3?-hydroxysteroid dehydrogenase type II deficiency on newborn screening test / Deficiência de 3?-hidroxiesteroide desidrogenase tipo 2 em teste de triagem neonatal

3b-hydroxysteroid dehydrogenase II (3β-HSD) deficiency represents a rare CAH variant. Newborns affected with its classic form have salt wasting in early infancy and genital ambiguity in both sexes. High levels of 17-hydroxypregnenolone (Δ517OHP) are characteristic, but extra-adrenal conversion to 17-hydroxyprogesterone (17OHP) may lead to positive results on newborn screening tests. Filter paper 17OHP on newborn screening test was performed by immunofluorometric assay, and serum determinations of 17OHP and Δ517OHP, by radioimmunoassay. A 46,XY infant with genital ambiguity and adrenal crisis at three months of age presented a positive result on newborn screening for CAH. Serum determinations of 17OHP and Δ517OHP were elevated, and a high Δ517OHP/cortisol relation was compatible with the diagnosis of 3β-HSD deficiency. Molecular analysis of the HSD3B2 gene from the affected case revealed the presence of the homozygous p.P222Q mutation, whereas his parents were heterozygous for it. We present the first report of 3β-HSD type II deficiency genotype-proven detected at the Newborn Screening Program in Brazil. The case described herein corroborates the strong genotype-phenotype correlation associated with the HSD3B2 p.P222Q mutation, which leads to a classic salt-wasting 3β-HSD deficiency. Further evaluation of 17OHP assays used in newborn screening tests would aid in determining their reproducibility, as well as the potential significance of moderately elevated 17OHP levels as an early indicator to the diagnosis of other forms of classic CAH, beyond 21-hydroxylase deficiency.

A deficiência da enzima 3β-hidroxiesteroide desidrogenase tipo 2 (3β-HSD) representa variante rara de hiperplasia adrenal congenital (HAC). Recém-nascidos afetados com a forma clássica apresentam perda de sal nas primeiras semanas de vida e ambiguidade genital em ambos os sexos. Concentrações elevadas de 17-hidroxipregnenolona (Δ517OHP) são características, porém sua conversão extra-adrenal a 17-hidroxiprogesterona (17OHP) pode resultar em resultados positivos no teste de triagem neonatal. A determinação da concentração de 17OHP obtida em amostra de sangue colhida em papel-filtro para triagem neonatal foi realizada por ensaio imunofluorimétrico, e as concentrações séricas de 17OHP and Δ517OHP, por radioimunoensaio. Um menino, 46,XY, com ambiguidade genital e crise adrenal aos 3 meses de vida, apresentou teste positivo na triagem neonatal para HAC. As concentrações séricas de 17OHP e Δ517OHP estavam aumentadas, bem como a relação Δ517OHP/cortisol, o que foi compatível com o diagnóstico de deficiência de 3β-HSD. A análise molecular do gene HSD3B2 revelou a mutação p.P222Q em homozigose na criança afetada e em heterozigose em seus pais, o que confirmou a deficiência de 3β-HSD com resultado moderadamente elevado na dosagem de 17OHP no “Teste do Pezinho” (Programa de Triagem Neonatal do Distrito Federal, Brasil). Esse caso corrobora a forte correlação genótipo-fenótipo associada à mutação p.P222Q no gene HSD3B2. Estudos futuros para avaliação dos ensaios utilizados na triagem neonatal para determinação de 17OHP poderão auxiliar na determinação do significado potencial de concentrações moderadamente elevadas de 17OHP como um indicador precoce para o diagnóstico de outras formas de HAC clássicas, além da deficiência de 21-hidroxilase.

Culture of bovine ovarian follicle wall sections maintained the highly estrogenic profile under basal and chemically defined conditions

Follicle cultures reproduce in vitro the functional features observed in vivo. In a search for an ideal model, we cultured bovine antral follicle wall sections (FWS) in a serum-free defined medium (DM) known to induce 17β-estradiol (E2) production, and in a nondefined medium (NDM) containing serum. Follicles were sectioned and cultured in NDM or DM for 24 or 48 h. Morphological features were determined by light microscopy. Gene expression of steroidogenic enzymes and follicle-stimulating hormone (FSH) receptor were determined by RT-PCR; progesterone (P4) and E2 concentrations in the media were measured by radioimmunoassay. DM, but not NDM, maintained an FWS morphology in vitro that was similar to fresh tissue. DM also induced an increase in the expression of all steroidogenic enzymes, except FSH receptor, but NDM did not. In both DM and NDM, there was a gradual increase in P4 throughout the culture period; however, P4 concentration was significantly higher in NDM. In both media, E2 concentration was increased at 24 h, followed by a decrease at 48 h. The E2:P4 ratio was higher in DM than in NDM. These results suggest that DM maintains morphological structure, upregulates the expression of steroidogenic enzyme genes, and maintains steroid production with a high E2:P4 ratio in FWS cultures.

