related to the obesity and late-onset NIDDM background present in this family.

Specific insulin and proinsulin in normal glucose tolerant first-degree relatives of NIDDM patients

In order to identify early abnormalities in non-insulin-dependent diabetes mellitus (NIDDM) we determined insulin (using an assay that does not cross-react with proinsulin) and proinsulin concentrations. The proinsulin/insulin ratio was used as an indicator of abnormal ß-cell function. The ratio of the first 30-min increase in insulin to glucose concentrations following the oral glucose tolerance test (OGTT; I30-0/G30-0) was taken as an indicator of insulin secretion. Insulin resistance (R) was evaluated by the homeostasis model assessment (HOMA) method. True insulin and proinsulin were measured during a 75-g OGTT in 35 individuals: 20 with normal glucose tolerance (NGT) and without diabetes among their first-degree relatives (FDR) served as controls, and 15 with NGT who were FDR of patients with NIDDM. The FDR group presented higher insulin (414 pmol/l vs 195 pmol/l; P = 0.04) and proinsulin levels (19.6 pmol/l vs 12.3 pmol/l; P = 0.03) post-glucose load than the control group. When these groups were stratified according to BMI, the obese FDR (N = 8) showed higher fasting and post-glucose insulin levels than the obese NGT (N = 9) (fasting: 64.8 pmol/l vs 7.8 pmol/l; P = 0.04, and 60 min post-glucose: 480.6 pmol/l vs 192 pmol/l; P = 0.01). Also, values for HOMA (R) were higher in the obese FDR compared to obese NGT (2.53 vs 0.30; P = 0.075). These results show that FDR of NIDDM patients have true hyperinsulinemia (which is not a consequence of cross-reactivity with proinsulin) and hyperproinsulinemia and no dysfunction of a qualitative nature in ß-cells

Low levels of sex hormone-binding globulin and hyperproinsulinemia as markers of increased pancreatic Beta-cell demand in men

Low levels of sex hormone-binding globulin (SHBG) are considered to be an indirect index of hyperinsulinemia, predicting the later onset of diabetes mellitus type 2. In the insulin resistance state and in the presence of an increased pancreatic ß-cell demand (e.g. obesity) both absolute and relative increases in proinsulin secretion occur. In the present study we investigated the correlation between SHBG and pancreatic ß-cell secretion in men with different body compositions. Eighteen young men (30.0 ± 2.4 years) with normal glucose tolerance and body mass indexes (BMI) ranging from 22.6 to 43.2 kg/m2 were submitted to an oral glucose tolerance test (75 g) and baseline and 120-min blood samples were used to determine insulin, proinsulin and C-peptide by specific immunoassays. Baseline SHBG values were significantly correlated with baseline insulin (r = -0.58, P<0.05), proinsulin (r = -0.47, P<0.05), C-peptide (r = -0.55, P<0.05) and also with proinsulin at 120 min after glucose load (r = -0.58, P<0.05). Stepwise regression analysis revealed that proinsulin values at 120 min were the strongest predictor of SHBG (r = -0.58, P<0.05). When subjects were divided into obese (BMI >28 kg/m2, N = 8) and nonobese (BMI £25 kg/m2, N = 10) groups, significantly lower levels of SHBG were found in the obese subjects. The obese group had significantly higher baseline proinsulin, C-peptide and 120-min proinsulin and insulin levels. For the first time using a specific assay for insulin determination, a strong inverse correlation between insulinemia and SHBG levels was confirmed. The finding of a strong negative correlation between SHBG levels and pancreatic ß-cell secretion, mainly for the 120-min post-glucose load proinsulin levels, reinforces the concept that low SHBG levels are a suitable marker of increased pancreatic ß-cell demand

Etiopatogenia do diabetes mellitus do tipo 2 / Etiopathogeny of type 2 diabetes mellitus

O diabetes mellitus do tipo 2, na sua forma habitual, de início tardio, é caracterizado por resistência e deficiência insulínica, que contribuem de maneiras diferentes para a patogenia da doença. A alteração funcional da célula beta se manifesta precocemente, com aumento da relação pró-insulina/insulina. Graus variados de deficiência insulínica (absoluta ou relativa) São observados nos vários grupos étnicos estudados (caucasianos, mexicano-americanos, nipo-americanos, nipo-brasileiros, índios americanos, afro-americanos e asiáticos) onde a grande prevalência do diabetes do tipo 2 está associada à maior ingestão calórica e à redução da atividade física. A obesidade resultante tem um padrão central, visceral-abdominal. Nestas populações, a resistência insulínica é fator inicial e predominante, estanto associada à hiperinsulinemia, e à dislipidemia e ao maior risco de acometimento por doenças cardiovasculares. O papel da obesidade e dos ácidos graxos livres na produção hepática de glicose e na resistência à insulina são abordados, assim como o diagnóstico diferencial com outros tipos de diabetes.

