Cerebrospinal fluid challenges for the diagnosis of herpes simplex infection in the central nervous system / Desafios do exame do líquido cefalorraquidiano para o diagnóstico de infecção por herpes simplex no sistema nervoso central

Abstract Herpes simplex virus (HSV) is a cause of a severe disease of the central nervous system (CNS) in humans. The demonstration of specific antibodies in the cerebrospinal fluid (CSF) may contribute to the retrospective neurological diagnosis. However, the commercial immunological tests for HSV infection are for use in serum samples. Objective: The aim of the present study was to adapt a commercial kit anti-HSV IgG used for serum samples to be performed with a CSF sample. Methods: Forty CSF specimens from 38 patients with suspected CNS HSV infection were serially diluted for detecting anti-HSV IgG by enzyme immunoassay (EIA). The same samples were also analyzed with the polymerase chain reaction (PCR). Results: The sensitivity of EIA test for HSV was 5% (dilution 1:40) and 65% (dilution 1:2) in CSF, and HSV DNA PCR was 15%. The combined analysis of EIA (dilution 1:2) and PCR increased the sensitivity up to 72.5%. The inflammatory CSF was associated with positive HSV PCR. Conclusions: We demonstrated the importance to adapt serological anti-HSV IgG EIA test for CSF assays to increase the accuracy of the analysis, considering the low concentration of specific antibodies in CSF.

Resumo O vírus herpes simples (HSV) é um dos agentes causadores de uma doença grave no sistema nervoso central (SNC) em humanos. A detecção de anticorpos específicos no líquido cefalorraquidiano (LCR) pode contribuir para o diagnóstico neurológico retrospectivo. Entretanto, os testes imunológicos comerciais são para uso em amostras de soro. Objetivo: Adaptar um kit comercial sorológico anti-HSV IgG para ser utilizado no de LCR. Metodos: Quarenta amostras de LCR de 38 pacientes com suspeita de infecção por HSV no SNC foram diluídas pesquisa de anticorpos anti-HSV IgG pelo método imunoenzimático (EIA). Além disso, as mesmas amostras também foram analisadas por reação em cadeia da polimerase (PCR). Resultados: A sensibilidade do teste EIA para o HSV consistiu em 5% (diluição 1:40) e 65% (diluição 1:2) no LCR, e o PCR do DNA do HSV, 15%. A análise combinada de EIA (diluição 1:2) e PCR aumentou a sensibilidade para 72,5%. Houve associação entre presença do LCR inflamatório e PCR positiva para HSV. Conclusões: Demonstramos a importância na adaptação previa do teste sorológico anti-HSV IgG EIA para ensaios do no LCR, a fim de aumentar a acuracia da análise, considerando a baixa concentração de anticorpos específicos no LCR.

El ácido desoxirribonucleico mitocondrial (ADNm) y "Las siete hijas de Eva" / Mitochondrial deoxyribonucleic acid (mRNA) and "The seven daughters of Eve"

En el año 2001, el profesor Bryan Sykes (Oxford), publicó un libro intitulado "Las Siete Hijas de Eva", tras analizar el ADN mitocondrial (ADNm) de numerosas europeas. El ADNm pasa exclusivamente a las mitocondrias de mujeres y a su vez solo las hijas lo transmiten a la suya. El estudio fue posible gracias a la Reacción en Cadena de la Polimerasa. De ese modo Sykes precisó que en Europa hay siete clanes femeninos principales, cuyas fundadoras vivieron desde hace unos 45 000 hasta hace unos 8 500 años. Palabras clave: Ácido Desoxirribonucleico Mitocondrial (ADNm). Clanes ancestros maternos y paternos. Migraciones y Genética.(AU)

In 2001, professor Bryan Sykes (Oxford), published a book in Spanish untitled "Las siete hijas de Eva", analyzing the mitochondrial DNA from numerous European women. The mDNA has the peculiarity to pass exclusively to the mitochondrias of women, and only their daughters are able to transmit it. The study was possible thanks to the availability of the Polymerase Chain Reaction. By means of the study of the mtDNA he was able to detect in Europe seven principle maternal clans from 45 000 to 8 500 years.(AU)

