Efectos en ratas de los alcoholes de cera de abejas (D-002) sobre la colitis ulcerativa inducida por sulfato de dextrano y etanol / Effects in rats of bee-wax alcohols (D-002) on ulcerative colitis induced by dextran sulfate and ethanol

RESUMEN Objetivos. Investigar los efectos del D-002, mezcla de seis alcoholes alifáticos primarios de alto peso molecular, obtenida de la cera de abejas (Apis mellifera), sobre la colitis ulcerativa (CU) inflamatoria severa inducida por sulfato de dextrano (DSS) y etanol en ratas (Ratus ratus). Materiales y métodos. Las ratas se distribuyeron aleatoriamente en seis grupos: un control cero al que no se provocó daño, y cinco a los que se les indujo la CU: un control negativo (vehículo), tres tratados con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) y un control positivo con sulfazalacina (200 mg/kg) (sustancia de referencia). Se cuantificaron las manifestaciones clínicas (variación del peso corporal, presencia de diarrea y de sangrado rectal), el puntaje de daño macroscópico e histológico, y la actividad de mieoloperoxidasa (MPO). Resultados. El tratamiento oral con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) previno significativamente la disminución del peso corporal. La dosis de 400 mg/kg redujo la presencia de diarreas y sangrado rectal, aunque su comparación con el control negativo solo alcanzó significación estadística sobre las diarreas. El D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) redujo significativamente el puntaje de las lesiones macroscópicas (40,0; 43,3 y 47,2% de inhibición, respectivamente), el puntaje de daño histológico (31,5; 53,7 y 67,1% de inhibición, respectivamente) y la actividad de MPO (73,2; 83,6 y 85,0% de inhibición, respectivamente), comparado con el grupo control negativo. La sulfazalacina redujo significativamente todas las variables estudiadas. Conclusiones. El D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) protegió significativamente la mucosa colónica en ratas con CU inflamatoria severa inducida por DSS y etanol.

ABSTRACT Objectives. To investigate the effects of D-002, a mixture of 6 high molecular weight primary aliphatic alcohols, obtained from beeswax (Apis mellifera), on severe inflammatory ulcerative colitis (UC) induced by Dextran sulfate (DSS) and ethanol in rats (Ratus ratus). Materials and methods. Rats were randomly distributed in six groups: a zero control to which no damage was caused, and five to which the UC was induced: a negative control (vehicle), three treated with D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) and a positive control with sulfasalazine (200 mg/kg) (reference substance). Clinical manifestations (body weight variation, diarrhea and rectal bleeding), macroscopic and histological damage score, and myeloperoxidase (MPO) activity were quantified. Results. The oral treatment with D-002 (25, 100 and 400 mg/ kg) significantly prevented the decrease in body weight. The dose of 400 mg/kg reduced the presence of diarrhea and rectal bleeding, although its comparison with the negative control only reached statistical significance on diarrhea. D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) significantly reduced the score of macroscopic lesions (40.0; 43.3 and 47.2% inhibition, respectively), the histological damage score (31.5; 53.7 and 67.1% inhibition, respectively) and the activity of MPO (73.2; 83.6 and 85.0% inhibition, respectively), compared to the negative control group. Sulfasalazine significantly reduced all variables studied. Conclusions. D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) significantly protected the colonic mucosa in rats with severe inflammatory UC induced by DSS and ethanol.

Streptozotocin-induced diabetes mellitus affects lysosomal enzymes in rat liver

It has been previously shown that dextran sulfate administered to diabetic rats accumulates in the liver and kidney, and this could be due to a malfunction of the lysosomal digestive pathway. The aim of the present study was to evaluate the expression and activities of lysosomal enzymes that act upon proteins and sulfated polysaccharides in the livers of diabetic rats. Diabetes mellitus was induced by streptozotocin in 26 male Wistar rats (12 weeks old), while 26 age-matched controls received only vehicle. The livers were removed on either the 10th or the 30th day of the disease, weighed, and used to evaluate the activity, expression, and localization of lysosomal enzymes. A 50-60% decrease in the specific activities of cysteine proteases, especially cathepsin B, was observed in streptozotocin-induced diabetes mellitus. Expression (mRNA) of cathepsins B and L was also decreased on the 10th, but not on the 30th day. Sulfatase decreased 30% on the 30th day, while glycosidases did not vary (or presented a transitory and slight decrease). There were no apparent changes in liver morphology, and immunohistochemistry revealed the presence of cathepsin B in hepatocyte granules. The decrease in sulfatase could be responsible for the dextran sulfate build-up in the diabetic liver, since the action of sulfatase precedes glycosidases in the digestive pathway of sulfated polysaccharides. Our findings suggest that the decreased activities of cathepsins resulted from decreased expression of their genes, and not from general lysosomal failure, because the levels of glycosidases were normal in the diabetic liver.