Structural aspects of the p.P222Q homozygous mutation of HSD3B2 gene in a patient with congenital adrenal hyperplasia / Aspectos estruturais da mutação homozigótica p.P222Q do gene HSD3B2 em um paciente com hiperplasia congênita da adrenal

Type II 3β-hydroxysteroid dehydrogenase/Δ5-Δ4-isomerase (3β-HSD2), encoded by the HSD3B2 gene, is a key enzyme involved in the biosynthesis of all the classes of steroid hormones. Deleterious mutations in the HSD3B2 gene cause the classical deficiency of 3β-HSD2, which is a rare autosomal recessive disease that leads to congenital adrenal hyperplasia (CAH). CAH is the most frequent cause of ambiguous genitalia and adrenal insufficiency in newborn infants with variable degrees of salt losing. Here we report the molecular and structural analysis of the HSD3B2 gene in a 46,XY child, who was born from consanguineous parents, and presented with ambiguous genitalia and salt losing. The patient carries a homozygous nucleotide c.665C>A change in exon 4 that putatively substitutes the proline at codon 222 for glutamine. Molecular homology modeling of normal and mutant 3β-HSD2 enzymes emphasizes codon 222 as an important residue for the folding pattern of the enzyme and validates a suitable model for analysis of new mutations.

A enzima 3β-hydroxysteroid dehydrogenase/Δ5-Δ4-isomerase do tipo 2 (3β-HSD2), codificada pelo gene HSD3B2, é importante na biossíntese de todas as classes de hormônios esteroides. As mutações no gene HSD3B2 podem causar deficiência da 3β-HSD2 da forma clássica. É de herança autossômica recessiva e uma das causas mais raras de hiperplasia congênita da adrenal (HCA). A deficiência dessa enzima leva frequentemente à ambiguidade genital e à insuficiência da adrenal em recém-nascidos com vários níveis de perda de sal. Neste trabalho, foi feito o estudo estrutural e molecular do gene HSD3B2 gene em um paciente 46,XY, filho de pais consanguíneos, com ambiguidade genital e perda de sal. O paciente é homozigoto para a troca nucleotídica c.665C>A no éxon 4, que putativamente leva à substituição de uma prolina do códon 222 por uma glutamina. A modelagem molecular por homologia das enzimas 3β-HSD2 normal e mutantes ressaltou que a prolina no códon 222 é um resíduo importante no enovelamento da enzima e validou um modelo adequado para avaliações de novas mutações.

Patología de los tumores inducidos por progestágenos / Pathology of the tumors induced by progestagens

El objetivo de este trabajo es describir las lesiones preneoplásicas y neoplásicas inducidas en la glándula mamaria de ratones hembra vírgenes de la cepa BALB/c inoculados con medroxiprogesterona (MPA) y progesterona (Pg). La MPA induce adenocarcinomas mamarios ductales con una incidencia actuarial del 79 por ciento y una latencia media de 52ñ2 semanas. Estos tumores son precedidos por lesiones preneoplásicas de los conductos que se caracterizan por hiperplasia ductal sólida o papilar y progresiva evolución hacia el carcinoma in situ. La progesterona induce adenocarcinomas lobulillares con una incidencia actuarial del 28 por ciento y una latencia de aparición de 46ñ13 semanas. En los tratados con Pg se observaron hiperplasias de los brotes terminales con eventual diferenciación en estructuras alveolares similares a las de una mama lactante. En etapas posteriores el epitelio alveolar se hiperplasia y aparecen los primeros signos de displasia; existe aumento en el nómero de las estructuras lobulillares hiperplásicas y displasias y ocasional secresión focal en algunos lobulillos. Las hiperplasias atípicas y carcinomas "in situ" se caracterizan por un aumento del nómero de estructuras alveolares, acompañado por hiperplasia progresiva del epitelio de revestimiento, que rellena estas estructuras. Los carcinomas infiltrantes se caracterizan por formar grupos sólidos o estructuras lobulares compuestas por células atípicas redondas o poligonales, de citoplasma claro y con un alto índice mitótico. Los tumores infiltran extensamente el estroma adyacente y muestran, ocasionalmente, diferenciación tubular o alveolar.

Progesterone, its A/B cis reduction and delta aminolevulinic acid synthetase in the developing hen

La 5 ß reductasa (Rasa) aumenta después de la eclosión en tejidos esteroidogénicos de la gallina en desarrollo, especialmente en el ovario derecho. La sintetasa del ácido delta aminolevulínico (ALAs) es más activa en estos tejidos que en hígado durante la mayoría de los estadios embrionarios. Pero después de la eclosión sólo aumenta en forma aguda ALAs hepática y adrenal; en ovario izquierdo dicha enzima crece moderadamente y en ovario derecho desciende a valores muy bajos. Cierta relación entre las curvas de ALAs y Rasa durante el desarrollo embrionario del ovario izquierdo y la adrenal sugieren que la 5 ß pregnanediona fuera un inductor natural de la ALAs en estas glándulas endocrinas funcionantes, por lo menos durante sus estadios embrionarios