Evaluation of antimicrobial, hypotensive and diuretic effect of Eugenia uniflora extracts / Avaliação do efeito antimicrobiano, hipotensivo e diurético de extratos de Eugenia uniflora

The genus Eugenia sp. (Myrtaceae) comprises plants with reported antioxidant and antidiarrheal capability among other therapeutic potentials. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oil; diuretic and hypotensive activities of aqueous extracts from leaves of Eugenia uniflora. The antimicrobial activity was evaluated . The diuretic and hypotensive activities were evaluated in normotensive Wistar rats by measuring blood pressure and urine flow after received four different concentrations of aqueous extracts (10%, 15%, 20% and 25%). Essential oil inhibited the growth of Candida parapsilosis and Candida albicans with MIC values lower than 14.41 mg/mL, equal to 57.75 mg/mL for Candida krusei. Among antibacterial effect, essential oil inhibited growth with a MIC equals to 153.93 mg/mL for all strains tested, except for Escherichia coli (MIC equals to 307.96 mg/mL. Aqueous extracts showed powerful reductions of the arterial pressure (34% and 31% lower than the control), after administration of 10% and 25% of aqueous extract, respectively. However, the animals that received the aqueous extract at the 15% and 20% concentrations presented a discrete hypotensive effect (20% and 21% lower than control group, respectively) concomitantly to powerful diuretic effect (280% and 91% higher than control group, respectively). These data confirmed the potential biological effect of this species, and represents an important step toward a depth study on the therapeutic properties of this species

O gênero Eugenia sp. (Myrtaceae) compreende plantas com capacidade antimicrobiana e antioxidante entre outros potenciais terapêuticos. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana de óleo essencial; atividade diurética e hipotensora de extrato aquoso de folhas de Eugenia uniflora. A atividade antimicrobiana foi avaliada pela determinação da concentração inibitória mínima (MIC) e concentração mínima bactericida (MBC) de cepas bacterianas e concentração fungicida mínima (MFC) para fungos. A atividade diurética e hipotensora foi avaliada em ratos Wistar normotensos pela mensuração da pressão sanguínea e fluxo urinário após administração de quatro diferentes concentrações de extrato aquoso (10%, 15%, 20% e 25%). Óleo essencial inibiu o crescimento de Candida parapsilosis e Candida albicans com valores de MIC menores que 14,41 mg/mL, igual a 57,75 mg/mL para Candida krusei. A respeito do efeito antimicrobiano, o óleo essencial inibiu o crescimento de todas as cepas testadas, com MIC igual a 153,93 mg/mL, exceto para Escherichia coli (MIC igual a 307.96 mg/mL). O extrato aquoso mostrou redução importante da pressão arterial (34% e 31% quando comparado ao controle), após administração de 10% e 25% do extrato aquoso, respectivamente. Contudo, os animais que receberam o extrato aquoso na concentração de 15% e 20% apresentaram discreto efeito hipotensor (20% e 21% menor que o grupo controle, respectivamente) concomitantemente ao importante efeito diurético (280% e 91% maior quando comparado ao grupo controle, respectivamente). Esses achados confirmam o potencial efeito biológico dessa espécie, e representa um importante embasamento para estudos relacionados as propriedades terapêuticas da Eugenia uniflora

Aseguramiento de Calidad en el Laboratorio de Biología Molecular: Control de Contaminación Ambiental / Quality Assurance in the Laboratory of Molecular Biology: Control of Environmental Contamination / Garantia de Qualidade no Laboratório de Biologia Molecular: Controle da Contaminação Ambiental

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es la técnica más importante en Biología Molecular. Su principal deficiencia es la susceptibilidad a la contaminación de la muestra, ya sea con productos de amplificación generados en reacciones previas o con material genético proveniente de otras muestras. Se entiende por contaminación a la presencia indeseada de moléculas de ADN o ARN, que pueden actuar como templados en reacciones de amplificación. El objetivo del trabajo fue demostrar la importancia de la implementación de un control de contaminación ambiental periódico monitoreando la integridad del circuito de PCR. Para ello, se hisoparon puntos correspondientes a diferentes áreas de trabajo y se investigó la presencia de amplicones mediante PCR Real Time en Lighcycler 2.0, Roche® y Ampliprep Cobas s201, Roche®. En puntos críticos del circuito (flujo laminar o la cabina de seguridad del área de pre-PCR) no se detectaron amplicones, aunque sí se hallaron en las mesadas y heladeras. En el resto del circuito, la distribución de los amplicones fue variable. De esta forma se demuestra la importancia de la realización de un control de contaminación ambiental periódico en laboratorios que realizan la técnica de PCR, pudiendo detectar contaminación de forma precoz y tomar acciones correctivas a tiempo.