Leptinemia e secreçäo pancreática em homens / Pancreatic leptin and secretion in men

Na literatura, crescem as evidências de um possível envolvimento da insulina como reguladora da síntese adipocítica de leptina. Com o objetivo de estudar as possíveis corelações entre a leptina com a secreção das células beta-pancreáticas, em homens, estudou-se 19 indivíduos jovens (idades entre 25-33 anos), saudáveis, com tolerância normal à glicose. Os indivíduos foram avaliados por vários parâmetros de composição corporal como peso. IMC, medida da relação entre a cintura e o quadril e o percentual de gordura corporal (densitometria, LUNAR-DPX). Realizou-se dosagens com o emprego de ensaios específicos de glicose, insulina, pró-insulina, peptídeo C e leptina basais e 120 min após sobrecarga com 75 g de glicose. Encontrou-se correlações (teste de Spearman) positivas entre os níveis de leptina com todas as medidas antropométricas (todas com p < 0,0001). A leptinemia correlacionou-se positivamente com os níveis de insulina basal (r = 0,67; p < 0,05), insulina 120 min (r = 0,76; p < 0,0001), pró-insulina basal (r = 0,68; p < 0,0005), pró-insulina 120 min (r = 0,71; p < 0,0001), peptídeo C basal (r = 0,66; p < 0,005) e peptídeo C 120 min (r = 0,66; p < 0,005). Em resumo, encontramos uma associação entre os níveis circulantes de leptina com os vários produtos de secreção das células b-pancreáticas, em homens, reforçando o conceito da existência de um eixo hormonal entre o adipócito e as ilhotas pancreáticas.

Estudo do gene da glicoquinase em famílias brasileiras com suspeita de diabete melito da maturidade no jovem e estudo da secreçäo de insulina e pró-insulina nos indivíduos afetados / Study of the gene of glicoquinase in Brazilian families with suspicion of diabetes mellitus of the maturity in the young and study of secretions insulin and pro-insulin in the affected individuos

O diabete melito da maturidade no jovem (DMMJ) é caracterizado pelo seu aparecimento precoce (25 anos) e herança genética autossômica dominante. DMMJ é uma síndrome geneticamente heterogênea, sendo que mutaçöes do gene da enzima glucokinase (GCK) säo a sua causa mais freqüente, na França. Através da técnica do polimorfismo de conformaçäo de fitas simples (SSCP) näo radioativa foi realizado o estudo do gene da GCK em 17 famílias com suspeita clínica de DMMJ. As bandas com migraçäo anômala observadas foram seqüenciadas. Foram encontradas mutaçöes nos exons 7 e 9 do gene da GCK em duas famílias (Q e P), respectivamente, e uma alteraçäo no exon 1 na família J. Neste caso, a filha do propósito apresentou uma variaçäo homozigótica em dois exons (1a e 1b), que sugere um polimorfismo, uma vez que a ausência da funçäo da GCK é aparentemente incompatível com a sobrevivência. A família Q apresentou uma mutaçäo no exon 7, transformando uma glutamina em códon de parada na posiçäo 248, que foi detectada no propósito e em três filhos. Os demais membros da família que näo eram diabéticos, inclusive os pais do propósito, näo apresentaram a mutaçäo. O estudo de impressöes digitais de DNA confirmou a paternidade, sendo este indivíduo a primeira mutaçäo desta família. A família P apresentou uma mutaçäo no exon 9, transformando de valina para um códon de parada na posiçäo 401. A alteraçäo foi dectada no propósito, no seu filho, e em 5 de seus irmäoa que apresentavam hiperglicemia. A mutaçäo näo foi encontrada na mäe, na tia e na irmä do propósito, todas com obesidade e diabete näo insulino-dependente de desenvolvimento tardio. O pai do propósito, já falecido (portador obrigatório) näo foi testado. Teste oral de tolerância à glicose (TTG) foi realizado nas famílias com mutaçäo na GCK para estudo da secreçäo de insulina e pró-insulina, utilizando para isto, ensaios específicos. Verificamos que a secreçäo de insulina encontrava-se diminuida nos indivíduos GCK-mutantes em ambas as famílias. A secreçäo de pró-insulina encontrava-se dentro dos valores da normalidade nos indivíduos da família Q e aumentada nos indíduos da família P. Com três indivíduos desta última família apresentavam diabete sem mutaçäo para o gene da GCK, isto sugeria a presença de outro gene diabetogênico nesta família. A pró-insulina esteve positivamente correlacionada à obesidade (r=o,66; p<0,0001) e foi a variável independente que mais se associou ao índice da massa corporal...(au)

