CMPD1 inhibited human gastric cancer cell proliferation by inducing apoptosis and G2/M cell cycle arrest

BACKGROUND: Gastric cancer occupies the fourth highest morbidity rate of cancers worldwide. Clinical therapies of gastric cancer remain limited because of uncertainty of mechanisms and shortness of effective medicine. Thus, new drug candidates for gastric cancer treatment is urgently needed. RESULTS: In this study, CMPD1 as a wildly used MK2 phosphorylation inhibitor was employed to find its impact on gastric cancer cell proliferation, apoptosis and cell cycle using colony formation assay and flow cytometry analysis. Along with its anti-proliferation effect on gastric cancer cell line MKN-45 and SGC7901, CMPD1 also induced massive apoptosis and significant G2/M phase arrest in a time-dependent and dose-dependent manner in MKN-45 cells respectively. Furthermore, Western blot confirmed that the expression of anti-apoptotic proteins Bcl-2 was decreased while BAX, cytochrome c release and cleaved PARP were increased. In addition, oncogene c-Myc was downregulated in response to CMPD1 treatment. CONCLUSIONS: Our results demonstrated that CMPD1 has anti-tumor effect on human gastric cancer cell line MKN- 45 possibly via downregulating oncogene c-Myc expression and CMPD1 could be applied as a potential candidate for treating gastric malignancy. To the best of our knowledge, it is the first report of anti-tumor effect of CMPD-1 on human gastric cancer cells.

Morphological, molecular characterization and taxonomic status of Triplophysa marmorata and Triplophysa kashmirensis (Cypriniformes: Nemacheilidae) from Kashmir valley, India

AbstractIn India the distribution of genus Triplophysa has been reported only in the upper drainage of the Indus River in Jammu and Kashmir and Lahul and Spiti area of Himachal Pradesh. There is no study on the taxonomic characterization of this genus from Kashmir Himalaya. Therefore the present study was aimed to characterize two important fish species Triplophysa marmorata and T. kashmirensis from Kashmir valley, by using morphometric and molecular tools. It is difficult to discriminate these two species due to the poor quality of original descriptions, and the lack of good reviews. Keeping this in view, a morphometric and molecular study was conducted. Morphometric data were analyzed by using univariate analysis of variance (ANOvA) and multivariate analyses (Principal component analysis) and mtDNA marker Cytochrome oxidase 1 was used for molecular support. Altogether, 22 morphometric characters were used and 15 characters were found significantly variable (P < 0.05). First two components of principal component analysis (PCA) i.e. PC1 and PC2 grouped these two species into separate clusters. The Cytochrome oxidase 1 analysis showed that the mean intraspecific nucleotide divergence (K2P) was 0.001 and interspecific nucleotide divergence was 0.007. Despite having low K2P divergence, these two species got separated into two distinct clades in both Neighbour joining (NJ) and Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean (UPGMA) tree building methods. But the pattern of clade formation showed that these species were recently radiated from each other and may have the same ancestor. Furthermore, these two species were found closer to Nemacheilidae than to Balitoridae family in the phylogenetic analysis. The molecular divergence between these species was also supported by variance in morphometric data. This work may build the base for the revision of taxonomic identity of these two important fishes of genus Triplophysa. The present investigation formulated that, based on morphological and mtDNA COI sequences analysis, these two taxonomic Triplophysa species should be considered as valid. The results may further assist to enhance the knowledge of the ichthyologists in understanding the ichthyofauna of Kashmir valley and will help them in planning strategies for conservation and management of these less studied small indigenous species along their natural range of distribution. Rev. Biol. Trop. 64 (2): 473-482. Epub 2016 June 01.