Polymerase chain reaction (PCR) is the most important technique in Molecular Biology. Its main deficiency is susceptibility to contamination of the sample, either with amplification products generated in previous reactions or with genetic material from other samples. Contamination is understood as the undesired presence of DNA or RNA molecules, which may act as annealing in amplification reactions. The objective of this work is to demonstrate the importance of implementing a periodic environmental pollution control by monitoring the integrity of the PCR. To do this, different areas of work were swabbed and the presence of amplicons were investigated by Real Time PCR in Lighcycler 2.0, Roche® and Ampliprep Cobas s201, Roche®. At critical points in the circuit (laminar flow or pre-PCR area booth) no amplicons were detected, although they were found in countertops and refrigerators. In the rest of the circuit, the distribution of the amplicons was variable. Thus, the importance of conducting a periodic environmental contamination control in laboratories that perform the PCR technique is demonstrated, enabling early detection contamination and corrective actions being taken on time.

A reação em cadeia da polimerase (PCR) é a técnica mais importante em Biologia Molecular. Sua principal deficiência é a suscetibilidade à contaminação da amostra, seja com produtos de amplificação gerados em reações prévias ou com material genético em reações prévias ou com material genético proveniente de outras amostras. Entende-se por contaminação a presença não desejada de moléculas de DNA ou ARN, que podem agir como temperados em reações de amplificação. O objetivo do trabalho foi demonstrar a importância da implementação de um controle de contaminação ambiental periódico monitorando a integridade do circuito de PCR. Para isso, se fez esfregaço de pontos correspondentes a diferentes áreas de trabalho e foi investigada a presença de amplicons mediante PCR Real Time em Lighcycler 2.0, Roche® e Ampliprep Cobas s201, Roche®. Em pontos críticos do circuito (fluxo laminar ou a cabine de segurança da área de pré-PCR), não foram detectados amplicons, apesar de serem encontrados nas bancadas e refrigeradores. No resto do circuito, a distribuição dos amplicons foi variável. Assim mostra a importância da realização de um controle de contaminação ambiental periódico em laboratórios que realizam a técnica de PCR, podendo detectar a contaminação de forma precoce e tomar ações corretivas a tempo.

Prevalence of mutations in HBV DNA polymerase gene associated with nucleos(t)ide resistance in treatment-naive patients with Chronic Hepatitis B in Central China

Abstract Objective There are a lot of disagreements in the studies on hepatitis B virus (HBV) DNA polymerase mutation rate associated with nucleos(t)ide analogues (NAs) in treatment-naive chronic hepatitis B (CHB) patients. This is the first study aimed to investigate the prevalence of spontaneous HBV resistance mutations in Central China. Methods This study included treatment-naive patients with CHB from June 2012 to May 2015 receiving care at the Institute of Liver Disease in Central China. All patients completed a questionnaire covering different aspects, such as family medical history, course of liver disease, medication history, alcohol use, among others. Mutations in HBV DNA polymerase associated with NAs resistance were detected using INNO-LiPA assay. Results 269 patients were infected with HBV genotype B (81.4%), C (17.9%), and both B and C (0.7%). Mutations in HBV DNA polymerase were detected in 24 patients (8.9%) including rtM204I/V (n = 6), rtN236T (n = 5), rtM250V (n = 2), rtL180M (n = 2), rtT184G (n = 1), rtM207I (n = 1), rtS202I (n = 1), rtM204V/I & rtL180M (n = 5), and rtM204I & rtM250V (n = 1). Conclusion Spontaneous HBV resistance mutations in HBV DNA polymerase were found in treatment-naive patients with CHB in Central China. These findings suggest that we should analyze HBV DNA polymerase resistance mutation associated with NAs before giving antiviral therapy such as lamivudine (LAM), adefovir (ADV), and telbivudine (LdT).