Utilizaçäo da pró-insulina no diagnóstico de insulinomas: caso 01/96 (RG 921.996) e caso 02/96 (RG 891.498) - Hospital Säo Paulo/Universidade Federal de Säo Paulo/EPM / Utilization of proinsulin in the diagnosis of the insulinomas: case 01/96 (RG 921.996) and case 02/96 (RG 891.498) - Hospital Säo Paulo/Universidade Federal de Säo Paulo/EPM

Insulinomas sao tumores das células beta pancreáticas, caracterizados pela secreçao excessiva de insulina e, ocasionalmente, de outros peptídeos pancreáticos levando, na maioria dos casos, à hipoglicemia. Entretanto, o diagnóstico nao se baseia apenas no encontro de hipoglicemia laboratorial e elevaçao dos níveis de insulina, já que também ocorre aumento do peptídeo C e da pró-insulina. Com o advento das técnicas imunofluorimétricas (IFMA), utilizando-se anticorpos monocionais e técnicas de DNA recombinante, métodos sensíveis e específicos foram desenvolvidos para a dosagem da pró-insulina. Neste trabalho, descrevemos dois casos de insulinoma (um benigno e outro maligno) que apresentavam no diagnóstico níveis muito elevados de pró-insulina (IFMA) e elevaçao da relaçao pró-insulina/insulina (IFMA), demonstrando que nesta patologia a pró-insulina, ao contrário do que ocorre com a insulina, pode estar elevada mesmo fora dos episódios de hipoglicemia. Para a dosagem de insulina utilizamos também, um método específico imunofluorométrico (IFMA) que mede cerca de 50 por cento da insulina dosada por radioimunoensaio (RIE), e por esta razao consideramos como normal a relaçao insulina (IFMA)/glicemia < O, 15. Os dados sugerem que a dosagem de pró-insulina parece ser um método mais sensível, quando comparado com a dosagem de insulina, no diagnóstico de insulinoma.

A specific and highly sensitive time-resolved fluoroimmunoassay for human proinsulin

We describe a time-resolved fluoroimmunoassay specific for human proinsulin using a combination of two high-affinity monoclonal antibodies, one against insulin and the other specific for intact proinsulin and for split 65-66 and des 64-65 proinsulin forms. The assay employs only 200 micro liters of serum, with a detection limit of 0.1 pmol/l. The intra-assay variation coefficient was less than 3 percent between 3 and 1000 pmol/l. There was 0 percent cross-reaction with insulin, C-peptide, split 32-33 and des 31-32 proinsulin. Serum concentration of proinsulin was analyzed in 50 subjects during an oral glucose tolerance test (10 non-obese controls, 10 obese controls, 10 subjects with impaired glucose tolerance, 10 patients with type II diabetes meIlitus (DM) and fasting blood glucose (FBG) <140 mg/dl, and 10 patients with type II DM and FBG >150 mg/dl). Mean fasting serum proinsulin levels measured by this assay in non-obese controls (0.84 +/-0.90 pmol/l; 0.1-2.4 pmol/l) were lower than the results reported by her investigators. There was an increase of proinsulin related to obesity and increased glucose levels, suggesting that proinsulin levels increase with insulin resistance.

A model of complete random molecular evolution by recurrent mutation

A model for random molecular evolution based on recurrent mutation is proposed. Recurrent mutation replaces completely any original base in a nucleotidic site. This occurs if more than four times the number of reproductive cycles equal to the reciprocal of the mutation rate happen; no matter the population size, the number of nucleotides a genome has, or the taxa at which it belongs. The main results are: i) the expected distribution of DNA bases in a site is an isotetranomial distribution, where Adenine (A), Guanine (G), Cytosine (C) and Thymine (T) occur with probability equal to 0.25; ii) the distribution of bases in a site is independent from the distribution of bases in other sites. Several expected consequences that can be contrasted with actual data are generated. Species or operational taxonomic units (OTUs) that evolved in big populations should present distances equal to zero and similarities equal to one. OTUs evolving in small populations should present distances equal to 3/4 and similarities equal to 1/4. Thus, random molecular evolution by recurrent mutation cannot yield a tree at all. The only possible tree is that produced by random fluctuations of distances according to their variances (stochastic tree). Some consequences of the model on the expected primary structure of proteins are also analyzed. There are sufficient generations for any DNA segment evolving apart during the last four hundred million years, to reach those expected base distributions

Influência da obesidade e da glicemia nos níveis de pró-insulina durante o teste oral de tolerância à glicose / Influence of the obesity and the blood glucose in the proinsulin levels during the glucose tolerance oral test