ResumenEn la India, la distribución del género Triplophysa se ha reportado solo en la parte superior del río Indus en Jammu, Kashmir, Lahul y Spiti en el área de Himachal Pradesh. No existen publicaciones acerca de la caracterización taxonómica de este género en Kashmir Himalaya. Por lo tanto, en este estudio se caracterizaron dos especies del valle de Kashmir: Triplophysa marmorata y T. kashmirensi, mediante el uso de herramientas morfométricas y moleculares. Es difícil diferenciar entre estas dos species debido a las vagas descripciones originales y a la falta de buenas revisiones. Debido a esto se realizó un estudio morfométrico y molecular. Los datos morfométricos se analizaron mediante un ANOvA y un análisis de componentes principales y el marcador del gen de la citocromo oxidasa 1 se usó para apoyo molecular. En general, se usaron 22 caracteres morfométricos y 15 fueron significativos (P < 0.05). Los dos primeros componentes del análisis de components principales (PCA), PC1 y PC2, agruparon estas dos especies en clusters separados. El análisis con citocromo oxidasa 1 mostró que el promedio de divergencia del nucleótido intraespecífico (K2P) fue de 0.001 y la divergencia del nucleótido intraespecífico fue de 0.007. A pesar de la baja divergencia de K2P, estas dos species se separan en dos clados diferentes tanto por el método NJ como por el método UPGMA. Sin embargo, el patrón de formación del clado mostró que estas species radiaron recientemente una de la otra y que podrían tener un ancestro en común. Además, en el análisis filogenético estas dos especies se encontraron más cerca de la familia Nemacheilidae que de Balitoridae. La divergencia molecular entre estas dos especies también fue respaldada por la varianza en los datos morfométricos. Este estudio puede establecer la base para una revisión taxonómica de estos dos importantes peces del género Triplophysa. Esta investigación postuló que, basada en análisis morfológicos y de secuencia de ADNm COI, estas dos especies taxonómicas de Triplophysa deben considerarse válidas. Los resultados pueden contribuir a mejorar el conocimiento de los ictiólogos en la comprensión de la ictiofauna del valle de Kashmir y les ayudará a planear estrategias de conservación y manejo de estas dos pequeñas especies indígenas y poco estudiadas en su rango de distribución natural.

Filogeografia de Triatoma sordida (Stål, 1859) nas ecorregiões do cerrado, caatinga e chaco / Phylogeography of Triatoma sordida (Stål, 1859) of the cerrado ecoregion, savanna and chaco

Triatoma sordida é um triatomíneo nativo de regiões de clima tipicamente seco e dealtas temperaturas. Apresenta ampla distribuição, ocorrendo no Brasil, Argentina,Paraguai e Bolívia. É um importante vetor secundário da doença de Chagas sendofrequentemente capturado em ecótopos artificiais próximos a habitações humanas,como galinheiros, currais e estábulos. Por ser uma espécie autóctone e apresentarpopulações silvestres e peridomésticas que podem ocasionalmente recolonizar áreaspreviamente tratadas, principalmente após a eliminação dos vetores de maiorimportância epidemiológica, estratégias tradicionais de controle vetorial, como o usode inseticidas residuais, podem ser ineficazes para eliminação de T. sordida. Por estasrazões, torna-se necessário o desenvolvimento de novas medidas de vigilância econtrole destinadas especificamente a este vetor. Estudos moleculares têmdemonstrado alta diversidade genética entre populações de T. sordida, sugerindo queesta espécie representa na verdade um complexo de espécies crípticas que podemapresentar diferenças quanto à relevância epidemiológica. Deste modo, para aelaboração e aplicação de melhores estratégias de controle contra esse vetor éfundamental que uma correta identificação taxonômica de T. sordida seja realizada,além da delimitação precisa de sua distribuição geográfica. Um estudo filogeográficode espécimes de T. sordida coletados em nove localidades no Brasil e uma naArgentina foi realizado utilizando um fragmento de 510 pb do gene mitocondrialcitocromo b (cyt b). As análises filogenéticas revelaram que as populações de T.sordida amostradas nesse estudo formam um grupo monofilético, filogeneticamentedistinto de populações de T. sordida da Bolívia (T. sordida grupos 1 e 2).Interessantemente, análise das amostras de Rochedo em Mato Grosso do Sul sugerema ocorrência de um processo recente de especiação...