Comparison of sxx commercially-available dna polymerases for direct ccr / Comparacao de seis polimerases de DNA disponiveis comercialmente para o PCR direto

SUMMARY The use of a “direct PCR” DNA polymerase enables PCR amplification without any prior DNA purification from blood samples due to the enzyme's resistance to inhibitors present in blood components. Such DNA polymerases are now commercially available. We compared the PCR performance of six direct PCR-type DNA polymerases (KOD FX, Mighty Amp, Hemo KlenTaq, Phusion Blood II, KAPA Blood, and BIOTAQ) in dried blood eluted from a filter paper with TE buffer. GoTaq Flexi was used as a standard DNA polymerase. PCR performance was evaluated by a nested PCR technique for detecting Plasmodium falciparum genomic DNA in the presence of the blood components. Although all six DNA polymerases showed resistance to blood components compared to the standard Taq polymerase, the KOD FX and BIOTAQ DNA polymerases were resistant to inhibitory blood components at concentrations of 40%, and their PCR performance was superior to that of other DNA polymerases. When the reaction mixture contained a mild detergent, only KOD FX DNA polymerase retained the original amount of amplified product. These results indicate that KOD FX DNA polymerase is the most resistant to inhibitory blood components and/or detergents. Thus, KOD FX DNA polymerase could be useful in serological studies to simultaneously detect antibodies and DNA in eluents for antibodies. KOD FX DNA polymerase is thus not limited to use in detecting malaria parasites, but could also be employed to detect other blood-borne pathogens. .

RESUMO O propósito deste estudo foi avaliar 6 polimerases de DNA disponíveis comercialmente que são resistentes aos inibidores do PCR para uma amplificação potencial de DNA de amostras de sangue total. O DNA genômico do parasita humano da malária, Plasmodium falciparum, foi analisado sob condições que incluíram os componentes inibidores do sangue extraído de sangue ressacado em papel de filtro. Nossos resultados sugerem que a polimerase KOD FX DNA é superior a outras polimerases. .

DNA repair by polymerase delta in Saccharomyces cerevisiae is not controlled by the proliferating cell nuclear antigen-like Rad17/Mec3/Ddc1complex

DNA damage activates several mechanisms such as DNA repair and cell cycle checkpoints. The Saccharomyces cerevisiae heterotrimeric checkpoint clamp consisting of the Rad17, Mec3 and Ddc1 subunits is an early response factor to DNA damage and activates checkpoints. This complex is structurally similar to the proliferating cell nuclear antigen (PCNA), which serves as a sliding clamp platform for DNA replication. Growing evidence suggests that PCNA-like complexes play a major role in DNA repair as they have been shown to interact with and stimulate several proteins, including specialized DNA polymerases. With the aim of extending our knowledge concerning the link between checkpoint activation and DNA repair, we tested the possibility of a functional interaction between the Rad17/Mec3/Ddc1 complex and the replicative DNA polymerases alpha, delta and epsilon. The analysis of sensitivity response of single and double mutants to UVC and 8-MOP + UVA-induced DNA damage suggests that the PCNA-like component Mec3p of S. cerevisiae neither relies on nor competes with the third subunit of DNA polymerase delta, Pol32p, for lesion removal. No enhanced sensitivity was observed when inactivating components of DNA polymerases alpha and epsilon in the absence of Mec3p. The hypersensitivity of pol32delta to photoactivated 8-MOP suggests that the replicative DNA polymerase delta also participates in the repair of mono- and bi-functional DNA adducts. Repair of UVC and 8-MOP + UVA-induced DNA damage via polymerase delta thus occurs independent of the Rad17/Mec3/Ddc1 checkpoint clamp.