Positive correlttion between disease activity idex and matrix metalloproteinasses activity in a rat model of colitis / Correlação positiva entre índice de atividade de doença e metaloproteinase de matriz em modelo de colite em ratos

Context Inflammatory bowel disease, including ulcerative colitis and Crohn’s disease, comprising a broad spectrum of diseases those have in common chronic inflammation of the gastrointestinal tract, histological alterations and an increased activity levels of certain enzymes, such as, metalloproteinases. Objectives Evaluate a possible correlation of disease activity index with the severity of colonic mucosal damage and increased activity of metalloproteinases in a model of ulcerative colitis induced by dextran sulfate sodium. Methods Colitis was induced by oral administration of 5% dextran sulfate sodium for seven days in this group (n=10), whereas control group (n=16) received water. Effects were analyzed daily by disease activity index. In the seventh day, animals were euthanized and hematological measurements, histological changes (hematoxylin and eosin and Alcian Blue staining), myeloperoxidase and metalloproteinase activities (MMP-2 and MMP-9) were determined. Results Dextran sulfate sodium group showed elevated disease activity index and reduced hematological parameters. Induction of colitis caused tissue injury with loss of mucin and increased myeloperoxidase (P<0.001) and MMP-9 activities (45 fold) compared to the control group. Conclusions In this study, we observed a disease activity index correlation with the degree of histopathological changes after induction of colitis, and this result may be related mainly to the increased activity of MMP-9 and mieloperoxidase. .

Contexto Doenças inflamatórias intestinais, entre elas colite ulcerativa e doença de Crohn, compreendem um amplo espectro de doenças que apresentam em comum inflamação crônica do trato gastrointestinal, alterações histológicas e um aumento de atividade de determinadas enzimas, tais como, metaloproteinases. Objetivos Avaliar possível correlação do índice de atividade de doença em modelo de colite ulcerativa induzida por dextran sulfato de sódio com o grau de severidade de danos na mucosa colônica e aumento de atividade de metaloproteinases. Métodos Colite foi induzida por administração oral de dextran sulfato de sódio 5% durante sete dias no grupo (n = 10), enquanto que o grupo controle (n = 16) recebeu água. Efeitos foram analisados diariamente pelo índice de atividade de doença. No sétimo dia, os animais foram sacrificados e as medições hematológicas, alterações histológicas (hematoxilina e eosina e coloração de azul Alcian), mieloperoxidase e atividades de metaloproteinases (MMP-2 e MMP-9) foram determinados. Resultados Grupo dextran sulfato de sódio mostrou elevação no índice de atividade de doença e redução dos parâmetros hematológicos. A indução da colite causa lesão no tecido, com perda de mucina e aumento da mieloperoxidase (P<0,001) e as atividades MMP-9 (45 vezes) em comparação com o grupo de controle. Conclusões Neste estudo, observamos uma correlação do índice de atividade de doença com o grau de alterações histopatológicas após indução da colite por dextran sulfato de sódio, podendo associar este resultado ao aumento principalmente da atividade de MMP-9 e de mieloperoxidase. .

Surdez súbita: experiência terapêutica de dez anos / Sudden hearing loss: ten years' treatment experience

Observar a evolução da surdez súbita em pacientes incluidos em diferentes grupos de tratamento, de acordo com o tempo de evolução da doença e com as contra-indicações para uso de medicações...

Determine the follow-up between patients sudden sensorineural hearin loss treated in five different groups according of disease and the drugs used for treatment...

Distribuição do dextran -99mTC e do carvão ativado no linfonodo-sentinela em coelho / Distribution of dextran-99mTc and activated carbon in sentinel lymph nodes of rabbtis

Objetivos: Avaliar a viabilidade do carvão ativado(CA) como marcador intra-operatório para detecção do linfonodo sentinela (LS) e sua distribuição em comparação com dextran-99mTc. Métodos: Realizou-se a injeção intradémica de dextran-99mTc e de uma solução contendo CA e azul patente V na proporção de 1:1 em 16 coelhos da raça Nova Zelândia de sexo, peso e idade semelhantes. O LS foi identificado e ressecado. Aferiu-se a radioatividade e, em seguida, foi submetido a exame histológico convencional para quantificação e determinação da distribuição do CA. Resultados: Durante a dissecação foi possível observar, em todos os casos, a impregnação do corante azul patente V no LS. A leitura da radiotividade em i/s e as medidas, em cruzes da quantidade de CA obtidas no LS, dividi-lo em duas metades, sendo uma hiper (H1) e a outra hipocaptante(H2). Conclusões: A solução CA(6%) e corante vital (azul patente V) na proporção 1:1 determinou uma fácil identificação do LS no intra-operatório. A análise comparativa da distribuição do CA e do dextran-99mTc demonstra que ambos se comportaram da mesma forma concentrando-se na mesma metade do LS.