Triatoma sordida is a triatomine species native to regions of typically dry weather andhigh temperatures. It presents a wide distribution, occurring in Brazil, Argentina,Paraguay and Bolivia. It is an important secondary vector for Chagas disease beingoften captured in artificial ecotopes close to human dwellings, such as chicken coops,corrals and stables. Because it is an autochthonous species with sylvatic andperidomestic populations that can occasionally recolonize previously treated areas(mainly after the elimination of vectors of greater epidemiological importance)traditional vector control strategies, such as the use of residual insecticides, may beineffective against T. sordida. For these reasons, the development of new measures ofsurveillance and control intended specifically for this vector are required. Molecularstudies have shown high genetic diversity among T. sordida populations, suggestingthat this species represents, actually, a cryptic species complex that may conceal unitswith differences in epidemiological relevance. Thereby, to elaborate better controlstrategies against this vector it is important to determine the taxonomic status of T.sordida populations and the limits of their geographic distribution. A phylogeographicstudy of T. sordida specimens collected from nine locations in Brazil and one inArgentina was carried out using a fragment of 510pb of the mitochondrial genecytochrome b (cyt b). The phylogenetic analyses revealed that the T. sordidapopulations sampled consist in a monophyletic group distinct of T. sordida populationsof Bolivia (T. sordida groups 1 and 2). Interestingly, the analysis of Mato Grosso do Sulsamples suggests the occurrence of a recent speciation process. Results of populationanalyses revealed low levels of genic flow among the studied populations (Fst valuesbetween 0.22 and 1.00)...

Estudos populacionais e filogenéticos de Oligoryzomys nigripes e o status taxonômico de Oligoryzomys utiaritensis (Rodentia, Sigmodontinae) / Population studies and the phylogenetic and taxonomic status Oligoryzomys nigripes of Oligoryzomys utiaritensis (Rodentia, Sigmodontinae)

Os roedores neotropicais do gênero Oligoryzomys possuem ampla distribuição geográfica, distribuindo-se por toda América Latina. No Brasil, existem pelo menos 12 espécies, com representantes em todos os domínios morfoclimáticos. Entre essas espécies, Oligoryzomys nigripes possui a distribuição mais ampla, ocorrendo por toda a Mata Atlântica, do Rio Grande do Norte ao Rio Grande do Sul (incluindo regiões adjacentes do Paraguai e Argentina), nos Pampas gaúchos e uruguaios e regiões de Cerrado em São Paulo e Goiás. Membros do gênero Oligoryzomys desempenham papel fundamental na dispersão e transmissão de hantaviroses, e estudos populacionais e filogenéticos de espécies de mamíferos reservatórios ajudam a entender a distribuição e a dinâmica dos ciclos de transmissão da doença. Com esse trabalho, pretendemos estudar a diversidade genética de Oligoryzomys, através de filogenias moleculares com marcadores mitocondriais (genes citocromo b e citocromo oxidase subunidade I) e um marcador nuclear (íntron 7 do gene beta-fibrinogênio); analisar a diversidade intraespecífica de O. nigripes, através de análises populacionais e filogeográficas de subpopulações de Goiás, Espírito Santo, Rio de Janeiro, Minas Gerais, São Paulo, Paraná, Santa Catarina, Rio Grande do Sul e Paraguai, com os dois marcadores mitocondriais citados acima.revisar o status taxônomico de O. utiaritensis, considerado atualmente sinônimo júnior de O. nigripes, através de análises filogenéticas e morfométricas; e investigar se existem inserções nucleares de genes mitocondriais em espécies de Oligoryzomys, um estudo importante levando-se em consideração que a maior parte dos estudos evolutivos desse grupo incluem o sequenciamento de genes mitocondriais. Os resultados mostram que Oligoryzomys é um gênero monofilético, contendo pelo menos quatro grupos de espécies. A diversidade de Oligoryzomys é subestimada, e existem pelo menos quatro espécies não descritas, além da presença de espécies crípticas. Oligoryzomys diferenciou-se dos outros orizomíneos no final do Mioceno e início do Plioceno, há aproximadamente 6,5 milhões de anos, sendo a espécie O. microtis a espécie mais antiga (2,5 milhões de anos) e O. destructor a espécie mais recente (23 mil anos). As análises populacionais indicam uma estruturação genética incipiente entre subpopulações de O. nigripes do Sudeste e Sul do Brasil, mas a diferenciação entre as subpopulações dentro dessas regiões é pequena. A área de diferenciação original de O. nigripes é a região do sul.do Brasil, e pelo menos duas frentes de colonização ocorreram: uma em direção ao Paraguai e outra em direção ao centro e sudeste do Brasil. Oligoryzomys utiaritensis é uma espécie válida, distinta de O. nigripes através da morfologia, morfometria, filogenia molecular e citogenética. Existem inserções de sequências mitocondriais no genoma nuclear de pelo menos cinco espécies de Oligoryzomys. Estudos evolutivos devem vir acompanhados de outros tipos de marcadores moleculares, além de informações morfológicas, geográficas e citogenéticas, para um melhor entendimento das relações complexas entre as espécies de Oligoryzomys.