A insulina provém da conversao da pró-insulina intacta que é submetida a uma série de clivagens insimáticas até a remoçao do peptídeo C. Neste trabalho determinamos os níveis séricos de pró-insulina por ensaio imunofluorimétrico específico durante a realizaçao de um teste oral de tolerância à glicose (TOTG) em cinco grupos de dez indivíduos: I) indivíduos normais com índice de massa corporal (IMC) < 25 Kg/m2, II) indivíduos com sobrepeso, III) tolerância diminuída à glicose (TDG) IV) diabetes mellítus tipo 2 (DM II) com glicemia de jejum < 140 mg/dl e, V) DM II com glicemia de jejum > 140 mg/dl. Os resultados mostraram um aumento significante da pró-insulina de jejum nos grupos II, III, IV e V em comparaçao ao grupo I (p<0,002). As concentraçoes de pró-insulina durante a realizaçao do TOTG, avaliado pela área sob a curva (ASC), foram significantemente maiores nos grupos II, III e V em comparaçao grupo I (p<0,004). Nos grupos III,IV e V verificamos uma correlaçao positiva entre a glicemia de jejum e pró-insulina de jejum (r=0,53; p=0,002). As concentraçoes crescentes de pró-insulina com a obesidade e a piora da tolerância à glicose sugerem que a sua dosagem possa ser um indicador precoce de disfunçao da célula beta.

Transferencia de insulinas en 198 pacientes de seis países latinoamericanos / Transference of insulins in 198 patients of six Latinoamerican countries

Es un estudio multicéntrico, comparativo, ciego, aleatorio y prospectivo que evaluó la eficacia y seguridad de la transferencia de insulinas de origen animal a insulina humana biosintética en 198 pacientes de seis países latinoamericanos. Todos los pacientes recibían insulinas de origen animal al menos dos meses antes de su inclusión al estudio. Este tuvo una duración de seis semanas, con evaluaciones al inicio, y a las dos y seis semanas. La eficacia se determinó por cambios inicial-final en la glucemia de ayunas y hemoglobina glucosilada, y la seguridad por la aparición de efectos adversos. De los 198 pacientes, 94 se asignaron al grupo de insulina bovina y 104 al de humana. Al ingreso, ambos grupos fueron similares en sus características. El único cambio al final del estudio fue una disminución en la glucemia en ayunas en el grupo de insulina humana (bovina 212 ñ 95.3 vs 193 ñ 78.8 mg/dL, p= 0.18; humana 198 ñ 86.8 vs 169 ñ 71.7, p= 0.025). El resto de los parámetros no tuvieron modificaciones estadísticamente significativas, aunque la tendencia fue hacia la mejoría en las cifras de hemoglobina glucosilada en ambos grupos. Se presentaron episodios de hipoglucemia leve con mayor frecuencia en el grupo de insulina humana, y hubo un episodio de hipoglucemia grave sin síntomas premonitorios con insulina humana. Concluimos que la transferencia de insulina de origen animal a insulina humana biosintética, en pacientes diabéticos insulinorrequirientes latinoamericanos, es eficaz y razonablemente segura (con ajuste de las dosis de insulina al hacer el cambio)

Comparison of the determination of insulin by a monoclonal antibody-based immunofluorometric assay and by radioimmunoassay

This paper describes an immunofluorometric assay (IFMA) for insulin and compares it with the classical radioimmunoassay (RIA). Monoclonal antibodies against insulin were produced and used to develop the IFMA. One, immobilized on microtiter plates, was used for capture, the other, labelled with Europium, was used as tracer antibody. The IFMA presentes sensitivity to an amount of insulin of 3 pmol/1 and acceptable valueus for intra- and interassay error. The IFMA presented superimposable curves for human insulin, Arg65/Gly66-split proinsulin and des-Lys64, Arg65, and no cross-reactivity with human proinsulin, Arg32/Glu33 -split and des-Arg31, Arg32. The RIA showed 100 percent cross-reactivity with human proinsulin, 90 pecent with des-Arg31, Arg32 and 170 percent with des-Lys64, Arg65. The assay were used to measure insulin in 300 serum samples from 50 subjects submitted to an oral glucose tolerance test (OGTT). Twenty were normal, 10 had impaired glucose tolerance and 20 non-insulin-dependent diabetes mellitus. The mean value (ñ SEM) obtained bu IFMA was 166.7 ñ 12.1 pmol/1 and the mean value obtained by RIA was 339.6 ñ 18.6, with a correlacion of r = 0.80 (P0.01). Comparison of basal insulin levels of the different groups of individuals using IFMA or RIA led to the same conclusions. The area under curve showed statistically significant differences only for the comparison between normal lean subjects and individuals with impaired glucose tolerance, when measured by RIA...(au)