Avaliação morfológica e molecular de lesões colônicas em modelo de colite experimental induzida por dextran sulfato de sódio / Morphological and molecular evaluation of colonic lesions in a mouse model of experimental colitis induced by Dextran Sulfate Sodium (DSS)

A retocolite ulcerativa (RU) é uma doença inflamatória crônica que caracteristicamente afeta o reto e o intestino grosso e cuja etiologia ainda é desconhecida. Os pacientes portadores de RU apresentam um alto risco para o desenvolvimento de câncer colorretal (CCR). O desenvolvimento e a progressão do câncer associado à RU envolvem vários eventos genéticos que parecem ser diferentes dos observados nos cânceres esporádicos... O modelo animal de colite através do uso de DSS desenvolve displasia e câncer muito similares aos observados em humanos. O estudo da carcinogênese do cólon nestes animais pode ser de grande valia para o melhor entendimento das alterações que ocorrem em humanos e pode proporcionar o descobrimento de novos marcadores ou mesmo regimes quimiopreventivos para o câncer relacionado à RU. O objetivo deste estudo é elucidar os eventos moleculares das neoplasias relacionadas à RU no modelo experimental animal de colite induzida por DSS, traçando um paralelo com os estudos moleculares realizados em humanos. Para isto, foram utilizadas duas abordagens. A primeira, relacionada com a pesquisa de alterações moleculares nas neoplasias originadas no modelo de colite pelo uso de DSS e Azoxymethane (AOM) em animais sadios, onde foram avaliados os genes Trp53, k-ras, Apc e ß-catenina. A segunda, relacionada com o uso de DSS em animais alterados geneticamente para o gene Trp53, considerado o evento inicial nos tumores associados à RU... Nos animais geneticamente alterados para o gene Trp53 a pesquisa de mutação no gene k-ras foi negativa. Estes animais demonstraram a presença de displasia e câncer, também muito similares aos humanos, sendo que os animais homozigotos (p53-/-) apresentaram uma maior incidência de lesões quando comparados aos animais heterozigotos (p53+/-) e controles p53 (+/+)...

Ulcerative Colitis (UC) is a diffuse inflammatory disease of the colorectum, which etiology is unknown. UC patients are at increased risk of developing colorectal cancer (CRC). Development and progression of UC-associated to CRC involves multiple genetic alterations that appear to be different from those of sporadic cancer. Alterations of APC gene and k-ras gene are less frequent than in sporadic colorectal neoplasia. Although, alterations of TP53 gene is a frequently observed in both UC associated tumors and sporadic tumors, this alteration is an early event in UC related tumors but it is occurs late in sporadic tumors. Dextran Sulfate Sodium (DSS) mouse colitis model develop dysplasia and cancer similar to UC in human. Studies of colon carcinogenesis in this model can be very useful to elucidate mechanisms and provide development of markers or hemoprevention approaches in the human situation. The aim of this study is to establish the molecular events in a DSS mouse colitis model associated neoplasia in parallel with the molecular alterations seen in humans. Two different approaches had been used to achieve this goal. First, investigate molecular events in neoplastic lesions developed in a mouse model of colitis using DSS in combination with Azoxymethane (AOM) in healthy animals. In this approach, it was investigate genes, such as Trp53, k-ras, ß-catenin and Apc. Second, evaluate genetic events in mice deficient in the Trp53 gene, considered an early event in RUassociated tumors. Besides k-ras evaluation, it was also evaluated the histological aspects of the colonic lesions in this model. ß-catenin mutation (codons 32 and 34) and translocation ß-catenin were observed in healthy animals using DSS/AOM. No mutation of k-ras and Apc were observed and Apc LOH was not informative. DSS induced colitis in p53 deficient mice developed dysplasia and cancer. p53-/- (homozygous) showed a higher incidence of tumors when compared with p53+/- (heterozygous) and p53+/+ (wild-type) animals. No mutation of k-ras gene was observed. Besides dysplasia and cancer, p53-/- and p53+/- animals developed colite cystica profunda and hyperplastic lesions, both observed in patients with UC. The further accumulation of data originated in studies with mouse models of colitis related-neoplasia chemically-induced should provide information for better understand UC- related colorectal neoplasia in humans (AU)

Biopsia de ganglio centinela localizado mediante linfocintigrafía Tc-99 dextran en melanoma cutáneo / Biopsy of sentinel lymph node using lymphocintigraphy 99-Tc dextran in skin melanoma