Perfil de sensibilidad de Hep-G2 como modelo para evaluación de actividad citotóxica dexenobióticos bioactivados via CYP450 / Sensitivility profile Hep-G2 as a model of cytotoxic activity determination of bioactivated xenobiotics via CYP450

Para establecer la acción anticancerígena se han propuesto numerosas metodologías, principalmente enfocadas en la valoración de la citotoxicidad in vitro sobre líneas celulares neoplásicas derivadas de diferentes tipos de cáncer humano; sin embargo, gran parte de estas líneas celulares presentan el inconveniente de ser limitadas metabólicamente y, por lo tanto, pueden no resultar apropiadas para establecer la citotoxicidad de potenciales profármacos, al mostrar falsos negativos. La línea celular Hep-G2 se emplea en la detección de moléculas que requieran activación metabólica para ejercer una actividad biológica, por ser de origen hepático y por exhibir actividad de varias enzimas de la fase I y II, que juegan un importante rol en la activación y detoxificación de xenobióticos. Hep-G2 es utilizada como modelo para encontrar actividad citotóxica producida por 2-amino-1-metil-6-fenilimidazol[4,5-b]piridina (PhIP) y ciclofosfamida, en presencia o ausencia de agentes inductores. Para este análisis se mide indirectamente el número de células viables mediante los ensayos de reducción del MTT y de tinción con resazurina. Adicionalmente se evalúa la posibilidad de emplear sistemas de co-cultivos con otras líneas celulares para fortalecer la sensibilidad del método. Se observa una limitada citotoxicidad de PhIP y ciclofosfamida, por lo cual se establece un sistema de cocultivos, en donde las respuestas son similares a las obtenidas con cada línea celular independiente. Los resultados permiten proponer que Hep-G2, pretratada con algunos agentes inductores, muestra, aunque limitadamente, una sensibilidad por PhIP, similar a lo propuesto por diferentes autores.

Estudo da proteína P450 óxido-redutase e dos citocromos hepáticos 2C19 e 3A4 como possíveis moduladores do fenótipo da deficiência da 21-hidroxilase / Study of P450 oxidoreductase protein and hepatic cytochromes 2C19 and 3A4 as a potential modulatory factors in 21-hydroxylase deficiency phenotype

A deficiência da 21-hidroxilase é uma doença genética comum, causada por mutações no gene CYP21A2, que codifica a enzima 21-hidroxilase (P450c21). A deficiência da 21-hidroxilase afeta a síntese de cortisol e aldosterona e promove acúmulo de precursores, que são desviados para a síntese de andrógenos. Observa-se três principais fenótipos: a forma clássica virilizante simples (VS), na qual as meninas nascem com virilização da genitália externa e ambos os sexos apresentam virilização pós-natal; a forma perdedora de sal (PS), na qual além da virilização, ambos os sexos apresentam crise de perda de sal no período neonatal; e a forma não clássica (NC), na qual os sintomas de hiperandrogenismo iniciam-se mais tardiamente, na infância, adolescência ou idade adulta. Os estudos in vitro das mutações do CYP21A2 demonstram que existe uma boa correlação do grau de comprometimento da atividade enzimática conferido pelo genótipo com o fenótipo. Entretanto, existem algumas divergências como: pacientes que apresentam quadro clínico e hormonal de forma não clássica, nos quais mutações não são identificadas em um ou em ambos os alelos do CYP21A2, e pacientes que apresentam o fenótipo mais leve do que o predito pelo genótipo. Essas divergências sugerem a presença de fatores moduladores do fenótipo na deficiência da 21-hidroxilase. A primeira hipótese foi de que houvesse mutações no gene P450 óxido-redutase (POR), que codifica uma flavoproteína que doa elétrons para as enzimas microssomais P450, inclusive a P450c21, passo fundamental para a atividade enzimática das mesmas. A segunda hipótese foi de que outras enzimas P450, que não a P450c21, tivessem a capacidade de realizar a 21-hidroxilação extra-adrenal da progesterona e 17OH-progesterona (17OHP), sendo então capazes de modular o fenótipo da perda de sal e/ou virilização. Os citocromos P450 hepáticos CYP2C19 e CYP3A4, responsáveis pelo metabolismo de drogas, são capazes de realizar 21-hidroxilação da progesterona...

