Cultivo de células mesenquimais do sangue de cordão umbilical com e sem uso do gradiente de densidade Ficoll-Paque / Blood mesenchymal stem cell culture from the umbilical cord with and without Ficoll-Paque density gradient method

OBJETIVOS: Implantação de técnicas de isolamento e cultivo de células-tronco mesenquimais do sangue de cordão umbilical humano, com e sem uso de gradiente de densidade Ficoll-Paque (d=1,077g/ml). MÉTODOS: Dez amostras de sangue de cordão umbilical humano de gestação a termo foram submetidas a dois procedimentos de cultivo de células-tronco mesenquimais: sem gradiente de densidade Ficoll-Paque e com gradiente de densidade. As células foram semeadas em frascos de 25cm² a uma densidade de 1x10(7)células nucleadas/cm² (sem Ficoll) e 1,0x10(6) células mononucleares/cm² (com Ficoll). As células aderentes foram submetidas a marcação citoquímica com fosfatase ácida e reativo de Schiff. RESULTADOS: No procedimento sem gradiente de densidade Ficoll, foram obtidas 2,0-13,0x10(7) células nucleadas (mediana=2,35x10(7)) e, no procedimento com gradiente de densidade Ficoll, foram obtidas 3,7-15,7x10(6) células mononucleares (mediana=7,2x10(6)). Em todas as culturas foram observadas células aderentes 24 horas após o início de cultivo. As células apresentaram morfologias fibroblastóides ou epitelióides. Na maioria das culturas houve proliferação celular nas primeiras semanas de cultivo, mas após a segunda semana, somente três culturas provenientes do método sem gradiente de densidade Ficoll-Paque mantiveram crescimento celular, formando focos confluentes de células. Essas culturas foram submetidas a várias etapas de tripsinização para espalhamento ou subdivisão e permaneceram em cultivo por períodos que variaram de dois a três meses. CONCLUSÃO: Nas amostras estudadas, o isolamento e cultivo de células-tronco mesenquimais do sangue de cordão umbilical humano pelo método sem gradiente de densidade Ficoll-Paque foi mais eficiente do que o método com gradiente de densidade Ficoll-Paque.

OBJECTIVES: Implantation of cell separation and mesenchymal stem cell culture techniques from human umbilical cord blood with and without using the Ficoll-Paque gradient density method (d=1.077g/ml). METHODS: Ten samples of the umbilical cord blood obtained from full-term deliveries were submitted to two different procedures of mesenchymal stem cell culture: a) Method without the Ficoll-Paque density gradient, which concentrates all nucleated cells; b) Method with the Ficoll-Paque density gradient, which selects only low-density mononuclear cells. Cells were initially plated into 25 cm² cultures flasks at a density of 1x10(7) nucleated cells/cm² and 1x10(6) mononuclear cells/cm². RESULTS: It was obtained 2-13x10(7) (median = 2.35x10(7)) nucleated cells/cm² by the method without the Ficoll-Paque gradient density, and 3.7-15.7x10(6) (median = 7.2x10(6)) mononuclear cells/cm² by the method with the Ficoll-Paque gradient density. In all cultures adherent cells were observed 24 hours after being cultured. Cells presented fibroblastoid and epithelioid morphology. In most of the cultures, cell proliferation occurred in the first week, but after the second week only some cultures - derived from the method without the Ficoll-Paque gradient density - maintained the growth rate reaching confluence. Those cultures were submitted to trypsinization with 0.25 percent trypsin/EDTA solution and cultured for two to three months. CONCLUSION: In the samples analyzed, cell separation and mesenchymal stem cell culture techniques from human umbilical cord blood by the method without the Ficoll-Paque density gradient was more efficient than the method with the Ficoll-Paque density gradient.

Um novo modelo de isolamento do tumor de Walker utilizando o gradiente de Ficoll-Hypaque / A novel model for isolation of Walker's tumoral cells using the Ficoll-Hypaque gradient

OBJETIVO: Analisar uma nova técnica de isolamento das células do tumor de Walker, utilizando o gradiente de ficoll-hypaque. MÉTODOS: Vinte ratos Wistar machos foram divididos em 2 grupos (G1, G2). O tumor do animal doador foi dissecado, triturado em solução de ringer lactato e filtrado. A suspensão celular obtida foi dividida em duas alíquotas (A1 e A2) e a alíquota A2 foi centrifugada em gradiente de ficoll-hypaque. As duas alíquotas foram ajustadas para uma concentração de 1X10(6) células/ml. Um ml da suspensão A1 ou A2 foi injetado por via subcutânea na axila direita dos ratos dos seus respectivos grupos. Os diâmetros tumorais, peso tumoral e análise histológica foram avaliados. RESULTADOS: Não houve diferença no volume tumoral (G1=17,9±3,8cm³; G2=17,2±4,4cm³; p=0,190) e no peso tumoral (G1=7,0±1,8g; G2=7,3±2,8g; p=0,569). A análise histológica evidenciou padrões semelhantes de infiltração de células pequenas indiferenciadas e de necrose nos dois grupos. Entretanto, exsudato granulocítico leve a moderado foi mais acentuado no G2 do que no grupo G1 e hemorragia leve a moderada foi observada somente no grupo com ficoll. CONCLUSÃO: O gradiente de ficoll-hypaque é uma técnica adequada de isolamento das células do tumor de Walker e fornece uma suspensão celular menos contaminada com outros tipos celulares.

Linfócitos em hanseníase: I. Linfócitos B do sangue periférico de portadores do Mal de Hansen / Lymphocytes in hanseniasis: I-B lymphocytes in the bloodstream of patients with Haansen's disease

Os autores estudaram os valores dos linfócitos do tipo B em doentes portadores do mal de hansen. Examinaram o sangue de 125 pessoas nao portadoras de nenhuma doença aparente . Concomitantemente examinaram o sangue de 413 doentes, distribuídos nas formas: Virchowiana, tuberculóide e indeterminada. Os resultados mostraram nåo haver diferença entre controles e portadores na forma Virchowiana, para linfócitos do tipo B, porém diminuiçåo em relaçåo as outras duas formas: tuberculóide e indeterminada. Os autores também nåo encontraram diferenças estatísticamente significantes quando foram relacionados os resultados obtidos portadores das três formas estudadas. Verificaram ainda que o tempo de tratamento nåo modifica o número dos linfócitos do sangue periférico

Metodo de separacion de linfocitos de sangre periferica con una mezcla de Ficoll y Angio-Conray. / Method of separation of lymphocytes from peripheral blood with Ficoll and Angio-Conray mixture

El metodo mas comunmente usado para la obtencion de linfocitos se basa en el uso de una mezcla de Ficoll e Hypaque. En este trabajo se informa que el Hypaque puede sustituirse por otro medio de contraste, el Angio-Conray.Para ello, se preparan 100 ml de Ficoll al 9 por ciento (p/v) y se anaden 12 ml de solucion de Angio-Conray al 40 por ciento (p/v) para dar una densidad de 1.074. Sobre esta mezcla se centrifugo, a 600 g por 20 minutos, la sangre desfibrinada de 10 donadores voluntarios. Los linfocitos obtenidos con esta mezcla tuvieron el mismo grado de pureza que con Ficoll y Hypaque, por lo que se considero que la mezcla de Ficoll y Angio-Conray puede servir como medio alternativo para la separacion de los linfocitos