En melanoma, como en la mayoría de los tumores sólidos, el compromiso tumoral ganglionar es el principal factor pronóstico en ausencia de metástasis a distancia. El ganglio centinela se define como el primer ganglio en la cadena linfática que drena el sitio del tumor. La linfocintigrafía ha demostrado ser un método eficaz en la localización del ganglio centinela. En esta presentación exponemos nuestra experiencia en la melanoma usando Tc-99 Dextrán. Estudiamos 19 pacientes consecutivos, 11 mujeres, edades entre 5-79 años, portadores de un melanoma maligno cutáneo primario, 10 de extremidades, 7 tronco y 2 en cabeza y cuello. Dos horas antes de la cirugía se inyectaron 2 ó 3 dosis de 0,5 mCi Tc-99-m Dextrán intradérmicas en la periferia del tumor o la cicatriz de la biopsia previa. Se obtuvieron imágenes seríadas de los canales linfáticos y del sitio probable del ganglio centinela, confirmándolo con una sonda manual pre e intraoperatorio en 15 de los 19 casos. Cuatro pacientes tenían infiltración tumoral del ganglio centinela lo que motivó reevaluación terapéutica. En resumen, la linfocintigrafía con Dextrán marcado y uso de sonda detectora manual pre e intraoperatoria permite una adecuada localización del ganglio centinela en melanoma

Cofactor II de la heparina, valores de referencia, consumo en presencia de distintos glicosamoniaglicanos / Cofactor II, reference values consumption in the presence of different glycosaminoglycans

El Cofactor II de la Heparina (HCII) es una glicoproteína plasmática que inhibe rápidamente Trombina, en presencia de Glicosaminoaglicanos (GAGS) como Dermatán Sulfato (DS), Dextrán Sulfato (DX) y altas concentraciones de heparina. El nivel de actividad de HCII está marcadamente disminuido en pacientes con daño hepático severo, coagulación intravascular diseminada y en complicaciones obstétricas, siendo normales en la mayoría de pacientes con trombosis venosa. En este trabajo, se determinaron los valores de referencia para la actividad y antigenicidad de HCII para la población normal de Buenos Aires (Argentina). Los valores obtenidos: 70-130 por ciento actividad y 75-11- por ciento antigenicidad. Se midió la actividad de HCII en suero, siendo ésta entre un 20 a 40 por ciento menor que la del plasma. Se estudió también el consumo (CON) de HCII cuando se dejó coagular in vitro, sangre de individuos normales, en ausencia y presencia de distintas concentraciones de DS, DX y Heparina. El CON de HCII aumenta significativamente (p < 10-4) en presencia de DS, este incremento es aún mayor en presencia de DX, mientras que Heparina en las concentraciones utilizadas no modifica significativamente el CON de HCII. De lo cual se puede concluir, que si bien el DX es el mejor potenciador in vitro, su acción fisiológica sería escasa porque presenta una síntesis muy localizada, mientras que el DS desempeñaría un importante rol fisiológico como potenciador de HCII a nivel extravascular, ya que se sintetiza en los fibroblastos de la capa media de los vasos

GPI-specific phospholipase D as an apolipoprotein

Glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase D (GPI-PLD) has recently been shown to be associated with high-density lipoproteins (HDL) in bovine serum. To determine the distribution of GPI-PLD among lipoproteins and characterize the GPI-PLD-containing lipoproteins in human plasma, we used dextram sulfate and immunoaffinity chromatography to isolate apolipoprotein-specific lipoproteins. This procedure allowed fractionation of lipoprotein particles into those containing apolipoprotein B (Lp B), apolipoproteins AI and AII (Lp AI/AII), or apolipoprotein AI only (Lp AI). In five plasma samples with HDL cholesterol ranging from 40 to 129 mg/dl, 75 ñ 12 percent (mean ñ SD) of the GPI-PLD activity was associated with LpAI, 11 ñ 13 percent with Lp AI/AII, while only 13 ñ 9 percent was present in plasma devoid of these lipoproteins, suggesting that most of the GPI-PLD in human plasma is associated with apolipoprotein AI. No GPI-PLD activity was detected in Lp B. Further characterization of the GPI-PLD-containing lipoproteins by gel filtration chromatography, nondenaturing poly-acrylamide and agarose gel electrophoresis revealed that GPI-PLD was restricted to an apolipoprotein AI-containing particle or complex that was small (apparent mean Mw of 140 KDa) and distinct from the bulk of HDL. Thus, the majority of plasma GPI-PLD appears to be specifically associated with a small, minor fraction of apoloprotein AI