Adrenal 21-hydroxylase deficiency is a common genetic disorder, caused by mutations in the CYP21A2 gene, which encodes the 21-hydroxylase P450c21. The 21-hydroxylase deficiency disrupts cortisol and aldosterone biosynthesis and leads to accumulation of androgen precursors. There are 3 main phenotypes: the simple virilizing (SV) form, in which girls present with virilized external genitalia at birth and both sexes present with precocious pseudopuberty; the salt wasting (SW) form, characterized by additional salt-wasting crisis in the neonatal period in both sexes; and the nonclassic (NC) form, in which the hyperandrogenic signs occur later in life, during childhood, adolescence or adulthood. In vitro studies show a good correlation between the degree of enzymatic impairment determined by genotype and phenotype. However, there are some discrepancies as: patients with clinical and hormonal profiles of nonclassic form in whom mutations are not found in one or both alleles, and patients with milder phenotype than the ones predicted by genotyping. These discrepancies suggest the existence of modulatory factors in 21- hydroxylase deficiency phenotype. The first hypothesis was that there were mutations in P450 oxidoreductase (POR), a gene which encodes a flavoprotein that donates electrons for all microsomal P450s, including P450c21, an essential step for P450s activity. The second hypothesis was that other enzymes that not P450c21 could perform extra-adrenal 21-hydroxylation of progesterone and 17OHprogesterone (17OHP), modulating salt balance and virilization. Hepatic drugmetabolizing P450 enzymes CYP2C19 and CYP3A4 can 21-hydroxylate progesterone; however, this activity was never compared to 21-hydroxylation performed by P450c21, in order to determine the importance of this extra-adrenal activity in vivo. The present cohort consisted of 11 patients with nonclassic form and incomplete genotype and 6 patients with genotype/phenotype discrepancies...

Actividad del citocromo P450 y su alteración en diversas patologías / Cytochrome P450 activity and its alteration in different diseases

Cytochrome P450 (CYP) enzymes participate in the metabolism of a variety of naturally occurring and foreign compounds by reactions requiring NADPH and O2. The diversity of reactions catalyzed and its extensive substrate specificity render CYP enzymes as one of the most versatile known catalysts. Individual members of the CYP superfamily are expressed in almost every cell type in the body. As compared to hepatic enzymes, the regulation of human extrahepatic CYPs has not been so well studied. In general, the levels of some hepatic CYP enzymes are depressed by diseases, causing potential and documented impairment of drug clearence and clinical drug toxicity. However, modulation of CYPs is enzyme selective and this selectivity differs in different diseases. This article reviews some basic concepts about CYP and its regulation in some disease states such as hypertension, diabetes, obesity and hepatic, infectious and inflammatory diseases (Rev Méd Chile 2004; 132: 85-94).

Cytochrome P450c17alpha (CYP17) gene polymorphism is not associated with leiomyoma susceptibility

Estrogen plays a role in the pathogenesis of leiomyoma. The CYP17 gene codes for the cytochrome P450c17alpha enzyme, which is involved in the biosynthesis of estrogen. Our aim was to investigate if CYP17 polymorphism could be a useful marker to predict the susceptibility to leiomyoma. Our sample of female subjects was divided into two groups: (1) with leiomyoma (n = 159); (2) without leiomyoma (n = 128). A 169-bp fragment encompassing the A1/A2 polymorphic site of the CYP17 gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR), restricted by enzyme MspA1I and electrophored on agarose gel. Genotypes and allelic frequencies for this polymorphism in both groups were compared. There was no significant difference between the two groups regarding the distribution of the CYP17 gene polymorphism frequencies. The A1 homozygote/heterozygote/A2 homozygote proportions for CYP17 in both groups were: (1) 17.0/46.5/36.5 percent, and (2) 17.2/45.3/37.5 percent. The proportions for alleles A1 and A2 were also comparable in the two groups. A1 and A2 allele frequencies were: 7 percent (40.3/59) in group 1, and 2 percent (39.8/60) in group 2. No significant association was observed between the risk of leiomyoma and polymorphisms of the CYP 17 gene. So, CYP17 gene polymorphism does not appear to be a useful marker for the prediction of leiomyoma susceptibility