Detección molecular de Dientamoeba fragilis en heces: eliminación de los inhibidores de la DNA polimerasa / Molecular detection of Dientamoeba fragilis in faeces: removal of DNA polymerase inhibitors

Se realizó un estudio de purificación del DNA de los trofozoitos de Dientamoeba fragilis a partir de muestras fecales humanas congeladas, no fijadas en formol, y con elevadas concentraciones de inhibidores de la DNA polimerasa. Para tal fin, se utilizaron columnas ("spin-columns") disponibles en el comercio. Esta metodología se comparó con una técnica tradicional de purificación con fenol/cloroformo. Ambos métodos fueron seguidos de la amplificación del DNA de D. fragilis por una "nested" PCR y posterior electroforesis en un gel de agarosa de los amplicones obtenidos. La extracción del DNA a partir de trofozoitos de D. fragilis - mediante el procedimiento de las columnas - produjo DNA de elevada calidad, libre de impurezas e inhibidores de la polimerasa. Por el contrario, con la técnica de fenol/cloroformo se observó la inhibición de la enzima, cuando se analizaron los productos de amplificación. Además, se confirmó que el agregado de SAF (solución de acetato de sodio - ácido acético - formol) a las muestras fecales afecta la integridad del DNA y como consecuencia impide su posterior amplificación.

La transcriptasa reversa del VIH: estudios estructurales y cinéticos / The reverse transcriptasa of the HIV: structural and kinetic studies

La transcriptasa reversa (TR) es una polimerasa de ADN, compuesta por dos subunidades 66 y 51 KDa. Sintetiza ADN usando un ácido nucleico complementario como templado. Esta enzima posee tres actividades distintas: una polimerasa de ADN dependiente de ARN que sintetiza la cadena negativa del ADN proviral, una actividad polimerasa de ADN dependiente de ADN que cataliza la construcción de la hebra positiva y una actividad de RNAsa H. La TR del VIH utiliza un ARN de transferencia (ARNt) específico para llevar acabo la fabricación del ADN complementario, lo cual induce un cambio de conformación que afecta las actividades de la polimerasa. Diversos investigadores han encontrado que la afinidad del sustrato por la TR del VIH es significativamente alta; la Kd para un dNTP de la TR viral es 4nM, una de las más bajas encontradas para las polimerasas de ADN y posee a su vez valores de procesividad y selectividad de gran magnitud. Distintas evidencias remarcan el hecho de que la TR sufre un cambio conformacional cuando se encuentra acomplejada de la forma E-ADN-dNTP, y que esta acción puede ser inhibida por el apareamiento de un nucleótido incorrecto. La enzima debe acomodar los duplex generados de cada reacción y debido a esto la TR podría no ser capaz de restringir la geometría del apareamiento, como sucede para el resto de las polimerasas, originando la aparición de los diferentes mutantes del VIH. Los inhibidores de la transcriptasa reversa del VIH se pueden agrupar en tres categorías: análogos de nucleósidos, no nucleósidos y oligonucleótidos. Los inhibidores análogos de nucleósidos más utilizados clínicamente son: Lamivudina, Zerit, Retrovir, Videz, AZT o Zidoduvina y Viramune. Los no nucleósidos ya empleados en terapias son: Viramune y rescriptor. Por todas sus características, la TR del VIH se encuentra catalogada como una de las enzimas de mayor funcionalidad y complejidad que se haya estudiado

Biología molecular en infectología: parte II, diagnóstico molecular de agentes infecciosos / Molecular biology in infectius diseases: part II molecular diagnosis of infectious agents