Importancia clínica del metabolismo de medicamentos: primera parte / Clinic importance of the metabolism of medicaments: first Part

Este es el primer artículo de una serie de dos artículos sobre el metabolismo de medicamentos. El metabolismo de medicamentos es un tema de mucho importancia en farmacología, porque parte de la farmacocinética y el efecto clínico de los medicamentos dependen de el. Además, el metabolismo de medicamentos es importante para explicar una gran cantidad de interacciones. En este artículo se revisa el papel de las enzimas citocromales P450, en el metabolismo e interacciones de medicamentos. Esta es la razón por la que solo se estudiarán los citocromos de importancia clínica en farmacología. Se revisarán entre otros temas los siguientes: mecanismos de inducción e inhibición, nomenclatura, distribución en el cuerpo humano y polimorfismo genérico. Además, se incluyen tablas con las sustancias inductoras e inhibidoras más importantes así como las sondas utilizadas para la identificación de un citocromo particular. Finalmente se inicia una sección con la discusión de las interacciones de interés clínico más relevantes.

Ativação da proteína reguladora da homeostase intracelular de ferro (IRP1) pelo pró-oxidante endógeno ácido delta-aminolevulínico / Activation of iron regulatory protein 1 (IRP1) by endogen prooxidant delta-aminolevulinic acid

O ferro é um metal essencial ao organismo, pois está presente em várias proteínas de importância vital, dentre elas a hemoglobina e os citocromos. No entanto, pode também levar à geração de espécies reativas de oxigênio, e por isso necessita de um controle coordenado de sua homeostase a fim de evitar seu acúmulo. Este controle é efetuado pós-transcricionalmente pela proteína IRP1. Esta proteína é sensível aos níveis de ferro, controlando assim a síntese do receptor de transferrina e da ferritina. Quando os níveis de ferro estão baixos, a IRP1 é ativada ligando-se a regiões IRE presentes nos mRNAS destas proteínas, o que leva à inibição da síntese de ferritina e a um estímulo da síntese do receptor de transferrina para que mais ferro seja internalizado...

Pasaje del antichagásico Benznidazol vía leche materna a ratas lactantes: efectos sobre el metabolismo de xenobióticos / Passage of Benznidazol antichagasics ingestion maternal milk to neonatal rats: effects on xenobiotic metabolism

El antichagásico Benznidazol presenta efectos tóxicos indeseables en su empleo clínico. Esta droga es capaz de pasar al lactante vía leche materna modificando su capacidad metabolizante de xenobióticos. En ratas lactantes cuyas madres fueron tratadas previamente con la droga el tiempo de sueño producido por pentobarbital fue modificado, así como también la actividad de la aminopirina demetilasa, que fue significativamente menor que en ratas lactantes control.

Citocromos en diferentes estadíos, cepas y poblaciones de Trypanosoma cruzi / Cytochromes in different stages, strains and populations of Trypanosoma cruzi

Los espectros diferenciales de muestras "reducida menos oxidada" (Red-Ox) y "reducida. CO menos reducida" (Re. CO-Red) de tripomastigotes metacíclicos del Trypanosoma cruzi (cepa Tulahuen) revelaron la presencia de los citocrómos aa3, b, c555 y o. Espectros concordantes se obtuvieron con la fracción mitocondrial de la forma epimastigote de la misma cepa, después de filtrar las membranas por Sephadex G-50 para excluir hemoproteínas espúreas provenientes del medio de cultivo o hemoproteínas solubles (hemoglobina, peroxidasa, catalasa, etc.), o citocrómos P-420 y P-450. El tratamiento de la fracción mitocondrial cruda con guanidina y colato de Na y la formación de complejos con cianuro, revelaron que el citocrómo o es un constituyente integral de esas membranas. El análisis de los piridinahemocrómos provenientes de los citocrómos mitocondriales demostró la presencia de los hemos A, B y C. Una banda espectral a 625 nm en los espectros de los tripomastigotes, en las membranas mitocondriales, y en los piridina-hemocrómos indicó la presencia de un citocrómo d. Un examen comparativo del contenido en citocrómos o y b de una serie de poblaciones de T. cruzi, provenientes originariamente en su mayoría de pacientes con formas agudas o crónicas de la enfermedad de Chagas, demostró variabilidad en el contenido en citocrómos y falta de correlación de este parámetro con las propiedades biológicas del parásito, en particular con la letalidad para el ratón

Ultrastructural and metabolic alteration in dyskinetoplastic Trypanosoma cruzi

El cultivo del Trypanosoma cruzi (agente causal de la enfermedad de Chagas; Kinetoplstidae; cepa Tulahuen) en presencia de etidio, una droga de efecto selectivos sobre el DNA mitocondrial, produjo la inhibición del crecimiento del parásito (50% con 1 µg/ml de droga) y alteraciones típicas en el DNA cinetoplástico, verificadas por microscopía electrónica. Los kinetoplastos se vuelven irregulares y erráticos en la ubicación, pierden la forma de arco y las diferencias de las membranas (densidad y crestas), la matriz se vuelve floculenta y filamentosa y el k DNA se compacta y pierde la configuración fibrilar. La espectrofotometría diferencial de los epimastigotes discinetoplásticos demostró la disminución de los citocromos aa3, b y o, mientras que el citocromo c no fue afectado. El efecto del etidio fue maximo sobre aa3; mínimo sobre o y en todos los casos proporcional a la concentración de la droga. Con 1 µg/ml de bromuro de etidio la disminución del citocromo aa3 fue de 93% (promedio de 4 determinaciones ñ E.S.). La respuesta de los epimastigotes discinetoplásticos a los inhibidores de la cadena respiratoria mitocondrial, a saber, cianuro (concentraciones hasta 200 µM), azida y antimicina fue negativa, en contraste con los epismatigotes normales, cuya respiración fue inhibida 75-85% por los mismos inhibidores. El cianuro 1-3 mM inhibió, sin embargo, la respiración endógena de los epimastigotes discineto-plasticos y también la respiración antimicina o azida-insensible de los epimastigotes normales. Resultados similares se obtuvieron con la fracción mitocondrial de T. cruzi, que contiene el citocromo o. Teniendo en cuenta esta circunstancia se postula la operación de una xidasa terminal accesoria, inhibida por el cianuro en concentraciones relativamente altas. El ácido salicihidromáxico, un inhibidor de la respiración dependiente de la oxidasa Cu-dependiente de otros tripanosomatideos, no afectó la respiración del T. cruzi normal o discinetoplástico

Reconstitution "in vitro" of a formate or NADH dependent nitrite reductase activity starting from cytochrome C552 and membrane vesicles from Escherichia coli K-12.

El aislamiento en Escherichia coli K-12 de un cytocromo C552, libre de contaminantes particulados, permitio la reconstitucion "in vitro" de una actividad nitrito reductasa que requiere vesiculas de membrana, cytocromo C552 y formiato (o NADH) como donadores de electrones. La via de transferencia de electrones desde el formiato o el NADH incluye un segmento de las cadenas respiratorias membranales del nitrato y el oxigeno que carece de cytocromos de tipo b. Este segmento contiene NADH y formiato deshidrogenasas, y un transportador redox sensible al 2-heptil-4hidroxiquinolina-N-oxido (HQNO). Evidencias indirectas sugieren que este transportador es probablemente una quinona que reaccionaria directamente, o indirectamente por medio de un transportador desconocido, con el cytocromo C552 periplasmico soluble. En este sistema el citocromo C552 parece actuar directamente sobre el nitrito como una nitrito reductasa terminal

Disminucion de los citocromos y la biosintesis proteica mitocondrial en musculo esqueletico de ratas diabeticas. / Decrease cytochromes and mitochondrial protein biosynthesis in skeletal muscle of diabetic rats

Se determino el contenido en citocromos aa3, b, c y c1 en mitocondrias de musculo esqueletico, higado y corazon de ratas diabeticas por inyeccion de estreptozotocina (65 mg/kg, dosis unica, intravenosa), 30 dias despues de la iniciacion de la diabetes. Se aislaron las mitocondrias y se determino su contenido en citocromos. Solamente en las mitocondrias de musculo esqueletico se comprobo disminucion significativa (p < 0.001) de los citocromos, especialmente aa3 y b (en las mitocondrias de higado hubo aumento de los citocromos aa3).La variacion de los citocromos musculares concordo con la disminucion de la sintesis de proteinas, comprobada utilizando el procedimiento de Favalukes y col. para medir la incorporacion de aminoacidos en proteinas mitocondriales