Las aplicaciones diagnósticas de la biología molecular para enfermedades infecciosas son extremadamente variadas y aplicables a cualquier problema diagnóstico. En agentes virales de la familia Hepersviridae, los más usados se basan en la amplificación del gen de la enzima ADN polimerasa que permite la detección de virus herpes simplex (VHS) 1 y 2, virus varicela-zoster (VVZ), citomegalovirus (CMV), virus de Epstein Barr (VEB) y herpesvirus humano (HVH) 6 en forma simultánea. Esta metodología ha detectado la coinfección por VHS 1 y VZV en muestras de líquido cefalorraquideo. En CMV son utilizados en el monitoreo de la reactivación de CMV en pacientes inmunosuprimidos siendo capaz de detectar reactivación viral con una semana de anticipación a la aparición de los síntomas. Los métodos moleculares han permitido la identificación del VEB en una proporción de 8 a 20 por ciento de casos de cáncer gástrico los cuales poseen una cepa única a pesar de la presencia de múltiples cepas en la población sana. Estas asociaciones entre virus y cáncer también se han descrito para el virus papiloma humano y cáncer pulmonar. En agentes bacterianos, la detección y cuantificación de Bordetella pertussis es otra aplicación relevante ya que podría convertirse en un método de diagnóstico rápido y predictivo de severidad de enfermedad en niños menores de 6 meses. La caracterización de cepas de Helicobacter pylori en relación con cáncer gástrico y enfermedadulcerosa péptica, y la caracterización de cepas nosocomiales de Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SAMR), son ejemplos de las potencialidades de los métodos moleculares en la tipificación de microorganismos. En el diagnóstico de agentes causantes de patologías respiratorias como Mycobacterium tuberculosis, Pneumocystis carinil y agentes atipicos de infecciones respiratorias, estos métodos han permitidoel diagnóstico a partir de muestras de obtención no invasora. Finalmente, también han demostrado su aporto en el diagnóstico de infecciones micóticas (candidiasis y aspergilosis), n particular en pacientes inmunocomprometidos

Biología molecular en infectología, parte I: desarrollo y metodologías / Molecular biology in infectious diseases, part I: development and methodologies

El origen de la biología molecular se puede rastrear hasta fines del siglo XIX; sin embargo, el descubrimiento de la estructura del ADN se considera como el inicio de esta disciplina. Los avances producidos por la biología molecular en la década del 60 nos permiten contar hoy con herramientas para el estudio de microorganismos a nivel molecular. En particular, el descubrimiento de la ADN polimerasa y las propiedades de hibridación del ADN son algunos de los descubrimientos que aplicados hoy día en la reacción de polimerasa en cadena, la amplificación isotérmica y la hibridación con ADN ramificado, se han transformado en herramientas útiles en el diagnóstico y cuantificación de agentes infecciosos. Finalmente la secuenciación de genomas bacterianos completos permitirá el desarrollo de nuevos métodos para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades infecciosas

Accuracy of replication in the polymerase chain reaction. Comparison between Thermotoga maritima DNA polymerase and Thermus aquaticus DNA polymerase

For certain applications of the polymerase chain reaction (PCR), it may be necessary to consider the accuracy of replication. The breakthrough that made PCR user friendly was the commercialization of Thermus aquaticus (Taq) DNA polymerase, an enzyme that would survive the high temperatures needed for DNA denaturation. The development of enzymes with an inherent 3' to 5' exonuclease proofreading activity, lacking in Taq polymerase, would be an improvement when higher fidelity is needed. We used the forward mutation assay to compare the fidelity of Taq polymerase and Thermotoga maritima (ULTMATM) DNA polymerase, an enzyme that does have proofreading activity. We did not find significant differences in the fidelity of either enzyme, even when using optimal buffer conditions, thermal cycling parameters, and number of cycles (0.2 per cent and 0.13 per cent error rates for ULTMATM and Taq, respectively, after reading about 3,000 bases each). We conclude that for sequencing purposes there is no difference in using a DNA polymerase that contains an inherent 3' to 5' exonuclease activity for DNA amplification. Perhaps the specificity and fidelity of PCR are complex issues influenced by the nature of the target sequence, as well as by each PCR component.

Structure of rotavirus particle: interaction of the inner capsid protein VP6 with the core polypeptide VP3

The structural relationship between VP6 (inner capsid polypeptide) and the viral core was studied using chemical cross-linking with dithiobis(succinimidyl propionate). Crosslinked single shelled and reconstituted rotavirus particles, suggest the existence of a complex organization of VP6 molecules in the inner capsid and a direct interaction with the core polypeptide VP3. The inhibition of the recovery of RNA polymerase activity associated with the reconstitution of the single shelled particle in the presence of antiVP6 monoclonal antibodies indicates that a VP6 domain between amino acids 56 and 58 seems to be important in viral transcription. A VP6 gene temperature-sensitive mutant (ts G) carrying a mutation affecting assembly of single shelled particles was used in reconstitution experiments. The mutant was able to recover RNA polymerase activity at restrictive temperature. Wild type cores or VP6 were able toreconstitute the particle with both the mutant cores and VP6. These results suggest the existence of various steps for the assembly of single shelled particles, where the VP6-VP3 interaction seems to be important for recovery of RNA polymerase activity

Análisis molecular de la hemofilia A en familias del noroeste de México / molecular analysis of Hemophilia A in northeastern mexican families

Empleando las técnicas de Southern para la detección de genes por hibridación con una sonda radiactiva de la reacción en cadena de la polimerasa para la amplificación de fragmentos génicos, se practicó el análisis molecular a nivel de ADN para detectar portadoras de la hemofilia A. Este se basó en el estudio del polimorfismo para la enzima de restricción Bcl I presente en el intró 18 del gen para el factor VIII de la coagulación. Se analizaron ocho familias de noroeste de México con antecedentes de la enfermedad, que comprendieron un total de 43 individuos. De las 27 mujeres que formaban parte de la muestra, 17 requerían el diagnóstico de portadora, el cual se estableció en tres de ellas, se excluyó en cinco y no se pudo determinar en nueve. Las frecuencias encontradas en la muestra para el polimorfismo fueron de 63 por ciento para el alelo de tamaño y de 37 por ciento para el alelo de tamaño menor, determinando un porcentaje de mujeres heterocigotas (informativas) de 48.2 por ciento y fijando en este valor la utilidad teórica del polimorfismo en las familias aquí incluidas. Estas frecuencias muestran simulitud con las de las poblaciones mediterráneas y establecen que la utilidad del polimorfismo es mayor en nuestra muestra que en otros grupos étnicos.

Aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en medicina / Application of polymerase chain reaction (PCR) in medicine

La técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) permite amplificar selectivamente secuencias específicas en el ADN en poco tiempo. con gran eficiencia y sensibilidad, por lo que constituye un valioso instrumento en el campo de la medicina. Este método se ha empleado con éxito en el diagnóstico prenatal de enfermedades hereditarias, en la detección de infecciones virales y en el estudio de hemopatias malignas

Análise de alguns parâmetros envolvidos com o ensaio da DNA polimerase do vírus da hepatite B / Some parameters for the assay of the DNA polymerase of the hepatitis B virus

O micrométodo para detecçäo da atividade da DNA polimerase do vírus da hepatite B descrito por LIN et alii foi modificado, e realizou-se um estudo comparativo entre as duas técnicas. Além disso, foram comparados dois tipos diferentes de papel de filtro, o GF/C e o AP20. Todos os testes apresentaram resultados viáveis; ademais, pudemos verificar que a técnica de LIN modificada e o filtro AP20 mostraram maiores diferenciais, sendo recomendados para este tipo de trabalho.

Comparison of serum hepatitis B virus replication markers in patients with chronic hepatitis B: studies on HBeAg/anti-HBe system, viral DNA polymerase and HBV-DNA

A detecçäo do genoma do HBV no soro por hibridizaçäo molecular é o mais sensível e específico marcador da replicaçäo e infectividade do HBV, sendo sua utilizaçäo proposta como técnica rotineira no acompanhamento de doenças relacionadas a este vírus. Comparando diferentes técnicas descritas, anteriormente, escolhemos a deposiçäo direta das amostras séricas sobre a membrana de nitrocelulose sob filtraçäo a vácuo, seguida de banhos desnaturantes e neutralisantes como mais prática e simples, com sensibilidade equivalente. O ensaio da DNA polimerase usando ácido fosfonofórmico como inibidor viral específico mostrou 86.8% de concordância com a detecçäo direta do DNA viral, sendo, portanto, uma alternativa viável no acompanhamento de pacientes com hepatite crônica B. Encontramos 19,2% das amostras AgHBe positivos sem outros marcadores de replicaçäo viral. Por outro lado, nenhuma amostra anti-HBe positiva teve HBV-DNA detectável. discordância entre dois sistemas foi extensamente descrita, e confirmamos pela primeira vez este fato em pacientes com hepatite crônica B em nosso país. Técnicas de biologia molecular säo, portanto, fundamentais na determinaçäo da replicaçäo viral em cada paciente